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低氧联合辐照对小鼠骨髓造血细胞的影响作用研究
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作者 杨欣海 陈芳 +6 位作者 全勇 胡梦佳 芦玉凯 陈乃成 许杨 王崧 王军平 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第7期681-690,共10页
目的探究高原低氧环境联合辐照损伤对小鼠骨髓造血细胞的影响。方法165只C57BL/6雄性小鼠(10~12周,体质量20~25 g)按随机数字表法进行分组:正常对照组(Control组,n=33)、6 Gy单纯辐照组(6 Gy组,n=43)、6 Gy低氧辐照组(Hy-7 d+6 Gy组,n=4... 目的探究高原低氧环境联合辐照损伤对小鼠骨髓造血细胞的影响。方法165只C57BL/6雄性小鼠(10~12周,体质量20~25 g)按随机数字表法进行分组:正常对照组(Control组,n=33)、6 Gy单纯辐照组(6 Gy组,n=43)、6 Gy低氧辐照组(Hy-7 d+6 Gy组,n=43),7 Gy单纯辐照组(7 Gy组,n=12)、7 Gy低氧辐照组(Hy-7 d+7 Gy组,n=12)、7 Gy持续低氧治疗组(Hy-7 d+7 Gy+Hy组,n=12)、6 Gy持续低氧治疗组(Hy-7 d+6 Gy+Hy,n=10);Hy-7 d+6 Gy组、Hy-7 d+7 Gy组、Hy-7 d+7 Gy+Hy组、Hy-7 d+6 Gy+Hy组于常压低氧舱内进行7 d预处理(氧浓度12%),其余组小鼠在正常氧环境中饲养;6 Gy、Hy-7 d+6 Gy组、Hy-7 d+6 Gy+Hy组小鼠在低氧预处理结束后进行^(60)COγ射线全身一次性辐照6 Gy;7 Gy、Hy-7 d+7 Gy组、Hy-7 d+7 Gy+Hy组小鼠在低氧预处理结束后进行^(60)COγ射线全身一次性辐照7 Gy;Control组、6 Gy组、7 Gy组小鼠全程正常氧环境饲养,Hy-7 d+7 Gy组、Hy-7 d+6 Gy组小鼠辐照损伤后继续低氧饲养24 h后恢复正常氧环境饲养,Hy-7 d+7 Gy+Hy组、Hy-7 d+6 Gy+Hy组小鼠辐照后持续低氧环境饲养。Control、6 Gy、Hy-7 d+6 Gy组小鼠制备骨髓细胞悬液,采用全自动细胞计数仪计数小鼠骨髓有核细胞数量,采用HE染色观察小鼠骨髓腔病理形态改变,采用流式细胞术检测造血干/祖细胞(Lin^(-)Sca1^(+)c-Kit^(+),LSK)、髓系祖细胞(myeloid progenitor,MP)以及成熟T/B髓系细胞数量;7 Gy、Hy-7 d+7 Gy、Hy-7 d+7 Gy+Hy组小鼠从低氧预处理后开始持续监测30 d的生存率;6 Gy、Hy-7 d+6 Gy、Hy-7 d+6 Gy+Hy组小鼠采取尾血,使用全自动血液分析仪检测红细胞(red blood cell,RBC)、白细胞(white blood cell,WBC)、血红蛋白(hemoglobin,HGB)、血小板(platelet,PLT)等的动态变化;Control、6 Gy、Hy-7 d+6 Gy组小鼠于辐照后17 d处死后获取骨髓细胞悬液并进行单细胞测序及分析。结果①与Control组相比,6 Gy组小鼠辐照后全骨髓有核细胞数量显著减少(P<0.01),HE染色显示骨髓血窦扩张明显、红细胞溢出;与6 Gy组比较,Hy-7 d+6 Gy组小鼠骨髓腔内细胞密度增加,有核细胞数减少程度明显减轻(P<0.01);②流式细胞术检测结果显示与Control组比较,6 Gy组骨髓LSK、MP与成熟T/B/髓系细胞数量均显著降低(P<0.05);与6 Gy组比较,Hy-7 d+6 Gy组单纯辐照造成的LSK、MP的数量减少能得到显著抑制(P<0.01);③与7 Gy组相比,Hy-7 d+7 Gy组经过低氧辐照后24 h复常氧治疗显著提高了小鼠生存率(P<0.01);与7 Gy组相比,Hy-7 d+7 Gy+Hy组小鼠经持续低氧治疗未能显著改善小鼠生存率;Hy-7 d+7 Gy组与Hy-7 d+7 Gy+Hy组之间的生存率差异虽未达到统计学显著性(P=0.12),但在整个观察周期内Hy-7 d+7 Gy组始终表现出存活数量优势;④血常规检测结果显示,Hy-7 d+6 Gy组小鼠较6 Gy组和Hy-7 d+6 Gy+Hy组WBC水平得到更快的恢复(P<0.05);经低氧预处理后,Hy-7 d+6 Gy组和Hy-7 d+6 Gy+Hy组辐照前RBC及HGB水平更高;而相比于6 Gy组及Hy-7 d+6 Gy+Hy组,Hy-7 d+6 Gy组PLT恢复更显著且迅速(P<0.05);⑤通过单细胞转录组数据分析进行细胞亚群比例推测,相比于6 Gy组Hy-7 d+6 Gy组小鼠长期造血干细胞(long-term hematopoietic stem cell,LT-HSC)、短期造血干细胞(short-term hematopoietic stem cell,ST-HSC)数量减少得到抑制,与流式细胞术结果一致;拟时序分析显示,Hy-7 d+6 Gy组小鼠数据与Control组相似,表现出分化程度低且自我更新能力强的LSK较多;差异基因分析及KEGG通路富集表明,6 Gy组氧化磷酸化通路活跃度显著高于其他组,而Hy-7 d+6 Gy组则富集于染色质重塑和mRNA监视等通路。结论低氧预处理可减轻小鼠骨髓造血细胞放射损伤,辐照后恢复常氧治疗有助于急性放射损伤小鼠的骨髓造血功能重建。 展开更多
关键词 低氧预处理 骨髓造血干/祖细胞 急性放射损伤 造血功能 单细胞转录组技术
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羟基红花黄色素A通过抑制氧化应激反应改善hUC-MSC复制性衰老
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作者 汪思云 朱琦 +2 位作者 谭春霞 鲁放 卢涛 《中国实验血液学杂志》 北大核心 2025年第5期1507-1515,共9页
目的:探究羟基红花黄色素A(HSYA)对人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)复制性衰老的作用及机制。方法:通过连续体外扩增构建hUC-MSC复制性衰老模型,以P2代细胞为对照组,P10代细胞为衰老组。将衰老的细胞置于含有HSYA的培养基中培养,利用CCK-8... 目的:探究羟基红花黄色素A(HSYA)对人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)复制性衰老的作用及机制。方法:通过连续体外扩增构建hUC-MSC复制性衰老模型,以P2代细胞为对照组,P10代细胞为衰老组。将衰老的细胞置于含有HSYA的培养基中培养,利用CCK-8和Incucyte S3动态活细胞成像分析系统分别检测细胞活力和细胞融合度,选取适宜浓度和时间进行后续实验。选取0.01 mg/ml的HSYA预处理衰老的细胞,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色评估细胞衰老状况,qPCR法检测端粒相对长度,荧光探针DCFH-DA染色检测细胞内活性氧水平,JC-1染色法检测线粒体膜电位的变化,实时荧光定量qPCR法检测p53、p16、p21、OCT4和SOX2基因的表达,Western blot检测p53、p16、OCT4和SOX2蛋白的表达。结果:HSYA可以显著降低衰老细胞的SA-β-gal染色阳性率,抑制端粒的损耗,减少衰老细胞中活性氧的积累,提高线粒体膜电位,下调p53和p16基因的表达,上调OCT4基因的表达。HSYA也显著降低了p16蛋白的表达水平,提高了OCT4和SOX2蛋白的表达水平。结论:HSYA可能通过调控p53和p16信号通路,抑制氧化应激反应,改善hUC-MSC的复制性衰老。 展开更多
关键词 羟基红花黄色素A 人脐带间充质干细胞 衰老 氧化应激
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人骨髓间充质干细胞表达多种造血细胞因子 被引量:28
3
作者 朱光荣 周小玉 +5 位作者 陆化 周建伟 李爱萍 徐卫 李建勇 汪承亚 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期115-119,共5页
为了研究培养的人骨髓间充质干细胞在造血中的生物作用 ,采用RT PCR方法在mRNA水平上分析体外培养的人骨髓间充质干细胞 (BM MSC)造血因子的表达 ,以及氢化考的松对BM MSC表达造血细胞因子的影响。结果显示 ,体外传代培养的正常人、白... 为了研究培养的人骨髓间充质干细胞在造血中的生物作用 ,采用RT PCR方法在mRNA水平上分析体外培养的人骨髓间充质干细胞 (BM MSC)造血因子的表达 ,以及氢化考的松对BM MSC表达造血细胞因子的影响。结果显示 ,体外传代培养的正常人、白血病和淋巴瘤等血液病人BM MSC均能表达SCF ,Flt3 ligandTPO ,LIF ,IL 6和IL 11等重要的造血细胞因子 ,但不表达G CSF ,GM CSF和IL 3。不同代数的BM MSC细胞 ,造血细胞因子的表达相同。BM MSC经氢化考的松作用 7- 2 1天后 ,可诱导G CSFmRNA表达 ,但不诱导GM CSF的表达 ,细胞在形态学上也未发生明显改变。结论 :体外培养的正常人和本组血液病病人BM 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 造血细胞因子 表达 生物作用 氢化考的松 白血病 淋巴瘤
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人骨髓间充质干细胞支持体外造血(英文) 被引量:38
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作者 郭子宽 唐佩弦 +4 位作者 刘晓丹 杨靖清 李秀森 陈小三 毛宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期93-96,共4页
体内的稳态造血依赖于复杂而完整的骨髓造血微环境系统 ,其中的细胞成分是该系统的关键。存在于骨髓中的间充质干细胞 (MSCs)是成纤维细胞、内皮细胞、成骨细胞、脂肪细胞等多种骨髓基质细胞的前体细胞 ,在造血调控中可能具有一定的作... 体内的稳态造血依赖于复杂而完整的骨髓造血微环境系统 ,其中的细胞成分是该系统的关键。存在于骨髓中的间充质干细胞 (MSCs)是成纤维细胞、内皮细胞、成骨细胞、脂肪细胞等多种骨髓基质细胞的前体细胞 ,在造血调控中可能具有一定的作用。本研究首先建立了成人骨髓MSCs的分离及体外培养的方法 ,并应用长期骨髓细胞培养体系 ,观察了MSCs滋养层体外维持长期培养启动细胞 (LTC IC)的能力及其促进造血细胞分化的功能。结果显示 :①脐带血来源的CD34+细胞粘附于滋养层上形成造血灶 ,表明MSCs可形成与骨髓基质细胞相似的体外造血微环境 ;②共培养 5周后造血细胞仍具有体外集落形成能力 ,说明MSCs具有维系LTC IC的能力 ;③流式细胞术分析显示 ,体外培养 5周后约 1%悬浮细胞表达CD34,15 %细胞CD4 1a阳性 ,提示MSCs促进造血细胞向巨核系细胞分化。 展开更多
关键词 间充质干细胞 骨髓 造血 造血微环境 造血调控
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趋化素样因子(CKLF1)对骨髓细胞增殖活性的研究 被引量:42
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作者 韩文玲 芮珉 +5 位作者 张颖妹 陈英玉 钟英成 狄春辉 宋泉声 马大龙 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期119-122,共4页
目的 研究趋化素样因子 1(CKLF1)对造血功能的调节作用。方法 利用 MTT法,检测 CKLF1真核细胞表达载体转染上清在液体培养基中,对人低密度骨髓细胞和小鼠骨髓细胞的增殖调控作用;并在半固体培养基中,观察其对人低密度骨髓细胞集落... 目的 研究趋化素样因子 1(CKLF1)对造血功能的调节作用。方法 利用 MTT法,检测 CKLF1真核细胞表达载体转染上清在液体培养基中,对人低密度骨髓细胞和小鼠骨髓细胞的增殖调控作用;并在半固体培养基中,观察其对人低密度骨髓细胞集落形成的刺激作用。结果 COS-7细胞表达的 CKLF1能明显促进人和小鼠骨髓细胞的增殖,并能促进人骨髓细胞的集落形成,与 GM-CSF有协同刺激作用。结论 CKLF1能促进人和小鼠骨髓造血干 展开更多
关键词 趋化素样因子1 造血干细胞 集落形成 骨髓细胞增殖
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三七皂苷对人骨髓造血细胞凋亡相关蛋白表达的影响 被引量:15
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作者 陈小红 高瑞兰 +2 位作者 郑智茵 钱煦岱 徐卫红 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期343-346,共4页
本文研究观察三七皂苷(PNS)对造血细胞促进凋亡相关蛋白(Daxx、Fas)和抑制凋亡的核转录因子(NFkB、c-Rel)表达的影响,探讨PNS促进造血细胞增殖,支持生长存活的作用机制。采用半固体集落培养法观察PNS对人骨髓红系、粒系祖造血细胞(CFU-G... 本文研究观察三七皂苷(PNS)对造血细胞促进凋亡相关蛋白(Daxx、Fas)和抑制凋亡的核转录因子(NFkB、c-Rel)表达的影响,探讨PNS促进造血细胞增殖,支持生长存活的作用机制。采用半固体集落培养法观察PNS对人骨髓红系、粒系祖造血细胞(CFU-GM、CFU-E)的增殖作用,台盼蓝拒染法观察细胞的存活率,涂片染色法观察细胞形态学的变化,用流式细胞术分析细胞凋亡状况。同时,用PNS处理粒系HL-60、红系K562、巨核系CHRF-288和Meg-014种细胞株后,提取胞浆蛋白和核蛋白,Western免疫印迹观察Daxx、Fas、NFkB和c-Rel蛋白的表达水平。结果发现:①PNS能够刺激人骨髓红系、粒系祖细胞和HL-60等4种细胞株增殖。②HL-60等4种株细胞经PNS和饥饿处理后,活性良好,镜下未观察到凋亡的形态学特征;AnnexinⅤ分析也未见凋亡的阳性细胞。③Westernblot结果显示,经PNS处理的4株细胞Daxx蛋白表达水平与对照相比,下降幅度分别为33.3%-61·5%;HL-60细胞本身表达Fas蛋白低下,PNS处理后也无明显下降,而K562、CHRF-288和Meg-01细胞Fas蛋白表达与对照相比,下降幅度分别为33.3%-71.4%。④NFkB、c-Rel蛋白除HL-60细胞对PNS诱导无明显变化外,其余细胞均出现不同程度地增加,分别提高了2.0-2.7倍和1.5-2.3倍。结论:PNS在某种程度上能够抑制Daxx、Fas蛋白表达,而相应减少造血细胞的凋亡,同时也能通过上调NFkB、c-Rel转录因子,促进细胞增殖,并阻止半胱天冬酶(caspase)连锁链的活化而抑制造血细胞凋亡,这为PNS应用于临床治疗凋亡过度的疾病如再生障碍性贫血提供了可能性。 展开更多
关键词 三七皂苷 造血细胞 DAXX Fas NFKB C-REL 再生障碍性贫血
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不同浓度的骨碎补总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响 被引量:39
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作者 舒晓春 刘君静 +1 位作者 朱丹华 庞天骄 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1261-1264,共4页
目的:通过在体外条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)实施干预诱导,探寻骨碎补总黄酮对BMSCs的成骨诱导分化能力及不同浓度下可能存在的剂量效应关系。方法:应用全骨髓贴壁培养法对BMSCs进行分离、纯化,并通过流式细胞术对BMSCs进行鉴... 目的:通过在体外条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)实施干预诱导,探寻骨碎补总黄酮对BMSCs的成骨诱导分化能力及不同浓度下可能存在的剂量效应关系。方法:应用全骨髓贴壁培养法对BMSCs进行分离、纯化,并通过流式细胞术对BMSCs进行鉴定,再通过设立含不同浓度骨碎补总黄酮条件培养基,分组对BMSCs进行干预,观察各组7d和14d碱性磷酸酶(ALP)的表达,同时通过ALP染色和矿化结节染色进行定性分析。结果:用全骨髓贴壁法成功分离获得了均一稳定的BMSCs,各浓度骨碎补总黄酮作用BMSCs7d和14d后,诱导不同程度的ALP表达,经10-5g/L骨碎补总黄酮诱导,ALP染色及矿化结节染色均阳性。结论:低浓度骨碎补总黄酮能促进BMSCs向成骨细胞分化,其ALP生成量随着骨碎补总黄酮浓度的降低大致呈增加趋势。 展开更多
关键词 骨碎补总黄酮 骨髓间充质干细胞 成骨细胞 细胞分化
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人骨髓间充质干细胞体外分化为肝细胞样细胞 被引量:24
8
作者 孙嫣 段芳龄 +4 位作者 陈香宇 孙艳 李玉龙 曾艳丽 王豪勋 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2004年第3期244-248,共5页
目的 探讨人骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养及特异性诱导为肝细胞样细胞的能力。方法 骨髓标本来源于健康志愿者的胸骨,年龄2~35岁,采用淋巴细胞分离液(密度1.077)分离人MSCs,并分别采用HGF、FGF4、HGF+FGF4以及无生长因子四种处理... 目的 探讨人骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养及特异性诱导为肝细胞样细胞的能力。方法 骨髓标本来源于健康志愿者的胸骨,年龄2~35岁,采用淋巴细胞分离液(密度1.077)分离人MSCs,并分别采用HGF、FGF4、HGF+FGF4以及无生长因子四种处理因素体外诱导第三代人MSC向肝细胞样细胞分化。通过流式细胞术分析鉴定.MSCs的纯度,于诱导培养的0、7、14、21、28天时留取细胞检测CK18、AFP和白蛋白的表达情况,同时进行糖原染色验证细胞功能。结果 用淋巴细胞分离液分离出的人MSCs纯度可达90%,采用HGF、FGF4及HGF+FGF4三种处理因素均可在体外诱导人MSCs特异分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的细胞。结论 人MSCs能在体外扩增并定向诱导为肝细胞样细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 体外分化 肝细胞样细胞 MSCS 淋巴细胞
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3种不同途径移植骨髓间充质干细胞治疗肝硬化模型大鼠的效果比较 被引量:13
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作者 熊全 冯吉 +7 位作者 王军 熊吉 樊丽琳 胡辂 兰春慧 杨敏 孙文静 陈东风 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期804-808,共5页
目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)不同途径移植对肝硬化模型大鼠的效果差别。方法用四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射和酒精喂养的方法建立肝硬化大鼠模型,将肝硬化模型随机分为肝硬化未移植组(n=8)、门静脉移植... 目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)不同途径移植对肝硬化模型大鼠的效果差别。方法用四氯化碳液体橄榄油混合液皮下注射和酒精喂养的方法建立肝硬化大鼠模型,将肝硬化模型随机分为肝硬化未移植组(n=8)、门静脉移植组(n=8)、肝动脉移植组(n=8)、尾静脉移植组(n=8)。取健康SD大鼠骨髓,利用全骨髓贴壁的方法原代培养骨髓MSCs,利用CM-DiI标记间充质干细胞,然后通过3种途径分别进行移植。术后4周检测血清白蛋白、转氨酶、胆红素、Ⅳ型胶原;激光共聚焦显微镜观察干细胞在肝脏的分布及数量;HE和Masson染色观察肝硬化程度。结果通过3种途径移植MSCs到肝硬化模型大鼠体内,4周后发现移植组模型大鼠的肝功能均得到明显改善,血清白蛋白较肝硬化未移植组显著升高(P<0.05),转氨酶、胆红素较肝硬化未移植组显著降低(P<0.05),肝纤维化程度较肝硬化未移植组显著减轻(P<0.05)。3种途径移植MSCs对大鼠肝硬化的治疗效果无统计学差异(P>0.05)。结论骨髓MSCs移植肝硬化模型大鼠,移植后4周肝功能改善,肝纤维化程度降低,3种移植方法治疗效果相似。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 肝硬化 大鼠 移植途径
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大鼠骨髓间充质干细胞的培养及示踪优化 被引量:10
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作者 何秀华 李东良 +2 位作者 江军 程变巧 杨才生 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期137-140,共4页
目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)的标记和示踪方法,优化示踪技术。方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,通过流式细胞仪鉴定细胞表面抗原(CD29、CD34、CD45、CD90),分别用BrdU、DAPI以及GFP 3种方法标记干细胞,DAPI和GFP标记率直接通... 目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)的标记和示踪方法,优化示踪技术。方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,通过流式细胞仪鉴定细胞表面抗原(CD29、CD34、CD45、CD90),分别用BrdU、DAPI以及GFP 3种方法标记干细胞,DAPI和GFP标记率直接通过荧光显微镜进行鉴定,BrdU标记率通过细胞免疫化学法鉴定,比较3种示踪技术的优缺点。结果流式细胞仪鉴定结果显示MSCs CD29、CD90表达阳性,CD34、CD45表达阴性。3种标记方法对细胞均未显示明显毒性。终浓度10μmol/L BrdU标记48h、终浓度1μg/ml DAPI标记12h分别为其最佳标记浓度及时间。感染复数MOI=8时,GFP慢病毒感染MSCs 12h,感染率可达90%以上。结论 GFP基因转染是一种稳定、可靠、安全的标记方法,对成体干细胞的示踪有重要价值。 展开更多
关键词 间充质干细胞 骨髓 细胞 培养的 生物学标记
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大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与初步鉴定 被引量:17
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作者 张本斯 王凡 +2 位作者 邓力 羊惠君 李瑞祥 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期161-165,共5页
目的 探讨体外分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)的方法 ,分析其部分表型特点。方法 用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增 ,测定生长曲线 ,形态学观察 ,免疫细胞化学及图像分析测... 目的 探讨体外分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSCs)的方法 ,分析其部分表型特点。方法 用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增 ,测定生长曲线 ,形态学观察 ,免疫细胞化学及图像分析测定细胞表面抗原和细胞外基质蛋白表达情况。结果 MSCs属骨髓中单个核细胞 ,密度梯度离心结合贴壁培养法能有效分离纯化大鼠骨髓MSCs,MSCs在含 10 %小牛血清的L DMEM中生长性状相对稳定 ,1、 3、 5代细胞生长曲线基本一致 ,增殖速度快。细胞呈均一的成纤维细胞样 ,均一表达CD4 4、CD5 4、纤维粘连蛋白 (Fibronectin ,FN)、Ⅰ型胶原 (CollagenⅠ )。结论 本实验建立了一种体外分离纯化、培养扩增大鼠骨髓MSCs的方法 ,MSCs稳定表达CD4 4、CD5 4、FN、CollaganⅠ。 展开更多
关键词 大鼠 骨髓 间充质干细胞 分离纯化 表型
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大鼠去卵巢后骨髓源性破骨细胞形成的动态变化及其与骨髓IL-6、IL-6受体表达的关系 被引量:11
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作者 曾天舒 陈璐璐 +2 位作者 夏文芳 周慜 黎慧清 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2003年第4期291-294,共4页
目的 观察大鼠去卵巢后骨髓源性破骨细胞形成的动态变化及其与骨髓细胞IL-6、IL-6受体以及gpl30基因表达水平改变的关系。方法 健康3月龄雌性SD大鼠60只,30只作为假手术对照组,30只经腹手术去卵巢。分别于去卵巢后2,4,6,8,12周取去卵巢... 目的 观察大鼠去卵巢后骨髓源性破骨细胞形成的动态变化及其与骨髓细胞IL-6、IL-6受体以及gpl30基因表达水平改变的关系。方法 健康3月龄雌性SD大鼠60只,30只作为假手术对照组,30只经腹手术去卵巢。分别于去卵巢后2,4,6,8,12周取去卵巢组和对照组各6只大鼠骨髓细胞作细胞培养和提取RNA。培养的第6天分别作瑞氏-吉姆萨染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,以胞核3个或3个以上以及TRAP(+)为破骨细胞标志,计数细胞数。骨髓细胞提取总RNA进行逆转录PCR。结果 术后2周去卵巢组破骨细胞形成数即多于对照组(P<0.05);第4-6周,去卵巢组破骨细胞形成达高峰,明显多于2周(P<0.01);去卵巢后的8周,较峰值下降,直至12周去卵巢组破骨细胞形成数仍高于对照组(P<0.05)。与破骨细胞的变化相对应,术后2周,骨髓细胞IL-6及IL-6RmRNA表达均明显增高(分别为P<0.01,P<0.05);第4周时,IL-6表达水平达到高峰,保持至第6周,IL-6R表达则在第6周达最高;第8周,IL-6、IL-6R基因表达水平较峰值下降,但直至第12周仍高于对照组。去卵巢后全程未见gp130基因表达水平有明显变化。结论 大鼠去卵巢后骨髓干细胞分化形成破骨细胞明显增加,呈时间相关动态过程,第6周达高峰,这一过程与骨髓细胞IL-6、IL-6R基因表达的动态变化一致,提示去卵巢后骨髓细? 展开更多
关键词 大鼠 卵巢 骨髓 破骨细胞 白介素6受体
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人骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞 被引量:12
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作者 郭子宽 刘晓丹 +2 位作者 候春梅 李秀森 毛宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2001年第1期91-92,共2页
Recent reports have clearly demonstrated that bone marrow cells can be differentiated into neurons, suggesting the existence of cells with the differentiation capacity in the bone marrow cell population. It is well kn... Recent reports have clearly demonstrated that bone marrow cells can be differentiated into neurons, suggesting the existence of cells with the differentiation capacity in the bone marrow cell population. It is well known that hematopoietic stem cells as well as mesenchymal stem cells (MSCs) can be transplanted and therefore, alternative of them might contribute to the process. In the present study it was addressed whether marrow MSCs could be coaxed into neuron-specific antigen bearing cells and if so, whether the differentiated cells possess the cytochemical features seen in neurons. The report here showed that high concentration of 2-mercaptoethanol (2-ME) could induce some of the MSCs into neuron-like cells expressing neurofilament (NF) and neuron specific enolase (NSE). The neuron-like cells were alkaline phosphotase positive while the others MSCs were kept negative. Cells treated with 2-ME were positive for α-naphthylacetate esterase and glycogen and negative for acetylchonlinesterase, which were similar with the results seen in untreated cells. Furthermore, Nissel body was not observed in treated cells shown by toluidine blue staining. Therefore, it is likely that the cells described here seem not belong to the neuronal lineage. These findings, however, reveal that human MSCs could alter their committed fates under some circumstances. 展开更多
关键词 骨髓 间充质干细胞 细胞分化 神经元样细胞
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鱿鱼墨黑色素铁对缺铁性贫血大鼠造血调控因子的影响 被引量:5
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作者 柳东 王静凤 +3 位作者 张小哲 龙腾腾 王玉明 薛长湖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第17期317-322,共6页
目的:探究鱿鱼墨黑色素铁对缺铁性贫血(IDA)模型大鼠造血调控因子的影响。方法:采用低铁饲料喂养辅以尾静脉定期放血建立IDA模型,用鱿鱼墨黑色素铁灌胃30d,观察其对IDA大鼠外周血红细胞(RBC)数、血红蛋白(Hb)含量、红细胞压积(HCT)、红... 目的:探究鱿鱼墨黑色素铁对缺铁性贫血(IDA)模型大鼠造血调控因子的影响。方法:采用低铁饲料喂养辅以尾静脉定期放血建立IDA模型,用鱿鱼墨黑色素铁灌胃30d,观察其对IDA大鼠外周血红细胞(RBC)数、血红蛋白(Hb)含量、红细胞压积(HCT)、红细胞平均体积(MCV)和血清促红细胞生成素(EPO)含量的影响;分别制备大鼠肺条件培养液(LCM)、脾条件培养液(SCM)和腹腔巨噬细胞条件培养液(PMΦCM),采用MTT法检测其对正常大鼠骨髓造血细胞增殖的影响;采用单层半固体培养法检测其对粒单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E)和巨核系祖细胞(CFU-Meg)集落形成的影响;采用RT-PCR技术检测IDA大鼠骨髓细胞粒/单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)、促红细胞生成素受体(EPOR)和血小板生成素(TPO)mRNA的表达。结果:鱿鱼墨黑色素铁能提高IDA大鼠RBC、Hb、HCT、MCV值,增加血清EPO含量;经鱿鱼墨黑色素铁体内诱导所制备的LCM、SCM条件培养液可促进正常大鼠骨髓细胞增殖,增加CFU-GM、CFU-E的集落形成;鱿鱼墨黑色素铁上调骨髓细胞GM-CSF和EPOR mRNA的表达。结论:鱿鱼墨黑色素铁可能诱导机体产生GM-CSF、EPO等造血细胞因子,促进粒单系、红系造血细胞的增殖分化。 展开更多
关键词 缺铁性贫血 鱿鱼墨黑色素铁 单核细胞集落刺激因子(GM-CSF) 促红细胞生成素受体(EPOR) 血小板生成素(TPO)
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铁过载骨髓造血细胞体外模型的建立及其对造血的影响 被引量:7
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作者 谢芳 赵明峰 +4 位作者 朱海波 肖霞 徐新女 穆娟 李玉明 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期1038-1042,共5页
本研究通过铁与骨髓单个核细胞共培养,建立铁过载骨髓造血细胞模型并观察其对造血功能的影响。在体外培养骨髓单个核细胞的过程中,在培养液中添加枸橼酸铁铵(FAC),使细胞铁过载,建立铁过载骨髓造血细胞模型,然后检验这一过程中造血细胞... 本研究通过铁与骨髓单个核细胞共培养,建立铁过载骨髓造血细胞模型并观察其对造血功能的影响。在体外培养骨髓单个核细胞的过程中,在培养液中添加枸橼酸铁铵(FAC),使细胞铁过载,建立铁过载骨髓造血细胞模型,然后检验这一过程中造血细胞的凋亡水平、造血集落形成(CFU-E、CFU-GM、BFU-E和CFU-mix)和CD34+细胞的计数变化。再用去铁胺(DFO)祛铁,观察上述指标的变化。结果发现:在不同时间加入培养液中不同浓度FAC,骨髓造血细胞内可变铁池(LIP)水平升高,且具有时间和浓度依赖性,在含400μmol/L FAC的培养液中培养24小时时LIP水平达到最高。骨髓细胞造血功能检测表明,FAC组细胞凋亡比例(24.8±2.99%)较对照组(8.9±0.96%)显著升高(p(0.01);造血集落形成单位计数明显低于对照组(p(0.05);CD34+细胞比例(0.39±0.07%)与对照组(0.91±0.12%)相比也显著降低(p(0.01)。这些损伤影响可以通过DFO的处理部分消除。结论:在体外培养过程中添加铁能诱导骨髓单个核细胞铁过载,建立铁过载骨髓造血细胞模型,并能引起骨髓造血功能损伤,而这种损伤作用可以通过祛铁法减轻。本模型为深入研究铁过载对骨髓细胞造血功能的作用机制提供实验方法,并为骨髓造血功能低下的铁过载病人治疗提供新的靶点。 展开更多
关键词 铁过载 骨髓细胞模型 造血功能 可变铁池
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脂肪细胞分化机制与骨髓造血微环境调控 被引量:7
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作者 刘革修 陈小宇 +1 位作者 祝爱珍 刘成成 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期116-120,共5页
在人体生长发育与衰老过程中骨髓会逐渐由红骨髓转变成为黄骨髓,即骨髓脂肪化,其本质是骨髓中脂肪细胞增多。骨髓脂肪细胞对造血微环境具有负性调节作用,能抑制骨髓造血、抑制造血重建时造血干细胞在骨髓中的植入。深入研究骨髓脂肪化... 在人体生长发育与衰老过程中骨髓会逐渐由红骨髓转变成为黄骨髓,即骨髓脂肪化,其本质是骨髓中脂肪细胞增多。骨髓脂肪细胞对造血微环境具有负性调节作用,能抑制骨髓造血、抑制造血重建时造血干细胞在骨髓中的植入。深入研究骨髓脂肪化机制对促进某些疾病过程中造血恢复、提高造血干细胞移植效率具有一定意义。脂肪细胞的形成主要包括间充质干细胞向前体脂肪细胞的定向分化及其终末分化两个阶段。本文主要阐述细胞形态变化和细胞外基质通过WNT和RHO-family GTPase信号级联通路调节前体脂肪细胞的定向分化,成脂刺激因素通过PPARγ的表观遗传学途径诱导前体脂肪细胞的终末分化,以及PPARγ和C/EBP的相互作用维持脂肪细胞的基因表达。 展开更多
关键词 脂肪细胞 分化 骨髓 造血微环境 信号途径
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骨髓基质细胞的造血支持作用等生物学特性的研究 被引量:6
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作者 杨吉成 盛伟华 +4 位作者 李丽娥 童宁征 王红卫 郭瑃 王晓东 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期41-45,共5页
目的研究人骨髓基质细胞体外长期培养的生物学特性和造血支持功能。方法①采用静置贴壁细胞培养法,体外长期培养胎儿、儿童和成人的骨髓基质细胞。②采用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪检测法,分析细胞的表型。③将不同发育阶段的骨... 目的研究人骨髓基质细胞体外长期培养的生物学特性和造血支持功能。方法①采用静置贴壁细胞培养法,体外长期培养胎儿、儿童和成人的骨髓基质细胞。②采用免疫细胞化学染色法和流式细胞仪检测法,分析细胞的表型。③将不同发育阶段的骨髓基质细胞体外培养,并扩增脐血造血干细胞。结果①建立了成纤维肌样细胞系,可传至10代,维持6个月,同时还培养出内皮细胞和巨噬细胞。②儿童骨髓基质肌样细胞的染色特征为:波形纤维蛋白(viementin)呈阳性,第Ⅷ因子呈阴性;儿童骨髓基质细胞的表型为:CD33-、CD34-、CD38-和CDW90+;成人为:CD33-、CD34-、CD38+和CDW90+。③基质细胞能长期维持脐血中LTC-IC的生存。若加入IL-6、IL-3和SCF扩增体系,基质细胞对长期维持和扩增LTC-IC的效果更为明显(P〈0.01),较无基质细胞的对照组所形成的LTC-IC产率高2-4倍。结论人骨髓基质细胞体外可长期培养,对脐血干细胞具有造血支持功能。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 造血支持功能 生物学特性 细胞培养
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大鼠骨髓间充质干细胞适宜分离和培养条件的研究 被引量:12
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作者 吕铁伟 田杰 +1 位作者 朱静 刘官信 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2004年第6期715-717,721,共4页
目的 :寻求适宜有效的大鼠骨髓间充质干细胞 (mensechymalstemcell,MSCs)体外分离、纯化和培养的条件 ,为MSCs进一步的实验研究打下基础。方法 :分别用贴壁筛选法和密度梯度离心法来分离和纯化MSCs ,并用不同的接种密度、不同的血清浓... 目的 :寻求适宜有效的大鼠骨髓间充质干细胞 (mensechymalstemcell,MSCs)体外分离、纯化和培养的条件 ,为MSCs进一步的实验研究打下基础。方法 :分别用贴壁筛选法和密度梯度离心法来分离和纯化MSCs ,并用不同的接种密度、不同的血清浓度和不同的培养基检测细胞的生长情况 ,绘制出细胞的生长曲线 ;流式细胞仪检测MSCs生长周期。结果 :细胞贴壁呈纤维状生长 ,以 2× 10 9的浓度接种 ,在含 10 %胎牛血清的DMEM /F12培养基中 ,37℃、5 %CO2 细胞培养箱中 ,细胞生长状况良好 ;细胞在培养的最初几天处于生长的潜伏期 ,而后呈指数级生长 ,随着时间的延伸 ,细胞的生长速度减慢 ;而流式细胞仪检测示细胞大多处于G0 G1期。结论 :在适宜的培养条件下 ,MSCs在体外培养的过程中生长状态良好 ,增殖速度快 ,为进一步的研究打下了基础。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞培养 大鼠
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参麦注射液联合自体骨髓干细胞心脏移植治疗难治性心力衰竭的临床观察 被引量:8
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作者 刘新灿 李胜军 +4 位作者 张晓毅 左亚东 朱翠玲 朱明军 李莉 《中国中西医结合急救杂志》 CAS 北大核心 2013年第6期362-365,共4页
目的:探讨参麦注射液联合自体骨髓干细胞心脏移植治疗难治性心力衰竭(RHF)临床疗效。方法选择郑州大学第一附属医院收治的RHF患者200例,按随机原则分为对照组和治疗1、2、3组,每组50例。对照组给予心力衰竭(心衰)标准治疗;治疗... 目的:探讨参麦注射液联合自体骨髓干细胞心脏移植治疗难治性心力衰竭(RHF)临床疗效。方法选择郑州大学第一附属医院收治的RHF患者200例,按随机原则分为对照组和治疗1、2、3组,每组50例。对照组给予心力衰竭(心衰)标准治疗;治疗1组给予心衰标准治疗+自体骨髓干细胞心脏移植;治疗2组给予心衰标准治疗+参麦注射液;治疗3组给予心衰标准治疗+自体骨髓干细胞心脏移植+参麦注射液。平均随访24个月,观察治疗期间各组患者预后、再住院率、临床疗效、心功能指标及B型脑钠肽(BNP)水平的变化。结果治疗期间对照组有10例死亡,治疗1、2组各有4例死亡,治疗3组有3例死亡;治疗1、2、3组再住院率较对照组明显降低(38%、36%、24%比48%,P<0.05或P<0.01),治疗1、2、3组总有效率较对照组明显提高(88%、86%、94%比76%,均P<0.05);3个治疗组治疗后心功能指标左室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)、左心室收缩期末内径(LVESD)均较治疗前明显升高,左心室舒张期末内径(LVEDD)及BNP水平均较治疗前明显降低;且3个治疗组治疗后上述指标均较对照组同期明显改善,且以治疗3组改善更显著〔LVEF:0.477±0.099比0.396±0.098,FS:(30.0±5.1)%比(26.8±7.5)%,LVESD(mm):40.6±9.1比45.8±9.4,LVEDD(mm):44.9±9.8比52.8±10.1,BNP(ng/L):515±400比1875±400,均P<0.05〕。结论参麦注射液联合自体骨髓干细胞心脏移植治疗RHF疗效显著。 展开更多
关键词 参麦注射液 心力衰竭 骨髓干细胞移植 中西医结合疗法
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疏风宣肺解毒方药对流感病毒性肺炎小鼠Janus激酶信号转导与转录激活因子通路的影响 被引量:8
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作者 刘琪 王建国 +6 位作者 马彦平 元海军 杨琬芳 顾立刚 凌莎莎 智鹏 祥露 《中国中西医结合急救杂志》 CAS 北大核心 2016年第5期449-452,共4页
目的:观察疏风宣肺解毒方对流感病毒性肺炎小鼠肺组织Janus激酶信号转导与转录激活因子(JAK-STAT)通路的调控作用。方法将60只小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、达菲对照组和疏风宣肺方高、中、低剂量组,每组10只。应用0.05 m... 目的:观察疏风宣肺解毒方对流感病毒性肺炎小鼠肺组织Janus激酶信号转导与转录激活因子(JAK-STAT)通路的调控作用。方法将60只小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、达菲对照组和疏风宣肺方高、中、低剂量组,每组10只。应用0.05 mL的4LD50流感病毒肺适应株FM1滴鼻感染小鼠,建立小鼠流感病毒性肺炎模型;正常组以0.05 mL生理盐水滴鼻。制模成功2 h后,正常组、模型组灌服蒸馏水;达菲对照组灌服达菲(磷酸奥司他韦)2.5 g·mL-1·d-1;疏风宣肺方高、中、低剂量组分别灌服疏风宣肺解毒方药(由菊花、桑叶、杏仁、桔梗、连翘、柴胡等组成,颗粒剂),按照人与小鼠体表面积换算给药剂量,以加倍量为高剂量,折半量为低剂量,每日1次,每次0.2 mL。连续给药4 d后取小鼠肺组织,采用基因芯片技术检测小鼠JAK-STAT通路相关差异基因的表达,筛选差异表达基因的标准为:上调基因P<0.05,且log2比值>1,下调基因P<0.05,且log2比值<-1。应用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)测定肺组织Janus激酶(JAK)、γ干扰素(IFN-γ)的mRNA表达水平。结果与正常组比较,模型组差异表达基因STAT5〔log2(正常组/模型组)=2.32〕、白细胞介素-4受体亚单位〔IL4RA,log2(正常组/模型组)=4.77〕、白细胞介素-12受体〔IL12R, log2(正常组/模型组)=1.58〕、 JAK〔log2(正常组/模型组)=2.41〕均明显上调,干扰素(IFN)明显下调〔log2(正常组/模型组)=-1.45〕;与模型组比较,达菲对照组〔log2(达菲对照组/模型组)=1.51〕、方药各组〔log2(方药低剂量组/模型组)=1.46,log2(方药中剂量组/模型组)=1.72,log2(方药高剂量组/模型组)=1.40〕差异表达基因IFN明显上调,STAT5〔log2(达菲对照组/模型组)=-2.06,log2(方药低剂量组/模型组)=-1.41, log2(方药中剂量组/模型组)=-2.10,log2(方药高剂量组/模型组)=-1.89〕、IL4RA〔log2(达菲对照组/模型组)=-2.52,log2(方药低剂量组/模型组)=-1.85,log2(方药中剂量组/模型组)=-2.74,log2(方药高剂量组/模型组)=-1.39〕、IL12R〔log2(达菲对照组/模型组)=-1.48,log2(方药低剂量组/模型组)=-0.10,log2(方药中剂量组/模型组)=-1.58,log2(方药高剂量组/模型组)=-0.53〕、JAK〔log2(达菲对照组/模型组)=-1.44, log2(方药低剂量组/模型组)=-0.88,log2(方药中剂量组/模型组)=-1.74,log2(方药高剂量组/模型组)=-0.53〕明显下调,模型组JAK mRNA表达较对照组明显升高(2-ΔΔCt:3.17±0.94比1.01±0.13,P<0.05), IFN-γ mRNA表达较对照组明显降低(2-ΔΔCt:0.15±0.48比1.01±0.12,P<0.05);与模型组比较,达菲对照组和疏风宣肺方高、中剂量组JAK mRNA表达均明显降低(2-ΔΔCt:2.02±0.63、1.19±0.30、1.59±0.67比3.17±0.94,均P<0.05),达菲对照组和疏风宣肺方高、中、低剂量组IFN-γ mRNA表达升高(2-ΔΔCt:0.61±0.12、0.41±0.13、0.85±0.14、0.78±0.20比0.15±0.48,均P<0.05)。结论疏风宣肺解毒方可通过调节JAK-STAT通路和升高IFN-γ水平,调节辅助性T细胞1/2(Th1/2)的平衡,减轻肺组织免疫病理损伤。 展开更多
关键词 疏风宣肺解毒方 流感病毒 Janus激酶信号转导与转录激活因子 基因芯片
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