特异性抗体P210减轻Ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤 被引量：6

1

作者 陈娟 王志文 魏宇淼 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期1-6,共6页

目的探讨特异性抗体P210对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的血管内皮细胞脂质蓄积和内皮连接屏障损伤的影响。方法通过Transwell小室建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与人单核细胞(THP-1)来源巨噬细胞共孵育模型,利用激光共聚焦显微镜观察Ox-... 目的探讨特异性抗体P210对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的血管内皮细胞脂质蓄积和内皮连接屏障损伤的影响。方法通过Transwell小室建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与人单核细胞(THP-1)来源巨噬细胞共孵育模型,利用激光共聚焦显微镜观察Ox-LDL及特异性抗体对内皮细胞及内膜下巨噬细胞脂质蓄积的影响;将HUVEC随机分为3组:对照组、Ox-LDL组、Ox-LDL+Ab(特异性抗体)组,分别用DMEM完全培养液,Ox-LDL(50μg/mL,100μg/mL),Ox-LDL(50μg/mL)+Ab(100 ng/mL,200 ng/mL)处理24 h。Western blot检测各组细胞植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、血管内皮钙粘蛋白(VE-Cadherin)、紧密连接蛋白(Occludin)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)蛋白的表达。结果Transwell实验中Ox-LDL组小室上、下腔的细胞内均有较多荧光探针标记的Ox-LDL蓄积,在抗体组中这一效应被显著抑制。与对照组比较,Ox-LDL组的LOX-1、MCP-1和VCAM-1表达明显增高,VE-Cadherin、Occludin的表达明显降低;与Ox-LDL组比较,抗体组的LOX-1、MCP-1和VCAM-1的表达明显下降,VE-Cadherin、Occludin的表达明显升高。结论特异性抗体P210包被后可以明显减少内皮细胞和巨噬细胞内脂质蓄积,减轻Ox-LDL诱导的HUVEC损伤,保护内皮细胞连接屏障。 展开更多

关键词 P210抗体 氧化低密度脂蛋白 内皮细胞损伤 脂质蓄积

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一种简易稳定的乳小鼠脑微血管内皮细胞原代培养方法 被引量：2

2

作者 熊永洁 尹波 +2 位作者 甘莉 王倩 张苏明 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期731-734,共4页

目的寻找一种简单并稳定的原代小鼠脑微血管内皮细胞的培养方法。方法采用两次酶消化法及4℃梯度离心法获得细胞,光镜和电镜下观察细胞形态,用检测Ⅷ因子相关抗原等方法鉴定细胞。结果光镜下细胞呈多角形或短梭形,岛屿样聚集,随细胞生... 目的寻找一种简单并稳定的原代小鼠脑微血管内皮细胞的培养方法。方法采用两次酶消化法及4℃梯度离心法获得细胞,光镜和电镜下观察细胞形态,用检测Ⅷ因子相关抗原等方法鉴定细胞。结果光镜下细胞呈多角形或短梭形,岛屿样聚集,随细胞生长及不断融合而出现"漩涡状"、"铺路石"样排列。电镜下观察可见紧密连接结构。Ⅷ因子相关抗原免疫荧光染色阳性。结论上述方法可获得纯度较高的小鼠脑微血管内皮细胞,为其原代培养提供了一种经济、简易、重复性好的操作方法,也为进一步的生理、生化、药理及体外血脑屏障或共培养等方面的研究提供了材料来源。 展开更多

关键词 小鼠 脑微血管内皮细胞 原代培养

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胰酶分次消化及无血清角化细胞培养基培养甲床上皮细胞的体外实验 被引量：2

3

作者 刘东昕 路来金 王虎 《中国临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期40-41,45,i0003,共4页

目的:探讨甲床上皮细胞体外培养及传代的方法。方法:实验于2004-10/2005-04在吉林大学第一医院中心实验室完成。①标本消毒后,切取甲床并剪碎。②2.5g/L胰蛋白酶+3g/L乙二胺四乙酸1∶1混合液,37℃下消化重复3次,获得细胞悬液。③离心两... 目的:探讨甲床上皮细胞体外培养及传代的方法。方法:实验于2004-10/2005-04在吉林大学第一医院中心实验室完成。①标本消毒后,切取甲床并剪碎。②2.5g/L胰蛋白酶+3g/L乙二胺四乙酸1∶1混合液,37℃下消化重复3次,获得细胞悬液。③离心两次,清洗细胞,加入无血清角化细胞培养液制成细胞悬液,计数后接种于25mm培养瓶中。④37℃,体积分数为0.05的CO2、饱和湿度的培养箱内培养,每2天换液1次。⑤至单层细胞铺满近培养瓶底的80%以上时进行传代。⑥第3代细胞检测项目:倒置显微镜下观察细胞生长情况并摄片;细胞计数,绘制生长曲线;鼠抗人角蛋白17抗体做免疫细胞化学。结果:①细胞生长情况:倒置显微镜观察接种后的细胞12h后,大部分贴壁,11d左右时细胞生长密度可达瓶底的70%～80%,呈铺路石样排列。②免疫细胞化学鉴定结果:培养的细胞70%以上特异性角蛋白17抗体染色阳性。③生长曲线和群体倍增时间:接种后一两天细胞数减少,自第3天起细胞数迅速增多,至9～12d达高峰。对数期细胞群体倍增时间为4.46d。结论:利用酶消化法成功培养出人甲床上皮细胞,所得细胞纯度高并能传代培养,为深入研究甲床细胞的病理生理及分子生物学奠定了基础。 展开更多

关键词 指(趾)甲 上皮细胞 细胞培养

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内障丸加减方对氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞中Bcl-2及Bax表达的影响 被引量：3

4

作者 詹敏 李志英 王燕 《河北中医》 2012年第5期740-742,746,F0003,共5页

目的观察中药单体与含药血清对氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(LECs)中Bcl-2及Bax表达的干预作用异同,探讨内障丸加减方预防或延缓白内障发生发展的作用机制。方法取3只8周龄大鼠,予内障丸加减方45 g/(kg.次)灌胃,每日2次,连续3 d,末次灌胃... 目的观察中药单体与含药血清对氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(LECs)中Bcl-2及Bax表达的干预作用异同,探讨内障丸加减方预防或延缓白内障发生发展的作用机制。方法取3只8周龄大鼠,予内障丸加减方45 g/(kg.次)灌胃,每日2次,连续3 d,末次灌胃后1 h,制备含药血清。以Medium199培养液30 mL+青霉素注射液20万U/L+链霉素注射液25万U/L制备成培养液5份,分别为空白对照组、模型组、槲皮素组、含药血清组及空白血清组,除空白对照组外,其余各组培养液以30%过氧化氢(H2O2)溶液诱导Fenton反应。然后含药血清组及空白血清组分别加入相应的血清,将各培养液置于无菌6孔培养板中,每孔含培养液3 mL。另取15只4～5周龄大鼠随机分为5组,分别为空白对照组、模型组、槲皮素组、含药血清组及空白血清组,每组各3只。无菌操作提取晶状体,将晶状体放入含有相应培养液的培养孔中,每孔3枚。经24 h后,取囊膜铺片,以免疫组化法检测LECs的凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达,在光学显微镜下观察Bcl-2及Bax的表达情况。结果空白对照组、槲皮素组及含药血清组Bcl-2及Bax表达与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),空白血清组与模型组Bcl-2及Bax表达无统计学意义(P>0.05)。空白对照组、槲皮素组及空白血清组Bcl-2及Bax表达与含药血清组比较差异有统计学意义(P<0.05)。过氧化氢诱导的大鼠LECs凋亡,模型组和空白血清组Bax的表达上调明显,而Bcl-2的表达下调。槲皮素及含药血清组与模型组及空白血清组相比,LECs的Bcl-2的表达显著上调,而Bax的表达明显下调。含药血清组比槲皮素组更能有效上调Bcl-2的表达,降低Bax的表达。结论内障丸加减方的血清活性成分能有效保护LECs的细胞结构,上调Bcl-2基因的表达,抑制细胞凋亡。 展开更多

关键词 白内障 晶体 过氧化氢 上皮细胞 基因 BCL-2 模型 动物 大鼠 中医疗法

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脓毒症与内皮细胞损伤 被引量：9

5

作者 张晓娟 马晓春 《实用医院临床杂志》 2012年第6期11-14,共4页

脓毒症的发病率和死亡率一直居世界首位。内皮细胞损伤导致多器官功能障碍增加了脓毒症的严重程度和死亡风险。在这篇综述中,我们阐述了内皮细胞在正常生理条件下的功能和在脓毒症时的功能变化,其中包括内皮细胞形态学的改变,内皮细胞... 脓毒症的发病率和死亡率一直居世界首位。内皮细胞损伤导致多器官功能障碍增加了脓毒症的严重程度和死亡风险。在这篇综述中,我们阐述了内皮细胞在正常生理条件下的功能和在脓毒症时的功能变化,其中包括内皮细胞形态学的改变,内皮细胞促粘附、促凝、抗纤溶的功能改变和降低了对血管张力的调节。内皮细胞可能成为我们治疗脓毒症的靶点。 展开更多

关键词 脓毒症 内皮细胞

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CD151及其突变体在人脐静脉内皮细胞系中的稳定表达

6

作者 李鹏程 王赟 +2 位作者 左后娟 邹远林 刘正湘 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期95-99,共5页

目的建立能够稳定高表达四跨膜蛋白CD151及其突变体的人脐静脉内皮细胞系,为研究CD151在内皮细胞血管形成中的作用奠定基础。方法成功构建重组质粒rAAV-CD151,rAAV-CD151-AAA突变体及rAAV-CD151-ARSA突变体,并用rAAV-GFP作对照,应用脂... 目的建立能够稳定高表达四跨膜蛋白CD151及其突变体的人脐静脉内皮细胞系,为研究CD151在内皮细胞血管形成中的作用奠定基础。方法成功构建重组质粒rAAV-CD151,rAAV-CD151-AAA突变体及rAAV-CD151-ARSA突变体,并用rAAV-GFP作对照,应用脂质体介导质粒转染的方法将重组质粒和对照质粒分别转染至人脐静脉内皮细胞中,通过G418进行筛选,建立稳定高表达CD151蛋白的内皮细胞系。Westernblot检测目的蛋白表达,对构建好的稳定转染细胞系进行筛选和鉴定。结果 rAAV-CD151,rAAV-CD151-AAA突变体,rAAV-CD151-ARSA突变体及rAAV-GFP重组质粒成功整合入人脐静脉内皮细胞,并能够稳定的表达相应的目的蛋白。结论通过本实验能够获得稳定高表达野生型CD151及突变体CD151的内皮细胞系,为研究CD151在调节内皮细胞各种病理生理改变中的作用提供了坚实的实验基础。 展开更多

关键词 CD151 突变体 人脐静脉内皮细胞系 稳定表达

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伽玛刀治疗胚胎发育不良性神经上皮瘤1例

7

作者 刘海涛 陈群 +2 位作者 朱玉存 杨耘 郝琴 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2008年第5期380-380,436,共2页

关键词 胚胎发育 神经外胚瘤 原始 伽玛刀

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人羊膜不同位置上皮细胞的类胚胎干细胞性质差异研究 被引量：3

8

作者 冯小倩 陈连凤 方全 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期701-705,共5页

目的了解足月人羊膜上皮不同位置上皮细胞在类胚胎干细胞性质方面的异质性。方法分层消化收集人羊膜上皮近表层与近基底层细胞,运用流式细胞术、免疫荧光、免疫组织化学等方法观察测定其干细胞表面抗原及分子标记物Nanog、Oct4、Sox2、S... 目的了解足月人羊膜上皮不同位置上皮细胞在类胚胎干细胞性质方面的异质性。方法分层消化收集人羊膜上皮近表层与近基底层细胞,运用流式细胞术、免疫荧光、免疫组织化学等方法观察测定其干细胞表面抗原及分子标记物Nanog、Oct4、Sox2、SSEA1、SSEA3、SSEA4、TRA1-60、TRA1-81、CD73的表达情况;同时将足月人羊膜全层及经胰酶消化去上皮后的人羊膜行组织学染色,测定SSEA3、TRA1-60、TRA1-81表达情况。结果人羊膜上皮近基底层细胞表达Nanog、Oct4、Sox2、SSEA3、SSEA4、TRA1-60、TRA1-81普遍高于近表层细胞;表达SSEA4最强、最显著的细胞主要为较小的近圆形细胞,分布于羊膜上皮近基底层处。结论人羊膜上皮不同位置细胞的干细胞特性不同,近基底层细胞比近表层细胞具有更强的类胚胎干细胞性质,因而有望成为临床干细胞的来源。 展开更多

关键词 羊膜 上皮细胞 干细胞

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Sec3对中性粒细胞弹性蛋白酶诱导的气道上皮细胞黏蛋白分泌的影响 被引量：1

9

作者 何芳 周向东 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期266-269,共4页

目的探讨栓链因子复合物亚基Sec3对中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导的气道上皮细胞黏蛋白(MUC)分泌的影响。方法体外培养人气道上皮细胞16HBE,随机分为8组:空白对照组、表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化抑制剂AG1487组、Sec3siRNA组、阴性si... 目的探讨栓链因子复合物亚基Sec3对中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导的气道上皮细胞黏蛋白(MUC)分泌的影响。方法体外培养人气道上皮细胞16HBE,随机分为8组:空白对照组、表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化抑制剂AG1487组、Sec3siRNA组、阴性siRNA对照组、NE组、NE+AG1478、NE+Sec3siRNA组、NE+阴性siRNA组。采用Western blot法检测Sec3蛋白及pEGFR的相对含量;ELISA、RT-PCR法分析细胞培养上清液中MUC5AC的相对含量及细胞中MUC5AC mRNA水平。结果 Sec3siRNA转染显著降低Sec3蛋白表达,提示转染成功,且加入NE对转染效果无干扰。单纯NE刺激组上清液中MUC5AC含量,细胞中MUC5AC mRNA、pEGFR水平显著高于空白对照组(P<0.01),AG1487可明显抑制上述刺激作用;转染Sec3siRNA可阻断MUC5AC分泌(P<0.01),但并不影响其转录水平表达(P>0.05)。结论在NE诱导的人气道上皮黏液高分泌过程中,栓链因子复合物亚基Sec3对黏蛋白出胞有重要的介导作用。 展开更多

关键词 黏蛋白 中性粒细胞弹性蛋白酶 栓链因子复合物 表皮生长因子受体

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晶状体上皮细胞胞间通讯的研究进展

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作者 王真艳 李立 《检验医学与临床》 CAS 2008年第2期101-104,共4页

关键词 晶体 上皮细胞 胞间通讯 白内障

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鞍区错构性上皮样囊肿1例

11

作者 倪志立 张名霞 孔锋 《临床耳鼻咽喉科杂志》 CSCD 北大核心 2005年第2期92-92,共1页

关键词 上皮样囊肿 鞍区肿瘤

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