骨髓基质细胞培养和体外成骨研究 被引量：24

1

作者 刘劲松 曾才铭 +2 位作者 王宏邦 李世和 贾伟 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 1997年第4期237-241,共5页

为研究骨髓基质细胞在体外培养条件下的成骨能力，将家兔骨髓细胞进行体外培养。其中的造血细胞成分在一周内死亡或随换液而被清除。传代后改用含１０－８ｍｏｌ／Ｌ地塞米松和１０ｍｍｏｌ／Ｌβ－甘油磷酸钠的条件培养液，经活体相差... 为研究骨髓基质细胞在体外培养条件下的成骨能力，将家兔骨髓细胞进行体外培养。其中的造血细胞成分在一周内死亡或随换液而被清除。传代后改用含１０－８ｍｏｌ／Ｌ地塞米松和１０ｍｍｏｌ／Ｌβ－甘油磷酸钠的条件培养液，经活体相差显微观察、四环素荧光标记、组织化学染色、透射电镜、扫描电镜和Ｘ线能谱等方法进行观测。结果显示，传代细胞培养１５天融合成单层后分泌活动增强，培养２０天后细胞形成多层结构，并聚集成多个散在的不透光结节。这些细胞的ＡＬＰ染色呈强阳性，结节的四环素荧光标记、钙盐染色均呈强阳性，Ｘ线能谱分析显示结节的主要组成元素为钙和磷。确认培养的骨髓基质细胞具有与成骨细胞相似的形态特征和生物学特性，并能在体外形成钙化的新骨组织。 展开更多

关键词 骨髓 基质细胞 细胞培养 成骨作用

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骨髓间充质干细胞复合异种骨基质明胶修复大鼠桡骨缺损 被引量：16

2

作者 田志逢 秦书俭 +2 位作者 王瑞芳 柏永刚 谷学静 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第15期2801-2805,共5页

目的:在骨组织工程学领域内,主要集中种子细胞、支架载体和细胞支架复合体的构建3个方面的研究,在干细胞方面大多数学者认为骨髓间充质干细胞较为理想,支架材料虽然种类繁多,但却没有一种理想的载体。实验拟通过观察骨髓间充质干细胞/... 目的:在骨组织工程学领域内,主要集中种子细胞、支架载体和细胞支架复合体的构建3个方面的研究,在干细胞方面大多数学者认为骨髓间充质干细胞较为理想,支架材料虽然种类繁多,但却没有一种理想的载体。实验拟通过观察骨髓间充质干细胞/骨基质明胶复合体植入骨缺损处成骨性细胞的变化以及钙化情况,认识同种骨髓间充质干细胞复合异种骨基质明胶修复大鼠桡骨节段性骨缺损的可行性。方法:实验于2006-10/2007-08在辽宁医学院解剖学试验室与科学实验中心完成。①骨髓间充质干细胞体外培养、纯化、扩增、Brd-U体外标记后并在体外与骨基质明胶复合培养,制成骨髓间充质干细胞/骨基质明胶复合体。②60只SD大鼠采用随机数字表法分为骨髓间充质干细胞/骨基质明胶复合体治疗组、单纯骨基质明胶治疗组和单纯骨髓间充质干细胞治疗组,每组20只;每组分2,4,8,12周4个时间段,每个时间段5只。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。③制备同种异体SD大鼠桡骨骨干5mm节段性骨缺损模型。骨髓间充质干细胞/骨基质明胶复合体治疗组缺损处植入骨髓间充质干细胞/骨基质明胶复合体,单纯骨基质明胶治疗组缺损处植入单纯骨基质明胶(骨基质明胶由完全培养液同等条件下培养7d),单纯骨髓间充质干细胞治疗组缺损处植入单纯骨髓间充质干细胞(Brd-U标记的第3代骨髓间充质干细胞,密度1×109个/L)。④大体观察大鼠的术肢活动情况;X射线放射学、组织学对比观察各组大鼠骨缺损的修复情况。结果:除骨髓间充质干细胞/骨基质明胶复合体治疗组有1例动物因麻醉过深死亡外,其余59只大鼠进入结果分析。①各组术后各时间段骨缺区X射线片表现:骨髓间充质干细胞/骨基质明胶复合体治疗组:2周桡骨缺损处略见骨痂形成,8周可见明显形成骨缺损区的桥接,12周骨缺损区完全被新生骨组织填充,已有骨髓腔出现。单纯骨基质明胶治疗组:12周骨缺损区骨痂形成增多,但未出现桥接,并可见两端有骨质硬化现象。单纯骨髓间充质干细胞治疗组:12周可见两断端有骨质硬化现象,最后形成骨不连。术后2,4,8,12周复合体治疗组与单纯治疗组放射学检查评价新骨生成差异有显著性意义(P<0.01)。②组织学检测结果:术后2,4,8,12周复合体治疗组与单纯治疗组组织学检查新骨生成速度、生成量差异均有显著性意义(P<0.01)。结论:骨髓间充质干细胞/骨基质明胶复合体有较强的成骨能力,对节段性骨缺损有较好的修复作用,有望成为骨组织工程中可以选择的植骨材料。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 骨基质明胶 异种 细胞培养 骨缺损 组织构建

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人脂肪间充质干细胞与生物材料共混物三维打印体的体内成骨 被引量：10

3

作者 宋杨 王晓飞 +2 位作者 王宇光 孙玉春 吕培军 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期45-50,共6页

目的:构建人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,h ASCs)-生物材料共混物三维生物打印体,检测其体内成骨能力,初步建立将细胞共混物三维生物打印技术应用于体内成骨的技术路线。方法:以P4代h ASCs作为种子... 目的:构建人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,h ASCs)-生物材料共混物三维生物打印体,检测其体内成骨能力,初步建立将细胞共混物三维生物打印技术应用于体内成骨的技术路线。方法:以P4代h ASCs作为种子细胞,进行成骨向诱导,并采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和茜素红矿化结节染色检测其成骨向分化的能力。将种子细胞加入20 g/L海藻酸钠和80 g/L明胶混合物(细胞密度约为1×106个/m L),采用Bioplotter三维生物打印机(德国Envision公司)进行打印,获得细胞-海藻酸钠-明胶共混物打印体,采用活-死细胞双荧光染色法观察打印体中细胞存活率,随后对打印体进行1周成骨诱导培养,作为实验组;另打印不含细胞、只含海藻酸钠-明胶溶胶的三维打印体作为对照组。将实验组和对照组打印体植入裸鼠背部皮下,于植入后6周取出样本,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、马松(Masson)三色法染色、免疫组织化学染色和Inveon微型CT(Micro CT)检测打印体样本的成骨情况。结果:打印体中细胞存活率达89%±2%,打印体植入6周后取出,对照组植入打印体大部分发生降解,形态不规则,为无定型凝胶状,而实验组打印体基本保持原有大小,质地坚韧。HE染色和马松三色法染色结果显示,植入6周后,实验组打印体中有类骨组织形成,并有血管长入;免疫组织化学染色结果显示,骨钙素抗体表达成阳性;Micro CT结果显示,实验组密度较高,新生骨容积为18%±1%。结论:h ASCs共混物三维生物打印体可在裸鼠体内异位成骨,细胞共混物三维生物打印技术应用于体内成骨的技术路线是可行的。 展开更多

关键词 骨生成 打印 三维 间充质干细胞 脂肪组织 生物相容性材料

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骨形态发生蛋白与关节软骨修复 被引量：6

4

作者 李丹 孔迅 +5 位作者 李葚煦 王琰 王天昱 栾丽菊 张艳 秦丽华 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第28期5525-5529,共5页

学术背景:近些年组织工程和基因技术开辟了修复软骨关节的新途径,但目前尚在研究阶段,有较多问题需解决。骨形态发生蛋白可促进软骨生成和修复,在关节软骨修复上有着很好的前景。目的:总结分析骨形态发生蛋白在关节软骨修复过程中的作... 学术背景:近些年组织工程和基因技术开辟了修复软骨关节的新途径,但目前尚在研究阶段,有较多问题需解决。骨形态发生蛋白可促进软骨生成和修复,在关节软骨修复上有着很好的前景。目的:总结分析骨形态发生蛋白在关节软骨修复过程中的作用及可能的应用前景。资料来源:应用计算机检索北京大学医学部"ScienceDirect Onsite"数据库和"Medline"数据库1996-01/2007-05有关英文文献,检索词"BMPs,cartilage repair/chondrocyte",限定文章语言种类为英文;同时应用中国期刊全文专题数据库和中国科技期刊数据库1996-01/2007-05有关中文文献,检索词"骨形态发生蛋白,关节软骨修复",限定文章语言种类为中文。对资料初审,纳入标准:①与目前关节软骨修复的现状和问题有关的文献。②有关骨形态发生蛋白对关节软骨修复的作用研究的文章。文献评价:收集到符合上述要求的文献61篇,除去无关研究和重复性研究,采用40篇。资料综合:临床上修复关节软骨有几种主要方式,如软骨或骨细胞移植、骨膜移植、自体软骨细胞移植等,自体软骨细胞移植是目前反映最好的一种方式,但仍存在问题。骨形态发生蛋白对关节软骨修复具有促进作用,有促进软骨分化、基质形成,并抑制软骨细胞去分化等作用。结论:骨形态发生蛋白在促进软骨修复方面的作用有良好应用前景,随着研究的不断深入,关节软骨修复这个临床上的难题将有望被突破。 展开更多

关键词 软骨修复 骨形态发生蛋白质类 综述文献 组织构建

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富血小板血浆对大鼠乳鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响 被引量：5

5

作者 范志勇 张英泽 +3 位作者 马维 张华 张爱民 史正亮 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第32期6321-6325,共5页

目的:观察富血小板血浆对体外培养的SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响,探讨富血小板血浆促进骨修复的细胞学机制及其有效浓度。方法:实验于2004-09/2006-10在河北医科大学第二医院外科实验室完成。①实验动物:出生24h内的SD乳鼠1... 目的:观察富血小板血浆对体外培养的SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响,探讨富血小板血浆促进骨修复的细胞学机制及其有效浓度。方法:实验于2004-09/2006-10在河北医科大学第二医院外科实验室完成。①实验动物:出生24h内的SD乳鼠10只,体质量400～500g的健康雄性SD大鼠10只。②实验方法:取出生24h内的SD乳鼠颅骨进行成骨细胞分离与培养。从健康雄性SD大鼠腹主动脉抽血制备富血小板血浆。将体外培养并扩增的第3代SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞与不同浓度富血小板血浆复合培养。③实验分组:实验分为空白对照、12.5%富血小板血浆组、25%富血小板血浆组和50%富血小板血浆组。④实验评估:通过相差显微镜观察细胞生长情况,培养后1,3,5和7d应用四甲基偶氮唑盐法、碱性磷酸酶活性检测和钙结节染色检测成骨细胞的增殖和分化情况。结果:①各组细胞生长情况:相差显微镜下见富血小板血浆组细胞增殖旺盛,与空白对照组相比,富血小板血浆能明显促进成骨细胞的增殖,其作用随富血小板血浆浓度的增加而增强。其中,50%富血小板血浆组细胞增殖最为显著,且细胞达到汇合的时间也相应缩短。②成骨细胞增殖情况:在各时间段,各种浓度的富血小板血浆组中成骨细胞的增殖活性均高于空白对照组(P<0.05),且与富血小板血浆浓度成正比。50%富血小板血浆对成骨细胞增殖刺激作用最强,3,5和7d时与其他富血小板血浆组相比差异有显著性(P<0.05)。③各组细胞碱性磷酸酶活性检测结果:富血小板血浆组中成骨细胞的碱性磷酸酶活性均高于空白对照组(P<0.05),且与富血小板血浆浓度成正比。以50%富血小板血浆组的成骨细胞碱性磷酸酶活性最高,3,5和7d时均显著高于其他富血小板血浆组(P<0.05)。④钙结节茜素红染色结果:不同浓度的富血小板血浆组的矿化结节数量均显著高于空白对照组(P<0.05),其中50%富血小板血浆组的矿化结节数量最多,显著高于其他浓度的富血小板血浆组(P<0.05)。结论:富血小板血浆能明显促进体外培养的SD大鼠乳鼠颅骨成骨细胞增殖和分化,其作用效果与富血小板血浆的浓度成正比。 展开更多

关键词 血小板 成骨细胞 细胞增殖 细胞分化 组织构建

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骨形态发生蛋白的研究进展 被引量：21

6

作者 安新玲 韩金祥 王世立 《食品与药品》 CAS 2009年第6期69-73,共5页

骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)于1965年发现。深入研究其理化和生物学特性,证明BMP是正常胚胎时期骨、牙组织内部骨和成年骨修复中最重要的诱导分化因子,是唯一能单独诱导骨组织形成的生长因子。现对BMP的生物特性、... 骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)于1965年发现。深入研究其理化和生物学特性,证明BMP是正常胚胎时期骨、牙组织内部骨和成年骨修复中最重要的诱导分化因子,是唯一能单独诱导骨组织形成的生长因子。现对BMP的生物特性、受体蛋白、信号传导及作用等的研究进展作一综述。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白 胚胎发育 骨代谢 成骨

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带血供肱骨下段内侧骨(膜)瓣移位术的应用解剖 被引量：10

7

作者 张发惠 刘经南 钟桂午 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 1997年第1期11-14,共4页

目的：为带血供肱骨下段骨瓣移位术提供解剖学基础。方法：４０侧成人上肢标本，观测尺侧下副动脉、尺侧返动脉的起始、走行、分支分布、骨膜支和吻合。结果：尺侧下副动脉距髁间连线上３．７±１．７ｃｍ始于肱动脉，外径１．８
... 目的：为带血供肱骨下段骨瓣移位术提供解剖学基础。方法：４０侧成人上肢标本，观测尺侧下副动脉、尺侧返动脉的起始、走行、分支分布、骨膜支和吻合。结果：尺侧下副动脉距髁间连线上３．７±１．７ｃｍ始于肱动脉，外径１．８±０．４ｍｍ，长１．８±０．７ｃｍ，骨膜支１～３支，外径０．８±０．４ｍｍ分布肱骨下段内侧半骨膜。尺侧返动脉前干外径１．１±０．２ｍｍ。尺侧上副动脉、尺侧下副动脉、尺侧返动脉在肱骨内上髁附近互相吻合。结论：利用上述血管吻合关系，设计带血供的肱骨（膜）瓣或骨皮瓣，可移位修复肱骨中上段、尺、桡骨中段骨折骨不连。临床应用已取得良好效果。 展开更多

关键词 尺侧下副动脉 移位术 肱骨瓣 应用解剖

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Cyclin D1 及P21^(cip1/waf1)基因在下颌骨髁状突软骨中的表达及其意义 被引量：3

8

作者 李松 王惠芸 +1 位作者 金岩 李媛 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期51-53,共3页

目的：探讨ｃｙｃｌｉｎＤ１及Ｐ２１ｃｉｐ１／ｗａｆ１基因表达变化对颞下颌关节发育中髁状突软骨细胞周期活动的影响。方法：用免疫组织化学染色及原位杂交检测ｍＲＮＡ技术，分别对胚胎及生后一周ＳＤ大鼠颞下颌关节不同发育时期ｃ... 目的：探讨ｃｙｃｌｉｎＤ１及Ｐ２１ｃｉｐ１／ｗａｆ１基因表达变化对颞下颌关节发育中髁状突软骨细胞周期活动的影响。方法：用免疫组织化学染色及原位杂交检测ｍＲＮＡ技术，分别对胚胎及生后一周ＳＤ大鼠颞下颌关节不同发育时期ｃｙｃｌｉｎＤ１蛋白及Ｐ２１ｃｉｐ１／ｗａｆ１ｍＲＮＡ在髁状突软骨中的表达进行观察。结果：ｃｙｃｌｉｎＤ１在各发育时期的髁状突软骨增殖层及浅层肥厚层中均有表达，而且从增殖层至浅层肥厚层阳性细胞数无明显变化。Ｐ２１ｃｉｐ１／ｗａｆ１ｍＲＮＡ阳性细胞主要分布于髁状突软骨表面未分化间充质细胞层向增殖层过渡的区域及增殖层深部向浅层肥厚层过渡的区域。结论：Ｐ２１ｃｉｐ１／ｗａｆ１在髁状突软骨的特征性分布提示Ｐ２１ｃｉｐ１／ｗａｆ１参与软骨细胞周期的调节，Ｐ２１ｃｉｐ１／ｗａｆ１表达强弱的变化可能是启动髁状突软骨细胞分化的主要因素之一。 展开更多

关键词 细胞周期素D1 下颌骨髁状突 关节软骨 细胞周期

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脱氢表雄酮对体外培养大鼠成骨细胞和骨保护素的影响 被引量：2

9

作者 杨建芬 孙宜萍 +2 位作者 李蔚 朱国英 王莉华 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第15期2815-2819,共5页

背景：脱氢表雄酮主要米自肾上腺皮质，在相关外周组织中转化为雄激素或雌激素而发挥间接的生物学作用。目的：实验拟验证脱氢表雄酮促进成骨细胞增殖的作用及其机制。设计、时间及地点：分组对照观察，于2006-01／2007-02在上海交通大... 背景：脱氢表雄酮主要米自肾上腺皮质，在相关外周组织中转化为雄激素或雌激素而发挥间接的生物学作用。目的：实验拟验证脱氢表雄酮促进成骨细胞增殖的作用及其机制。设计、时间及地点：分组对照观察，于2006-01／2007-02在上海交通大学附属第六人民医院和上海复旦大学放射医学研究所合作完成。材料：1日龄SD新生大鼠10只，雌雄不拘。脱氢表雄酮为美国Sigma公司产品。方法：体外分离培养SD大鼠成骨细胞，取传1代细胞，分别给予（1×10^-5,1×10^-7，1×10^-9）mmol／L脱氢表雄酮培养72h，以1×10^-8mmol／L雌二醇为阳性对照，另设空白对照组。主要观察指标：以细胞形态学和碱性磷酸酶染色进行成骨细胞鉴定。应用光镜、四甲基偶氮唑盐法检测细胞的生长和增殖。茜素红染色观察成骨细胞矿化结节形成功能；同时双抗体夹心ABC-ELISA法测定不同浓度脱氢表雄酮培养液中对骨保护素浓度的影响。结果：①原代培养细胞碱性磷酸酶染色成阳性鉴定为成骨细胞。②不同浓度脱氢表雄酮组成骨细胞增殖能力均有上升，其中以1×10^-7mmol／L脱氢表雄酮组最显著（P〈0．01），其作用和雌二醇相似（P〉005）。③不同浓度脱氢表雄酮组碱性磷酸酶的活性均升高，亦以1×10^-7mmol／L脱氢表雄酮组最显著（P〈001），1×10^7mmol／L，1×10^9mmol／L脱氢表雄酮的作用和雌二醇和相似（P〉0．05）。④1×10^-9mmol／L脱氢表雄酮组单位细胞数的碱性磷酸酶活性高于空白对照组（P〈0．05）。⑨不同浓度脱氧表雄酮组矿化面积及矿化面积比均有显著增加（P〈0．01），其作用和雌二醇相似。⑥1×10^-9mmol／L脱氧表雄酮组培养72h时骨保护素反应最活跃（P〈0．01），与成骨细胞增殖能力呈正相关。结论：脱氢表雄酮能够促进SD大鼠成骨细胞生长和增殖，浓度适当时与雌二醇无显著差别，最佳浓度为1×（10^-7～10^-9）mmol/L，其作用可能与刺激骨保护素因子有关。当浓度升高至1×10^-5mmol／L时，并不利于成骨细胞的增殖。 展开更多

关键词 硫酸脱氢表雄酮 成骨细胞 骨保护素 组织构建

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长骨液促进骨延长区成骨作用的组织学观察 被引量：3

10

作者 邹培 李峻辉 +3 位作者 周中英 李主一 林月秋 阮默 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第46期60-61,T0004,共3页

目的:观察活血化瘀中药长骨液对骨延长动物模型骨延长区的组织学变化,以及对成骨作用的影响。方法:实验于2001-02-05在成都军区昆明总医院实验动物中心实验实完成。54只新西兰大白兔造成左胫骨中段骨延长模型,并随机分为对照组和实验组... 目的:观察活血化瘀中药长骨液对骨延长动物模型骨延长区的组织学变化,以及对成骨作用的影响。方法:实验于2001-02-05在成都军区昆明总医院实验动物中心实验实完成。54只新西兰大白兔造成左胫骨中段骨延长模型,并随机分为对照组和实验组,每组各27只。实验组于术后第2天开始喂含中药长骨液(由丹参、土鳖虫、骨碎补等组成)的颗粒饲料(每只按7.5mL/kg·d标准加入),对照组喂普通饲料。于延长7d、延长结束后0,7,14,21,30,50,60和70d,将两组各处死动物3只,切取延长区新骨组织,按常规做成光镜切片,在光镜下观察延长区新骨再生与成熟情况。结果:两组各有27只动物纳入结果分析。①两组胫骨中段骨延长情况:两组延长长度差异无显著性意义(P>0.05)。②各组胫骨中段骨延长的组织学变化:实验组在延长结束时,增厚的骨膜上有大量的毛细血管增生,可见大量的间充质细胞,成纤维细胞增生、活跃;延长结束后1～3周,骨膜下、骨小梁周围成骨细胞较多,且成骨活动较对照组更为活跃;延长结束后30d,延长区假性生长板比对照组提前消失。结论:长骨液通过促进骨延长区血管增生、改善局部的血液循环,促进骨生成细胞和破骨细胞数量的增加和功能的活跃,加速假性生长板成骨,来明显促进骨延长区新骨的形成与成熟。 展开更多

关键词 骨延长术 中药疗法 骨生成

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优化酶消化法体外培养及鉴定SD大鼠的成骨细胞(英文) 被引量：2

11

作者 王双利 刘宁 +2 位作者 杨淑野 吴昊 查振刚 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第15期2983-2987,共5页

背景:体外成骨细胞的培养技术已经有了很大的发展。但是,在培养过程中,如果胰蛋白酶的消化时间过长,成骨细胞膜便易受到损伤;同时,传统的培养方法存在所获得的成骨细胞数量少、纯度不高等不足。因此,有必要探求一种新的体外培养成骨细... 背景:体外成骨细胞的培养技术已经有了很大的发展。但是,在培养过程中,如果胰蛋白酶的消化时间过长,成骨细胞膜便易受到损伤;同时,传统的培养方法存在所获得的成骨细胞数量少、纯度不高等不足。因此,有必要探求一种新的体外培养成骨细胞的方法。目的:优化成骨细胞在体外条件下的培养方法并对其进行鉴定。设计:观察性实验。单位:暨南大学附属第一医院骨科。材料:实验于2007-03/05在暨南大学附属第一医院骨科完成。选用出生24h的SD大鼠8只,由南方医科大学实验动物中心提供,雌雄不拘。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。实验用Ⅱ型胶原酶由美国Sigma公司分装,胰蛋白酶为Sigma公司产品,碱性磷酸酶试剂盒由南京建成生物制品公司生产,SABC-1021试剂盒由武汉博士德公司进口分装。方法:挑选24h之内的新生SD乳鼠麻醉后处死,无菌条件下取出颅骨,剔除附着的结缔组织及骨膜,D-Hank’s液冲洗3次。不强调对颅骨内、外膜,骨缝连接处等附着的结缔组织及颅顶的透明软骨结节等进行反复多次的剔除,避免操作时间过长影响细胞的存活率。结合0.1%Ⅱ型胶原酶来消化SD乳鼠颅骨,减少并严格控制胰蛋白酶的消化时间。组织块经0.25%胰蛋白酶消化20min,继以0.1%Ⅱ型胶原酶消化60min,收集上清离心,所得成骨细胞接种于培养瓶中并行"多次贴壁法"纯化。主要观察指标:应用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、扫描电子显微镜观察成骨细胞形态特点。采用碱性磷酸酶Gomori钙钴法染色、钙结节茜素红法染色及Ⅰ型胶原免疫组织化学染色方法进行鉴定成骨细胞生物学特性。结果:原代和传代培养的细胞具有活跃的增殖能力,细胞呈多角形或梭形,具有多个突起可互相连接,细胞核较幼稚,细胞器丰富,具有典型的成骨细胞形态特征。体外培养的成骨细胞可分泌碱性磷酸酶,改良钙钴法染色阳性率可达90%,并可形成钙结节,I型胶原染色阳性,具有成骨细胞的生物学功能。结论:实验用优化后的酶消化法分离、培养的SD大鼠成骨细胞具有典型的成骨细胞生物学特征。 展开更多

关键词 成骨细胞 改良酶消化法 SD大鼠

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端粒酶在人发育骨与软骨中的原位表达 被引量：1

12

作者 裴明 曲绵域 +1 位作者 于长隆 张波 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期12-13,共2页

为观察端粒酶在人发育骨与软骨组织中的表达及分布，认识端粒酶在关节软骨发育中的作用，用组织学及原位杂交技术，对临床经过石蜡包埋的人发育关节软骨组织进行定位定性检测，结果显示，３月龄胚胎软骨端粒酶高表达，随着进一步发育，... 为观察端粒酶在人发育骨与软骨组织中的表达及分布，认识端粒酶在关节软骨发育中的作用，用组织学及原位杂交技术，对临床经过石蜡包埋的人发育关节软骨组织进行定位定性检测，结果显示，３月龄胚胎软骨端粒酶高表达，随着进一步发育，端粒酶的活性明显降低。 展开更多

关键词 骨发育 端粒酶 原位杂交 软骨 表达 发育骨

原文传递

破骨细胞三维培养体系的建立 被引量：1

13

作者 肖新华 廖二元 +4 位作者 董源媛 赵向 刘江华 曹仁贤 文格波 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第20期3863-3866,共4页

背景:建立基质细胞与骨髓细胞共培养模型能诱导破骨样细胞产生,但这种培养体系存在细胞不单纯,不适合基因转染等缺点。目的:建立基质细胞MBA-1细胞与破骨前体细胞RAW264.7共培养形成不混杂基质细胞的成熟多核破骨细胞的新方法。设计、... 背景:建立基质细胞与骨髓细胞共培养模型能诱导破骨样细胞产生,但这种培养体系存在细胞不单纯,不适合基因转染等缺点。目的:建立基质细胞MBA-1细胞与破骨前体细胞RAW264.7共培养形成不混杂基质细胞的成熟多核破骨细胞的新方法。设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2007-03在南华大学附属第一医院临床研究所实验室完成。材料:小鼠源性破骨前体细胞RAW264.7细胞从ATCC引进,基质细胞MBA-1细胞由周厚德博士惠赠。方法:RAW264.7细胞以1×104/孔接种于Transwell三维培养板下层,将聚碳酸酯膜孔径0.4μm的培养板上层先取出接种MBA-1细胞,待细胞贴壁胞体伸展后,将其重新与下层联合共培养,共培养体系细胞每3d换液1次。主要观察指标:①抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察染色阳性的破骨细胞形态特点。②扫描电镜观察骨吸收陷窝形态,评价共培养形成的破骨样细胞骨吸收活性。结果:共培养体系中的RAW264.7细胞,第9天可见较多TRAP阳性单核细胞,出现TRAP阳性多核破骨样细胞。共培养14d后,已分化成熟的破骨细胞,能形成骨吸收陷窝。结论:MBA-1细胞与破骨前体细胞RAW264.7分层共培养可形成成熟的、有骨吸收功能的多核破骨细胞,且这种破骨细胞中不混杂基质细胞。 展开更多

关键词 破骨细胞 共培养 基质细胞 组织构建

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辛伐他汀纳米脂质体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 被引量：1

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作者 徐璐 王超 +1 位作者 沈文文 祁荣 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期883-888,共6页

目的:通过对骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达进行测定,研究纳米脂质体剂型对辛伐他汀(simvastatin,SMV)在骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)形成骨过... 目的:通过对骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达进行测定,研究纳米脂质体剂型对辛伐他汀(simvastatin,SMV)在骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)形成骨过程中的促进作用。方法:采用全骨髓贴壁培养法体外培养小鼠原代BMSC。以SMV原料药处理组作为对照组,分别设SMV药物浓度1μmol/L和2μmol/L为SMV低剂量组(SMV low dosage group,S1)和SMV高剂量组(SMV high dosage group,S2);将辛伐他汀纳米脂质体(simvastatin nano-liposomes,SMV-liposome)处理组作为实验组,根据SMV药物包载浓度1μmol/L和2μmol/L分别设为SMV-liposome低剂量组(SMV-liposome low dosage group,SL1)和SMV-liposome高剂量组(SMV-liposome high dosage group,SL2);此外,实验中所有涉及到不做任何处理的组,都作为空白组(blank)。将SMV和SMV-liposome分别与BMSC共孵育48 h后,用碱性磷酸酶比色法测定其ALP比活性,用碱性磷酸酯酶显色试剂盒(BCIP/NBT alkaline phosphatase color development kit,BCIP/NBT Kit)检测其ALP蛋白表达量,用Western Blot检测其BMP-2蛋白的表达量。结果:细胞毒性实验结果显示,对照组与实验组在与BMSC共孵育48 h后,各组细胞生存率均高于84%,且组间差异无统计学差意义(P>0.05)。在给药浓度相同时,实验组ALP比活性显著高于对照组,其中S1组和SL1组ALP比活性分别为0.27±1.11和0.21±2.15(P<0.001),S2组和SL2组ALP比活性分别为0.63±1.64和0.72±2.88(P<0.05)。ALP BCIP/NBT染色结果表明,与对照组相比,实验组ALP染色更深,且组内呈现剂量依赖性。实验组BMP-2蛋白表达量显著高于对照组。同时,ALP比活性、ALP BCIP/NBT染色及BMP-2蛋白表达结果表明,对照组和实验组内均呈现剂量依赖性,即高剂量组结果优于低剂量组。结论:纳米脂质体剂型能显著提高SMV促进BMSC的成骨分化作用。 展开更多

关键词 辛伐他汀 间充质干细胞 脂质体 骨形态发生蛋白质类 碱性磷酸酶

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实验性大鼠股骨颈组织形态学测量 被引量：2

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作者 张智弘 徐天蓉 吴云松 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1998年第1期55-56,共2页

观察SD大鼠正常组、糖尿病组、骨质疏松组及相应治疗后股骨颈处骨组织形态，测量骨皮质、骨外膜、骨内膜厚度、骨母细胞及破骨细胞数目。用大鼠右侧股骨进行脱钙处理，光镜观察，测微器测量。结果：正常SD大鼠股骨颈处骨皮质厚度（277&#... 观察SD大鼠正常组、糖尿病组、骨质疏松组及相应治疗后股骨颈处骨组织形态，测量骨皮质、骨外膜、骨内膜厚度、骨母细胞及破骨细胞数目。用大鼠右侧股骨进行脱钙处理，光镜观察，测微器测量。结果：正常SD大鼠股骨颈处骨皮质厚度（277±57．94）μm，骨外膜厚度（49±5．68）μm，而病鼠骨皮质变薄，骨外膜增厚。病鼠较正常鼠成骨细胞活性下降，破骨细胞活性相对增高。 展开更多

关键词 股骨颈 骨组织形态 大鼠

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AdLacZ基因修饰山羊耳软骨细胞复合F127构建组织工程化软骨 被引量：3

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作者 常庆 张秀丽 蒋欣泉 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第32期6326-6329,共4页

目的:应用AdLacZ基因修饰体外培养的山羊耳软骨细胞,并与Pluronic F127支架材料复合,观察裸鼠皮下软骨形成的情况,为进一步应用软骨分化因子基因修饰重建软骨的研究提供参数。方法:实验于2004-11/2006-12在上海交通大学医学院附属第九... 目的:应用AdLacZ基因修饰体外培养的山羊耳软骨细胞,并与Pluronic F127支架材料复合,观察裸鼠皮下软骨形成的情况,为进一步应用软骨分化因子基因修饰重建软骨的研究提供参数。方法:实验于2004-11/2006-12在上海交通大学医学院附属第九人民医院完成。①实验材料:取健康雄性山羊,体质量26～30kg。6周龄BALB/c裸鼠24只,体质量20g。体外培养山羊耳软骨细胞,转染AdLacZ基因,检测基因转染效率。②实验方法:将基因修饰的细胞与可吸收生物材料PluronicF127混合形成细胞-生物材料复合物,并注射到6只裸鼠皮下,每只在其背部皮下分别接种2个点,分别在术后2,4周取材,每个时间点有标本6例。另取裸鼠18只,同样设计,分别以未转基因的软骨细胞-材料复合物、单独注射的软骨细胞、或单独注射的F127支架作为对照组,每组6只。③实验评估:标本行苏木精-伊红染色、阿利新蓝染色,并对4周标本行X-gal染色,Ⅱ型胶原免疫组织化学检测。结果:纳入BALB/c裸鼠24只,均进入结果分析。①50pfu/细胞可以获得80%的转染效率。②2周时细胞-材料复合物形成了不成熟的软骨样组织,苏木精-伊红染色显示外周呈纤维样组织包裹,中部大部分为不成熟的软骨细胞;4周实验组中央部位出现少量稍成熟的软骨,阿利新蓝染色显示该部位为深蓝色的巢状软骨,部分细胞有Ⅱ型胶原阳性表达。冰冻切片X-gal染色提示细胞来自于植入的软骨-材料复合物。对照组未转基因的软骨细胞-材料复合物,其组织学及Ⅱ型胶原免疫组织化学表现与实验组没有明显差别,而X-gal染色为阴性。单独注射软骨细胞或单独注射F127支架,在4周内则均未见到软骨形成。结论:腺病毒载体可向软骨细胞高效转移目的基因,F127支架材料是软骨再生较为理想的支架材料。 展开更多

关键词 软骨细胞 组织工程 基因治疗 组织构建

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低温等离子体射频消融术应用于椎间松解的组织学观察 被引量：2

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作者 张如意 张永刚 +1 位作者 郑国权 赵斌 《脊柱外科杂志》 2016年第5期277-280,共4页

目的：评价低温等离子体射频消融术应用在椎间松解及其自然转归的组织学变化。方法将12只2.0-2.5月龄的健康雌性山羊随机分为低温等离子体消融组（消融组，n=6）和传统胸椎椎间盘切除组（传统组，n=6）。每只动物均处理中段6个胸椎椎间... 目的：评价低温等离子体射频消融术应用在椎间松解及其自然转归的组织学变化。方法将12只2.0-2.5月龄的健康雌性山羊随机分为低温等离子体消融组（消融组，n=6）和传统胸椎椎间盘切除组（传统组，n=6）。每只动物均处理中段6个胸椎椎间盘（T5/T6/T7/T8/T9/T10/T11），光镜下分别比较2种术式术后即刻和术后12周自然转归的组织学变化。结果消融组术后即刻椎间盘组织（纤维环，髓核和软骨终板）基本被去除，仅在软骨终板和骨性终板交界处残留一薄层软骨终板，表面光整，厚度均匀，周围组织细胞形态基本正常。传统组术后即刻纤维环、软骨终板有不同程度的剩余，骨性终板无明显破坏，松解面凹凸不平，刀痕周围的组织细胞形态正常。消融组术后12周显微镜下见椎间残留有部分薄层软骨终板已被不同程度的钙化，椎间前后缘融合稍差；椎间中部被大量成纤维细胞连接，软骨细胞增生更加明显，椎体骨小梁和终板下骨小梁之间无明确的界限，潮标前移变薄。传统术后12周显微镜下见软骨终板大部分消失，仅在近椎体后缘残留；终板下骨小梁排列不规则，上下终板下骨小梁之间未呈连续性生长，而是被大量由软骨细胞和成纤维细胞组成的组织连接，其中可见新生的毛细血管，上下潮标不对称并前移。结论采用低温等离子体消融术行椎间准备可以较好地去除软骨终板，处理后的终板面较传统组光整，且对周围健康组织影响小，和传统组都能获得早期的椎间融合倾向。 展开更多

关键词 脊柱侧凸 矫形外科手术 导管消融术 组织学

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骨形态发生蛋白研究进展 被引量：3

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作者 樊宇平 蔡谞 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2007年第1期71-73,共3页

随着骨组织工程学的发展,使愈来愈多需要自体或异体骨移植的骨缺损、骨融合可以通过工程化体内骨诱导的形式成骨。其中骨形态发生蛋白是最有应用前景,同时也是近几年国内外研究最多成骨诱导因子,并且已经在临床得到初步的应用。故对其... 随着骨组织工程学的发展,使愈来愈多需要自体或异体骨移植的骨缺损、骨融合可以通过工程化体内骨诱导的形式成骨。其中骨形态发生蛋白是最有应用前景,同时也是近几年国内外研究最多成骨诱导因子,并且已经在临床得到初步的应用。故对其生物特性、传送方式、缓释载体等方面有一个全面的理解是必要的。 展开更多

关键词 骨和骨组织 组织工程 骨形态发生蛋白质类

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骨局部植入型硫酸钙/聚乳酸/庆大霉素释放系统的生物相容性研究 被引量：1

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作者 于学忠 张伯勋 +3 位作者 陈华 徐风华 黄靖香 张莉 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第4期530-532,共3页

目的以柠檬酸化硫酸钙和聚乳酸的复合物作为抗生素载药基质,构建骨植入型硫酸钙/聚乳酸/庆大霉素药物释放系统,对其生物相容性进行研究。方法根据医疗器械生物学评价实验选择指南对药物释放系统进行红细胞溶血实验、细胞毒性实验、热原... 目的以柠檬酸化硫酸钙和聚乳酸的复合物作为抗生素载药基质,构建骨植入型硫酸钙/聚乳酸/庆大霉素药物释放系统,对其生物相容性进行研究。方法根据医疗器械生物学评价实验选择指南对药物释放系统进行红细胞溶血实验、细胞毒性实验、热原实验、肌肉内植入实验等生物相容性评价。结果抗生素释放系统红细胞溶血率为3.07%,小于阳性标准;细胞毒性实验中实验组细胞相对增殖率和对照组无统计学差异,毒性评分为0～1级;兔平均体温升高为0.3℃;抗生素释放系统在肌肉组织内可逐渐降解,材料周围未见大量炎性细胞浸润,组织无排斥。结论抗生素释放系统无溶血作用,无细胞毒性,符合医用材料的热原反应要求,具有良好的生物相容性和安全性,符合医用生物材料的基本要求。 展开更多

关键词 药物释放系统 硫酸钙 乳酸 庆大霉素类 生物相容性材料

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股骨头颈修复术有关的显微外科解剖学研究进展 被引量：1

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作者 武钢 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 1998年第2期182-184,共3页

股骨头颈修复术有关的显微外科解剖学研究进展武钢①综述徐达传①审校股骨颈骨折和股骨头缺血性坏死，是骨科常见和治疗的难题之一。如何提高其修复效果，是众所迫切研究的课题，应用显微外科技术，设计切取带血供的骨瓣、骨膜瓣及血管... 股骨头颈修复术有关的显微外科解剖学研究进展武钢①综述徐达传①审校股骨颈骨折和股骨头缺血性坏死，是骨科常见和治疗的难题之一。如何提高其修复效果，是众所迫切研究的课题，应用显微外科技术，设计切取带血供的骨瓣、骨膜瓣及血管束植入等修复术取得了令人嘱目的进展... 展开更多

关键词 股骨颈骨折 股骨头坏死 显微解剖学

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