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初级纤毛介导微重力效应下骨细胞力学感知/传递变化
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作者 田然 吴欣童 +2 位作者 丁东 杨肖 孙联文 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期641-641,共1页
目的骨细胞是骨中的力感受细胞,具有多个感受外界力学刺激的结构。初级纤毛作为细胞伸出的“天线”,能感知胞外环境变化,将胞外信号转导至胞内引起细胞应答。前期研究发现,模拟微重力效应下,骨细胞对流体剪切响应减弱,并伴随骨细胞纤毛... 目的骨细胞是骨中的力感受细胞,具有多个感受外界力学刺激的结构。初级纤毛作为细胞伸出的“天线”,能感知胞外环境变化,将胞外信号转导至胞内引起细胞应答。前期研究发现,模拟微重力效应下,骨细胞对流体剪切响应减弱,并伴随骨细胞纤毛缩短及纤毛运输系统功能变化。在“神舟”十六号空间站细胞学实验中,真实空间微重力下纤毛缩短的现象也已得到验证,但纤毛结构变化是否与微重力效应下骨细胞力敏感性降低有关还不明确。方法本研究中,建立了药物调控骨细胞纤毛长度变化的模型,探索了具有不同纤毛长度的骨细胞受流剪后的多囊蛋白PC1/PC2复合体-Ca^(2+)-NO信号通路的响应变化,并利用“半渗透双通道共培养流动腔系统”研究了具有不同纤毛长度的骨细胞对共培养体系中成骨细胞的成骨功能的调控作用。结果和结论结果表明,水合氯醛能显著缩短骨细胞纤毛,纤毛缩短下调了骨细胞受流剪后的PC1/PC2复合体-Ca^(2+)-NO信号响应,共培养体系中的成骨细胞矿化结节数减少、胶原合成量降低;Li离子处理能显著增长骨细胞纤毛,并上调PC1/PC2复合体-Ca^(2+)-NO信号响应及共培养体系中的成骨细胞功能,表明纤毛长度与骨细胞对流剪的响应相关。上述研究的发现将为今后明确骨细胞力敏感性的干预靶点并提出有效对抗措施提供有力依据。 展开更多
关键词 细胞学实验 力学刺激 细胞应答 成骨细胞 水合氯醛 信号响应 胶原合成 空间微重力
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miR-34a/SIRT1在重症监护病房获得性衰弱中的作用及其机制 被引量:3
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作者 林正霄 徐朝霞 +5 位作者 陈娟 胡健 祝国芸 朱忠立 冯健 李福祥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期796-803,共8页
目的探讨miR-34a/SIRT1在重症监护病房获得性衰弱(ICU-AW)中的作用及其机制。方法(1)诱导C2C12小鼠骨骼肌细胞分化成肌管,并分为ICU-AW模型组[ICU-AW组,用脂多糖(LPS)干预12 h]与正常对照组(等量无菌水干预12 h)。采用Western blotting... 目的探讨miR-34a/SIRT1在重症监护病房获得性衰弱(ICU-AW)中的作用及其机制。方法(1)诱导C2C12小鼠骨骼肌细胞分化成肌管,并分为ICU-AW模型组[ICU-AW组,用脂多糖(LPS)干预12 h]与正常对照组(等量无菌水干预12 h)。采用Western blotting检测两组肌肉环指蛋白1(MuRF-1)、萎缩相关基因1(Atrogin-1)蛋白、沉默调节蛋白1(SIRT1)表达水平,RT-qPCR检测两组微小核糖核酸-34a(miR-34a)及MuRF-1、Atrogin-1、SIRT1 mRNA的表达水平,并在光镜下观察两组小鼠C2C12骨骼肌细胞生长及分化情况。(2)将ICU-AW细胞分为对照组(siRNA的转染剂干预)、Scra siRNA组(转染剂和非特异性siRNA干预)、miR-34a siRNA组(miR-34a siRNA转染剂和特异性siRNA干预)、Vehicle组(SIRT1激动剂的溶剂二甲基亚砜干预)及SRT1720组(SIRT1激动剂SRT1720干预)。采用Western blotting检测各组SIRT1、Atrogin-1、MuRF-1蛋白表达水平,RT-qPCR检测各组miR-34a及MuRF-1、Atrogin-1、SIRT1 mRNA表达水平。(3)将ICU-AW细胞分为对照组(miR-34a siRNA的转染剂干预)、miR-34a siRNA组(转染剂和特异性siRNA干预)、miR-34a siRNA+Vehicle组(转染剂、特异性siRNA和二甲基亚砜干预)及miR-34a siRNA+EX-527组(转染剂、特异性siRNA和SIRT1抑制剂EX-527干预),采用Western blotting检测并比较各组Atrogin-1、MuRF-1蛋白表达水平,RT-qPCR检测并比较各组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA表达水平。结果光镜下可见第4天C2C12小鼠骨骼肌细胞肌管分化形成,与正常对照组比较,ICU-AW组肌管明显萎缩。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与正常对照组比较,ICU-AW组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA及蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05),miR-34a相对表达水平明显升高(P<0.001),SIRT1 mRNA及蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01)。RT-qPCR检测结果显示,与对照组(转染剂干预)比较,miR-34a siRNA组的miR-34a及Atrogin-1、MuRF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01或P<0.001),SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.01);与Vehicle组比较,SRT1720组SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05),而Atrogin-1、Mu RF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.05)。与miR-34a siRNA组比较,Scra siRNA组miR-34a及Atrogin-1、MuRF-1 mRNA和蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05、P<0.01或P<0.001),而SIRT1 mRNA和蛋白相对表达水平明显降低(P<0.01)。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示,与miR-34a siRNA+Vehicle组比较,miR-34a siRNA+EX-527组Atrogin-1、MuRF-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论ICU-AW状态下miR-34a过度激活,通过抑制SIRT1的表达导致骨骼肌萎缩,可能在ICU-AW发病过程中起重要作用。 展开更多
关键词 重症监护病房获得性衰弱 骨骼肌萎缩 MIR-34A 沉默调节蛋白1 萎缩相关基因1 肌肉环指蛋白1
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ATF4介导基底硬度调控破骨细胞融合的力学生物学机制
3
作者 涂莎莎 刘思君 +3 位作者 段梦梦 张德茂 谢静 刘肖珩 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期239-239,共1页
目的骨质疏松是一种以骨量减少,骨密度降低为特征的全身性疾病,常伴有细胞外基质硬度的改变。破骨细胞在疾病的发生发展过程中至关重要。与正常骨组织(硬基底)相比,骨质疏松组织(软基底)表现出破骨形成缺陷。大数据筛查表明,软基底组中... 目的骨质疏松是一种以骨量减少,骨密度降低为特征的全身性疾病,常伴有细胞外基质硬度的改变。破骨细胞在疾病的发生发展过程中至关重要。与正常骨组织(硬基底)相比,骨质疏松组织(软基底)表现出破骨形成缺陷。大数据筛查表明,软基底组中转录激活因子4(ATF4)的表达减少。本研究旨在探讨ATF4在两种基底硬度下调控破骨细胞融合及其力学生物学机制。方法使用PDMS制备两种硬度的基底,提取小鼠原代BMMs细胞进行ATF4过表达处理和敲低处理后,给予M-CSF和RANKL诱导破骨细胞发生。采用细胞定时监测、TRAP染色、吖啶橙染色检测破骨细胞生成情况。通过WB、Q-PCR和免疫荧光共定位观测ATF4和破骨分化标志物的表达。采用Co-ip明确ATF4的蛋白互作。结果大数据筛查找到ATF4的变化,并在体外实验数据中证实其力学敏感性;ATF4过表达促进硬基底上成熟破骨细胞的形成,表现为融合时间早,形成数量多,破骨形成面积大,侵袭能力强,且相关破骨分化标志物表达增加。ATF4过表达能挽救软基底上破骨形成缺陷,且达到与硬基底对照组破骨形成较一致的水平。ATF4绑定FAK蛋白,调控细胞内微管微丝的重新分布,进而影响破骨细胞的融合。结论ATF4通过FAK响应细胞外基质硬度变化调节破骨细胞骨架重组以促进成熟破骨细胞形成。 展开更多
关键词 力学生物学 破骨细胞 细胞外基质 骨质疏松 全身性疾病 软基底 大数据 硬度变化
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低载荷机械振动通过MMP-9影响高糖环境破骨细胞的生物力学研究
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作者 刘舜 朱东 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期631-631,共1页
目的探讨高糖环境下低载荷机械振动是否通过MMP-9影响破骨细胞的分化成熟。方法将小鼠单核巨噬细胞细胞(RAW264.7)使用RANKL蛋白质诱导为破骨细胞后分为对照组、高糖组、高糖振动组、MMP-9过表达高糖组、MMP-9过表达高糖振动组。高糖环... 目的探讨高糖环境下低载荷机械振动是否通过MMP-9影响破骨细胞的分化成熟。方法将小鼠单核巨噬细胞细胞(RAW264.7)使用RANKL蛋白质诱导为破骨细胞后分为对照组、高糖组、高糖振动组、MMP-9过表达高糖组、MMP-9过表达高糖振动组。高糖环境造模方案为培养液葡萄糖浓度为25.5 mmol/L。振动方案为每天0.5 h,频率35 Hz,强度0.25 g,为期1周。慢病毒转染构建MMP-9过表达的RAW264.7细胞模型。TRAP染色法检测成熟破骨细胞,WB和ELISA检测破骨相关蛋白表达;骨吸收实验检测破骨细胞的骨吸收能力;Transwell实验检测RAW264.7细胞的迁移能力。结果(1)RANKL能够诱导RAW264.7细胞分化为成熟破骨细胞。(2)低载荷机械振动抑制破骨细胞分化、成熟、骨吸收、破骨相关蛋白表达和破骨前体细胞迁移。(3)低载荷机械振动降低MMP-9的表达。(4)MMP-9过表达促进破骨细胞分化、成熟,增强骨吸收。(5)低载荷机械振动通过降低MMP-9蛋白表达抑制破骨细胞。结论低载荷机械振动抑制破骨细胞分化、成熟、骨吸收和破骨前体细胞的迁移;MMP-9参与低载荷机械振动对破骨细胞的抑制。 展开更多
关键词 RAW264.7 高糖环境 破骨细胞分化 机械振动 生物力学研究 骨吸收 RANKL 葡萄糖浓度
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机械应力通过成纤维细胞迁移体调控上皮钉突形成
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作者 撒国良 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期111-111,共1页
目的机械应力是上皮钉突形成的关键因素,但此过程中成纤维细胞的作用方式不明。本团队的研究表明,机械应力可以促进成纤维细胞迁移体形成。本研究旨在探究机械应力通过成纤维细胞迁移体调控上皮钉突形成的作用及机制。方法通过扫描电镜(... 目的机械应力是上皮钉突形成的关键因素,但此过程中成纤维细胞的作用方式不明。本团队的研究表明,机械应力可以促进成纤维细胞迁移体形成。本研究旨在探究机械应力通过成纤维细胞迁移体调控上皮钉突形成的作用及机制。方法通过扫描电镜(SEM)观察受力皮肤和口腔黏膜中的回缩纤维及迁移体,通过多色免疫荧光染色(m IHC)判断迁移体的主要细胞来源。通过密度梯度离心提取成纤维细胞来源迁移体并经SEM和免疫印迹验证。借助GFP和m Cherry实现成纤维细胞和角化细胞的荧光标记。将普通和受力刺激产生的迁移体分别注射到大鼠皮肤创缘,观察创面愈合的速度及瘢痕形成能力,并通过HE染色观察上皮钉突的形成能力。借助单细胞测序(Sc RNA-seq)分析迁移体促进上皮钉突形成可能的分子机制。结果SEM提示受力皮肤和口腔黏膜乳头层成纤维细胞形成较多回缩纤维和迁移体,机械应力显著提高成纤维细胞迁移体形成能力。SEM和免疫印迹结果提示提取的迁移体纯度好。live cell imaging证实成纤维细胞来源迁移体可被角化细胞摄取,并诱导角化细胞迁移。应力诱导的迁移体可显著加速创面的愈合速度和上皮钉突形成能力。Sc RNA-seq提示成纤维细胞通过CXCL12-CXCR4以及IL-6-F3信号轴调控角化细胞。结论机械应力可通过成纤维细胞迁移体诱导上皮钉突形成。 展开更多
关键词 成纤维细胞 CXCL12 机械应力 瘢痕形成 大鼠皮肤 密度梯度离心 愈合速度 口腔黏膜
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核骨架蛋白Emerin在刚度耦合拓扑结构微环境下对HSF分化的调控机制研究
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作者 郭芸芸 杨田田 +3 位作者 王梓晨 文美玲 刘阳 安美文 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期633-633,共1页
目的增生性瘢痕细胞外基质刚度增加与胶原纤维束紊乱排列是其重要特征,但其发病机制仍有待探索。方法使用聚丙烯酰胺水凝胶构建19.3 kPa和90.1 kPa两种刚度耦合交叉角度为45°、90°和180°沟槽的弹性基底,利用活细胞动态... 目的增生性瘢痕细胞外基质刚度增加与胶原纤维束紊乱排列是其重要特征,但其发病机制仍有待探索。方法使用聚丙烯酰胺水凝胶构建19.3 kPa和90.1 kPa两种刚度耦合交叉角度为45°、90°和180°沟槽的弹性基底,利用活细胞动态监测、原子力显微镜和RNAi技术等实验方法研究基底对人体皮肤成纤维细胞(Human skin fibroblasts,HSF)铺展形态、分化与细胞核力学特性的影响,并阐述核骨架蛋白Emerin在其中发挥的作用。结果基底细胞大多黏附在沟槽单侧或中央,细胞沿沟槽生长,中央生长的细胞与细胞核最终铺展为长梭形,单侧生长的细胞与细胞核由圆形逐渐变为三角锥形;高刚度基底上,细胞核体积、高度更大;高刚度和单侧沟槽的限制,促进HSF分化;Emerin参与细胞及细胞核的形态变化,干扰Emerin表达,显著降低HSF的分化,并通过降低细胞质及细胞核刚度,促进细胞迁移。结论本研究揭示了刚度耦合拓扑结构基底对HSF生物学行为的调控作用,并深入研究了Emerin在该过程中发挥的作用,为阐明瘢痕纤维化形成机制及防治提供新的研究思路和参考。 展开更多
关键词 HSF 聚丙烯酰胺水凝胶 基底细胞 增生性瘢痕 骨架蛋白 刚度耦合 细胞外基质 细胞迁移
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抗藻酸盐血清对粘液型铜绿假单胞菌粘附性和生物被膜渗透性的影响 被引量:14
7
作者 裴斐 王睿 +5 位作者 柴栋 方翼 刘皈阳 朱曼 李存福 邸敏 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期423-426,共4页
目的:研究抗藻酸盐血清对粘液型铜绿假单胞菌粘附性及其生物被膜渗透性的影响。方法:采用结晶紫染色法测定粘液型铜绿假单胞菌的粘附性,采用HPLC法测定加替沙星在粘液型铜绿假单胞菌生物被膜的渗透浓度,从而观察抗藻酸盐血清对... 目的:研究抗藻酸盐血清对粘液型铜绿假单胞菌粘附性及其生物被膜渗透性的影响。方法:采用结晶紫染色法测定粘液型铜绿假单胞菌的粘附性,采用HPLC法测定加替沙星在粘液型铜绿假单胞菌生物被膜的渗透浓度,从而观察抗藻酸盐血清对于粘液型铜绿假单胞菌生物被膜渗透性的影响。结果:1:1抗藻酸盐血清在同 8X MIC加替沙星联用的情况下,使细菌对硅胶片粘附性显著降低,硅胶片洗脱液在540nm波长处的光密度值从0.126 ± 0.011降低到0.114±0.010;同时使加替沙星对细菌生物被膜的渗透性增强,4,8和16mg·L-1 的加替沙星通过细菌生物被膜的浓度分别从1.210±0.091,2.911±0.112和5.511±0.213mg·L-1显著提高至1.752±0.122、3.908±0.154和7.898±0.321mg·L-1。结论:抗藻酸盐血清能够降低粘液型铜绿假单胞菌对于生物医学材料的粘附性,增强抗生素对于生物被膜的渗透能力。 展开更多
关键词 粘液型铜绿假单胞菌 生物被膜 粘附性 渗透性 抗藻酸盐血清
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不同活性的胶原酶对大鼠心肌细胞分离的影响 被引量:9
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作者 朱肖星 牛小麟 +5 位作者 朱萧玲 陈定章 周晓东 陈绍洋 朱妙章 王文清 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1089-1091,共3页
目的研究不同活性的胶原酶对大鼠心肌细胞存活率的影响。方法用4种不同活性的胶原酶以常规酶解法分离成年大鼠心肌细胞,观察分离即刻(D时点)、复钙60min后(E时点)和电刺激]Orrdn后(F时点)心肌细胞的存活率,采用IonOptix单细胞... 目的研究不同活性的胶原酶对大鼠心肌细胞存活率的影响。方法用4种不同活性的胶原酶以常规酶解法分离成年大鼠心肌细胞,观察分离即刻(D时点)、复钙60min后(E时点)和电刺激]Orrdn后(F时点)心肌细胞的存活率,采用IonOptix单细胞动缘检测系统同步检测心肌细胞收缩幅度(ph)、ph占单个心肌细胞长度(b1)的百分比(以ph/bl表示)、心肌细胞收缩速率(+dL/dt)和心肌细胞舒张速率(-dL/dt)等指标。结果观察D、E、F时点心肌细胞存活率,结果表明299U/mg胶原酶的分离效果286U/mg、203u/mg和403U/mg的胶原酶(P〈0.05)。D时点4组心肌细胞的存活率没有差别,E、F时点时存活率降低。在心肌细胞收缩/舒张功能的检测中,299U/mg的胶原酶分离效果最佳,203、286、299U/mg和403U/mg组的ph分别是0.13±0.05、0.14±0.06、0.14±0.06μm和0.11±0.05μm;分别是8.8%±.4%、8.%±2.3%、9.2%±3.5%和7.5%±2.2%;+dL/dt分别是1.8±0.6、1.9±0.6、2.0±0.7μm/s和1.7±0.5μm/s,-dL/dt分别是1.9±0.6、2.0±0.7、2.1±0.6μm/S和1.7±0.6μm/s。结论采用一定范同(203-299U/mg)的胶原酶对心肌细胞进行分离,酶活性越大,消化时间越短,心肌细胞存活率高、收缩/舒张功能好,其中以299U/mg活性的胶原酶效果最好。活性偏高或偏低的胶原酶分离心肌细胞的存活率和收缩/舒张功能均明显降低。 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 胶原酶类 存活率 心肌收缩
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悬浮介质粘度对红细胞的“C=0”轨道上取向与变形的影响 被引量:13
9
作者 文宗曜 马维原 +1 位作者 高铁 孙大公 《中国生物医学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1995年第4期339-342,共4页
在Morris和本文作者关于悬浮介质粘度对激光衍射法测量红细胞变形性影响的基础上,进一步研究了悬浮介质粘度一种新型激光衍射法测得的在C=0轨道上取向和变形行为的影响。结果表明,由于高切变低粘度的流场的稳定性较差,因而... 在Morris和本文作者关于悬浮介质粘度对激光衍射法测量红细胞变形性影响的基础上,进一步研究了悬浮介质粘度一种新型激光衍射法测得的在C=0轨道上取向和变形行为的影响。结果表明,由于高切变低粘度的流场的稳定性较差,因而影响所测得的取向指数的精度,而在高粘切变流场中,因受粘滞力的影响使在C=0轨道上取向的红细胞数明显减少,即取向指数(DI)or明显减小。红细胞对称轴在C=0轨道上的变形稍有波动,而红细胞长轴沿切变流场“C=∞”方向上的变形,其变形指数则随悬浮介质粘度增加而增大。本文的目的在于研究悬浮介质粘度对新型激光衍射法测得的取向指数与变形指数的影响,并寻找出获得精度高、稳定性好的(DO)or(DI)a的最佳悬浮介质粘度,为新型激光衍射法最有效地研究红细胞微观流变特性提出有力的理论与实验依据。 展开更多
关键词 红细胞变形性 悬浮介质粘度 激光衍射法 红细胞
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低剂量X射线全身照射后小鼠IL-10和IL-12的反向变化 被引量:9
10
作者 刘晓冬 刘树铮 +1 位作者 马淑梅 刘杨 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期283-288,共6页
通过检测低剂量辐射 (LDR)对小鼠脾淋巴细胞中IL - 10以及腹腔巨噬细胞中IL - 12的影响 ,研究LDR辐射免疫效应的机制。采用Northernblot检测了 75mGyX射线全身照射后 ,IL - 10、IL - 12mRNA水平的变化 ,同时分别通过流式细胞术和ELISA... 通过检测低剂量辐射 (LDR)对小鼠脾淋巴细胞中IL - 10以及腹腔巨噬细胞中IL - 12的影响 ,研究LDR辐射免疫效应的机制。采用Northernblot检测了 75mGyX射线全身照射后 ,IL - 10、IL - 12mRNA水平的变化 ,同时分别通过流式细胞术和ELISA检测了IL - 10、IL - 12蛋白水平的变化。(1)Northernblot检测表明 ,75mGyX射线全身照射后脾细胞中IL - 10的mRNA转录水平从照射后 1h即降低 ,并维持较低水平 ,一直到 4 8h开始恢复 ,达到假照射水平的 86 .2 % ;巨噬细胞中IL- 12两亚基的mRNA水平的变化则表现为 ,照射后 1hp35及p4 0亚基均迅速升高分别达到假照射组的 131%和 192 %。而后 ,p35开始回降 ,直至照射后 16 - 4 8h恢复正常 ,p4 0亚基从照射后 1-4 8h总体表现为升高。(2 )对蛋白产物检测结果表明 ,脾细胞IL - 10合成在照射后 2h开始即呈时间依赖性降低 ,至 4 8h仍无恢复迹象 (p <0 .0 1) ,双抗体夹心酶联免疫吸附法 (ELISA)检测表明 ,巨噬细胞分泌IL - 12明显增高。LDR引起IL - 10和IL - 展开更多
关键词 LDR 辐射兴奋效应 T细胞分化 IL-10 IL-12 低剂量辐射 小鼠 淋巴细胞 反向变化 细胞免疫功能
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血小板低渗休克反应检测方法的建立及应用 被引量:10
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作者 邬旭群 熊文 +2 位作者 鲍自谦 李雪梅 陈云龙 《现代检验医学杂志》 CAS 2006年第1期6-8,共3页
目的通过建立合适的低渗休克反应(HSR)检测方法,监测单采血小板在保存期内的HSR变化,以监控和评估单采血小板在保存期内的功能和质量状况。方法利用血液凝集仪,分别检测血小板与等渗磷酸盐缓冲液混合后的透光率变化值和血小板与去... 目的通过建立合适的低渗休克反应(HSR)检测方法,监测单采血小板在保存期内的HSR变化,以监控和评估单采血小板在保存期内的功能和质量状况。方法利用血液凝集仪,分别检测血小板与等渗磷酸盐缓冲液混合后的透光率变化值和血小板与去离子水混合后的透光率变化值,从而计算出HSR值。检测20份新鲜采集的单采血小板及10份在保存期的第1,3,5和7d的血小板HSR变化。结果新鲜采集的单采血小板HSR正常参考值范围为58%~93%(80.35%±10.39%,n=20);单采血小板在保存期的第1,3,5和7d的HSR分别为:75.85%±11.10%,74.00%±9.04%,71.39%±6.16%和68.85%±7.89%;各天之间比较均无显著性差异(P〉0.1)。结论利用血液凝集仪检测HSR是一种合适的方法,具有简便、准确和重复性好的特点;单采血小板保存至7d仍具有较好的抗低渗休克的能力。 展开更多
关键词 低渗休克反应 单采血小板 聚集仪 保存
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乌头碱对大鼠睾丸支持细胞的毒性研究 被引量:9
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作者 张建军 王衍堂 +2 位作者 王金勇 王莉 李宏霞 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第7期1221-1223,1227,共4页
[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠睾丸支持细胞的毒性。[方法]无菌制备18~20日龄SD大鼠的睾丸支持细胞,通过Tris-Hcl低渗处理进行细胞纯化,采用HE染色、瑞氏-吉姆萨染色进行细胞鉴定。然后用MTT法(四唑盐比色法)检测浓度为0、5×... [目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠睾丸支持细胞的毒性。[方法]无菌制备18~20日龄SD大鼠的睾丸支持细胞,通过Tris-Hcl低渗处理进行细胞纯化,采用HE染色、瑞氏-吉姆萨染色进行细胞鉴定。然后用MTT法(四唑盐比色法)检测浓度为0、5×101、5×102、5×103、5×104 ng/ml的乌头碱对大鼠睾丸支持细胞活力的影响,并用乳酸试剂盒检测乌头碱对支持细胞乳酸分泌功能的影响。[结果]MTT结果显示:乌头碱作用24h后,各剂量组对大鼠睾丸支持细胞的增殖均有促进作用;作用48 h后,低剂量乌头碱(5×101、5×102ng/m)对大鼠睾丸支持细胞的增殖有促进作用;高剂量乌头碱(5×103、5×104 ng/ml)抑制支持细胞的增殖。乳酸测定结果显示:乌头碱作用24 h后,各剂量组乳酸分泌量均增加,乌头碱剂量为5×104 ng/ml时,乳酸分泌量增加率降低。[结论]低剂量乌头碱可促进大鼠睾丸支持细胞的增殖及乳酸分泌量的增加,高剂量乌头碱可抑制大鼠睾丸支持细胞的增殖,降低其对乳酸分泌的刺激作用。 展开更多
关键词 乌头碱 大鼠睾丸支持细胞 MTT 乳酸
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脂质过氧化对人红细胞膜脂流动性的影响 被引量:28
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作者 陈建文 张兰萍 +1 位作者 宋剑陶 黄芬 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期502-506,共5页
研究枯稀过氧化氢/高铁血红素体系所产生的烷基过氧自由基对红细胞的损伤。测定了脂质过氧化的产物——丙二脂的生成,并证明阿魏酸钠对脂质过氧化的抑制。荧光偏振的结果指出,膜脂过氧化以后降低了膜脂的流动性。人红细胞用5DSA和16DSA... 研究枯稀过氧化氢/高铁血红素体系所产生的烷基过氧自由基对红细胞的损伤。测定了脂质过氧化的产物——丙二脂的生成,并证明阿魏酸钠对脂质过氧化的抑制。荧光偏振的结果指出,膜脂过氧化以后降低了膜脂的流动性。人红细胞用5DSA和16DSA标记并用ESR检测膜脂流动性,结果表明,序参数S几乎没有发生变化,旋转相关时间τ值的增加证明膜脂过氧化以后,疏水尾部的物理状态发生了改变。经脂质过氧化以后,红细胞膜中的不饱和脂防酸的减少,可能是降低膜脂流动性的原因之一。 展开更多
关键词 红细胞膜 过氧化 阿魏酸钠 流动性
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重组人血小板型磷脂酶A_2杀菌作用的研究 被引量:17
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作者 梁宁生 李艳 +2 位作者 杨帆 陆益 蒙子卿 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 2004年第10期1081-1083,共3页
目的 探讨利用基因工程制备重组人血小板型磷脂酶A2 (phospholipaseA2 ,PLA2 )对不同细菌在体外的杀菌作用 ,为临床用于治疗细菌感染提供依据。方法 将不同浓度的重组PLA2 或抗生素与不同的菌株在 37℃共同孵育 2h ,然后铺琼脂板 ,次... 目的 探讨利用基因工程制备重组人血小板型磷脂酶A2 (phospholipaseA2 ,PLA2 )对不同细菌在体外的杀菌作用 ,为临床用于治疗细菌感染提供依据。方法 将不同浓度的重组PLA2 或抗生素与不同的菌株在 37℃共同孵育 2h ,然后铺琼脂板 ,次日记录每一琼脂板上的菌落生成数 (CFU) ,计算出PLA2 作用后细菌生存率和杀灭 95 %细菌 (LD95)的PLA2 浓度。结果 重组人血小板型PLA2 对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌等革兰阳性 (G+)菌有较强杀菌作用 ,PLA2 的LD95的范围在 6~ 4 0 0ng/ml之间 ,对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)也有较强的作用 ,LD95为 4 0 0ng/ml。结论 重组人血小板型PLA2 对革兰阳菌有较强的杀菌作用 。 展开更多
关键词 重组人血小板型磷脂酶A2 杀菌作用
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丰富环境对缺氧缺血性脑损伤大鼠海马突触超微结构及突触素表达的影响 被引量:9
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作者 蒲昭霞 赵聪敏 鲁利群 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期816-818,共3页
目的探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马CA1区神经元突触超微结构和突触素(p38)表达的影响。方法按Rcie法制作HIBD新生动物模型,共计20只,随机分为干预组和非干预组。同时设假手术对照组10只。干预组大鼠于术后... 目的探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马CA1区神经元突触超微结构和突触素(p38)表达的影响。方法按Rcie法制作HIBD新生动物模型,共计20只,随机分为干预组和非干预组。同时设假手术对照组10只。干预组大鼠于术后第2天开始给予丰富环境刺激,持续20d。干预结束后用透射电镜观察各组海马CA1区锥体神经元超微结构,免疫组化和图像分析技术检测p38的表达。结果与对照组比较,非干预组海马CA1区锥体细胞见部分核膜消失、线粒体嵴模糊、神经元突触数量减少,突触间隙增宽,突触囊泡减少,突触后致密物变薄;干预组神经元和突触无明显异常。非干预组海马CA1区突出素光密度值明显低于干预组和对照组(P<0.01),而干预组和对照组之间无显著差异(P>0.05)。结论阻止或减轻HI后突触超微结构的损伤、促进突触的重建可能是丰富环境发挥作用的物质基础。 展开更多
关键词 缺氧缺血性脑病 早期干预 突触素 电子 显微镜
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正常与脑缺血大鼠脑皮质线粒体的比较蛋白质组学研究 被引量:5
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作者 杨涌涛 陈康宁 +4 位作者 贺伟峰 黄河清 刘国军 周振华 冉鸿 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期964-968,共5页
目的采用比较蛋白质组学方法观察正常与脑缺血大鼠脑皮质线粒体蛋白表达差异。方法SD大鼠按随机数字表法分为正常组和缺血组,采用改进的栓线法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral antery occlusion,MCAO)模型,分离大鼠缺血及正常大脑皮... 目的采用比较蛋白质组学方法观察正常与脑缺血大鼠脑皮质线粒体蛋白表达差异。方法SD大鼠按随机数字表法分为正常组和缺血组,采用改进的栓线法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral antery occlusion,MCAO)模型,分离大鼠缺血及正常大脑皮层,纯化线粒体蛋白进行二维电泳和凝胶图像分析,对差异蛋白质用HPLC-Chip/MS纳流液质联用技术进行序列分析,经Spectrum Mill搜索NCBInr数据库后鉴定蛋白质。结果正常与脑缺血大鼠脑皮层线粒体蛋白表达存在显著差异,这些差异蛋白经鉴定,主要为TUC-4b、肌酸激酶同工酶、HS1结合蛋白、线粒体核糖体蛋白S27、异柠檬酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、二氢硫辛酸脱氢酶、泛醌-细胞色素C还原酶、琥珀酸辅酶A还原酶、细胞色素氧化酶、F1-ATP beta链、热休克蛋白70、热休克蛋白60、脂酰辅酶A脱氢酶等差异线粒体蛋白。结论脑缺血可以导致皮层线粒体相关蛋白表达改变,提示其作用可能与线粒体能量代谢、凋亡有关。 展开更多
关键词 脑缺血 线粒体 蛋白质组学 凋亡
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红细胞变形的动力学行为 被引量:16
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作者 陶祖莱 文宗曜 +8 位作者 曹石 陈生 赵玉衡 李玉梅 王鸿儒 徐家(鸟令 栗刚 俞桂芬 吴本玠 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第2期233-238,共6页
用激光衍射仪测量了兔红细胞在PBS和PVP两种介质里的应力松弛过程.结果表明,红细胞在低粘介质(PBS)中的动力学行为和它在高粘介质(PVP)中的动力学响应有显著差异,除了等容变形和非等容变形以外,还有一个从定向到随机取向的变化过程.故... 用激光衍射仪测量了兔红细胞在PBS和PVP两种介质里的应力松弛过程.结果表明,红细胞在低粘介质(PBS)中的动力学行为和它在高粘介质(PVP)中的动力学响应有显著差异,除了等容变形和非等容变形以外,还有一个从定向到随机取向的变化过程.故在低粘介质中测得的红细胞应力松弛过程中变形指数(DI)随时间(t)的变化是由红细胞变形(DI)d和红细胞取向(DI)or两部分构成的.红细胞变形的特征时间(约10毫秒)比取向过程的特征时间(约50秒)小2~3个量级.这就使得我们有可能从测得的DI—t曲线中把(DI)d和(DI)or区分开来,从而获得关于红细胞动力学特性的更多的信息.这一点,在临床实践是很有意义的. 展开更多
关键词 红细胞 动力学
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脑神经细胞膜脂流动性的荧光偏振测定法 被引量:5
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作者 胡善明 赵显峰 +3 位作者 荫士安 孟晶 徐青梅 张丽 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期112-115,共4页
以大鼠大脑神经细胞为实验材料,探索用荧光偏振法测定完整神经细胞的膜脂流动性、荧光探针DPH(1,6-Diphenyl-1,3,5-Hexatriene)标记的实验条件。适合条件为DPH浓度2×10-6mol/L,... 以大鼠大脑神经细胞为实验材料,探索用荧光偏振法测定完整神经细胞的膜脂流动性、荧光探针DPH(1,6-Diphenyl-1,3,5-Hexatriene)标记的实验条件。适合条件为DPH浓度2×10-6mol/L,细胞浓度1×1010个/L,标记温度25℃,时间30min。本文还对无血清体外培养的人胚大脑神经细胞的膜脂流动性进行了初步动态观察,发现神经细胞在培养至3、6、9和12天时,膜脂流动性维持在相对稳定的水平。 展开更多
关键词 荧光偏振 膜脂流动性 脑神经 细胞膜
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MN9202抑制心肌细胞收缩、舒张机制的研究 被引量:4
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作者 朱肖星 梅其炳 +6 位作者 刘莉 张峰 裴建明 张海锋 胡玉珍 陈定章 牛小麟 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1022-1024,共3页
目的研究MN9202对Forskolin(腺苷酸环化酶激动剂)、盐酸四乙胺(TEA,钙激活钾通道阻断剂)和美蓝(MB,鸟苷酸环化酶抑制剂)增强心肌细胞收缩、舒张功能影响的机制。方法采用IonOptix单细胞动缘检测系统(IonOptixCo.USA),测定心肌细胞收缩... 目的研究MN9202对Forskolin(腺苷酸环化酶激动剂)、盐酸四乙胺(TEA,钙激活钾通道阻断剂)和美蓝(MB,鸟苷酸环化酶抑制剂)增强心肌细胞收缩、舒张功能影响的机制。方法采用IonOptix单细胞动缘检测系统(IonOptixCo.USA),测定心肌细胞收缩幅度和收缩/舒张速度等。这些指标均由计算机自动实时采集并记录。结果Forskolin、MB和TEA增强心肌细胞收缩幅度(ph)和心肌细胞收缩幅度/单个心肌细胞的长度百分比(ph/bl%),最大缩短速率(+dL/dt)和最大复长速率(-dL/dt),Forskolin和MB增强上述指标均有显著性差异(P<0.01)。Forskolin通过cAMP的增加发挥作用。MB通过减少cGMP的生成使心肌细胞的收缩功能增强。Forskolin增加ph、ph/bl%、+dL/dt和-dL/dt,上述指标分别增加91%、123%、110%、89%,用MB后,ph、ph/bl%、+dL/dt和-dL/dt分别为0.14±0.04μm、11±4%、2.2±0.3μm/s和2.2±0.6μm/s,用药前后差异非常显著(P<0.01)。3×10-6mol/L的MN9202降低Forskolin引起ph、ph/bl%、+dL/dt和-dL/dt的升高,其中+dL/dt和-dL/dt的降低较对照组显著差异。同时MN9202能降低MB和TEA引起ph、ph/bl%、+dL/dt和-dL/dt的增加。结论Forskolin、TEA和MB使心肌细胞收缩和舒张功能均增强,Forskolin能直接增加细胞内钙,TEA和MB能间接使细胞内钙增加而增强收缩功能;MN9202有抑制Forskolin、TEA和MB的作用。 展开更多
关键词 MN9202 心肌 收缩功能 舒张功能
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人黑素细胞与角质形成细胞对中波紫外线辐射的应激能力比较研究 被引量:9
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作者 朱健伟 骆丹 +2 位作者 朱洁 徐丽贤 吉玺 《中国美容医学》 CAS 2006年第4期369-371,i0001,共4页
目的:观察两种皮肤细胞即原代黑素细胞(MC)与角质形成细胞(KC)对中波紫外线(UVB)辐射的反应差异。方法:采用不同剂量(0、30、60、90、120mJ/cm2)UVB照射上述两种细胞,评估UVB对细胞作用的时间及剂量效应,以倒置光学显微镜观察细胞受损程... 目的:观察两种皮肤细胞即原代黑素细胞(MC)与角质形成细胞(KC)对中波紫外线(UVB)辐射的反应差异。方法:采用不同剂量(0、30、60、90、120mJ/cm2)UVB照射上述两种细胞,评估UVB对细胞作用的时间及剂量效应,以倒置光学显微镜观察细胞受损程度,细胞记数法记录生长曲线,MTT法检测细胞活性。结果:UVB照射后,KC的形态学改变、生长曲线及细胞活性的损伤程度随照射剂量加大而加重;MC在较低剂量时无明显受损,但达到一定剂量后其损伤程度亦随照射剂量加大而加重。另经30mJ/cm2照射孵育24h、48h及72h后,分别对两种细胞进行不同时间段的细胞活性比值比较(72h/48h,72h/24h),发现KC活性比依次递减(分别为1.81和1.23);MC的活性比则相反(分别为0.94和1.01)。结论:低剂量UVB照射后,MC无形态学受损,其细胞突起增多,活性增强;较高剂量UVB照射后,MC和KC均有不同程度受损,KC的损伤程度随孵育时间延长而加重,而MC仍可在48h得到恢复。 展开更多
关键词 中波紫外线 黑素细胞 角质形成细胞 原代 MTT法 应激能力
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