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缺氧通过驱动M1巨噬细胞极化诱发睾丸间质细胞溶酶体依赖性死亡导致生精功能受损
1
作者 孟丹 何畏 曾继涛 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第23期2893-2902,共10页
目的探究缺氧通过驱动M1型巨噬细胞极化,进而诱发睾丸间质细胞溶酶体依赖性细胞死亡(lysosome-dependent cell death,LDCD)在生精功能障碍中的关键作用。方法将10只8周龄雄性SD大鼠(体质量220~250 g)按照完全随机设计,分为常氧组(n=5)... 目的探究缺氧通过驱动M1型巨噬细胞极化,进而诱发睾丸间质细胞溶酶体依赖性细胞死亡(lysosome-dependent cell death,LDCD)在生精功能障碍中的关键作用。方法将10只8周龄雄性SD大鼠(体质量220~250 g)按照完全随机设计,分为常氧组(n=5)与缺氧组(n=5),分别置于常氧饲养环境和模拟5000 m海拔的低压低氧环境暴露4周以构建缺氧动物模型。采用1%O_(2)低氧工作站处理TM3(小鼠睾丸间质细胞)2 d以构建缺氧细胞模型,并建立RAW 264.7巨噬细胞与TM3细胞的Transwell共培养体系。采用睾丸组织HE染色进行病理形态学分析并计算生精细胞数量/生精小管面积;通过ELISA方法(以BCA法标化)检测睾丸组织睾酮含量;利用免疫荧光染色定量睾丸组织间质细胞(CYP11A1^(+))数量和M1型巨噬细胞(CD68^(+)/CD86^(+))与细胞玻片中M1型巨噬细胞(iNOS^(+))极化;应用公共数据库(PRJNA926018)的单细胞转录组测序(scRNA-seq)数据与基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)筛选间质细胞中的程序性死亡方式;借助LysoTracker探针与组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)免疫荧光染色评估TM3细胞溶酶体完整性及通透性。结果在体实验发现缺氧状态显著降低大鼠睾丸生精小管中生精细胞数量(P<0.01)及睾酮含量(P<0.01),伴随间质细胞(CYP11A1^(+))数量减少(P<0.01)。scRNA-seq揭示缺氧条件下长形精子细胞、间质细胞、支持细胞比例显著减少(P<0.01),然而精母细胞和精原细胞比例显著上调(P<0.01),并且间质细胞中LDCD通路显著富集(P=0.0027)。除此之外,缺氧环境可诱导M1型巨噬细胞浸润(CD68^(+)/CD86^(+))睾丸,并且缺氧也能促进RAW 264.7细胞中iNOS^(+)表达(P<0.01)。体外Transwell共培养实验提示单独缺氧不影响TM3细胞溶酶体膜稳定性,而与缺氧处理的RAW 264.7细胞共培养加剧溶酶体通透性。结论缺氧可能是通过驱动M1型巨噬细胞极化,进而诱发睾丸间质细胞溶酶体依赖性细胞死亡,最终导致睾酮合成减少与生精功能障碍。 展开更多
关键词 缺氧 睾丸 间质细胞 巨噬细胞 溶酶体
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D-半乳糖脑老化模型的脂质过氧化机理 被引量：83
2
作者 崔旭 李文彬 +1 位作者 张炳烈 张洁 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期38-40,共3页
运用体内、体外相结合的方法观察了Ｄ－半乳糖（Ｄ－ｇａｌ）对脂质过氧化和蛋白质代谢的影响。结果表明：Ｄ－ｇａｌ使大鼠脑组织、家蝇头和培养大鼠神经细胞、人胚肺二倍体成纤维细胞（ＨＢＳ）均出现ＳＯＤ含量下降，ＭＤＡ和脂褐素... 运用体内、体外相结合的方法观察了Ｄ－半乳糖（Ｄ－ｇａｌ）对脂质过氧化和蛋白质代谢的影响。结果表明：Ｄ－ｇａｌ使大鼠脑组织、家蝇头和培养大鼠神经细胞、人胚肺二倍体成纤维细胞（ＨＢＳ）均出现ＳＯＤ含量下降，ＭＤＡ和脂褐素（Ｌｉｐｏ）水平升高及大鼠全血中谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）水平降低等现象；此外，大鼠脑组织中总ＲＮＡ含量下降，可溶性蛋白减少，不可溶性蛋白增加，这些变化与老年对照相类似，也与黄嘌呤氧化酶－次黄嘌呤系统产生的Ｏ２结果一致。提示，在Ｄ－ｇａｌ的代谢过程中伴有活性氧自由基产生，以Ｏ２为主的自由基介导的脂质过氧化可能是该脑老化模型的主要原因。 展开更多
关键词 D-半乳糖 脂质过氧 脑老化
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肠黏膜上皮细胞的载体分布及功能 被引量：12
3
作者 周济宏 李幼生 +3 位作者 洪志坚 胡心宝 解伟光 黎介寿 《医学研究生学报》 CAS 2009年第7期677-681,共5页
目的:谷氨酰胺是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内。研究IEC-6细胞膜上分布的谷氨酰胺载体种类及其功能。方法:体外培养肠黏膜上皮细胞株IEC-6,检测细胞膜上不同谷氨酰胺载体(ASCT2、SN1、SN2、ATA1、ATA2、LAT... 目的:谷氨酰胺是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内。研究IEC-6细胞膜上分布的谷氨酰胺载体种类及其功能。方法:体外培养肠黏膜上皮细胞株IEC-6,检测细胞膜上不同谷氨酰胺载体(ASCT2、SN1、SN2、ATA1、ATA2、LAT1、LAT2)的mRNA;检测载体ASCT2蛋白;测定不同载体对同位素标记谷氨酰胺的转运特性。结果:在IEC-6细胞膜上载体ASCT2、SN1、ATA1、LAT1、LAT2的mRNA均得以表达。细胞外缓冲液中Na+存在时,[3H]-谷氨酰胺摄取率为(164.07±37.94)fmol/(mg protein.10 min);Na+不存在时,[3H]-谷胺酰胺摄取率为(58.71±10.51)fmol/(mg protein.10 min);饱和剂量甲氨基异丁酸(methylamino-isobutyric acid,MeAIB)阻断A类载体后,[3H]-谷氨酰胺摄取率为(81.02±19.59)fmol/(mg protein.10 min)。结论:在IEC-6细胞膜上可能存在载体ASCT2、SN1、ATA1、LAT1、LAT2;Na+依赖性氨基酸载体起主要作用(约64.22%),其中A类载体占50.62%,非A类载体占13.60%,非Na+依赖载体起次要作用(35.78%) 展开更多
关键词 IEC-6 [3H]-谷氨酰胺 谷氨酰胺载体 ASCT2 SN1 ATA1 LAT1 LAT2
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吉西他滨诱导胰腺癌细胞株SW1990的耐药作用与硫氧还蛋白还原酶活性的改变 被引量：11
4
作者 牛备战 陈革 +2 位作者 李丽君 吴元德 赵玉沛 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期606-610,T0002,共6页
目的建立对吉西他宾耐药的胰腺癌细胞株,探讨硫氧还蛋白还原酶(TrxR)在耐药过程中的作用。方法采用间歇浓度递增法诱导胰腺癌细胞株SW1990对吉西他宾耐药,检测其生物学性状变化,并对比观察TrxR活性变化。结果药物培养9个月后,得到稳定... 目的建立对吉西他宾耐药的胰腺癌细胞株,探讨硫氧还蛋白还原酶(TrxR)在耐药过程中的作用。方法采用间歇浓度递增法诱导胰腺癌细胞株SW1990对吉西他宾耐药,检测其生物学性状变化,并对比观察TrxR活性变化。结果药物培养9个月后,得到稳定传代的SW1990/GZ耐药细胞株;其形态学、生长特征等均发生了明显变化,细胞变圆、体积缩小、内质网扩张、颗粒样物质增多及细胞倍增时间延长;对吉西他滨、5-氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素的耐药性均显著增加;耐药细胞的TrxR活性也明显增高。结论SW1990/GZ有多药耐药现象,TrxR在耐药过程中起一定作用。 展开更多
关键词 胰腺癌 多药耐药 吉西他宾 硫氧还蛋白还原酶
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湖光牛奶脂肪酸的气相色谱-质谱联用分析 被引量：17
5
作者 林观平 伍金华 +2 位作者 江黎明 蔡春 周克元 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第19期3619-3620,3624,共3页
[目的]建立简易方法检测湛江市湖光牛奶脂肪酸,并分析其营养价值。[方法]以BF3/MeOH溶液为衍生化试剂,正十七碳饱和脂肪酸(C17:0)为内标,牛奶脂肪酸的抽提和甲酯化一步完成;经DB-WAX石英毛细管柱分离,气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)进行定... [目的]建立简易方法检测湛江市湖光牛奶脂肪酸,并分析其营养价值。[方法]以BF3/MeOH溶液为衍生化试剂,正十七碳饱和脂肪酸(C17:0)为内标,牛奶脂肪酸的抽提和甲酯化一步完成;经DB-WAX石英毛细管柱分离,气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)进行定性定量分析。[结果](1)本方法重现性试验脂肪酸CV为1.15%～5.68%,仪器重现性CV为2.31%～9.81%,回收率为84.2%～105.0%。(2)湖光牛奶含有16种脂肪酸,平均饱和脂肪酸:单不饱和脂肪酸:多不饱和脂肪酸为11.80:4.38:1,饱和脂肪酸的含量最高,达到69%;多不饱和脂肪酸的含量最低,仅为6%;ω-6/ω-3脂肪酸比率为2.30。[结论]本方法高效易行,准确可靠,节省时间,适合大标本量的检测;湖光牛奶饱和脂肪酸,单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸比例不均衡,有必要优化脂肪酸的组分以提高其营养价值。 展开更多
关键词 牛奶 脂肪酸 气相色谱质谱联用
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P物质刺激下脊髓星形胶质细胞活化中磷酸化P38丝裂素活化蛋白激酶和c-fos的表达及作用 被引量：6
6
作者 张恒 周占松 +2 位作者 刘丽梅 杨忠 宋波 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第21期2163-2166,共4页
目的观察P物质(substance P,SP)作用下,脊髓星形胶质细胞中P38丝裂素活化蛋白激酶的磷酸化(P-P38MAPK)和c-fos的表达,及P38MAPK磷酸化对炎性因子分泌的影响。方法采用体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激,分别采用Western blot和RT-PC... 目的观察P物质(substance P,SP)作用下,脊髓星形胶质细胞中P38丝裂素活化蛋白激酶的磷酸化(P-P38MAPK)和c-fos的表达,及P38MAPK磷酸化对炎性因子分泌的影响。方法采用体外培养脊髓星形胶质细胞,施加SP刺激,分别采用Western blot和RT-PCR检测P38MAPK磷酸化和c-fos表达的变化,ELISA法检测SB203580阻断P38MAPK磷酸化对炎性因子TNF-α、IL-1β、NO分泌的影响。结果在SP(10-7mol/L)刺激下,P38MAKP在15、30、45、60min时均明显磷酸化,与对照组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01),磷酸化高峰在45min;SP(10-7mol/L)作用下c-fos表达明显,30min、1、3、6h均显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),3h达到高峰;SP(10-7mol/L)刺激脊髓星形胶质细胞明显分泌炎性因子IL-1β、TNF-α和NO(P<0.01),SB203580阻断P38MAKP信号通路后TNF-α和NO的分泌下降(P<0.01),IL-1β的分泌在阻断前后无显著性差异(P>0.05)。结论SP作用下脊髓星形胶质细胞中P38MAPK和c-fos信号通路激活,P38MAPK磷酸化参与了SP作用下脊髓星形胶质细胞的活化及炎性因子的分泌,与星形胶质细胞在脊髓中枢对痛觉的调控有关。 展开更多
关键词 星形胶质细胞 慢性疼痛 SP IL-1β NO TNF—α P38MAPK c-fns
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体外培养的成骨细胞中碱性磷酸酶活性的检测方法探讨 被引量：30
7
作者 李德华 刘宝林 +1 位作者 吴军正 陈建元 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期21-23,共3页
检测细胞内碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ）活性是体外研究细胞分化及功能的重要手段。实验根据ＡＬＰａｓｅ活性检测的基本原理，探讨了体外培养的成骨细胞中ＡＬＰａｓｅ活性的检测方法。对９６孔细胞培养成骨细胞，以２００μｌ０．０５... 检测细胞内碱性磷酸酶（ＡＬＰａｓｅ）活性是体外研究细胞分化及功能的重要手段。实验根据ＡＬＰａｓｅ活性检测的基本原理，探讨了体外培养的成骨细胞中ＡＬＰａｓｅ活性的检测方法。对９６孔细胞培养成骨细胞，以２００μｌ０．０５％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００＋超声破碎细胞，以氢氧化钠终止ＡＬＰａｓｅ分解底物的反应。对人胚成骨细胞而言，细胞裂解产物与底物及０．４ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ的配比比例以４０∶１００∶１００（μｌ）为宜，有较好的灵敏性和可靠性。 展开更多
关键词 骨母细胞 碱性磷酸酶 细胞培养
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激素性股骨头坏死BMSCs骨保护素/NF-κB受体活化因子配基mRNA的表达 被引量：9
8
作者 王建忠 高鸿雁 +3 位作者 王坤正 李伟 时志斌 张明宇 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期777-780,共4页
目的观察激素性股骨头坏死患者BMSCs骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/NF-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)mRNA表达情况,探讨长期应用激素导致股骨头坏死的另一病理机制。方法取2007年3... 目的观察激素性股骨头坏死患者BMSCs骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/NF-κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL)mRNA表达情况,探讨长期应用激素导致股骨头坏死的另一病理机制。方法取2007年3月-2008年3月激素性股骨头坏死患者自愿捐赠的骨髓及股骨头骨组织35例(实验组)和股骨颈骨折患者自愿捐赠的骨髓及股骨头骨组织21例(对照组)。两组男女比例均为4∶3;年龄41～70岁,其中实验组平均55.34岁,对照组平均55.33岁。实验组患者最近2年内接受糖皮质激素治疗超过3周或大剂量冲击治疗超过1周,对照组患者从未接受超过1周的激素治疗。骨组织标本行多聚甲醛固定后石蜡包埋,HE染色。所取骨髓采用贴壁法分离培养BMSCs,采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RTQ-PCR)技术检测BMSCs OPG mRNA和RANKL mRNA的表达水平,并计算OPG mRNA/RANKL mRNA比值。结果HE染色示实验组未见完整的骨小梁和骨单位,可见不连续骨碎片,碎片骨陷窝内骨细胞大部分消失,周围有大量炎性肉芽组织。对照组可见完整骨单位由板层骨构成,板层骨连续完整,围绕血管呈同心圆排列,小梁骨陷窝内可见骨细胞。BMSCs RTQ-PCR检测:实验组OPG mRNA表达量为0.37±0.12,RANKL mRNA1.12±0.39,OPG mRNA/RANKL mRNA比值为0.37±0.17;对照组OPG mRNA0.47±0.13,RANKL mRNA0.84±0.24,OPG mRNA/RANKL mRNA比值为0.61±0.26;两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论长期应用糖皮质激素致股骨头坏死可能与其调控BMSCs OPG和RANKL表达有关。 展开更多
关键词 糖皮质激素 股骨头坏死 BMSCS 细胞因子
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活性维生素D缺乏导致脑内加压素表达上调和脑血管功能损伤 被引量：10
9
作者 毛志远 贾坚 +2 位作者 丁炯 苗登顺 张露青 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1680-1684,共5页
目的 :本研究探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)_2D_3]缺乏在小鼠高血压发病的病理进程中对脑内加压素(VP)表达和脑血管功能的影响。方法:运用尾动脉压体积描记法、免疫组织化学、离体微血管压力肌动描记法分析和比较2月龄25羟化维生素D 1... 目的 :本研究探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)_2D_3]缺乏在小鼠高血压发病的病理进程中对脑内加压素(VP)表达和脑血管功能的影响。方法:运用尾动脉压体积描记法、免疫组织化学、离体微血管压力肌动描记法分析和比较2月龄25羟化维生素D 1α羟化酶基因敲除[1α(OH)ase^(-/-)]小鼠和同窝野生型小鼠的平均动脉血压、脑内VP的表达和脑微血管反应性的变化。结果:1α(OH)ase^(-/-)小鼠出现高血压表型,下丘脑室旁核和视上核VP表达都高于同窝野生型小鼠,大脑后动脉对乙酰胆碱的舒血管反应和对一氧化氮合酶抑制剂L-硝基-精氨酸的缩血管反应较对照组显著降低。结论:1,25(OH)_2D_3在高血压发病过程中对脑内神经内分泌和脑血管功能起重要调控作用。 展开更多
关键词 1 25二羟维生素D3 1α羟化酶 高血压 加压素 脑血管反应性
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生草乌对小鼠精神神经系统的毒性作用研究 被引量：8
10
作者 何晓娟 王莉 +2 位作者 王冲 严光焰 李宏霞 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第7期1218-1220,共3页
[目的]从自发活动、肌肉耐力和学习记忆3方面了解生草乌对小鼠神经系统的毒性作用。[方法]试验设立阴性对照组、阳性对照组和生草乌27.48 g生药/kg、13.74 g生药/kg、6.87生药g/kg 3个试验组。测试指标:①小鼠自发活动数:单次给药15 min... [目的]从自发活动、肌肉耐力和学习记忆3方面了解生草乌对小鼠神经系统的毒性作用。[方法]试验设立阴性对照组、阳性对照组和生草乌27.48 g生药/kg、13.74 g生药/kg、6.87生药g/kg 3个试验组。测试指标:①小鼠自发活动数:单次给药15 min、30 min和3 h后用自发活动仪测定小鼠在10 min内自发活动次数。②爬杆时间:单次给药30 min后将小鼠置于爬杆架的玻璃棒上,记录小鼠由于肌肉疲劳从棒上跌落的时间,累计3次作为爬杆时间。③平均逃避潜伏期:连续给药4 d,末次给药后30 min进行水迷宫实验,以小鼠找到隐藏平台的时间为逃避潜伏期,测试两次取平均值。通过比较实验组和阴性对照组以上3个测试指标,了解生草乌对小鼠神经系统的毒性作用。[结果]采用单因素方差分析和最小有意义差异法(LSD法)比较生草乌低、中、高3个剂量组和阴性对照组之间小鼠的3个测试指标,结果显示:各给药组与阴性对照组之间小鼠自发活动数、爬杆时间和平均逃避潜伏期的差异均无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]生草乌低、中、高3个剂量组与阴性对照组相比,在自发活动、肌肉耐力和学习记忆3方面的差异均无统计学意义,故认为在本实验条件下,生草乌剂量为0.229、0.458、0.916 g生药/ml时,对小鼠精神神经系统无毒性作用。 展开更多
关键词 生草乌 昆明种小鼠 精神神经系统 自发活动 爬杆实验 MORRIS水迷宫
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激活Notch信号通路可延迟人牙髓细胞的老化表现 被引量：10
11
作者 常思佳 邹晓英 +2 位作者 庄姮 岳林 高学军 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期5-11,共7页
目的:建立Notch信号通路激活的人牙髓细胞模型,探讨激活Notch信号通路对人牙髓细胞老化的影响。方法:体外培养人牙髓细胞,从第4代开始实验,将牙髓细胞分为激活组和阴性对照组。激活组采用10 mg/L的Jagged1蛋白包被培养皿的方法激活Notc... 目的:建立Notch信号通路激活的人牙髓细胞模型,探讨激活Notch信号通路对人牙髓细胞老化的影响。方法:体外培养人牙髓细胞,从第4代开始实验,将牙髓细胞分为激活组和阴性对照组。激活组采用10 mg/L的Jagged1蛋白包被培养皿的方法激活Notch信号通路,阴性对照组的培养皿不做处理。以实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测第4代、第8代、第10代Notch信号通路下游基因Hes1的表达水平。分三个水平观察Notch信号通路激活后人牙髓细胞的变化:(1)细胞水平,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,用MTT法检测细胞活力改变;(2)代谢酶水平,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性测定试剂盒检测ALP的表达和活性,用衰老相关β-半乳糖苷酶染色方法检测阳性细胞百分率;(3)基因水平,用RT-qPCR检测老化相关基因p53和p16的表达。t检验比较激活组和阴性对照组各指标的差异。结果:采用Jagged1蛋白包被培养皿后,Notch信号通路下游基因Hes1表达增高,表明建立了Notch信号通路激活的人牙髓细胞模型。激活组牙髓细胞与阴性对照组牙髓细胞相比,较晚出现形态显现衰老的细胞,第8代、第10代细胞活力升高,ALP表达量升高;第10代ALP活性升高,β-半乳糖苷酶表达下降;各代p16基因表达水平均降低,第8代、第10代p53基因表达水平降低。结论:Jagged1蛋白可有效激活Notch信号通路,激活Notch信号通路后,人牙髓细胞在细胞水平、代谢酶水平、基因水平均表现出老化延迟的趋势。 展开更多
关键词 受体 Notch 信号传导 细胞衰老 牙髓
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微流控芯片操纵传输及实时监测单细胞量子释放 被引量：6
12
作者 程伟 黄卫华 +5 位作者 庞代文 王宗礼 程介克 崔大付 屈三甫 郑从义 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1585-1587,共3页
微流控芯片技术用于细胞生化分析已引起了广泛关注.
关键词 微流控芯片 单细胞操纵 实时监测 单细胞活体 量子释放 碳纤维微电极 生物化学分析
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白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用 被引量：9
13
作者 郭江 陈清 +3 位作者 周浩 高璐璐 孔丹莉 俞守义 《热带医学杂志》 CAS 2010年第5期531-533,541,F0002,共5页
目的研究白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用,从而探索其对中枢神经保护作用的可能机制。方法采用不同浓度的白藜芦醇预处理星形胶质细胞12h,继之用25μmol/L浓度的β淀粉样蛋白进行损伤,然后检测细胞存活率、... 目的研究白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用,从而探索其对中枢神经保护作用的可能机制。方法采用不同浓度的白藜芦醇预处理星形胶质细胞12h,继之用25μmol/L浓度的β淀粉样蛋白进行损伤,然后检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)以及采用DHE探针测定荧光强度间接反映胞内活性氧(ROS)含量,以评价白藜芦醇对细胞氧化损伤的保护作用。结果受β淀粉样损伤的细胞存活率明显下降(P<0.05),而用10、100μmol/L白藜芦醇预处理则能提高该细胞的存活率(P<0.05),但1μmol/L白藜芦醇预处理的细胞存活率并无明显变化;荧光检测显示,蛋白损伤使得荧光强度增高(P<0.05),1μmol/L白藜芦醇处理组荧光强度大于阳性对照组,其余各组荧光强度均小于阳性对照组(P<0.05);蛋白损伤可导致细胞LDH漏出量增加(P<0.05),1μmol/L白藜芦醇使得LDH漏出增加(P<0.05),而10、100μmol/L白藜芦醇处理组,细胞LDH漏出量明显减少(P<0.05)。结论星形胶质细胞受到β淀粉样蛋白损伤后,白藜芦醇能减少LDH的漏出及有效降低胞内ROS水平,从而显示对星形胶质细胞具有保护作用。 展开更多
关键词 Β淀粉样蛋白 阿尔茨海默病 白藜芦醇 星形胶质细胞 氧化损伤
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层粘蛋白对雪旺细胞在三维网架上迁移的影响 被引量：13
14
作者 杨勤 沈馨亚 +2 位作者 刘才栋 严恒林 汪洋 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期400-403,共4页
用20只SD大鼠的坐骨神经片段培养在涂有层粘蛋白的聚酯纤维上,对照组培养在无层粘蛋白的聚酯纤维上.培液由20%小牛血清和80%DMEM组成,37℃,5%二氧化碳培养箱培养2周.在培养24,48,72小时,观察雪旺细胞迁移情况,测量迁移最远的雪旺细胞离... 用20只SD大鼠的坐骨神经片段培养在涂有层粘蛋白的聚酯纤维上,对照组培养在无层粘蛋白的聚酯纤维上.培液由20%小牛血清和80%DMEM组成,37℃,5%二氧化碳培养箱培养2周.在培养24,48,72小时,观察雪旺细胞迁移情况,测量迁移最远的雪旺细胞离组织块边缘的距离.结果显示:实验组和对照组相比较,雪旺细胞从组织中迁出的时间早.速度快,数量多.在体外培养条件下.显示了层粘蛋白对雪旺细胞在三维网架上迁移的促进作用.对层粘蛋白促进雪旺细胞迁移的影响和作用机制作了讨论,并探讨其在神经移植中的应用前景. 展开更多
关键词 雪旺细胞 层粘蛋白 迁移 聚酯纤维 三维网架
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孕酮对全脑缺血/再灌注损伤大鼠学习记忆及海马P2X_7受体表达的影响 被引量：6
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作者 李新娟 何瑞芳 +2 位作者 李爽 李晓娟 李东亮 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期472-475,共4页
目的:研究孕酮(PROG)对全脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠学习记忆及海马P2X7受体表达的影响。方法:雄性SD大鼠48只,随机分成4组(n=12):正常组、假手术组、I/R组和I/R+PROG组。采用改良Pulsinelli’s 4血管闭塞法建立全脑缺血/再灌注损伤动... 目的:研究孕酮(PROG)对全脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠学习记忆及海马P2X7受体表达的影响。方法:雄性SD大鼠48只,随机分成4组(n=12):正常组、假手术组、I/R组和I/R+PROG组。采用改良Pulsinelli’s 4血管闭塞法建立全脑缺血/再灌注损伤动物模型,Y-型迷宫检测学习与记忆成绩;免疫荧光法观察海马区P2X7受体蛋白表达;羟胺氧化法测定海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性;硫代巴比妥酸法测定海马组织中丙二醛(MDA)含量。结果:正常组和假手术组学习记忆成绩、海马区P2X7阳性表达细胞数、海马组织中SOD活性和MDA含量差异无显著性;与假手术组相比,I/R组学习记忆成绩显著降低(P<0.01);与I/R组相比,I/R+PROG组学习记忆成绩显著升高(P<0.05)。与假手术组相比,I/R组海马区P2X7阳性表达细胞数显著增多(P<0.01);与I/R组相比,I/R+PROG组海马区P2X7阳性表达细胞数显著减少(P<0.01)。与假手术组相比,I/R组海马组织中SOD活性显著降低(P<0.01),而MDA含量显著升高(P<0.01);与I/R组相比,I/R+PROG组海马组织中SOD活性显著升高(P<0.05),而MDA含量显著降低(P<0.01)。结论:PROG可明显改善全脑缺血/再灌注损伤大鼠学习与记忆能力,其作用机制可能与下调海马区P2X7受体蛋白表达和清除氧自由基有关。 展开更多
关键词 孕酮 脑缺血/再灌注 学习记忆 P2X7受体 超氧化物歧化酶 丙二醛
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乌头类中药对CHL细胞的DNA损伤作用 被引量：8
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作者 王金勇 王亚其 +4 位作者 张建军 王衍堂 李宏霞 李颐 肖凯 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2007年第7期1204-1206,共3页
[目的]观察乌头类中药盐附子和乌头碱对CHL细胞(中国仓鼠肺成纤维细胞)的DNA损伤作用。[方法]采用单细胞凝胶电泳法检测盐附子、乌头碱对CHL细胞DNA即刻损伤的影响。在加和不加S9时,盐附子均设5个剂量组(终浓度分别为5、2.5、1.25、0.62... [目的]观察乌头类中药盐附子和乌头碱对CHL细胞(中国仓鼠肺成纤维细胞)的DNA损伤作用。[方法]采用单细胞凝胶电泳法检测盐附子、乌头碱对CHL细胞DNA即刻损伤的影响。在加和不加S9时,盐附子均设5个剂量组(终浓度分别为5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药∕ml)、乌头碱设4个剂量组(终浓度分别为100、50、25、5μg/ml),试验同时设PBS阴性对照组和阳性对照组,阳性对照在不加S9时为0.1 mmol/ml重铬酸钾,加S9时为80μg/ml环磷酰胺。[结果]在加和不加S9时,盐附子各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照比较差异无统计学意义(P﹥0.05),乌头碱100μg/ml和50μg/ml组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长与阴性对照之间差异有统计学意义(P﹤0.05),乌头碱各浓度组拖尾细胞率和拖尾细胞尾长存在剂量反应关系。[结论]在本试验条件下,加与不加S9时,乌头碱浓度为100μg/ml和50μg/ml时对CHL细胞有DNA损伤作用;盐附子5、2.5、1.25、0.625、0.313 mg生药/ml时未观察到对CHL细胞有DNA损伤作用。 展开更多
关键词 乌头碱 CHL细胞 彗星试验 DNA损伤
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过表达ALEX1对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响 被引量：7
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作者 曾帆 高月 +6 位作者 伍家燕 李海玉 樊建军 李韵 张寒韬 刘革力 宋方洲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1066-1069,共4页
目的:研究过表达ALEX1对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法:将重组慢病毒LV5-ALEX1及阴性对照LV5-NC分别感染乳腺癌MCF-7细胞。感染72 h后,采用实时定量PCR和Western blot分别检测感染后ALEX1的表达情况;感染24、48、72、96 h,CCK... 目的:研究过表达ALEX1对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法:将重组慢病毒LV5-ALEX1及阴性对照LV5-NC分别感染乳腺癌MCF-7细胞。感染72 h后,采用实时定量PCR和Western blot分别检测感染后ALEX1的表达情况;感染24、48、72、96 h,CCK8法检测细胞增殖情况;感染72 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:感染72 h后细胞ALEX1 mRNA表达水平明显上升(165.81±12.14 vs 52.29±2.32,P<0.01),实验组与对照组相比,细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加(20.55%±2.50%vs 3.60%±1.614%,P<0.05)。结论:过表达ALEX1能明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 乳腺癌 MCF-7细胞 细胞增殖 凋亡
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耐钙心肌细胞的分离和电生理特性观察 被引量：12
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作者 李慈珍 刘远谋 +1 位作者 王红卫 边毓土 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 1994年第4期359-362,共4页
用快速、恒压的无钙和胶原酶Ｔｙｒｏｄｅ液相继灌流豚鼠心脏冠脉系统后，再经无钙液室温浸泡心脏和用改变的Ｋ－Ｂ液帮助分离细胞的恢复，可获得耐钙的游离心肌细胞。全细胞电流记录：静息电位为－７２±９ｍＶ（ｎ＝１２），并显... 用快速、恒压的无钙和胶原酶Ｔｙｒｏｄｅ液相继灌流豚鼠心脏冠脉系统后，再经无钙液室温浸泡心脏和用改变的Ｋ－Ｂ液帮助分离细胞的恢复，可获得耐钙的游离心肌细胞。全细胞电流记录：静息电位为－７２±９ｍＶ（ｎ＝１２），并显示出快内向电流（ＩＮａ），可被异搏定阻断的慢钙离子流和时间依赖性外向钾流（Ｉｋ）；单通道记录分别显示了Ｎａ＋Ｃａ２＋和Ｋ＋通道的电压依赖性等特征。结果表明了用此法分离的细胞具有耐钙性和正常电生理特性。 展开更多
关键词 胶原酶 心肌细胞 分离 技术
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成骨细胞胞内胞外碱性磷酸酶含量比较 被引量：19
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作者 张英 袁月 孙富丽 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期874-876,884,共4页
目的通过比较原代培养的成骨细胞细胞内、外碱性磷酸酶含量,为提高碱性磷酸酶检测结果的准确性提供实验依据。方法取4只出生24 h内的大鼠胎鼠的颅骨,采用胰酶和Ⅰ型胶原酶交替消化的方法获得原代成骨细胞。分别取培养1 d、3d、5 d各5瓶... 目的通过比较原代培养的成骨细胞细胞内、外碱性磷酸酶含量,为提高碱性磷酸酶检测结果的准确性提供实验依据。方法取4只出生24 h内的大鼠胎鼠的颅骨,采用胰酶和Ⅰ型胶原酶交替消化的方法获得原代成骨细胞。分别取培养1 d、3d、5 d各5瓶细胞,直接取培养成骨细胞的培养液作为对照组,采用超声破碎的方法破碎细胞,收集细胞悬液,作为实验组,用碱性磷酸酶含量试剂盒检测收集到的2组液体。结果各时间点均是实验组数值高于对照组数值,并且差异有统计学意义(P<0.05)。结论原代成骨细胞细胞内的碱性磷酸酶含量,显著高于成骨细胞外的碱性磷酸酶含量,建议尽量采用将细胞破碎的方法进行ALP含量的检测,以提高结果的准确性。 展开更多
关键词 成骨细胞 原代培养 碱性磷酸酶含量
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局灶性脑缺血再灌损伤时神经细胞内Ca^(2+)时空动态变化的实验研究 被引量：11
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作者 邢虹 何其华 +2 位作者 袁兰 徐家 吴本 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1999年第1期51-56,共6页
本文用插线法制作局灶性脑缺血／再灌损伤模型，利用激光共聚焦扫描显微镜观察活体脑片细胞内Ｃａ２＋的分布及动态变化，结果表明：（１）缺血／再灌时间不同，梗塞面积不同，缺血４小时梗塞面积占同侧半球的１６．３％，缺血４小时再... 本文用插线法制作局灶性脑缺血／再灌损伤模型，利用激光共聚焦扫描显微镜观察活体脑片细胞内Ｃａ２＋的分布及动态变化，结果表明：（１）缺血／再灌时间不同，梗塞面积不同，缺血４小时梗塞面积占同侧半球的１６．３％，缺血４小时再灌２０小时梗塞面积增加到２５．９％，缺血２４小时梗塞面积占同侧半球的６０．４％。（２）本文首次观察到在缺血４小时纹状体区域的Ｃａ２＋变化明显高于皮层。 展开更多
关键词 脑片 局灶性脑缺血 钙离子 激光共聚焦扫描显微镜
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