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基于Cre-loxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性敲除SENP1基因小鼠
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作者 杨坤 章容 +4 位作者 吴越 雷小平 谌云川 康兰 董文斌 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第14期2943-2950,共8页
背景:前期在体外成功构建了SENP1基因沉默的人肺泡上皮细胞系,在细胞水平上研究了SENP1在高氧性肺损伤中的作用。目的:基于Cre-loxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性敲除SENP1基因小鼠模型。方法:将SENP1^(flox/-)小鼠自交得到SENP... 背景:前期在体外成功构建了SENP1基因沉默的人肺泡上皮细胞系,在细胞水平上研究了SENP1在高氧性肺损伤中的作用。目的:基于Cre-loxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性敲除SENP1基因小鼠模型。方法:将SENP1^(flox/-)小鼠自交得到SENP1^(flox/flox)和SENP1^(flox/-)小鼠;将Sftpc-Cre^(+/+)小鼠与野生型小鼠交配获得更多的Sftpc-Cre^(+/-)小鼠。将Sftpc-Cre^(+/+)或子代Sftpc-Cre^(+/-)小鼠与SENP1^(flox/-)或子代SENP1^(flox/flox)小鼠进行杂交,获得SENP1^(flox/-)Sftpc-Cre^(+/-)双杂合小鼠。将SENP1^(flox/-)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠与SENP1^(flox/flox)小鼠杂交,获得SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠。剪鼠尾提取基因组DNA,行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳确定小鼠基因型。取SENP1^(flox/flox)和SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠肺组织行免疫荧光双标实验及Western blot以验证SENP1敲除效果;取SENP1^(flox/flox)和SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠心、肝、肺、肾组织行苏木精-伊红染色以观察两组小鼠各脏器的组织形态。结果与结论:琼脂糖凝胶电泳正确筛选出SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠。免疫荧光双标实验显示,与SENP1^(flox/flox)小鼠相比,SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠肺组织中SENP1的平均荧光强度降低(P<0.01),且SENP1和Sftpc未见明显共定位(P<0.01)。Western blot结果显示,与SENP1^(flox/flox)小鼠相比,SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠肺组织中SENP1蛋白表达降低(P<0.001)。苏木精-伊红染色结果显示SENP1^(flox/flox)和SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠的心、肝、肺和肾脏组织形态无明显改变。该研究利用Cre-loxP重组酶系统成功构建了肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性敲除SENP1基因小鼠,为后续研究SENP1基因在以肺泡Ⅱ型上皮细胞为主要损伤细胞的肺疾病如支气管肺发育不良、特发性肺纤维化中的作用提供了良好的工具。 展开更多
关键词 SENP1 Cre-loxP重组酶系统 肺泡Ⅱ型上皮细胞 条件性基因敲除 小鼠
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肝素、5-羟色胺和白介素-1对NIH/3T3成纤维细胞AgNORs影响的图像分析 被引量:5
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作者 崔玉芳 杨红 +3 位作者 高亚兵 杨瑞彪 夏国伟 王德文 《中国体视学与图像分析》 1998年第1期18-21,共4页
应用核仁组成区相关蛋白银染技术(AgNORs)结合图像分析观察了肝素、5-羟色胺和白介素质(IL-1)对体外培养的NIH3T3成纤维细胞AgNORs的影响。结果表明:(1)加入0.1-0.4mgL浓度的肝素培养后... 应用核仁组成区相关蛋白银染技术(AgNORs)结合图像分析观察了肝素、5-羟色胺和白介素质(IL-1)对体外培养的NIH3T3成纤维细胞AgNORs的影响。结果表明:(1)加入0.1-0.4mgL浓度的肝素培养后第3天,成纤维细胞嗜银蛋白颗粒面积(Ag-a)、积分光密度(Ag-iod)和嗜银相关蛋白面积与核面积的百分比(Ag-a/Na)均出现升高,其中以0.10和0.20mgL浓度的肝素刺激作用最强,三个指标的均值分别为对照值的1.47、1.54和1.94倍(P<0.01);(2)加入不同浓度5-羟色胺后AgNORs的三个参数呈现出类似的升高趋势,而以1.0和2.0×10-6molL浓度的5羟色胺显示出较强的促进作用,成纤维细胞AgNORs的三个指标相当于对照值的1.53、1.57和2.42倍;(3)在所观察的lL-1四种浓度范围内,以100和200×103uL浓度的lL-1对成纤维细胞的促增殖作用最强,三个指标的均值分别为对照值的1.60、1.84和2.42倍。 展开更多
关键词 肝素 5羟色胺 白介素-1 成纤维细胞 图像分析 AGNORS
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人非小细胞肺癌NCI-H3122克唑替尼耐药细胞株的构建及耐药相关miRNAs的初步筛选 被引量:1
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作者 刘晓 贾燕花 +1 位作者 张可 刘皈阳 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期687-692,共6页
目的建立对克唑替尼耐药的非小细胞肺癌细胞株,并对其耐药性进行鉴定,初步筛选耐药相关的miRNAs。方法采用克唑替尼药物浓度递增的方法建立人耐药细胞株NCI-H3122CR,并通过细胞生长曲线、药物敏感性、细胞凋亡和细胞周期的检测评价NCI-H... 目的建立对克唑替尼耐药的非小细胞肺癌细胞株,并对其耐药性进行鉴定,初步筛选耐药相关的miRNAs。方法采用克唑替尼药物浓度递增的方法建立人耐药细胞株NCI-H3122CR,并通过细胞生长曲线、药物敏感性、细胞凋亡和细胞周期的检测评价NCI-H3122CR细胞株的耐药性。第二代基因测序法和RT-PCR检测耐药后microRNA表达量的变化。结果成功建立了克唑替尼耐药细胞株H3122CR,耐药指数为9.86。流式细胞仪检测结果显示H3122CR细胞凋亡率比H3122细胞低,并呈现浓度依赖性的趋势。耐药细胞株的细胞周期分布产生了显著的变化。当前的第二代测序和RT-PCR检测结果显示:miR-30a-5p、miR-374c-5p和miR-125b-5p表达上调,miR-31-5p、miR-10a-5p和miR-200c-3p表达下调。结论构建的H3122CR耐药细胞模型对克唑替尼有一定的耐药性,并且耐药后部分miRNAs表达量产生显著的变化。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 克唑替尼 抗药性 肿瘤 MIRNAS
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E-cadherin,β-catenin,N-cadherin在卵巢浆液性癌中的表达及意义 被引量:11
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作者 林路 赵卫东 +2 位作者 何玉 欧玉荣 席玉玲 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期95-100,共6页
目的研究浆液性卵巢癌中E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad),β-连环蛋白(β-catenin,β-cat),N-钙粘蛋白(N-cadherin,N-cad)的表达,探讨其相关性及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测60例卵巢浆液性癌中E-cadherin,β-catenin and N-cadh... 目的研究浆液性卵巢癌中E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad),β-连环蛋白(β-catenin,β-cat),N-钙粘蛋白(N-cadherin,N-cad)的表达,探讨其相关性及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测60例卵巢浆液性癌中E-cadherin,β-catenin and N-cadherin的表达。结果 E-cadherin,β-catenin在卵巢浆液性癌、卵巢浆液性良性肿瘤和卵巢交界性肿瘤及正常卵巢组织间差异有统计学意义(P<0.05),而在卵巢良性肿瘤和卵巢交界性肿瘤间,差异不大,无统计学意义(P>0.05)。N-cadherin在卵巢浆液性癌与卵巢交界性肿瘤,卵巢浆液性良性瘤及正常卵巢组织间差异有统计学意义(P<0.05),而在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤和卵巢交界性肿瘤间,无差异,无统计学意义。结论 E-钙粘蛋白(E-cadherin),β-连环蛋白(β-catenin),N-钙粘蛋白(N-cadherin)在浆液性卵巢癌中均存在异常表达。提示三种因子可能造成肿瘤的发生、发展、侵袭及转移。三者同时检测,可能为早期诊断上皮性卵巢癌及针对上皮性卵巢癌的靶向治疗提供分子依据及新的思路。 展开更多
关键词 上皮性卵巢癌 E-CADHERIN Β-CATENIN N-CADHERIN 免疫组化
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分离、鉴定CD133^+人肝癌干细胞以及^(131)I-CD133mAb对其生物学效应的影响 被引量:5
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作者 侯妍利 唐敏 +4 位作者 陈兴月 段丽群 康强强 舒锦 李少林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期222-227,共6页
目的分离、鉴定CD133+人肝癌干细胞以及131I-CD133mAb对其生物学效应的影响。方法为选择最适的细胞系,流式细胞仪检测Huh-7和HepG2细胞中CD133表达率;磁珠分选Huh-7细胞,流式细胞仪检测分选后CD133表达率;体外成球、克隆形成实验及体内... 目的分离、鉴定CD133+人肝癌干细胞以及131I-CD133mAb对其生物学效应的影响。方法为选择最适的细胞系,流式细胞仪检测Huh-7和HepG2细胞中CD133表达率;磁珠分选Huh-7细胞,流式细胞仪检测分选后CD133表达率;体外成球、克隆形成实验及体内成瘤实验验证干细胞特性;氯胺T法制备131I标记CD133单克隆抗体(131ICD133mAb)并鉴定;取分选后的CD133+-Huh-7细胞、Huh-7细胞和HepG2细胞进行实验,将每种细胞分成4组(131ICD133mAb组、131I组、CD133mAb组、131I+CD133mAb组);MTT法检测各组对CD133+-Huh-7细胞生长抑制的最适剂量和各组在最适剂量作用后24、48、72 h对3组细胞生长抑制率;流式细胞仪检测131I-CD133mAb作用3组细胞72 h时细胞凋亡和细胞周期的变化。结果 Huh-7和HepG2细胞系CD133表达率分别为18.8%和5.2%,故选用Huh-7细胞进行分选;磁珠分选后CD133+-Huh-7细胞CD133的表达率为99.28%,与分选前比较差异有统计学意义(P<0.01)。CD133+-Huh-7细胞相对于CD133--Huh-7细胞具有更强的体外成球能力、克隆形成能力和体内成瘤能力。131I-CD133mAb标记率为87.92%,放射化学纯度为97.54%,具有较好的稳定性和免疫活性。当131I 4.8 MBq/100μL、CD133mAb 4.8μg/100μL时对CD133+-Huh-7细胞抑制率最高(P<0.05),取此放射性浓度进行实验。24、48、72 h时各组对CD133+-Huh-7细胞的抑制作用明显高于Huh-7和HepG2细胞组,131I-CD133mAb组对3种细胞生长抑制率明显高于其余各组,抑制率随时间的增加而升高(P<0.01)。131I-CD133mAb作用CD133+-Huh-7细胞72 h后凋亡率为31.21%,明显高于其余2组(P<0.05)。细胞周期检测结果显示CD133+-Huh-7细胞G0/G1期减少54.77%,明显高于其余2组(P<0.05)。结论 CD133+细胞具有肿瘤干细胞特性,131I-CD133mAb能特异性结合CD133+-Huh-7细胞,调控细胞周期和诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 CD133 肝癌干细胞 ^131I 单克隆抗体
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ERK1和E-cadherin在胃腺癌中的表达及其临床病理意义 被引量:4
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作者 陆国玉 吴晓飞 +2 位作者 周蕾 王丹娜 武世伍 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期72-77,共6页
目的探讨原发性胃腺癌(gastric adenocarcinoma,GAC)组织中ERK1和E-cadherin蛋白的表达情况及其临床病理意义。方法应用免疫组织化学ElivisionTM plus法检测261例GAC组织和100例正常胃黏膜组织中ERK1和E-cadherin蛋白的表达。结果在正... 目的探讨原发性胃腺癌(gastric adenocarcinoma,GAC)组织中ERK1和E-cadherin蛋白的表达情况及其临床病理意义。方法应用免疫组织化学ElivisionTM plus法检测261例GAC组织和100例正常胃黏膜组织中ERK1和E-cadherin蛋白的表达。结果在正常胃黏膜组织中,ERK1和E-cadherin蛋白的阳性表达率分别为26.0%和100%;在GAC组中,ERK1和E-cadherin蛋白的阳性表达率分别为49.8%和41.4%,两组之间,差异有统计学意义(P<0.05)。ERK1和Ecadherin蛋白的阳性表达水平在肿瘤组织的不同分化程度、淋巴结转移与否、浸润深度及临床分期等之间差异有统计学意义(全部P<0.05);ERK1蛋白的阳性表达率与E-cadherin蛋白的阳性表达率呈负相关关系(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,ERK1蛋白表达阳性的患者其生存时间显著低于其阴性表达患者(P<0.001);E-cadherin蛋白表达阳性的患者其生存时间显著高于其阴性表达患者(P<0.001)。多因素Cox回归分析:ERK1、E-cadherin蛋白的表达水平以及TNM分期是影响GAC患者术后生存率的独立预后因素。结论 ERK1和E-cadherin蛋白的表达水平与GAC患者肿瘤组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期及预后等均有关;在GAC组织中联合检测ERK1和E-cadherin对判断GAC患者淋巴结转移及预后均有重要意义。 展开更多
关键词 胃肿瘤 ERK1 E-CADHERIN 预后 免疫组织化学
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BMP-2在成年大鼠脑内SVZa-RMS-OB通路中的表达 被引量:3
7
作者 刘建军 姚忠祥 +2 位作者 陈兴书 蔡文琴 杨辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第16期1656-1658,共3页
目的明确BMP-2在成年大鼠脑内,SVZa、RMS、OB3个不同区域内的表达模式。方法用RT-PCR和免疫荧光染色的方法观察成年大鼠SVZa、RMS、OB3个区域BMP-2的表达情况。结果RT-PCR检测在成年大鼠脑内SVZa、RMS、OB3个区域BMP-2的mRNA均有不同程... 目的明确BMP-2在成年大鼠脑内,SVZa、RMS、OB3个不同区域内的表达模式。方法用RT-PCR和免疫荧光染色的方法观察成年大鼠SVZa、RMS、OB3个区域BMP-2的表达情况。结果RT-PCR检测在成年大鼠脑内SVZa、RMS、OB3个区域BMP-2的mRNA均有不同程度的表达,其中OB区表达最高;免疫组化显示BMP-2蛋白在OB区表达也最高,但在SVZa区表达次之,RMS区表达最低。结论确立BMP-2在成年大鼠SVZa、RMS、OB3个区域的表达模式,提示BMP-2可能对成年SVZa神经干细胞的增殖和定向分化起到一定的调节作用。 展开更多
关键词 骨形成蛋白2 嘴侧迁移流 表达
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miR-494通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胰岛β细胞增殖、抑制其凋亡增加胰岛素分泌 被引量:2
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作者 宋姗姗 杨洋 +1 位作者 何静 唐俊峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1003-1009,共7页
目的 探究微小RNA-494 (miR-494)与胰岛β细胞功能和妊娠糖尿病之间的关系。方法 选择20例妊娠糖尿病患者和健康体检者,反转录PCR测定其外周血miR-494的含量;培养INS-1胰岛细胞瘤细胞,分别采用含低糖(3.3 mmol/L)和高糖(16.7 mmol/L)处... 目的 探究微小RNA-494 (miR-494)与胰岛β细胞功能和妊娠糖尿病之间的关系。方法 选择20例妊娠糖尿病患者和健康体检者,反转录PCR测定其外周血miR-494的含量;培养INS-1胰岛细胞瘤细胞,分别采用含低糖(3.3 mmol/L)和高糖(16.7 mmol/L)处理后,采用ELISA测定胰岛素含量来评价胰岛细胞基础和高糖刺激的胰岛素分泌能力;采用miR-494模拟物对照、miR-494模拟物、miR-494抑制物对照、miR-494抑制物分别处理INS-1细胞24、48、72 h,收集细胞。采用噻唑蓝(MTT)法检测INS-1细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡;反转录PCR检测INS-1细胞Wnt3a、β联蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和c-Myc的mRNA表达;Western blot法检测细胞Wnt3a、β-catenin、cyclin D1、c-Myc蛋白表达。结果 与正常对照组相比,妊娠糖尿病患者空腹胰岛素、空腹血糖、1 h血糖和2 h血糖显著升高;外周血miR-494含量降低。过表达miR-494的INS-1细胞上清液胰岛素浓度增加,当给予高糖后,过表达miR-494进一步促进胰岛素分泌。过表达miR-494明显促进INS-1细胞活性,抑制INS-1细胞凋亡;miR-494能够显著性促进Wnt3a、β-catenin、cyclin D1、c-Myc的mRNA和蛋白表达,miR-494抑制物处理则结果相反。结论 miR-494通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进胰岛β细胞增殖、抑制其凋亡增加胰岛素分泌。 展开更多
关键词 妊娠糖尿病 WNT β联蛋白(β-catenin) 微小RNA-494(miR-494) 胰岛Β细胞
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人TLR9真核表达载体在HEK293T细胞中的表达 被引量:1
9
作者 丁国富 吴翀 +3 位作者 蒋为薇 李军 罗平 周红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第13期1246-1248,共3页
目的构建人Toll样受体9(TLR9)全长序列与绿色荧光蛋白GFP的重组质粒,观察融合蛋白在HEK293T细胞内表达并检测其应答CpG DNA的能力。方法PCR法扩增TLR9全长,限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切绿色荧光真核表达质粒pcDNA3/GFP和TLR9全长,... 目的构建人Toll样受体9(TLR9)全长序列与绿色荧光蛋白GFP的重组质粒,观察融合蛋白在HEK293T细胞内表达并检测其应答CpG DNA的能力。方法PCR法扩增TLR9全长,限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切绿色荧光真核表达质粒pcDNA3/GFP和TLR9全长,构建重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP,脂质体转染人胚肾293T细胞(HEK293T),荧光显微镜下观察绿色荧光融合蛋白在细胞内的表达与分布;将重组质粒与NF-κB荧光素酶报告质粒pGL2-luc共转染HEK293T细胞,CpG DNA(10mg/L)刺激后,化学发光法检测细胞内荧光素酶活性。结果成功构建pcDNA3-TLR9/GFP质粒,经酶切及测序分析证实载体构建正确;转染细胞后,在荧光显微镜下观察到TLR9/GFP融合蛋白大量表达;重组质粒与pGL2-luc共转染细胞,应用荧光报告系统检测显示,CpG DNA刺激后荧光素酶活性显著高于生理盐水对照组(P<0.01)。结论重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP在HEK293T细胞中表达的TLR9/GFP绿色荧光融合蛋白,能够识别CpG DNA并诱导增加胞内NF-κB转录活性。 展开更多
关键词 TOLL样受体9 克隆 真核表达 核转录因子-ΚB 荧光素酶
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3T3-fGFP细胞摄取神经干细胞胞外泌囊泡的途径 被引量:2
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作者 陈曦 赵从健 阴正勤 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1193-1199,共7页
目的以超速离心方案提取胞外囊泡的鉴定为基础,初步探求小鼠神经干细胞C17.2胞外囊泡与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-fGFP细胞之间的通讯交流通路。方法分别用超速离心法获得胞外囊泡(EV)和Total Exosome Isolation Kit试剂盒获得外泌体(EX... 目的以超速离心方案提取胞外囊泡的鉴定为基础,初步探求小鼠神经干细胞C17.2胞外囊泡与小鼠胚胎成纤维细胞3T3-fGFP细胞之间的通讯交流通路。方法分别用超速离心法获得胞外囊泡(EV)和Total Exosome Isolation Kit试剂盒获得外泌体(EXO);用透射电镜和原子力显微镜分别对两种样品进行形态学比较;用SDS-PAGE和Western blot分别对两种样品进行生物化学比较;用染料标记超速离心法获得胞外囊泡;将标记的胞外囊泡与3T3-fGFP细胞共孵育,对3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡进行研究;通过药理实验筛选3T3-fGFP细胞摄取胞外囊泡的主要通路。结果 C17.2细胞生长良好,形态规则未出现明显分化现象。在透射电镜下两种样品均观察到圆形双层膜结构和"杯状"外形的囊泡,直径分布多集中在300 nm以内,并且发现胞外囊泡的平均直径大于外泌体。原子力显微镜的结果显示,两种样品的高度分布多集中在2~20 nm以内,直径分布多集中在300 nm以内,并且外泌体的平均高度和平均直径均大于胞外囊泡。SDS-PAGE结果显示两种样品所含蛋白种类、表达丰度接近。在相同上样量下HSP70的表达强度两者接近,但CD63、CD9和CD81 3种蛋白在胞外囊泡中表达更强。摄取实验表明C17.2细胞胞外囊泡可以被3T3-fGFP细胞内化,被包裹在囊泡内,转运到细胞核周围的区域,并且摄取数量随着时间延长而增加(P〈0.05)。通过药理实验确定网格蛋白(Clathrin)介导的内吞通路为3T3-f GFP细胞摄取C17.2细胞胞外囊泡的主要通路。结论小鼠神经干细胞外泌体可能主要经网格蛋白介导的通路参与了神经干细胞与3T3-fGFP细胞的通讯。 展开更多
关键词 小鼠神经干细胞 胞外囊泡 3T3-fGFP细胞 网格蛋白介导通路
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17β-雌二醇通过上调CXCR4表达促进骨髓间充质干细胞的趋化迁移 被引量:4
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作者 孙欣慰 杨铧琦 徐惠成 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期664-668,共5页
目的研究17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)对体外骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)趋化因子受体CXCR4表达的影响及CXCR4表达变化对BMSCs趋化迁移的调控情况。方法全骨髓法+贴壁法分离、培养BMSCs,不同浓度(10-1... 目的研究17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)对体外骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)趋化因子受体CXCR4表达的影响及CXCR4表达变化对BMSCs趋化迁移的调控情况。方法全骨髓法+贴壁法分离、培养BMSCs,不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7、5×10-7、10-6mol/L)的17β-雌二醇诱导经雌激素受体拮抗剂ICI182780处理和未经处理的BMSCs后于不同时相点(24、48 h),用RT-PCR法和Western blot法分别检测细胞趋化因子受体CXCR4的表达情况,利用Transwell小室体外迁移体系观察10-7mol/L 17β-雌二醇诱导前后的BMSCs对于不同浓度基质细胞衍生因子SDF-1的定向迁移情况,及采用AMD3100阻断SDF-1特异性受体CXCR4后对雌激素诱导前后BMSCs定向迁移的影响。结果 BMSCs在不同浓度17β-雌二醇诱导24、48 h后,其CXCR4 mRNA的表达均有不同程度的升高,其中以24 h时10-7mol/L组升高最为明显(P<0.05)。CXCR4蛋白表达在24 h各浓度组以升高为主,24 h时5×10-7mol/L组升高最为明显,48 h各浓度组以降低为主。雌激素受体拮抗剂ICI 182780能够明显抑制17β-雌二醇对CXCR4表达的影响(P<0.05)。BMSCs对SDF-1的定向迁移有明显的浓度依赖性,且相同条件下17β-雌二醇诱导后的BMSCs迁移细胞数显著高于未经诱导的BMSCs,而CXCR4阻断剂AMD3100可明显抑制17β-雌二醇干预前后BMSCs的趋化迁移(P<0.05)。结论 17β-雌二醇在一定的诱导时间内可提高BMSCs CXCR4的表达,进而增强SDF-1对BMSCs的体外趋化作用。 展开更多
关键词 雌激素 骨髓间充质干细胞 SDF-1 CXCR4[迁移
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CpG-c41分子对TLR7-MyD88依赖型信号通路的交叉干扰作用 被引量:1
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作者 陈铭 卫国 +2 位作者 祝元锋 沈伟 李彦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期927-930,共4页
目的探讨TLR9强力拮抗剂CpG-c41分子对TLR7-MyD88依赖型信号通路的交叉干扰作用。方法体外实验采用ELISA法检测CpG-c41对TLR7激动剂ssRNA83刺激RAW264.7细胞24 h诱发的炎症介质TNF-α和IL-6表达的影响,Western blot检测CpG-c41对TLR7-My... 目的探讨TLR9强力拮抗剂CpG-c41分子对TLR7-MyD88依赖型信号通路的交叉干扰作用。方法体外实验采用ELISA法检测CpG-c41对TLR7激动剂ssRNA83刺激RAW264.7细胞24 h诱发的炎症介质TNF-α和IL-6表达的影响,Western blot检测CpG-c41对TLR7-MyD88依赖型信号通路中IκBα蛋白表达的影响;体内实验采用ELISA法检测CpG-c41对ssRNA83攻击BALB/c小鼠2 h诱发血清中TNF-α和IL-6表达的影响作用。结果体内、体外实验均表明,CpG-c41分子能够显著抑制经ssRNA83刺激诱发TLR7-MyD88依赖型信号通路介导的炎症介质TNF-α和IL-6的释放(P<0.01),体外实验表明抑制作用具有量效关系;而Western blot检测显示在CpG-c41作用下,TLR7-MyD88依赖型信号通路中IκBα的降解受干扰。结论 TLR9强力拮抗剂CpG-c41分子通过干扰TLR7-MyD88依赖型信号通路中IκBα的磷酸化降解,抑制炎症介质的释放,发挥对ssRNA攻击小鼠的免疫保护作用。 展开更多
关键词 CpG—c41 ssRNA83 TLR7-MyD88依赖型信号通路 交叉干扰
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肌肉活检组织中NADH-TR染色与免疫组化双重染色技术 被引量:1
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作者 王丛阳 林莉 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1377-1378,共2页
对肌肉活检标本进行还原型辅酶Ⅰ四氮唑还原酶(NADH—tetrazolium reductase,NADH—TR)染色可区分不同的肌纤维结构,是神经肌纤维病变诊断的重要指标之一,免疫组化染色有利于观察肌纤维不同部位蛋白变化而进一步确定病变性质。在... 对肌肉活检标本进行还原型辅酶Ⅰ四氮唑还原酶(NADH—tetrazolium reductase,NADH—TR)染色可区分不同的肌纤维结构,是神经肌纤维病变诊断的重要指标之一,免疫组化染色有利于观察肌纤维不同部位蛋白变化而进一步确定病变性质。在同一张切片上进行NADH—TR染色与免疫组化双重染色,可同时显示不同染色成分,为病理诊断提供更丰富的形态学依据。现将方法介绍如下。 展开更多
关键词 肌肉活检 NADH—TR染色 免疫组织化学 双重染色
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逆转录PCR(RT-PCR)实验操作要点 被引量:3
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作者 孙晓东 王珺 +2 位作者 龚坚 王燕 桑明 《现代医药卫生》 2009年第13期2049-2049,共1页
RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。以RNA为模板,首先在依赖于RNA的DNA聚合酶的催化作用下体外合成cDNA的第一条链。以此条cDNA链为模板,又可继续进行PCR。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于... RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。以RNA为模板,首先在依赖于RNA的DNA聚合酶的催化作用下体外合成cDNA的第一条链。以此条cDNA链为模板,又可继续进行PCR。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA.要得到理想的结果.关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。而确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染,关键是要做好实验前的准备,注意实验操作的一些细节。 展开更多
关键词 RT-PCR技术 实验操作 RNA病毒 逆转录 CDNA序列 基因表达水平 基因组DNA DNA聚合酶
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适于组织学实验教学的疏松结缔组织铺片:瑞氏-吉姆萨染色法
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作者 熊慧慧 刘星卓 林初文 《中国组织化学与细胞化学杂志》 2025年第3期273-276,共4页
目的 建立一种可应用在医学本科组织学实验教学中的简易快速、显示效果好的疏松结缔组织铺片染色方法。方法 采用成年小鼠作为实验对象,一部分小鼠腹腔注射1%的台盼蓝溶液,连续注射3 d;另一部分小鼠不注射台盼蓝。在第4 d天,将小鼠麻醉... 目的 建立一种可应用在医学本科组织学实验教学中的简易快速、显示效果好的疏松结缔组织铺片染色方法。方法 采用成年小鼠作为实验对象,一部分小鼠腹腔注射1%的台盼蓝溶液,连续注射3 d;另一部分小鼠不注射台盼蓝。在第4 d天,将小鼠麻醉后取其腹部皮下疏松结缔组织进行铺片,分别进行美兰染色和瑞氏-吉姆萨染色。结果 注射台盼蓝溶液并采用瑞氏-吉姆萨染色的铺片的染色效果最好,其肥大细胞呈紫黑色;成纤维细胞核呈紫色,胞质呈淡蓝色;巨噬细胞轮廓清晰,胞质中可见较多大小不一的蓝色台盼蓝吞噬颗粒;胶原纤维呈淡粉色,弹性纤维呈紫色,二者交织分布。铺片中肥大细胞呈紫黑色;成纤维细胞核紫色,胞浆淡蓝色;巨噬细胞轮廓清晰,胞浆中可见较多的大小不一的蓝色台盼蓝吞噬颗粒;胶原纤维呈淡粉色,弹性纤维呈紫色,二者交织分布。相比之下,未注射台盼蓝溶液仅采用美兰染色的条件下,染色效果相对较差。结论 与传统的未注射台盼蓝的美兰染色法相比,注射台盼蓝后采用瑞氏-吉姆萨染色法操作简单快速,适合学生在实验课上动手操作。同时,该方法染色效果较好,疏松结缔组织中的三种细胞成分染色鲜艳且易于辨认,两种纤维成分显示清晰,有助于学生加深对疏松结缔组织形态的认识,从而提升实验课的授课质量。 展开更多
关键词 疏松结缔组织铺片 瑞氏-吉姆萨染色 组织学实验教学
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1,25-二羟维生素D_3对体外人晶状体上皮细胞增殖的影响
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作者 宁宏 李春苗 李丹 《国际眼科杂志》 CAS 2009年第11期2072-2074,共3页
目的:研究1,25二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3,简称D3]对体外培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,hLEC)增殖的影响。方法:人晶状体上皮细胞系SRA01/04常规培养,取对数期细胞接种于96孔培养板,将含有细胞和培养液不含D3的... 目的:研究1,25二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3,简称D3]对体外培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,hLEC)增殖的影响。方法:人晶状体上皮细胞系SRA01/04常规培养,取对数期细胞接种于96孔培养板,将含有细胞和培养液不含D3的空白对照组,只含有培养液不含有细胞及D3的调零组,含有无水乙醇(10-4mol/L)、细胞和培养液的阴性对照组,含有不同浓度(10-10,10-9,10-8,10-7mol/L)的D3组,分别处理24,48,72h后,采用MTT法检测各组细胞在490nm波峰处吸光度A值,计算细胞生长抑制率;FCM检测10-7mol/LD3处理细胞48h后细胞周期的改变。结果:24和48h10-8和10-7mol/LD3组A值均较对照组下降(P<0.01),72h各处理组和对照组差异无统计学意义。10-7mol/LD348h后,G1和S期细胞数占总细胞数百分比分别为(65.3±2.4)%和(30.0±1.4)%,与对照组[(57.4±1.5)%和(39.0+1.4)%]相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:1,25-(OH)2D3在10-7和10-8mol/L对细胞增殖具有抑制作用,使hLEC部分阻滞于细胞周期的G1期。 展开更多
关键词 1 25-二羟维生素D_3 人晶状体上皮细胞 细胞增殖抑制 细胞周期阻滞
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冠状动脉粥样硬化性心脏病患者单核细胞CX3CR1表达的研究
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作者 彭丹丹 李志梁 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期546-548,共3页
目的观察CX3CR1在不同类型冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者外周血单核细胞中的表达。方法选择经冠状动脉造影后确诊为冠心病的患者,其中54例稳定型心绞痛病例及61例急性冠脉综合征的病例作为研究对象;以冠状动脉造影正常的20... 目的观察CX3CR1在不同类型冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者外周血单核细胞中的表达。方法选择经冠状动脉造影后确诊为冠心病的患者,其中54例稳定型心绞痛病例及61例急性冠脉综合征的病例作为研究对象;以冠状动脉造影正常的20例患者作为正常对照组,24例冠状动脉造影正常但有胸前区疼痛的病例作为阳性对照。利用流式细胞仪直接免疫荧光法检测不同类型患者外周血单核细胞上CX3CR1的表达;同时采用Gensini评分系统对冠心病患者冠状动脉病变程度进行定量评分,并分析CX3CR1与Gensini积分间的关系。结果冠心病患者CX3CR1表达水平高于正常对照组[正常对照组为(0.46±0.27)%、稳定性心绞痛组为(12.59±6.05)、急性冠脉综合征组为(38·77±13.22),P<0·01],急性冠脉综合征患者CX3CR1表达明显高于稳定型心绞痛患者,差异有统计学意义(P<0·01);且冠心病患者CX3CR1表达水平与Gensini积分呈显著正相关(r=0·913,P<0·01)。结论冠心病患者CX3CR1表达水平明显升高,并且其增加程度与冠脉的狭窄程度有相关性。 展开更多
关键词 冠心病 CX3CR1 表达 动脉粥样硬化 冠状动脉病变
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NT-3基因修饰施万细胞促进培养的神经干细胞分化为神经元样细胞
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作者 郭家松 曾园山 +3 位作者 李海标 黄文林 刘然义 丁英 《解剖学研究》 CAS 2003年第2期159-159,共1页
关键词 NT-3基因修饰 施万细胞 神经干细胞 分化 神经元样细胞 培养的细胞
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改良May-Grnwald染色法在血涂片染色中的应用
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作者 赵文华 陈河 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期43-44,共2页
关键词 May-Grünwald染色法 血涂片 微波辐射 压片法
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转染重组bcl-2基因缓解RA介导NTCD的电镜观察
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作者 孙榆 李泽桂 蔡文琴 《四川解剖学杂志》 2001年第2期116-117,共2页
关键词 转染 介导 NTCD bcl-2 神经管缺陷 神经管畸形 RA 基因
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