年轻大鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体逆转老龄大鼠骨髓间充质干细胞衰老 被引量：1

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作者 张熊劲夫 陈奕达 +2 位作者 程歆怡 刘岱珲 施勤 《中国组织工程研究》 北大核心 2025年第36期7709-7718,共10页

背景:骨髓间充质干细胞是骨形成的主要效应细胞,随着年龄的增加,骨髓间充质干细胞的再生能力减弱、分化功能受损,导致骨质疏松。因此,恢复老龄骨髓间充质干细胞的再生能力和细胞功能对骨质疏松的有效治疗至关重要。目的:探究年轻大鼠第3... 背景:骨髓间充质干细胞是骨形成的主要效应细胞,随着年龄的增加,骨髓间充质干细胞的再生能力减弱、分化功能受损,导致骨质疏松。因此,恢复老龄骨髓间充质干细胞的再生能力和细胞功能对骨质疏松的有效治疗至关重要。目的:探究年轻大鼠第3,11代骨髓间充质干细胞来源外泌体对老年大鼠骨髓间充质干细胞衰老的影响。方法:分离培养6-8周龄雌性SD大鼠骨髓间充质干细胞,分别传代至第3代和第11代,随后提取第3,11代骨髓间充质干细胞来源外泌体。分离培养18月龄雌性SD大鼠骨髓间充质干细胞,传代至第3代,分为3组:对照组为常规培养,其他2组用第3,11代骨髓间充质干细胞来源外泌体干预。外泌体干预48 h后,利用β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞核内β-半乳糖苷酶的表达,qRT-PCR检测衰老相关基因的表达。通过Small RNA测序,比较第3,11代骨髓间充质干细胞来源外泌体内miRNA的表达差异。结果与结论:(1)与对照组和第11代骨髓间充质干细胞来源外泌体组相比,第3代骨髓间充质干细胞来源外泌体组老龄大鼠骨髓间充质干细胞的β-半乳糖苷酶活性显著降低;(2)与对照组相比,第3代骨髓间充质干细胞来源外泌体组衰老相关基因p21和p16的表达显著降低(P<0.05),而第11代骨髓间充质干细胞来源外泌体组衰老相关基因p21和p16的表达无显著差异;(3)测序结果表明,两种外泌体内miRNA的表达存在显著差异,其中表达差异最显著的miRNA是let-7c-5p、let-7b-5p 、miR-320-3p和miR-26a-5p,KEGG分析结果显示显著性差异miRNA富集通路包含mTOR、AMPK等衰老相关信号通路。上述结果表明,第3代骨髓间充质干细胞来源外泌体具有逆转老龄大鼠骨髓间充质干细胞衰老的能力。 展开更多

关键词 骨质疏松 外泌体 骨髓间充质干细胞 miRNA 衰老 工程化细胞外囊泡

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新疆阿魏根提取物对白细胞介素-22诱导的角质形成细胞异常增殖的作用研究 被引量：2

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作者 孙士芳 詹明峰 +1 位作者 沈晓峰 于均峰 《中国医药导报》 CAS 2023年第14期15-19,共5页

目的探讨阿魏根不同提取物对白细胞介素-22(IL-22)诱导的HaCaT细胞异常增殖的影响,为评估阿魏根提取物对银屑病HaCaT细胞作用的机制研究提供依据。方法实验分组:空白对照组,IL-22实验组,阿魏酸低、中、高剂量组(0.5、1、2 mmol/L),倍半... 目的探讨阿魏根不同提取物对白细胞介素-22(IL-22)诱导的HaCaT细胞异常增殖的影响,为评估阿魏根提取物对银屑病HaCaT细胞作用的机制研究提供依据。方法实验分组:空白对照组,IL-22实验组,阿魏酸低、中、高剂量组(0.5、1、2 mmol/L),倍半萜类化合物低、中、高剂量组(5、10、15 mg/ml),除空白对照组外其余各组采用100 ng/ml的IL-22干预24 h后,分别加入100μl不同浓度受试物继续培养24 h,观察细胞形态。CCK8法检测各组细胞增殖。流式细胞术检测各组细胞周期。酶联免疫吸附试验法检测培养体系细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-23、IL-4的含量。结果细胞形态学显示阿魏酸对HaCaT细胞的生长状态无明显影响,而倍半萜类化合物能抑制细胞的过度增殖。阿魏酸各剂量组细胞增殖率与IL-22实验组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。而倍半萜化合物各剂量组细胞增殖率与IL-22实验组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。阿魏酸各剂量组细胞周期与IL-22组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。倍半萜类化合物不同剂量组G0/G1期、S期、G2/M期百分比与IL-22实验组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-22实验组各细胞因子水平与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。阿魏酸及倍半萜类化合物各剂量组TNF-α含量低于IL-22实验组,差异有统计学意义(P<0.05),阿魏酸各剂量组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),倍半萜化合物高剂量组TNF-α含量低于倍半萜化合物低剂量组(P<0.05);阿魏酸及倍半萜类化合物各剂量组IFN-γ含量与IL-22实验组比较,差异有统计学意义(P<0.05),阿魏酸及倍半萜类化合物高剂量组IFN-γ含量低于中剂量组、低剂量组,中剂量组IFN-γ含量低于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);倍半萜类化合物各剂量组IL-23的含量与IL-22实验组比较,差异有统计学意义(P<0.05),倍半萜类化合物高剂量组IL-23含量低于倍半萜类化合物中剂量组、低剂量组;各处理组组间IL-4含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论倍半萜类化合物可以抑制IL-22诱导的HaCaT细胞过度增殖,调节细胞周期和分化,阿魏酸对HaCaT细胞过度增殖无明显作用。 展开更多

关键词 银屑病 新疆阿魏 细胞增殖 倍半萜类化合物

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过表达IDO骨髓间充质干细胞分泌外泌体改善移植心脏存活 被引量：1

3

作者 贺继刚 韩金秀 +2 位作者 撒亚莲 严丹 李贝贝 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第9期1383-1387,共5页

目的探讨过表达吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过分泌外泌体(exosome)改善大鼠腹腔异位移植心脏存活机制。方法构建过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞,而后提取分泌的exosome。同时建立大鼠腹腔异位移植心脏模型,经... 目的探讨过表达吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)通过分泌外泌体(exosome)改善大鼠腹腔异位移植心脏存活机制。方法构建过表达IDO大鼠骨髓间充质干细胞,而后提取分泌的exosome。同时建立大鼠腹腔异位移植心脏模型,经尾静脉给予相应细胞分泌的exosome后检测如下指标:移植心脏心功能变化;移植心脏局部荧光强度;受体大鼠脾脏细胞表面CD40、CD86、CD80、主要组织相容性抗原-Ⅱ(MHCⅡ)、CD274(PDL-1)、CD45RA、CD45RA+CD45RB表达及Treg细胞数量。并采用苏木精-伊红(HE)染色评估移植心脏局部炎性细胞浸润情况。结果 (1)大鼠异位心脏移植模型建立后,给予相应细胞分泌exosome,过表达IDO-BMSCs-exosome组移植心脏的射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)较其余各组有提高;(2)过表达IDO-BMSCs-exosome组移植心脏局部Dir荧光最强;(3)采用流式细胞技术证实过表达IDO-BMSCs-exosome组受体脾细胞CD86、CD40、CD80、主要组织相容性抗原-Ⅱ(MHCⅡ)、CD45RA+CD45RB、CD45RA、OX62表达量下降,而CD274(PDL-1)表达增高同时Treg细胞数量较其他组增多;(4)HE染色证实过表达IDO-BMSCs-exosome组移植心脏局部有较少炎性细胞浸润。结论大鼠BMSCs分泌的exosome可以有效调节DC细胞表面抗原分子表达、促进Treg细胞增生,从而在多个免疫层面改善心脏移植排斥。 展开更多

关键词 吲哚胺2 3双加氧酶 大鼠 骨髓间充质干细胞 外泌体 免疫抑制

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二甲双胍通过抑制内质网应激诱导的细胞凋亡改善结肠炎黏膜上皮屏障损伤 被引量：3

4

作者 王金钢 陈春晓 +2 位作者 任于晗 周辛欣 俞珊 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期627-632,共6页

目的:探讨二甲双胍对溃疡性结肠炎黏膜上皮屏障损伤的作用及具体机制。方法:用人结肠癌细胞系Caco-2与人单核细胞系THP-1构建结肠炎体外细胞共培养模型,用1 mmol/L二甲双胍作用24 h后,运用流式细胞术检测肠上皮细胞凋亡情况,采用蛋白质... 目的:探讨二甲双胍对溃疡性结肠炎黏膜上皮屏障损伤的作用及具体机制。方法:用人结肠癌细胞系Caco-2与人单核细胞系THP-1构建结肠炎体外细胞共培养模型,用1 mmol/L二甲双胍作用24 h后,运用流式细胞术检测肠上皮细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白和内质网应激相关蛋白的表达水平。结果:与模型对照组比较,二甲双胍组细胞凋亡率从(14.22±2.34)%下降至(9.88±0.61)%(t=3.119,P<0.05),紧密连接蛋白1和密封蛋白1相对表达量增加(t=5.172和3.546,均P<0.05),内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白(GRP)78和内质网应激诱导的凋亡相关分子C/EBP同源蛋白(CHOP)、胱天蛋白酶(caspase)-12的蛋白表达水平下降(均P<0.05),蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和真核生物起始因子2α(eIF2α)的磷酸化水平下降(均P<0.05)。结论:二甲双胍可以通过减轻结肠炎肠上皮细胞的细胞凋亡和增加紧密连接蛋白的表达改善结肠炎肠黏膜上皮屏障损伤,其分子机制可能与抑制内质网应激诱导的细胞凋亡途径有关。 展开更多

关键词 结肠炎 溃疡性 二甲双胍 内质网应激 细胞凋亡 细胞共培养 紧密连接蛋白

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退变髓核细胞修复及组织工程应用研究进展 被引量：2

5

作者 陈中 郑阳 +2 位作者 张信成 仇湘中 许辉 《医学综述》 CAS 2022年第7期1267-1271,共5页

髓核细胞退变的病理机制十分复杂,完整的退变过程目前尚未明确。髓核细胞退变保守治疗或手术治疗均具有一定局限性。近年来,生物分子技术和组织工程技术的发展为修复退变髓核细胞提供了新的思路和方法。干预Notch信号通路、调节细胞内... 髓核细胞退变的病理机制十分复杂,完整的退变过程目前尚未明确。髓核细胞退变保守治疗或手术治疗均具有一定局限性。近年来,生物分子技术和组织工程技术的发展为修复退变髓核细胞提供了新的思路和方法。干预Notch信号通路、调节细胞内的生长因子或抑制因子的表达对修复早期退变髓核细胞均具有积极作用,而细胞移植技术和生物复合材料的兴起也为严重的退行性病变提供了新的选择。因此,未来深入研究生物分子技术和组织工程材料治疗椎间盘退变的可行性具有重要意义。 展开更多

关键词 髓核细胞 组织工程 细胞移植 生物分子技术 生物复合材料

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低氧诱导型VEGF真核表达载体的构建及其体外递送的应用与功能鉴定 被引量：2

6

作者 林彦霞 白睿 +4 位作者 刘志强 杨锡琴 金至赓 田鹏 刘惠亮 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期98-106,共9页

目的构建低氧诱导型的血管内皮生长因子(VEGF)真核表达载体,建立体外递送方法并对其效能进行鉴定。方法应用基因重组技术,在真核表达载体pGL4.73[hRluc/SV40](pSV)启动子上游插入促红细胞生成素(EPO)增强子,构建低氧诱导型表达载体(pEPO... 目的构建低氧诱导型的血管内皮生长因子(VEGF)真核表达载体,建立体外递送方法并对其效能进行鉴定。方法应用基因重组技术,在真核表达载体pGL4.73[hRluc/SV40](pSV)启动子上游插入促红细胞生成素(EPO)增强子,构建低氧诱导型表达载体(pEPO-SV),以海肾荧光素酶(Rluc)为下游报告基因;随后以VEGF165基因取代Rluc插入到pEPO-SV质粒,同时将其插入到pSV质粒作为对照,分别获得pEPO-SV-VEGF和pSV-VEGF表达载体;在体外分别将表达Rluc或VEGF165的质粒转染人胚肾293T细胞,在正常和低氧条件下处理24h和48h后,通过Rluc或VEGF165的表达对所构建载体的低氧诱导功能进行鉴定;然后基于聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米颗粒建立质粒的细胞内递送方法,并在体外细胞缺氧模型中对上述低氧诱导型真核表达质粒的效能进行鉴定。结果在质粒构建中,分别通过酶切、PCR扩增和DNA测序证实了EPO增强子和VEGF165基因的成功插入与正确性。表达Rluc或VEGF165的质粒分别转染293T细胞后,正常培养条件下报告基因Rluc(其一质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为2448.24±158.51和3173.97±379.92,其二质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为55 500.00±3237.05和51 193.18±866.32)及目的基因VEGF165表达差异无统计学意义(P>0.05),而在低氧情况下Rluc(氯化钴低氧下,质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为4857.70±1223.28和16 432.64±1618.73;低氧培养箱中,质粒pSV和pEPO-SV荧光表达值分别为2504.45±213.20和17 274.35±685.60)及VEGF165表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),表明所构建的pEPO-SV和pEPO-SVVEGF质粒具有典型的低氧诱导表达活性。利用PLGA纳米颗粒在体外293T细胞中进行pEPO-SV与pSV递送后,在正常培养条件下与低氧条件下报告基因Rluc的表达变化与上述一致,即正常培养条件下,处理24h与48h后pSV、pEPO-SV质粒的荧光表达值分别为149.44±4.01、127.09±15.05与1074.91±114.78、1064.56±137.48;低氧条件下,处理24h和48h后pSV、pEPO-SV质粒的荧光表达值分别为3265.34±440.00、8828.87±637.03与3202.06±33.43、9114.75±292.06。结论成功建立了典型的低氧诱导型VEGF真核表达系统,并建立了有效的体外递送方法;这一低氧诱导型表达载体及递送方法在缺血、缺氧等组织损伤疾病中可能具有重要的应用前景。 展开更多

关键词 VEGF165基因 真核表达 DNA重组技术 PLGA纳米粒

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人羊膜间充质干细胞原代培养及向心肌样细胞分化 被引量：1

7

作者 杨曲 张卫芳 +3 位作者 陈祺 胡锋 李娟 罗军 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期513-519,共7页

目的探讨原代人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)体外分离培养的方法及向心肌样细胞分化的能力。方法收集人正常足月顺产或剖宫产后胎盘羊膜,采用机械-酶消化法分离培养hAMSCs,观察其形态学特点。取第3... 目的探讨原代人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)体外分离培养的方法及向心肌样细胞分化的能力。方法收集人正常足月顺产或剖宫产后胎盘羊膜,采用机械-酶消化法分离培养hAMSCs,观察其形态学特点。取第3代hAMSCs,通过诱导成骨、成脂分化和流式细胞术检测鉴定其干细胞特性,体内接种法和体外软琼脂克隆法检测其致瘤性。应用5-aza、TGF-β1及Ang-Ⅱ诱导其向心肌样细胞分化(实验组),镜下观察细胞形态学变化;qRT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光法分别检测心肌细胞标志基因cTnI、ACTN2、NKX2.5及其蛋白的表达;CCK-8实验检测细胞活性;淋巴细胞增殖实验检测细胞免疫原性。结果分离纯化后的hAMSCs呈梭形,漩涡状生长,可成功诱导向成骨、成脂分化;流式细胞术结果显示hAMSCs高表达CD44、CD90,低表达CD45,不表达HLA-DR;体内外实验未显示致瘤性。诱导hAMSCs向心肌样细胞分化后,细胞呈棒状或长梭形,胞间见细丝样连接结构,与对照组相比,实验组中cTnI、ACTN2、NKX2.5基因及其蛋白水平明显升高,且保持良好的细胞活性及低免疫原性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论hAMSCs可在体外分离培养且能够被诱导向心肌样细胞分化,为心肌疾病的再生修复治疗提供了新的种子细胞。 展开更多

关键词 羊膜间充质干细胞 原代培养 诱导分化 心肌样细胞

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不同浓度富血小板血浆促进骨髓间充质干细胞增殖及向软骨细胞分化的实验研究 被引量：9

8

作者 林春博 姚军 +4 位作者 农桔安 方徳鹏 吴立蔚 杨渊 余雪 《广西医科大学学报》 CAS 2020年第12期2147-2152,共6页

目的:观察不同浓度富血小板血浆(PRP)对兔骨髓间充质干细胞体外增殖及向软骨细胞分化的影响。方法:将兔骨髓间充质干细胞培养在水凝胶三维环境内,并按培养液的不同分为4组:空白对照组采用DMEM培养液培养,加入不含血小板的血浆;5%PRP组... 目的:观察不同浓度富血小板血浆(PRP)对兔骨髓间充质干细胞体外增殖及向软骨细胞分化的影响。方法:将兔骨髓间充质干细胞培养在水凝胶三维环境内,并按培养液的不同分为4组:空白对照组采用DMEM培养液培养,加入不含血小板的血浆;5%PRP组采用含5%PRP的DMEM培养液培养;10%PRP组采用含10%PRP的DMEM培养液培养;20%PRP组采用含20%PRP的DMEM培养液培养。MTT法检测骨髓间充质干细胞的增殖情况,苏木精-伊红(HE)染色实验及Ⅱ型胶原免疫组化染色分析骨髓间充质干细胞向软骨分化情况。结果:空白对照组细胞增殖呈递增趋势,而含富血小板的3组从培养的第3天开始快速增殖,第6天进入增殖平台期。于第3天到第7天,3组含PRP组细胞数多于空白对照组,其中10%PRP组细胞数最多(均P<0.05)。3组含PRP组均能观察到典型的软骨细胞形态,软骨细胞呈椭圆形或卵圆形,成熟的软骨细胞分布于软骨陷窝内,3组PRP组的软骨样细胞数量均多于空白对照组(均P<0.001),20%PRP组的软骨样细胞数量多于5%PRP组(P<0.001),10%PRP组软骨细胞数量多于5%PRP组和20%PRP组(均P<0.001),空白对照组呈阴性表达,含PRP的3组Ⅱ型胶原均呈阳性表达,3组PRP组阳性面积占比均大于空白对照组(均P<0.001),10%PRP组阳性面积占比大于5%及20%PRP组(P<0.001)。结论:PRP对骨髓间充质干细胞体外增殖有促进作用,并能诱导向软骨细胞分化,浓度为10%PRP组作用较明显。 展开更多

关键词 富血小板血浆 骨髓间充质干细胞 软骨分化 HE染色 Ⅱ型胶原

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OGR1籍ERK信号通路参与酸性微环境致气道上皮细胞黏蛋白5AC表达 被引量：1

9

作者 周万 周向东 +1 位作者 尤列.皮尔曼 维克多.科罗索夫 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期122-126,共5页

目的探讨气道酸性微环境诱导气道上皮细胞黏蛋白5AC表达的上游信号通路调节机制。方法体外培养人气道上皮细胞(16HBE),以氯化氢创造细胞酸性环境(pH 6.4),以细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂PD88059及卵巢癌G蛋白耦联受体1(OGR1)si... 目的探讨气道酸性微环境诱导气道上皮细胞黏蛋白5AC表达的上游信号通路调节机制。方法体外培养人气道上皮细胞(16HBE),以氯化氢创造细胞酸性环境(pH 6.4),以细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂PD88059及卵巢癌G蛋白耦联受体1(OGR1)siRNA进行干预,将细胞随机分为8组:对照组、酸刺激组、酸刺激+转染OGR1 siRNA组、pH 7.4+OGR1siRNA组、酸刺激+阴性siRNA组、pH 7.4+阴性siRNA组、酸刺激+PD98059组、pH 7.4+PD98059组。采用RT-PCR、ELISA法分别观察细胞黏蛋白(MUC)5AC转录水平及培养上清液中MUC5AC蛋白水平的改变;Western blot法检测OGR1蛋白及p-ERK蛋白的相对含量。结果酸刺激组内细胞MUC5AC转录及蛋白水平显著高于对照组(P值均<0.05),其OGR1及p-ERK蛋白含量较对照组亦明显增加,酸刺激+转染OGR1 siRNA组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平显著低于酸刺激组(P值均<0.05),其p-ERK含量亦明显降低。而pH 7.4+OGR1 siRNA组MUC5AC蛋白含量及mRNA水平较pH7.4对照组无明显差别,其p-ERK含量也变化不大。酸刺激+PD98059组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平显著低于酸刺激组(P值均<0.05),而pH 7.4+PD98059组较对照组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平无明显差异。结论 OGR1可能通过激活ERK信号通路参与气道酸性微环境所致的人气道黏膜上皮细胞MUC5AC表达。 展开更多

关键词 黏蛋白 酸性环境 卵巢癌G蛋白耦联受体1 细胞外信号调节激酶

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黄芩提取物抑制IL⁃22诱导的人角质形成细胞系HaCaT过度增殖 被引量：5

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作者 曾颖 付桂莉 《基础医学与临床》 2023年第1期123-129,共7页

目的探究黄芩提取物通过miR-369-3p对白介素-22(IL-22)诱导的人角质形成细胞系HaCaT增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法将HaCaT细胞分为对照组、IL-22组(细胞模型,100 ng/mL的IL-22培养细胞)、低、中和高剂量组(黄芩提取物50、100、150μ... 目的探究黄芩提取物通过miR-369-3p对白介素-22(IL-22)诱导的人角质形成细胞系HaCaT增殖、凋亡和炎性反应的影响。方法将HaCaT细胞分为对照组、IL-22组(细胞模型,100 ng/mL的IL-22培养细胞)、低、中和高剂量组(黄芩提取物50、100、150μg/mL)、anti-miR-NC干预组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-369-3p干预组(转染anti-miR-369-3p)、miR-NC+高剂量组(转染miR-NC,高剂量黄芩提取物培养细胞)、miR-369-3p+高剂量组(转染miR-369-3p,高剂量黄芩提取物培养细胞)。MTT法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;Western blot检测cleaved caspase-3蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6含量;RT-qPCR检测miR-369-3p表达。结果与对照组相比,IL-22组细胞存活率、miR-369-3p表达、TNF-α、IL-6表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达的差异无统计学意义;与IL-22组相比,低、中和高剂量组细胞存活率、miR-369-3p表达、TNF-α、IL-6表达降低,细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。与anti-miR-NC干预组相比,anti-miR-369-3p干预组细胞存活率、TNF-α、IL-6表达降低,细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。过表达miR-369-3p可以部分逆转黄芩提取物对银屑病细胞模型的细胞活性,凋亡以及炎性水平的作用(P<0.05)。结论黄芩提取物可能通过抑制miR-369-3p表达,抑制IL-22诱导的人角质形成细胞过度增殖和炎性反应,并促进其凋亡。 展开更多

关键词 银屑病 黄芩提取物 miR-369-3p IL-22 人角质形成细胞 炎性反应

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外泌体对睾丸微环境调控机制研究及应用进展

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作者 李波男 宁港 +4 位作者 孙天松 吴悔 何清湖 唐乾利 周兴 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第12期2328-2341,共14页

外泌体(exsomes)是一类具有生物活性的双层脂质组成的小囊泡,可携带不同类型的信息物质与受体细胞结合,通过信息传递与物质交换,促发受体细胞的表型发生变化。本文总结了在睾丸微环境中,外泌体通过调节细胞因子促进睾丸微环境中细胞增... 外泌体(exsomes)是一类具有生物活性的双层脂质组成的小囊泡,可携带不同类型的信息物质与受体细胞结合,通过信息传递与物质交换,促发受体细胞的表型发生变化。本文总结了在睾丸微环境中,外泌体通过调节细胞因子促进睾丸微环境中细胞增殖、调节细胞免疫维持睾丸免疫环境、调节氧化应激修复受体细胞功能、调节细胞自噬改善生精能力、调节细胞凋亡改善精子发生、调节细胞因子影响睾酮分泌等机制维持睾丸微环境稳态,并对外泌体在男科相关疾病预防、诊断、治疗中的作用进行归纳,外泌体在男性不育、勃起功能障碍、精索静脉曲张、性腺功能减退、前列腺癌等疾病诊疗中具备明显优势。外泌体作为一种新兴的应用物质,随着外泌体工程和提取工艺的不断优化,以及相关机制研究的不断深入,外泌体在男科疾病中的临床运用成为可能,有望成为治疗男科疾病的新手段。 展开更多

关键词 外泌体 睾丸微环境 调控机制 氧化应激 自噬 凋亡 男科疾病

原文传递

三种不同来源卵巢颗粒细胞外泌体的提取及鉴定

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作者 高婷 马小红 李晓荣 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第6期860-865,共6页

背景:卵巢颗粒细胞作为卵泡内主要的功能细胞,通过复杂的缝隙连接与卵母细胞进行细胞间的信息物质交流,调控着卵母细胞的生长与成熟;随着外泌体研究的深入,发现其积极参与了细胞间的通讯,并携带多种遗传物质,可通过自分泌或旁分泌方式... 背景:卵巢颗粒细胞作为卵泡内主要的功能细胞,通过复杂的缝隙连接与卵母细胞进行细胞间的信息物质交流,调控着卵母细胞的生长与成熟;随着外泌体研究的深入,发现其积极参与了细胞间的通讯,并携带多种遗传物质,可通过自分泌或旁分泌方式被细胞吸收,调节细胞增殖,参与疾病生理病理过程。由此可见,卵巢颗粒细胞的外泌体分泌能力及提取鉴定对于研究女性生殖具有重要的意义。目的:探讨人卵巢颗粒细胞分泌外泌体的能力及不同来源人卵巢颗粒细胞外泌体之间的差异。方法:体外培养SVOG细胞(人卵巢颗粒细胞系)、KGN细胞(人卵巢颗粒细胞瘤细胞)、人原代卵巢颗粒细胞;采用超高速离心法分别从3种不同来源卵巢颗粒细胞上清中分离提取外泌体,通过透射电子显微镜、纳米跟踪技术、蛋白质印迹法分别鉴定其形态结构、粒径大小、阳性相关特异性蛋白CD63、TSG101及阴性标记蛋白Calnexin的表达。结果与结论:①SVOG细胞、KGN细胞、人原代卵巢颗粒细胞的细胞核均为圆形或椭圆形,核大,核仁部分蓝染,细胞浆呈淡红色;SVOG细胞、KGN细胞呈长梭形或多边形,形态不规则,人原代卵巢颗粒细胞多呈突起或梭形,细胞伪足细长,相互紧密交织;②3种不同来源人卵巢颗粒细胞免疫荧光均阳性表达FSHR,且阳性表达率>95%;③3种不同细胞上清液分离的外泌体均呈双层膜结构杯托样;④纳米跟踪分析SVOG细胞、KGN细胞、人原代卵巢颗粒细胞来源外泌体的平均粒径分别为(183.5±4.9),(125.3±1.0),(171.1±2.0)nm,其中人原代卵巢颗粒细胞来源外泌体的分泌水平最高,KGN细胞来源外泌体的粒径最小,SVOG细胞来源外泌体大小较接近人原代卵巢颗粒细胞来源外泌体;⑤蛋白质印迹法检测显示3种不同来源卵巢颗粒细胞来源外泌体特异性相关蛋白CD63、TSG101均呈阳性表达,而Calnexin不表达;⑥结果表明,采用超高速离心法能够成功分离提取不同卵巢颗粒细胞来源外泌体,KGN细胞来源外泌体粒径最小,SVOG细胞及人原代卵巢颗粒细胞来源外泌体粒径较接近,以人原代卵巢颗粒细胞来源外泌体的分泌水平最高。 展开更多

关键词 颗粒细胞 外泌体 透射电镜 纳米粒子示踪分析 蛋白质印迹法

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血清外泌体对高糖作用后HUVECs细胞增殖、迁移及管腔形成能力的影响 被引量：3

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作者 刘慧竹 黄群 +5 位作者 闫美玉 吉懿 许小朋 刘奇良 王明亮 谢赟 《山东医药》 CAS 2020年第11期25-28,共4页

目的观察正常大鼠血清外泌体对高糖作用后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移及管腔形成能力的影响。方法从正常SD大鼠血清中提取外泌体,并经电子显微镜及Western blotting法证实。将HUVECs分为外泌体组、高糖组和对照组,外泌体组、高... 目的观察正常大鼠血清外泌体对高糖作用后人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移及管腔形成能力的影响。方法从正常SD大鼠血清中提取外泌体,并经电子显微镜及Western blotting法证实。将HUVECs分为外泌体组、高糖组和对照组,外泌体组、高糖组加入40 mmol/L葡萄糖,对照组加入7 mmol/L葡萄糖;同时外泌体组分别加入10、40、160μg/mL大鼠血清外泌体,高糖组和对照组不加入外泌体。各组分别于培养0、12、24、36 h,采用CCK-8法检测细胞增殖的光密度(OD)值;培养24 h,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率;培养8 h,采用管腔形成实验测量成管长度和成管分支点数。结果与对照组比较,高糖组作用12、24、36 h的OD值及细胞迁移率、成管长度、成管分支点数均降低(P均<0.05)。与高糖组比较,加入10μg/mL外泌体的外泌体组作用12、24、36 h的OD值及细胞迁移率、成管长度、成管分支点数均无明显变化(P均>0.05),加入40、160μg/mL外泌体的外泌体组上述指标均升高,且加入160μg/mL外泌体的外泌体组升高更明显(P均<0.05)。结论高糖会引起HUVECs细胞增殖、迁移及管腔形成能力下降,高浓度的正常大鼠血清外泌体可逆转上述变化,对HUVECs具有保护作用。 展开更多

关键词 血清外泌体 人脐静脉内皮细胞 高糖 细胞增殖 管腔形成

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复氧前给予不同浓度乳化异氟醚的大鼠缺氧/复氧心肌细胞损伤情况观察 被引量：2

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作者 王佳琪 徐鹏 +3 位作者 陈伟 李晓娟 王海英 喻田 《山东医药》 CAS 2020年第9期36-39,共4页

目的观察复氧前给予不同浓度乳化异氟醚(EI)的大鼠缺氧/复氧心肌细胞损伤情况。方法手术分离雄性SD大鼠心肌细胞并培养,将心肌细胞随机分为FAT组和不同浓度EI处理组(EI1组、EI2组、EI3组),采用混合气体培养法制备缺氧/复氧心肌细胞,其中... 目的观察复氧前给予不同浓度乳化异氟醚(EI)的大鼠缺氧/复氧心肌细胞损伤情况。方法手术分离雄性SD大鼠心肌细胞并培养,将心肌细胞随机分为FAT组和不同浓度EI处理组(EI1组、EI2组、EI3组),采用混合气体培养法制备缺氧/复氧心肌细胞,其中FAT组复氧前加入脂肪乳(FAT)进行处理,EI1组、EI2组、EI3组复氧前分别加入0.84、1.68、2.52 mmol/L EI进行处理。收集各组心肌细胞,进行细胞线粒体损伤评分(Flameng评分),测定细胞内游离Ca2+荧光强度,观察细胞内NF-E2相关因子2(Nrf2)蛋白核转位荧光强度,采用RT-PCR法和Western blotting法分别检测各组细胞中Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、醌氧化还原酶1(NQO1)mRNA和蛋白。结果不同浓度EI处理组细胞线粒体Flameng评分和细胞内游离Ca2+荧光强度均低于FAT组,且EI2组最低。EI1组、EI2组、EI3组、FAT组细胞内Nrf2蛋白核转位荧光强度分别为152.71±13.36、181.95±10.59、156.39±11.20、135.25±19.73,其中EI2组细胞内Nrf2核转位荧光强度与EI1组、EI3组、FAT组相比,P均<0.05。不同浓度EI处理组Nrf2、HO-1、SOD1、NQO1 mRNA和蛋白相对表达量均高于FAT组,且EI2组最高。结论复氧前给予不同浓度EI处理对大鼠缺氧/复氧心肌细胞均可起到保护作用,1.68 mmol/L的EI保护作用最优;EI可能是通过激活Nrf2/ARE通路发挥保护作用。 展开更多

关键词 乳化异氟醚 心肌细胞 缺氧/复氧损伤 NF-E2相关因子2/抗氧化反应原件通路 心肌保护

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风湿性心脏病大鼠血清对内皮细胞间充质转化的影响

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作者 梁远盈 吴思毅 曾志羽 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第4期611-617,共7页

目的:探讨风湿性心脏病(RHD)大鼠的血清对内皮细胞发生内皮间充质转化(EndMT)的影响。方法:先使用重组人转化生长因子-β1(TGF-β1)干预人原代脐静脉内皮细胞(HUVECs)以观察其发生EndMT的情况,分为空白组和TGF-β1组;再使用大鼠血清和T... 目的:探讨风湿性心脏病(RHD)大鼠的血清对内皮细胞发生内皮间充质转化(EndMT)的影响。方法:先使用重组人转化生长因子-β1(TGF-β1)干预人原代脐静脉内皮细胞(HUVECs)以观察其发生EndMT的情况,分为空白组和TGF-β1组;再使用大鼠血清和TGF-βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)抑制剂SB431542干预HUVECs,分为control组、RHD组和RHD+SB431542组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(western blotting)实验检测内皮细胞标志分子血管内皮细胞钙粘连蛋白(VE-cadherin)和间质细胞标志分子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平以观察细胞发生EndMT的情况。结果:与control组比较,RHD组的细胞增殖、迁移能力显著升高(P<0.05),且VE-cadherin蛋白的表达量降低,而α-SMA蛋白的表达量升高(P<0.05),表明发生了EndMT;而与RHD组比较,RHD+SB431542组的细胞增殖、迁移能力显著降低(P<0.05),且VE-cadherin蛋白的表达量升高,而α-SMA蛋白的表达量降低(P<0.05),表明EndMT被显著抑制。结论:RHD大鼠的血清高表达TGF-β1,可以诱导HUVECs发生EndMT,且能被SB431542抑制,表明在RHD大鼠血清促进内皮细胞间充质转化过程中,TGF-β1发挥着重要作用。 展开更多

关键词 TGF-Β1 内皮间充质转化 风湿性心脏病

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绿原酸促进成骨前体细胞成骨分化的作用 被引量：3

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作者 朱灿 何家恒 +4 位作者 陈迟迟 刘波 罗宗平 孙杰 施勤 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第14期2170-2175,共6页

背景:绿原酸是干李子中含量最丰富的多酚类物质,作为一种食源性药物有望用于骨质疏松治疗之中。目的:探究绿原酸对成骨前体细胞成骨分化的影响及其机制,并在骨质疏松小鼠模型中进行相关验证。方法:(1)体外实验:以含不同质量浓度(0,0.1,1... 背景:绿原酸是干李子中含量最丰富的多酚类物质,作为一种食源性药物有望用于骨质疏松治疗之中。目的:探究绿原酸对成骨前体细胞成骨分化的影响及其机制,并在骨质疏松小鼠模型中进行相关验证。方法:(1)体外实验:以含不同质量浓度(0,0.1,1,10,100 mg/L)绿原酸的培养基培养MC3T3-E1细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖。采用含0,10,20 mg/L绿原酸的成骨诱导培养基培养MC3T3-E1细胞,进行碱性磷酸酶染色、茜素红染色、成骨基因表达与BMP-2/RUNX2/SMAD4信号通路蛋白检测。(2)体内实验:将32只雌性C57BL/6小鼠随机分成4组,假手术组、去卵巢组及低、高剂量绿原酸组,每组8只,低、高剂量绿原酸组去卵巢后腹腔注射25,50 mg/(kg·d)的绿原酸,连续给药8周。给药8周后,进行骨组织Micro-CT扫描与组织形态学观察。结果与结论:(1)体外实验:当绿原酸质量浓度≤10 mg/L时,对MC3T3-E1细胞的增殖无明显影响。碱性磷酸酶染色与茜素红染色显示,随着绿原酸质量浓度的增加,MC3T3-E1细胞的碱性磷酸酶活性、钙沉积和钙结节生成能力提高,成骨相关基因碱性磷酸酶、骨桥蛋白、骨钙素、骨形态发生蛋白2、RUNX2、SMAD4表达升高,骨形态发生蛋白2、RUNX2、SMAD4蛋白表达升高。(2)体内实验:Micro-CT扫描显示,去卵巢组小鼠骨密度、骨体积分数、骨小梁厚度及数量均低于假手术组(P <0.05),骨小梁分离度高于假手术组(P <0.05);经过不同质量浓度绿原酸干预后,去卵巢小鼠的上述指标均有所改善,其中高剂量绿原酸组改善效果有显著性意义(P <0.05)。苏木精-伊红染色显示,去卵巢组小鼠骨量少于假手术组,经过绿原酸干预后骨量增加。(3)绿原酸可能通过BMP-2/RUNX2/SMAD4信号通路促进成骨分化,预防去卵巢小鼠的骨丢失。 展开更多

关键词 绿原酸 成骨基因 成骨分化 细胞增殖 成骨诱导 成骨矿化 信号通路 骨丢失

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黄芪注射液对肠道病毒71型感染引起的细胞凋亡及自噬的抑制作用

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作者 郝晋芳 孙晨曦 +2 位作者 杜建平 韩倩 张晓延 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期53-58,69,共7页

目的探讨黄芪注射液(astragalus membranaceus,AM)对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染诱导的人胃上皮细胞(GES-1)凋亡及自噬的影响。方法体外培养GES-1细胞,将细胞分为感染组(按MOI=3感染EV71)和对照组(未感染病毒),倒置显微镜观... 目的探讨黄芪注射液(astragalus membranaceus,AM)对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染诱导的人胃上皮细胞(GES-1)凋亡及自噬的影响。方法体外培养GES-1细胞,将细胞分为感染组(按MOI=3感染EV71)和对照组(未感染病毒),倒置显微镜观察EV71感染后细胞形态变化;Western blot检测EV71感染后GES-1细胞中病毒结构蛋白VP1的水平;CCK-8法检测EV71感染后GES-1细胞活力;用DAPI进行细胞核染色,观察EV71感染的细胞核凋亡形态变化。再将GES-1细胞分为对照组(未感染病毒)、感染组及终浓度分别为1、2.5、5和10μg/mL的AM干预组,Western blot检测AM干预对EV71感染的GES-1细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP及自噬相关蛋白LC3、P62表达的影响;CCK-8法检测AM干预对EV71感染的GES-1细胞活力的影响。结果EV71感染引起了GES-1细胞变圆、皱缩,细胞核固缩,大小不均,细胞中VP1水平明显增高(t=41.56,P<0.01),细胞活力明显降低(t=19.07,P<0.01),细胞中Caspase-3和PARP蛋白均发生了明显的剪切(t分别为35.29和3.648,P分别为<0.01和0.0218),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例显著增加(t=10.16,P=0.0005),P62蛋白发生了降解(t=68.68,P<0.01);AM干预后,抑制了EV71引起的Caspase-3、PARP、P62蛋白的降解(t分别为52.66、59.60和40.22,P均<0.01)及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例增加(t=5.521,P=0.0053),并减轻了EV71对GES-1细胞活力的抑制作用(t=4.420,P=0.0115)。结论EV71感染诱导了GES-1细胞凋亡,AM干预通过抑制EV71引起的细胞自噬来抑制EV71诱导的细胞凋亡。 展开更多

关键词 肠道病毒71型 黄芪注射液 GES-1细胞 细胞凋亡 细胞自噬

原文传递

MEK1/2抑制剂PD98059对ox-LDL诱导HUVEC损伤的保护机制及对LOX-1表达影响 被引量：1

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作者 孙珊 胡红玲 +6 位作者 段晓宇 吴钦钦 贺映侠 卜晓芬 明小燕 严凤琴 朱虹 《重庆医学》 CAS 2018年第13期1727-1730,共4页

目的探讨MEK1/2抑制剂PD98059对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护机制及对低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响。方法使用ox-LDL诱导HUVEC损伤模型并进行PD98059处理,分阴性对照组、ox-LDL组、阳性对... 目的探讨MEK1/2抑制剂PD98059对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护机制及对低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达的影响。方法使用ox-LDL诱导HUVEC损伤模型并进行PD98059处理,分阴性对照组、ox-LDL组、阳性对照组和PD98059+OX-LDL组;检测抑制MEK1/2对ox-LDL诱导HUVEC损伤的影响。结果与阴性对照组比较,ox-LDL组LOX-1、pMEK1/2、RhoA、ROCK1、ROCK2、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的释放增多,细胞增殖能力及培养液中一氧化氮(NO)水平降低(P<0.05);与ox-LDL组比较,阳性对照组和PD98059+ox-LDL组LOX-1、pMEK1/2、RhoA、ROCK1、ROCK2、TNF-α和IL-6的释放减少,细胞增殖能力及NO水平增高(P<0.05)。结论 PD98059抑制MEK1/2信号通路可降低HUVEC中LOX-1的表达以减轻ox-LDL诱导的内皮细胞损伤。 展开更多

关键词 脂蛋白类 LDL 受体 LDL PD98059 MEK1/2 RhoA/ROCK

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