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转录组学联合代谢组学分析挖掘佛手黄酮类物质生物合成途径关键基因
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作者 潘媛 谭均 陈大霞 《中草药》 北大核心 2025年第14期5179-5189,共11页
目的基于转录组和代谢组联合挖掘佛手Citrus medica中关键黄酮类物质生物合成关键基因,为进一步探究佛手中黄酮类物质的合成调控机制提供基础。方法采用Illumina HiSeqTM 4000高通量测序平台对佛手不同发育时期的果实组织进行转录组测序... 目的基于转录组和代谢组联合挖掘佛手Citrus medica中关键黄酮类物质生物合成关键基因,为进一步探究佛手中黄酮类物质的合成调控机制提供基础。方法采用Illumina HiSeqTM 4000高通量测序平台对佛手不同发育时期的果实组织进行转录组测序,借助LC-MS/MS技术,对其黄酮类物质进行表征,通过KEGG数据库和关联分析,充分挖掘佛手黄酮类物质生物合成关键基因。结果通过代谢组学和转录组学分析共获得21个差异黄酮类物质和25个差异表达基因,均存在明显差异。佛手黄酮类物质生物合成途径中,香橙素-7-O-葡萄糖苷、圣草次苷、柚皮苷、芸香柚皮苷、橙皮素-3-O-葡萄糖苷等随果实的发育逐渐降低,芹菜素-5-O-葡萄糖苷、木犀草素-4-O-葡萄糖苷等物质随果实的发育逐渐升高;在佛手黄酮类物质代谢途径中,成功鉴定到苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase,PAL)、4-香豆酸辅酶a连接酶(4-comarate coenzyme a ligase,4CL)、查耳酮合成酶(chalcone synthase,CHS)、查耳酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)、黄酮3-羟化酶(flavonol-3-dehydrogenase,F3H)、黄酮3’-羟化酶(flavonol-3’-dehydrogenase,F3’H)、黄酮合酶(flavone synthase,FNS)、花青素合成酶(anthocyanidin synthase,ANS)、糖基转移酶(UDP-glyotransferases,UGTs)等关键酶基因。关键酶基因PAL、4CL、CHS、F3H、FNS等负向调控下游代谢物,CHI、UGTs等正向调控下游代谢物,均与下游代谢物显著相关。结论揭示了佛手在不同发育阶段黄酮类代谢物和相关基因的差异表达模式,为阐明佛手黄酮类物质生物合成调控机制奠定理论基础。 展开更多
关键词 佛手 转录组 代谢组 黄酮类 关键基因 香橙素-7-O-葡萄糖苷 圣草次苷 柚皮苷 芸香柚皮苷 橙皮素-3-O-葡萄糖苷 芹菜素-5-O-葡萄糖苷 木犀草素-4-O-葡萄糖苷
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基于HPLC指纹图谱及化学模式识别的山慈菇(冰球子)及其潜在代用品的鉴定研究
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作者 张超 高一军 +4 位作者 孙启慧 郭衍珩 刘延娟 容蓉 赵丹彤 《中草药》 北大核心 2025年第12期4419-4426,共8页
目的建立山慈菇Pleiones Pseudobulbus(冰球子)及其潜在代用品的HPLC指纹图谱,并结合化学模式识别寻找山慈菇(冰球子)及其潜在代用品的差异性成分,筛选山慈菇(冰球子)最佳代用品。方法使用乙腈-0.1%磷酸水溶液作流动相进行梯度洗脱,Agil... 目的建立山慈菇Pleiones Pseudobulbus(冰球子)及其潜在代用品的HPLC指纹图谱,并结合化学模式识别寻找山慈菇(冰球子)及其潜在代用品的差异性成分,筛选山慈菇(冰球子)最佳代用品。方法使用乙腈-0.1%磷酸水溶液作流动相进行梯度洗脱,Agilent ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),检测波长224 nm,进样量25μL,柱温为30℃,体积流量为0.8 mL/min,建立40批样品HPLC指纹图谱,结合相似度评价、特征图谱、聚类热图分析、主成分分析(principalcomponent analysis,PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)对特征成分进行数据分析。结果40批样品共有5个共有峰,经对照品比对指认出了5个成分,分别为天麻素、对羟基苯甲醇、dactylorhin A、militarine、山药素III。聚类热图和PCA分析结果可将山慈菇(冰球子)及其潜在代用品进行区分,并结合相似度评价,初步判断带唇兰Tainia dunnii为山慈菇(冰球子)最佳代用品。不同基原样品的HPLC典型特征图谱结合OPLS-DA分析与PCA分析,筛选出山慈菇(冰球子)正品基原与其潜在代用品的主要差异性指标成分为loroglossin、dactylorhin A和militarine。结论建立的指纹图谱结合化学模式识别方法可用于山慈菇(冰球子)及其潜在代用品的区分及山慈菇(冰球子)最佳代用品的筛选。 展开更多
关键词 山慈菇(冰球子) 指纹图谱 相似度 化学模式识别 代用品 天麻素 对羟基苯甲醇 dactylorhin A militarine 山药素Ⅲ
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金银花糖基转移酶基因的原核表达及其编码蛋白纯化
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作者 蔡芷辰 赵君谊 +2 位作者 陈海杰 刘训红 王进 《中草药》 北大核心 2025年第4期1338-1345,共8页
目的以金银花Lonicerae Japonicae Flos中糖基转移酶为研究对象,进行糖基转移酶LjUGT73C1基因的生物信息学分析、基因合成与亚克隆、表达分析和纯化。方法利用前期盐胁迫金银花组学研究构建的金银花转录组数据库注释信息,筛选得到金银... 目的以金银花Lonicerae Japonicae Flos中糖基转移酶为研究对象,进行糖基转移酶LjUGT73C1基因的生物信息学分析、基因合成与亚克隆、表达分析和纯化。方法利用前期盐胁迫金银花组学研究构建的金银花转录组数据库注释信息,筛选得到金银花中关键糖基转移酶LjUGT73C1,进行基因合成和亚克隆;利用基因重组技术构建了原核表达载体Pet-30a-LjUGT73C1,遗传转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态;应用SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting检测蛋白的表达量、检测不同诱导条件下基因的表达情况,最后经亲和色谱进行纯化。结果通过基因合成与亚克隆得到糖基转移酶LjUGT73C1的全长序列,理论编码氨基酸数目为493,等电点(PI)预测为6.27,理论相对分子质量为55530。构建了LjUGT73C1基因的原核表达载体并且在大肠杆菌中诱导表达得到重组蛋白,应用His亲和色谱柱进行蛋白纯化并经SDS-PAGE凝胶电泳检测,确定为金银花LjUGT73C1蛋白。结论首次报道了盐胁迫金银花中糖基转移酶基因LjUGT73C1,并进行表达分析和纯化,为进一步研究金银花中苯丙素的生物合成及表达调控研究奠定了基础。 展开更多
关键词 金银花 LjUGT73C1基因 生物信息分析 原核表达 蛋白纯化
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基于全长转录组的白蜡树WRKY基因家族的鉴定与密码子偏好性分析
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作者 孙晓春 李爽 +3 位作者 刘雅君 蔡兴航 黄文静 李会容 《中草药》 北大核心 2025年第7期2482-2494,共13页
目的对白蜡树Fraxinus chinensis WRKY基因家族进行鉴定、生物信息学和密码子偏好性分析。方法基于白蜡树全长转录组数据,利用生物信息学方法对其WRKY基因家族进行鉴定,并对其理化性质、系统发育、保守基序进行分析;基于白蜡树叶片和枝... 目的对白蜡树Fraxinus chinensis WRKY基因家族进行鉴定、生物信息学和密码子偏好性分析。方法基于白蜡树全长转录组数据,利用生物信息学方法对其WRKY基因家族进行鉴定,并对其理化性质、系统发育、保守基序进行分析;基于白蜡树叶片和枝皮的二代转录组数据,对白蜡树WRKY基因家族的表达模式进行分析,并采用实时荧光定量PCR方法进行验证;利用CodonW、EMBOSS等程序对密码子偏好性进行分析,并进行最优密码子分析、中性绘图、ENC-plot和PR2偏倚分析。结果共鉴定得到49个WRKY转录因子,均为酸性、亲水蛋白,编码氨基酸数目为426~2175,相对分子质量33933.48~179137.94,理论等电点4.91~5.27,不稳定蛋白占比65.31%,预测均定位到细胞核;系统进化表明FcWRKY基因家族成员归为Ⅰ(11个)、Ⅱ(30个)、Ⅲ(7个)大类以及2个特殊成员(FcWRKY23和FcWRKY37),其中第Ⅱ类分为Ⅱa(5个)、Ⅱb(5个)、Ⅱc(8个)、Ⅱd(7个)、Ⅱe(7个)5个亚类;Motif 1和Motif 2存在于所有的WRKY转录因子中,是其保守序列;二代转录组数据筛选到16个WRKY基因在叶片和枝皮中具有显著差异表达,其中仅有FcWRKY11在枝皮中的表达量高于叶片。白蜡树FcWRKYs偏好使用以A/U结尾的密码子,并且偏好性较弱;确定了3个最优密码子,分别是CUU、AGG、和UAU;中性绘图分析和ENC-plot分析均表明自然选择是影响其密码子偏好性的主要因素,PR2偏倚分析结果表明突变压力亦影响其密码子偏好性。结论鉴定了白蜡树WRKY基因,其中8个WRKY基因表达量与转录组学测序结果趋势一致,为研究白蜡树WRKY的基因功能奠定基础。 展开更多
关键词 白蜡树 WRKY转录因子 生物信息学 密码子偏好性分析 全长转录组
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芍药属4种药用植物叶绿体基因组比较及系统发育分析
5
作者 范丙友 陈盈 +4 位作者 郝明扬 高凯 刘改秀 王萌瑶 吴疆 《中草药》 北大核心 2025年第13期4765-4778,共14页
目的研究芍药属4种药用植物叶绿体基因组特征、变异程度及芍药属和毛茛科植物的系统发育关系,为芍药属药用植物的分类地位和系统发育提供参考。方法应用二代高通量测序技术测定芍药Paeonia lactiflora叶绿体基因组,利用比较基因组学方... 目的研究芍药属4种药用植物叶绿体基因组特征、变异程度及芍药属和毛茛科植物的系统发育关系,为芍药属药用植物的分类地位和系统发育提供参考。方法应用二代高通量测序技术测定芍药Paeonia lactiflora叶绿体基因组,利用比较基因组学方法分析了芍药与川赤芍P.Veitchii、牡丹P.suffruticosa及杨山牡丹P.ostii等芍药属药用植物叶绿体基因组之间的结构特征及变异程度,以山地虎耳草Saxifraga sinomontana等植物为外类群,分析了芍药属植物与毛茛科植物的系统发育关系。结果芍药属4种药用植物的叶绿体基因组均为典型的四分结构,包含1个大单拷贝区(large single copy,LSC)、1个小单拷贝区(small single copy,SSC)和2个反向重复区(inverted repeats,IRa和IRb)。芍药叶绿体基因组序列长度为152731 bp,GC含量为38.43%,共注释到基因126个,其中82个蛋白质编码基因、36个t RNA基因和8个核糖体rRNA基因。重复序列分析发现芍药叶绿体基因组重复序列数量最多为48个,杨山牡丹最少为39个;只有芍药同时含有4种类型的重复序列。芍药含有最多的SSR序列达52个,4种植物SSR序列中单核苷酸重复占比达81%~86%,绝大多数为A/T重复。密码子偏好性分析表明芍药属4种药用植物中氨基酸出现频率均以亮氨酸最高,半胱氨酸最低;31种密码子具偏好性,且密码子偏好性与密码子第3位碱基具显著相关性。LSC/IRb、IRb/SSC、SSC/IRa和IRa/LSC边界附近的基因类型相同,相对保守,但牡丹组和芍药组之间仍具有差异。选择压力分析结果表明,绝大多数基因Ka/Ks值均小于1,受纯化选择,matK、ndhB和rpoA受到正选择。叶绿体基因组比较分析发现芍药属内4种药用植物的叶绿体基因组中非编码区比基因编码区的变异程度大,筛选出了6个基因间区和2个基因编码区的高变异区。系统发育分析结果显示,芍药与美丽芍药亲缘关系最近,所有芍药属植物被聚为一个分支,外类群把芍药属和毛茛科植物分隔开来,芍药属植物与毛茛科植物亲缘关系较远。结论芍药属4种植物在叶绿体基因组结构特征方面较为保守,但其变异程度存在一定差异;筛选出的8个高变异区可为芍药属药用植物的条形码开发、物种鉴定及药用植物质量控制提供候选片段;系统发育分析表明芍药属植物与外类群植物亲缘关系较近,而与毛茛科植物亲缘关系较远,为芍药属植物系统进化、芍药属药用植物的物种鉴定、质量控制及保护开发等研究奠定基础。 展开更多
关键词 芍药属 药用植物 芍药 川赤芍 牡丹 杨山牡丹 叶绿体基因组 变异 进化 系统发育
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基于SCoT分子标记的黄精属不同种质遗传多样性研究 被引量:2
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作者 朱珏 石雨荷 +5 位作者 侯超文 李晓玲 刘泽湘 龚秀娟 刘湘丹 童巧珍 《中草药》 北大核心 2025年第3期966-974,共9页
目的探讨黄精属Polygonatum Mill.6个产区3个种质的遗传多样性及亲缘关系。方法以34份黄精属种质资源为供试材料,采用正交设计方法,优化黄精属目标起始密码子多态性-PCR(start codon targeted polymorphism-PCR,SCo T-PCR)反应体系并筛... 目的探讨黄精属Polygonatum Mill.6个产区3个种质的遗传多样性及亲缘关系。方法以34份黄精属种质资源为供试材料,采用正交设计方法,优化黄精属目标起始密码子多态性-PCR(start codon targeted polymorphism-PCR,SCo T-PCR)反应体系并筛选引物;并基于筛选出的引物对其进行遗传多样性分析、遗传结构以及遗传分化研究。结果得到黄精属SCo T-PCR最佳反应体系,筛选出15条多态性较好的引物,多态性条带比率为94.45%;在物种水平上,3个种质的平均观测等位基因数(observed number of alleles,N_(a))、平均有效等位基因数(effective number of alleles,N_(e))、平均Nei’s基因多样性指数(Nei’s gene diversity index,H)、平均香农指数(Shannon information index,I)分别为1.6783、1.2686、0.1740、0.2786,揭示群体间存在丰富的遗传多样性;聚类分析结果显示,多花黄精与长梗黄精聚成一类,表明亲缘关系较近;卷叶黄精作为单独分枝,其与另外2个种质的亲缘关系也较远;基因多样度(total genetic diversity,H_(t))、基因分化系数(gene diversity within population,H_(s))、遗传分化系数(coefficient of gene differentiation,G_(st))、基因流(gene flow,N_(m))分别为0.2104、0.1740、0.1733、2.3860,表明群体间存在较高水平的基因交流,AMOVA结果显示84%遗传差异来自于群体内,16%遗传差异来自于群体间;群体结构分析表明,当分析群体数(true number of clusters,K)为3时,34份材料可分为3个类群,且与聚类分析结果基本一致。结论SCoT分子标记可有效用于黄精属不同种质之间的亲缘关系及遗传多样性分析,为黄精属植物种质资源的鉴定保护、开发利用提供科学依据。 展开更多
关键词 黄精属 SCoT标记 遗传多样性 亲缘关系 群体结构
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药用芍药栽培品种的SNP标记开发及品种鉴定 被引量:2
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作者 刘宇辰 张振宇 +3 位作者 尹旻臻 储姗姗 彭华胜 黄璐琦 《中草药》 北大核心 2025年第1期239-247,共9页
目的基于简化基因组,建立一种准确鉴定药用芍药Paeonia lactiflora栽培品种的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分子标记方法。方法利用特异位点扩增片段测序(specific-locus smplified fragment sequencing,SLAFseq... 目的基于简化基因组,建立一种准确鉴定药用芍药Paeonia lactiflora栽培品种的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分子标记方法。方法利用特异位点扩增片段测序(specific-locus smplified fragment sequencing,SLAFseq)技术对浙江、安徽、四川和湖南的13个药用芍药栽培品种进行SNP标记开发。通过多个指标如杂合率、缺失率和多态性来筛选候选标记,并通过遗传多样性、群体结构和主成分分析等方法进一步评估候选标记。最后采用能够区分药用芍药栽培品种的最简SNP组合绘制指纹图谱。结果通过SLAF-seq测序共获得3703329个SLAF标签,其中多态性标签有60749个,共获得412873个群体SNP标记,最后筛选的47个核心SNP标记位点表现出高多态性,可以很好地区分药用芍药栽培品种。结论基于简化基因组,建立了主要药用芍药栽培品种的SNP标记开发和指纹图谱绘制的方法,为药用芍药的品种鉴定和白芍药材的临床应用提供借鉴。 展开更多
关键词 药用芍药 栽培品种 SLAF-seq 单核苷酸多样性 指纹图谱
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宽叶十万错叶绿体基因组比较分析和系统进化关系研究 被引量:1
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作者 赵艳林 陈渊 +6 位作者 沈晓婷 安昌 王振华 黄泽豪 黄鸣清 林彦翔 郑燕芳 《中草药》 北大核心 2025年第5期1731-1746,共16页
目的以药用植物宽叶十万错Asystasia gangetica为研究对象,解析其叶绿体基因组结构特征,探究宽叶十万错在爵床族中的系统发育关系;方法利用Illumina NovaSeq 6000测序平台对宽叶十万错叶绿体基因组进行测序,对其进行组装、注释和特征序... 目的以药用植物宽叶十万错Asystasia gangetica为研究对象,解析其叶绿体基因组结构特征,探究宽叶十万错在爵床族中的系统发育关系;方法利用Illumina NovaSeq 6000测序平台对宽叶十万错叶绿体基因组进行测序,对其进行组装、注释和特征序列分析,并基于34种爵床族物种构建系统发育树。结果宽叶十万错叶绿体基因组为典型的四分体结构,总序列长度为150307 bp,包括一个大单拷贝区(LSC,82332 bp),一个小单拷贝区(SSC,17425 bp)和一对反向重复区(IRs,25275 bp);宽叶十万错叶绿体基因组共注释到光合作用基因、自我复制基因、其他基因和未知功能基因4类共133个基因,包括88个蛋白编码基因,37个tRNA基因和8个rRNA基因;宽叶十万错叶绿体基因组共检测到34个SSR位点,SSR类型以A/T为主,通过REPuter软件共检测到33个长重复序列;IR区边界分析表明,宽叶十万错比其他属物种保守,边界区域变异小;基于8个属8个物种全叶绿体基因组比较分析可知,基因间隔区atpH-atpI、petN-trnD-GUC、rps4-trnT-UGU、trnF-GAA-ndhJ等的变异大于编码区;宽叶十万错密码子偏好性分析表明,甘氨酸是宽叶十万错使用频次最高的氨基酸,以A或U结尾的密码子是宽叶十万错叶绿体基因组的偏好性密码子;ENC、PR2和中性绘图分析表明,自然选择是影响宽叶十万错密码子偏好性的主要原因;选择压力分析表明,有9个基因受到正选择,对宽叶十万错及其近缘属物种适应性进化具有重要作用;系统发育分析表明,宽叶十万错所在的十万错属和钩粉草属形成姊妹类群,亲缘关系最近,并具有较高的支持率,共同归为彩叶木亚族。结论对宽叶十万错叶绿体基因组结构进行了解析,并探讨了爵床族物种系统发育关系,丰富了爵床族药用植物遗传资源,为爵床族的物种分类提供了参考。 展开更多
关键词 宽叶十万错 叶绿体基因组 密码子偏好性 选择压力 序列变异 系统发育
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灰毡毛忍冬CHS1基因克隆及功能分析 被引量:1
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作者 敖志杰 张惊宇 +5 位作者 曾娟 何佳蔚 瞿美玲 童巧珍 周日宝 刘湘丹 《中草药》 北大核心 2025年第17期6334-6345,共12页
目的探究灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides中查耳酮合酶Lm CHS1基因对黄酮类成分合成的作用。方法以灰毡毛忍冬叶的c DNA为模板,利用RT-PCR技术克隆得到了LmCHS1基因开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,并对其基因序列进行生物信... 目的探究灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides中查耳酮合酶Lm CHS1基因对黄酮类成分合成的作用。方法以灰毡毛忍冬叶的c DNA为模板,利用RT-PCR技术克隆得到了LmCHS1基因开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,并对其基因序列进行生物信息学分析。通过农杆菌侵染的方式,构建本氏烟草瞬时转化体系,对Lm CHS1编码蛋白进行亚细胞定位;紫外分光光度法检测烟草叶片及灰毡毛忍冬样品中总黄酮含量;构建原核表达载体,诱导大肠杆菌得到重组蛋白;利用q RTPCR检测Lm CHS1基因在灰毡毛忍冬花、茎和叶中的表达情况。结果克隆得到的基因长度为1182 bp,共编码393个氨基酸,分子式为C1914H3070N514O563S17,理论等电点为6.34,属于亲水蛋白。亚细胞定位结果表明Lm CHS1蛋白主要定位在细胞质,与大部分物种中具催化黄酮前体合成功能的CHS蛋白的亚细胞定位一致。原核表达得到的重组蛋白,大小为43000。总黄酮的含量测定结果显示过表达Lm CHS1烟草叶片总黄酮含量高于空载组,并具统计学差异。联合表达量和总黄酮含量结果分析发现,LmCHS1表达量与总黄酮含量呈正相关。结论Lm CHS1蛋白定位在细胞质中,正向调控黄酮类物质的合成。 展开更多
关键词 灰毡毛忍冬 查耳酮合酶 原核表达 总黄酮 功能分析
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点地梅属10种植物叶绿体基因组密码子偏好性分析 被引量:1
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作者 郭玉朋 史明伟 +2 位作者 马虎 马彦军 姚步青 《中草药》 北大核心 2025年第4期1355-1365,共11页
目的研究点地梅属Androsace L.物种叶绿体基因组蛋白编码基因密码子的偏好性及其影响因素。方法测序了点地梅属1个物种(西藏点地梅)的叶绿体基因组,其他9物种的序列从NCBI下载。根据序列筛选条件,共得到41条共有序列。用CodonW 1.4.2计... 目的研究点地梅属Androsace L.物种叶绿体基因组蛋白编码基因密码子的偏好性及其影响因素。方法测序了点地梅属1个物种(西藏点地梅)的叶绿体基因组,其他9物种的序列从NCBI下载。根据序列筛选条件,共得到41条共有序列。用CodonW 1.4.2计算相关参数,Python整理数据,R做相关性分析并绘图。结果点地梅属各物种密码子第1、2、3位置碱基组成GC含量表现为GC1>GC2>GC3,其中第3位GC含量最小。各位点GC含量相关性为GC1、GC2极显著,而两者与GC3相关性都不显著,说明3个位置GC含量变化机制不同。3个位置GC含量都小于50%,表明密码子倾向于使用A/U碱基,尤其是第3位。从10个物种中共鉴定到13~17个最优密码子。所有基因的有效密码子数(effective number of codons,ENC)均大于35,说明密码子使用整体偏性较弱。中性绘图、ENC-plot及PR2-plot分析显示,造成密码子使用偏性的主要因素是自然选择,但突变压对大部分基因的密码子偏性也有重要影响。系统发育及聚类分析显示密码子偏性在物种间是保守的。结论点地梅属叶绿体基因组蛋白编码基因倾向于使用A/U碱基编码的密码子,自然选择是影响密码子偏好性的主要因素。研究结果能为点地梅属的分子进化、系统发育及叶绿体基因工程提供基础。 展开更多
关键词 点地梅属 密码子偏性 最优密码子 突变压 自然选择
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甘肃引种栽培不同品种金银花的质量评价与代谢组学分析 被引量:1
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作者 张素珍 张亚萍 +5 位作者 魏玉杰 陈耀 宋国士 翟玉生 张芳 杨志刚 《中草药》 北大核心 2025年第6期2135-2147,共13页
目的对甘肃引种栽培的不同品种金银花Lonicerae Japonicae Flos进行品质分析,为金银花品种选育和产业化开发提供新思路。方法采用ITS2条形码序列分析11个不同品种金银花的种间差异;采用HPLC建立金银花特征图谱,并对13个样品的指标成分... 目的对甘肃引种栽培的不同品种金银花Lonicerae Japonicae Flos进行品质分析,为金银花品种选育和产业化开发提供新思路。方法采用ITS2条形码序列分析11个不同品种金银花的种间差异;采用HPLC建立金银花特征图谱,并对13个样品的指标成分进行含量测定;采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS/MS)进行非靶向代谢组学分析。结果通过ITS2序列对比分析发现,金花3号、豫金2号、豫花1号和华金6号不同品种间核苷酸序列位点碱基发生较大突变,其中华金6号有24处碱基差异。根据HPLC特征图谱,指认了特征成分绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸C。不同品种金银花绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C和木犀草苷的含量存在差异,其中北花1号、华金6号、封花1号、金花3号与豫金1号金银花的酚酸类成分及木犀草苷含量均显著高于《中国药典》2020年版的规定。不同品种金银花代谢组学分析共筛选出21个差异代谢物,包括异绿原酸、山柰酚-O-芸香糖苷等。结论北花1号、华金6号、封花1号、金花3号与豫金1号金银花作为重点品种,可结合生产实践进行推广示范研究。系统分析了不同品种金银花中主要有效成分的异同,为金银花品种鉴定、质量控制和生产利用提供了科学依据。 展开更多
关键词 金银花 ITS2 特征图谱 绿原酸 异绿原酸A 异绿原酸C 木犀草苷 差异代谢物
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沉默LjMLO14基因增强忍冬对白粉病的抗性作用研究
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作者 褚洪月 刘振华 +3 位作者 李佳 刘谦 张永清 蒲高斌 《中草药》 北大核心 2025年第11期4029-4035,共7页
目的探索忍冬Lonicera japonica基因(LjMLO14)抗白粉病机制。方法应用病毒诱导的基因沉默技术(virus induced gene silencing,VIGS)抑制忍冬LjMLO14基因的表达,通过接种白粉菌进行抗性鉴定。结果研究发现,在VIGS载体转化忍冬15 d后,LjML... 目的探索忍冬Lonicera japonica基因(LjMLO14)抗白粉病机制。方法应用病毒诱导的基因沉默技术(virus induced gene silencing,VIGS)抑制忍冬LjMLO14基因的表达,通过接种白粉菌进行抗性鉴定。结果研究发现,在VIGS载体转化忍冬15 d后,LjMLO14基因的相对表达量显著下降了80%~90%,沉默效果显著。对基因沉默后的忍冬叶片进行白粉病抗性鉴定,菌丝体的生长较野生型显著减弱,抗性水平较野生型显著提高。结论为初步鉴定LjMLO14基因对忍冬白粉病的调控功能,培育忍冬抗白粉病新品种提供理论依据。 展开更多
关键词 忍冬 基因沉默技术 LjMLO14 白粉病 抗性
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人参GLP基因家族的鉴定及表达分析
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作者 王雪帅 王爱民 +4 位作者 于双 王康宇 赵明珠 王义 张美萍 《中草药》 北大核心 2025年第12期4387-4398,共12页
目的为了解类萌发素蛋白(germin-like protein,GLP)在人参Panax ginseng中的功能,对人参GLP基因(PgGLPs)家族进行了鉴定,明确其在不同类型组织材料的表达模式。方法利用生物信息学分析了PgGLPs的染色体定位、基因结构、保守基序、进化... 目的为了解类萌发素蛋白(germin-like protein,GLP)在人参Panax ginseng中的功能,对人参GLP基因(PgGLPs)家族进行了鉴定,明确其在不同类型组织材料的表达模式。方法利用生物信息学分析了PgGLPs的染色体定位、基因结构、保守基序、进化关系、表达模式和顺式作用元件等。同时基于以上分析结果选取4条PgGLP基因研究其在人参种胚、愈伤组织、实生苗根、叶柄、叶不同组织材料中的表达情况。结果在人参转录组数据库中鉴定得到28条PgGLP转录本,染色体定位结果表明PgGLPs不均匀地分布在人参12条染色体上。系统发育分析将PgGLPs分为3个亚型,分别包含3、10、15个成员,其中亚型Ⅱ中只包含PgGLPs。顺式作用元件预测结果显示,PgGLPs启动子区域存在多种与植物激素、生长发育、逆境胁迫相关响应元件。PgGLP成员在人参不同组织部位中的表达水平差异较大,4条PgGLPs在人参种胚的表达普遍高于其他组织部位,具有组织特异性,其中PgGLP16-01在不同组织部位中的表达量高于其他3条基因。结论鉴别出28个人参PgGLP家族成员,其表达呈现组织特异性,PgGLP基因家族的系统鉴定及表达分析为人参生长发育相关基因家族的研究奠定理论基础,为进一步研究植物类萌发素蛋白提供参考。 展开更多
关键词 人参 类萌发素蛋白 基因家族 生长发育 表达分析
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山豆根StNAC46基因的克隆及功能验证
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作者 梁细妹 秦双双 +4 位作者 韦范 韦桂丽 陈浩 韦树根 梁莹 《中草药》 北大核心 2025年第14期5190-5201,共12页
目的克隆山豆根Sophora tonkinensis St NAC46基因,并对其进行生物信息学、亚细胞定位及功能验证分析,探究St NAC46基因在山豆根中的作用。方法以山豆根总RNA反转录得到的c DNA作为模板,通过PCR技术克隆St NAC46基因。利用生物信息学分... 目的克隆山豆根Sophora tonkinensis St NAC46基因,并对其进行生物信息学、亚细胞定位及功能验证分析,探究St NAC46基因在山豆根中的作用。方法以山豆根总RNA反转录得到的c DNA作为模板,通过PCR技术克隆St NAC46基因。利用生物信息学分析、融合报告基因定位、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)、农杆菌介导的遗传转化以及高效液相色谱电喷雾串联质谱法(ESI-HPLC-MS/MS)等方法,分析St NAC46蛋白的结构特性、启动子序列、亚细胞定位以及转基因功能。结果St NAC46基因全长1083 bp,编码360个氨基酸,其蛋白质相对分子质量为39800,等电点为8.67,属于亲水性蛋白,含有32个丝氨酸磷酸化位点。StNAC46包含1个NAM结构域,与毒羊豆、相思子以及密花豆等多种植物中的NAC(NAM、ATAF1/2、CUC1/2)蛋白显示出较高的同源性。StNAC46基因启动子包含核心元件(CAAT-box和TATA-box)以及响应植物激素—脱落酸(abscisic acid,ABA)、赤霉素(gibberellic acid,GA)和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,Me JA)的特定反应元件。亚细胞定位结果显示,St NAC46蛋白定位于细胞核与细胞质中。酵母单杂交验证发现,St NAC46与St CAO基因启动子区域存在相互作用。与野生型(wide type,WT)相比,St NAC46转基因烟草中苦参碱和氧化苦参碱含量增加。结论山豆根St NAC46基因能够促进植物的生物碱合成,为山豆根的品种选育以及深入解析山豆根生物碱生物合成途径的分子机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 山豆根 StNAC46基因 蛋白特征 表达分析 生物碱
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甲基磺酸乙酯对蒲公英胚性细胞基因表达的影响
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作者 冯薇 孟然 +4 位作者 李赵嘉 吴哲 鲁雪林 陈悦 王秀萍 《中草药》 北大核心 2025年第6期2111-2121,共11页
目的对甲基磺酸乙酯(ethyl methanesulfonate,EMS)诱变下蒲公英Taraxacum mongolicum胚性细胞进行转录组测序,探究EMS诱变对蒲公英基因表达的影响。方法利用Illumina HiSeq 2500高通量测序技术对对照(CK)、0.15%EMS处理8 h后的蒲公英胚... 目的对甲基磺酸乙酯(ethyl methanesulfonate,EMS)诱变下蒲公英Taraxacum mongolicum胚性细胞进行转录组测序,探究EMS诱变对蒲公英基因表达的影响。方法利用Illumina HiSeq 2500高通量测序技术对对照(CK)、0.15%EMS处理8 h后的蒲公英胚性细胞进行测序并建立cDNA数据库,经拼接后得到Unigene,并进一步开展生物信息学分析。结果共获得Unigene 45551条,分别有32954、12923、21752、28115、9764条被非冗余数据库(non-redundant protein sequence database,NR)、基因本体(gene ontology,GO)、Swiss-Prot、eggNOG、京都基因与基因组数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)等数据库注释,GO富集分析发现,蒲公英胚性细胞的DEGs在GO功能注释中主要集中于细胞过程、代谢过程、结合蛋白、氧化还原、催化活性等功能。KEGG途径富集结果表明,EMS诱变下DEGs显著富集在植物激素信号转导、光合作用、光合生物的固碳作用及光合作用-天线蛋白、胡萝卜素合成、不饱和脂肪酸代谢以及淀粉和糖代谢途径。EMS诱变能引起蒲公英胚性细胞植物激素信号转导途径关键酶基因的表达上调,响应胁迫。结论通过转录组测序,初步表明EMS诱变下蒲公英胚性细胞差异基因的表达,并调控蒲公英胚性细胞中植物激素信号转导途径的相关酶基因,以期为从分子基因方面培育优质蒲公英提供参考和依据。 展开更多
关键词 蒲公英 甲基磺酸乙酯 转录组测序 胡萝卜素 植物激素信号转导途径
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连翘低温相关基因FsADH1的克隆、亚细胞定位及表达分析
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作者 邓萍 原梦 +6 位作者 许家齐 李文文 李义龙 张红晓 吕淑芳 胥华伟 侯典云 《中草药》 北大核心 2025年第15期5571-5577,共7页
目的克隆连翘Forsythia suspensa的FsADH1基因,初步探究蛋白定位以及在低温胁迫下该基因的表达模式。方法参考连翘转录组数据,克隆得到FsADH1基因,并通过生物信息学方法对其编码蛋白的理化性质进行分析,利用烟草叶片瞬时转化分析蛋白亚... 目的克隆连翘Forsythia suspensa的FsADH1基因,初步探究蛋白定位以及在低温胁迫下该基因的表达模式。方法参考连翘转录组数据,克隆得到FsADH1基因,并通过生物信息学方法对其编码蛋白的理化性质进行分析,利用烟草叶片瞬时转化分析蛋白亚细胞定位、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析在低温胁迫下的表达模式。结果连翘FsADH1基因长度为1143 bp,编码380个氨基酸,为亲水性蛋白,在连翘幼苗根、茎、叶中均有表达。FsADH1基因编码的蛋白定位在细胞质中,低温胁迫下,连翘幼苗FsADH1基因表达量呈先上升后下降的趋势,第3天达到最高值。结论FsADH1基因受到低温胁迫显著诱导,其可能参与连翘低温胁迫响应调控,为后续研究FsADH1基因功能以及提高连翘抗寒能力的研究提供一定的参考基础。 展开更多
关键词 连翘 FsADH1 生物信息学 亚细胞定位 表达分析
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北柴胡苗期根系发育中植物激素信号通路关键基因研究
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作者 师倩囡 莫传鑫 +8 位作者 魏桢 田林 罗亚东 李玉婵 闫明月 余马 赵军 辛超 陈华 《中草药》 北大核心 2025年第11期4019-4028,共10页
目的发掘植物激素信号通路中与北柴胡Bupleurum chinense侧根发育紧密关联的基因。方法以自组拼接的北柴胡基因组为模板,对北柴胡推广品种川北柴1号苗期根系进行有参考基因组的转录组分析,筛选参与植物激素信号转导的关键基因,利用实时... 目的发掘植物激素信号通路中与北柴胡Bupleurum chinense侧根发育紧密关联的基因。方法以自组拼接的北柴胡基因组为模板,对北柴胡推广品种川北柴1号苗期根系进行有参考基因组的转录组分析,筛选参与植物激素信号转导的关键基因,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术验证关键基因对外源生长素处理的表达应答。结果有参转录组分析得到32259个基因,681个基因在有侧根成熟区(RO)样本中特异表达。加权基因共表达网络分析将基因分为56个模块,2个模块与主根长度和侧根数目显著相关。与侧根形成高度相关的生长素信号转导与运输通路上共发掘到88个差异基因,其中26个基因表达模式高度相关。转录组差异基因表达相关性与外源生长素处理后的基因表达结果联合分析表明,BcIAA13、BcARF19、BcSAUR55和BcSAUR72基因可能是侧根生长发育的关键基因。结论进一步揭示了在RO样本中表达量高的基因可能与侧根发育密切相关,并筛选到转录因子BcARF19与BcIAA13密切相关,其可能调控下游基因的表达,进而影响侧根的生长发育。 展开更多
关键词 北柴胡 转录组 植物激素信号转导 侧根发育 外源生长素
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当归查耳酮异构酶基因家族的鉴定和功能验证
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作者 李朝会 李勒松 +4 位作者 张金金 梁艳丽 杨生超 栗孟飞 赵艳 《中草药》 北大核心 2025年第18期6750-6760,共11页
目的鉴定当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels查耳酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)基因家族成员,对其进行生物信息学分析、筛选候选基因并进行体外酶活实验,为进一步研究当归查耳酮异构酶在黄酮类化合物生物合成中的作用机制提供理论... 目的鉴定当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels查耳酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)基因家族成员,对其进行生物信息学分析、筛选候选基因并进行体外酶活实验,为进一步研究当归查耳酮异构酶在黄酮类化合物生物合成中的作用机制提供理论依据。方法依据当归基因组数据,鉴定AsCHI基因家族成员,进行蛋白理化性质分析、二级结构预测、基因结构、启动子顺式作用元件以及系统进化分析,通过大肠杆菌异源表达和体外酶活验证基因功能,利用反转录实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)分析其表达特征。结果在当归基因组中共鉴定到5个AsCHIs,编码219~321个氨基酸,相对分子质量在24000~36000,理论等电点为4.75~9.11,二级结构以无规则卷曲和α-螺旋为主。启动子分析显示AsCHIs基因含有丰富的光响应元件、激素响应元件及非生物胁迫响应元件;系统进化分析将As CHI1归类为Ⅰ型CHI,AsCHI2为Ⅳ型CHI;AsCHI3~5属于Ⅲ型CHI。体外酶活实验表明AsCHI1能够催化柚皮素查耳酮生成柚皮素;RT-qPCR结果显示AsCHI1和AsCHI2主要在当归的茎和叶中表达。结论鉴定了5个AsCHIs家族成员,成功克隆了AsCHI1和AsCHI2,通过体外酶活实验验证了AsCHI1具有查耳酮异构酶活性。 展开更多
关键词 当归 查耳酮异构酶 黄酮类化合物 RT-QPCR
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粗茎秦艽裂环马钱苷合酶基因克隆与表达分析
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作者 肖鸿扬 冯婧娴 +3 位作者 吴靳荣 李霞 赵志礼 倪梁红 《中草药》 北大核心 2025年第9期3245-3252,共8页
目的 克隆粗茎秦艽Gentiana crassicaulis的裂环马钱苷合酶(secologanin synthase,SLS)基因GcSLS,分析其理化性质、系统进化关系、组织表达特性,为进一步研究植物萜类化合物生物合成通路中的关键酶及其作用机制提供基础资料。方法 依据... 目的 克隆粗茎秦艽Gentiana crassicaulis的裂环马钱苷合酶(secologanin synthase,SLS)基因GcSLS,分析其理化性质、系统进化关系、组织表达特性,为进一步研究植物萜类化合物生物合成通路中的关键酶及其作用机制提供基础资料。方法 依据粗茎秦艽转录组数据,注释、筛选并克隆Gc SLS基因;使用生物信息学工具分析其编码的氨基酸序列、结构域等,预测其编码蛋白的理化性质;使用MEGA11软件分析进化关系,并利用荧光定量PCR检测Gc SLS基因在不同组织中的相对表达水平。结果 从粗茎秦艽中成功克隆获得Gc SLS基因,其开放阅读框(open reading frame,ORF)序列全长共计1 566 bp,编码521个氨基酸,蛋白质相对分子质量为59 590,为碱性亲水稳定蛋白,具有细胞色素P450的保守域并含有1处跨膜结构。荧光定量PCR结果显示,Gc SLS在粗茎秦艽根和花中的表达量显著高于在叶和茎中的表达量;且该基因受茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)诱导后表达水平显著上调。结论 获得粗茎秦艽Gc SLS序列基础信息,分析序列特征及表达模式,可为深入探究Gc SLS在萜类化合物合成通路中的功能提供科学资料。 展开更多
关键词 粗茎秦艽 裂环马钱苷合酶 表达模式 基因克隆 生物信息学分析
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茅苍术细胞分裂素羟化酶基因(AlCYP735A)的克隆与表达分析
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作者 刘越圳 聂小山 +5 位作者 尚进 李婷婷 陈袁袁 王萌 余坤 黄晓 《中草药》 北大核心 2025年第9期3253-3262,共10页
目的 克隆茅苍术Atractylodes lancea细胞分裂素羟化酶基因(AlCYP735A,Gen Bank:PP839072.1),对其进行生物信息学分析、组织特异性表达分析以及构建原核表达载体对该蛋白进行重组表达。方法 从茅苍术c DNA中克隆AlCYP735A序列全长,利用... 目的 克隆茅苍术Atractylodes lancea细胞分裂素羟化酶基因(AlCYP735A,Gen Bank:PP839072.1),对其进行生物信息学分析、组织特异性表达分析以及构建原核表达载体对该蛋白进行重组表达。方法 从茅苍术c DNA中克隆AlCYP735A序列全长,利用生物信息学方法分析其编码蛋白的理化性质,q RT-PCR检测其组织特异性表达情况,连接pET28ambp表达载体转入大肠杆菌BL21进行重组蛋白的表达,并在烟草叶片中对其进行了亚细胞定位。结果 AlCYP735A基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)长度为1 566 bp,编码521个氨基酸;拥有1个P450基因保守域,相对分子质量为59 328.6,等电点为9.13,有信号肽,属于分泌蛋白。q RT-PCR结果表明其根茎中表达量最高,与其他组织器官具有较明显差异。重组蛋白mbp-Al CYP735A获得可溶性表达,大小符合106 700的预期。烟草亚细胞定位显示其定位在叶绿体。结论成功克隆AlCYP735A的基因,完成生物信息学分析、探明组织特异性表达情况和在烟草中的亚细胞定位,重组蛋白在原核表达系统中获得了可溶性表达,为后续该基因的功能验证提供了条件。 展开更多
关键词 茅苍术 AlCYP735A 基因克隆 表达分析 原核表达 生物信息学
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