目的旨在建立一种基于生物传感器联合超高效液相色谱/串联质谱(ultra-performance liquid chromatography with electrospray tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)的中药苦味关键质量属性辨识方法。以白术内酯类成分为研究对象,通过...目的旨在建立一种基于生物传感器联合超高效液相色谱/串联质谱(ultra-performance liquid chromatography with electrospray tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)的中药苦味关键质量属性辨识方法。以白术内酯类成分为研究对象,通过分子对接与生物传感技术揭示其与苦味受体的相互作用机制,实现苦味属性从传统经验判定到分子水平表征的跨越,为完善白术质量控制体系提供支撑。方法采用D101大孔吸附树脂结合紫外分光光度法,制备并筛选富含内酯类成分的白术组分;通过UPLC-MS/MS与分子对接技术,在分子水平解析白术组分与味觉受体的相互作用特征;采用生物传感器与UPLCMS/MS联用技术,实现白术组分苦味关键质量属性的精准辨识。结果成功制得白术不同极性组分11个,其中白术醇提物70%组分的总内酯含量最高,为后续性味研究的理想载体;分子对接实验显示白术组分与Ⅱ型味觉受体家族14号成员(taste receptor type 2 member 14,TAS2R14)的结合展现出明显优势,在分子层面揭示了白术组分具有强烈趋于苦味属性的作用特质;进一步构建苦味生物传感器,对白术组分的苦味属性进行表征,结果显示白术组分与TAS2R14的相互结合强度为49.0ng/L,属于强相互作用,表明以内酯类成分为主的白术组分具有显著的苦味属性,该结果与分子对接结果相互印证,增强了实验结论的可靠性;最后,联合UPLC-MS/MS技术,共辨识得到包括白术内酯Ⅱ在内的苦味关键质量属性13个,在物质基础层面表明白术组分与苦味受体TAS2R14的结合受关键质量属性驱动,为理解白术内酯类成分苦味特性提供直接证据。结论通过多技术融合的系统性研究,从分子相互作用到物质基础层面揭示了白术内酯类成分苦味属性的本质,所发现的苦味关键质量属性为建立基于苦味特征的白术质量控制方法奠定了理论基础,此外,提出的技术路线为中药苦味物质基础研究提供了新的方法学参考。展开更多
目的建立旋覆代赭汤(Xuanfu Daizhe Decoction,XDD)中9种酚酸类成分一测多评(quantitative analysis of multicomponents by single marker,QAMS)定量测定方法,研究酚酸类成分的传递规律,结合基准关联度,分析配伍的影响,并探究“去渣再...目的建立旋覆代赭汤(Xuanfu Daizhe Decoction,XDD)中9种酚酸类成分一测多评(quantitative analysis of multicomponents by single marker,QAMS)定量测定方法,研究酚酸类成分的传递规律,结合基准关联度,分析配伍的影响,并探究“去渣再煎”的影响。方法制备15批XDD基准样品,以绿原酸为内标物,确定其他8种成分的相对校正因子(fs/i)并计算含量,同时采用外标法测定,比较两者结果差异,计算饮片-水煎液-基准样品的转移率,分析传递规律;制备不同配伍样品,以9种酚酸类成分转移率和指纹图谱相似度为评价指标,计算基准关联度;制备不同煎煮条件样品,检测9种酚酸类成分的转移率。结果QAMS法定量测定结果与外标法无显著差异。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸B、异绿原酸A、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸C的平均转移率分别为147.34%、42.60%、321.53%、131.49%、419.76%、172.93%、18.47%、25.06%、74.68%,酚酸类成分发生降解与异构化可能是部分成分转移率大于100%的主要原因;配伍、煎煮时间、浓缩对9种酚酸类成分的传递均有影响,其中旋覆花与半夏配伍后各指标成分和指纹图谱相似度的基准关联度均大于90%,而“去渣再煎”可以进一步促进酚酸类成分的降解与异构化。结论建立的QAMS法方便、稳定,初步明确从饮片到XDD基准样品中酚酸类有效成分群之间的变化、量值传递规律和可能的影响因素,为XDD的质量控制和制剂开发提供科学依据。展开更多
文摘目的旨在建立一种基于生物传感器联合超高效液相色谱/串联质谱(ultra-performance liquid chromatography with electrospray tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)的中药苦味关键质量属性辨识方法。以白术内酯类成分为研究对象,通过分子对接与生物传感技术揭示其与苦味受体的相互作用机制,实现苦味属性从传统经验判定到分子水平表征的跨越,为完善白术质量控制体系提供支撑。方法采用D101大孔吸附树脂结合紫外分光光度法,制备并筛选富含内酯类成分的白术组分;通过UPLC-MS/MS与分子对接技术,在分子水平解析白术组分与味觉受体的相互作用特征;采用生物传感器与UPLCMS/MS联用技术,实现白术组分苦味关键质量属性的精准辨识。结果成功制得白术不同极性组分11个,其中白术醇提物70%组分的总内酯含量最高,为后续性味研究的理想载体;分子对接实验显示白术组分与Ⅱ型味觉受体家族14号成员(taste receptor type 2 member 14,TAS2R14)的结合展现出明显优势,在分子层面揭示了白术组分具有强烈趋于苦味属性的作用特质;进一步构建苦味生物传感器,对白术组分的苦味属性进行表征,结果显示白术组分与TAS2R14的相互结合强度为49.0ng/L,属于强相互作用,表明以内酯类成分为主的白术组分具有显著的苦味属性,该结果与分子对接结果相互印证,增强了实验结论的可靠性;最后,联合UPLC-MS/MS技术,共辨识得到包括白术内酯Ⅱ在内的苦味关键质量属性13个,在物质基础层面表明白术组分与苦味受体TAS2R14的结合受关键质量属性驱动,为理解白术内酯类成分苦味特性提供直接证据。结论通过多技术融合的系统性研究,从分子相互作用到物质基础层面揭示了白术内酯类成分苦味属性的本质,所发现的苦味关键质量属性为建立基于苦味特征的白术质量控制方法奠定了理论基础,此外,提出的技术路线为中药苦味物质基础研究提供了新的方法学参考。
文摘目的建立旋覆代赭汤(Xuanfu Daizhe Decoction,XDD)中9种酚酸类成分一测多评(quantitative analysis of multicomponents by single marker,QAMS)定量测定方法,研究酚酸类成分的传递规律,结合基准关联度,分析配伍的影响,并探究“去渣再煎”的影响。方法制备15批XDD基准样品,以绿原酸为内标物,确定其他8种成分的相对校正因子(fs/i)并计算含量,同时采用外标法测定,比较两者结果差异,计算饮片-水煎液-基准样品的转移率,分析传递规律;制备不同配伍样品,以9种酚酸类成分转移率和指纹图谱相似度为评价指标,计算基准关联度;制备不同煎煮条件样品,检测9种酚酸类成分的转移率。结果QAMS法定量测定结果与外标法无显著差异。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、1,3-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸B、异绿原酸A、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸C的平均转移率分别为147.34%、42.60%、321.53%、131.49%、419.76%、172.93%、18.47%、25.06%、74.68%,酚酸类成分发生降解与异构化可能是部分成分转移率大于100%的主要原因;配伍、煎煮时间、浓缩对9种酚酸类成分的传递均有影响,其中旋覆花与半夏配伍后各指标成分和指纹图谱相似度的基准关联度均大于90%,而“去渣再煎”可以进一步促进酚酸类成分的降解与异构化。结论建立的QAMS法方便、稳定,初步明确从饮片到XDD基准样品中酚酸类有效成分群之间的变化、量值传递规律和可能的影响因素,为XDD的质量控制和制剂开发提供科学依据。
