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冻存复苏后骨髓间充质干细胞体外扩增和多向分化潜能研究 被引量：5
1
作者 项盈 贾冰冰 +5 位作者 沈丹 黄国平 解纯刚 郑强 金洁 王金福 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第11期2016-2020,共5页
冻存复苏的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)被传至15代并分别诱导成软骨细胞、脂肪细胞和神经细胞,以此研究冻存干细胞的扩增和分化潜能.结果表明,复苏细胞在软骨细胞诱导液的作用下分化为软骨细胞,对甲苯胺蓝异染并通过RT-PCR检测出Ⅱ型前胶... 冻存复苏的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)被传至15代并分别诱导成软骨细胞、脂肪细胞和神经细胞,以此研究冻存干细胞的扩增和分化潜能.结果表明,复苏细胞在软骨细胞诱导液的作用下分化为软骨细胞,对甲苯胺蓝异染并通过RT-PCR检测出Ⅱ型前胶原mRNA的表达;在脂肪细胞诱导液的作用下,可检测到被诱导细胞中脂滴的产生,通过油红O染色显示出细胞核周围聚集的脂滴;在神经细胞诱导液的作用下,通过免疫组化和RT-PCR均检测出被诱导细胞具有巢蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达,分化细胞延伸分支,末端为典型曲张体.推断复苏的hMSCs仍是具有向软骨、脂肪和神经元多系分化的潜能性干细胞群,可以作为细胞组织工程和治疗相关疾病的一种干细胞来源. 展开更多
关键词 冻存 骨髓间充质干细胞 分化 软骨细胞 脂肪细胞 神经细胞
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扩增的造血干/祖细胞对小鼠恢复造血的作用——体内各细胞系的快速恢复、长期植入及内源性恢复
2
作者 王金福 吴亦凡 +1 位作者 Jenny HARRINTONG Ian K.MCNIECE 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期368-372,共5页
分离雌性BDF1小鼠骨髓中的单个核细胞,以MoFlo细胞分选系统分离纯化CD34+/c-kit+造血干/祖细胞,与小鼠间充质干细胞系UC-OZ-17联合体外培养后,移植于经致死剂量照射的雌性小鼠.结果表明,体外扩增有效地提高了各种细胞的扩增倍数,其中单... 分离雌性BDF1小鼠骨髓中的单个核细胞,以MoFlo细胞分选系统分离纯化CD34+/c-kit+造血干/祖细胞,与小鼠间充质干细胞系UC-OZ-17联合体外培养后,移植于经致死剂量照射的雌性小鼠.结果表明,体外扩增有效地提高了各种细胞的扩增倍数,其中单个核细胞扩增的总有核细胞、CD34+细胞、GM-CFC和HPP-CFC扩增倍数分别为10.8、4.8、65.9和38.8,CD34+/c-kit+细胞扩增的四种细胞扩增倍数分别为76.1、2.9、71.7和51.8.扩增细胞移植后可在体内产生嗜中性粒细胞等的快速恢复,短期快速恢复不但为长期植入提供了机会,也对内源性重建造血产生重要作用. 展开更多
关键词 造血干/祖细胞 扩增 移植
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转人端粒酶基因骨髓间充质干细胞的蛋白表达谱分析 被引量：4
3
作者 黄国平 杨金凤 +6 位作者 郭春娟 黄建平 王义刚 郑强 沈丹 潘志军 王金福 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期315-328,共14页
通过外源表达人端粒酶基因,构建了具有长期传代能力的骨髓间充质干细胞系(hTERT-hMSC),并在传代过程中尚未发现有丧失接触性生长抑制和转型现象.本文主要目的是采用双向凝胶电泳技术和MALDI-TOF-MS蛋白质谱技术分析hTERT-hMSC细胞的蛋... 通过外源表达人端粒酶基因,构建了具有长期传代能力的骨髓间充质干细胞系(hTERT-hMSC),并在传代过程中尚未发现有丧失接触性生长抑制和转型现象.本文主要目的是采用双向凝胶电泳技术和MALDI-TOF-MS蛋白质谱技术分析hTERT-hMSC细胞的蛋白差异表达图谱,研究表达外源端粒酶基因对骨髓间充质干细胞生物学特性影响的可能机制.通过分析原代第12代hMSC、第95代和275代hTERT-hMSC的蛋白凝胶图,获得原代第12代hMSC总共1543±145个蛋白点,第95代hTERT-hMSC1611±186个蛋白点、275代hTERT-hMSC1451±126个蛋白点.质谱分析鉴定100种蛋白质,其中有20种有显著差异表达.结果表明,膜联蛋白(ANX)和GSTP1表达的下调以及内质网钙结合蛋白1(RCN1)、伴侣素CCT、TUBA1B和ACTG1表达的上调可能提升了人骨髓间充质干细胞扩增的能力,而prohibitin蛋白和p53蛋白维持正常表达可能对hTERT-hMSC维持细胞接触性生长抑制起着重要作用. 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 端粒酶 蛋白质图谱 增殖 致瘤性
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p53对缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞演变的影响 被引量：1
4
作者 李开龙 杜晓兰 +4 位作者 宋瑞华 赵玲 何娅妮 张建国 陈林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期6-10,共5页
目的:观察缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusioninjury,IRI)后,低龄和高龄p53(+/+)和p53(-/-)鼠肾小管上皮细胞的演变,探讨p53基因对IRI后肾小管上皮细胞演变的影响。方法:分别建立低龄(2月龄)和高龄(12月龄)p53(+/+)和p53(-/-)鼠左肾IR... 目的:观察缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusioninjury,IRI)后,低龄和高龄p53(+/+)和p53(-/-)鼠肾小管上皮细胞的演变,探讨p53基因对IRI后肾小管上皮细胞演变的影响。方法:分别建立低龄(2月龄)和高龄(12月龄)p53(+/+)和p53(-/-)鼠左肾IRI模型。于IRI后0d、1d、3d、7d、1月、3月、6月,用HE染色观察肾小管组织学变化,免疫组织化学法检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(prolifera-tingcellnuclearantigen,PCNA)的表达,组织化学染色观察肾小管上皮细胞衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)的活性,用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(terminaldeoxynu-cleotidyltransferase-mediateddUTP-biotininsitunick-endlabe-ling,TUNEL)法检测肾小管上皮细胞凋亡。结果:IRI后0d,肾小管以坏死为主,高龄鼠比低龄鼠明显(P<0.05),p53(-/-)鼠比p53(+/+)鼠明显(P<0.05);细胞凋亡在7d时达到高峰,且高龄鼠比低龄鼠明显(P<0.05),p53(+/+)鼠比p53(-/-)鼠明显(P<0.05)。p53(+/+)低龄鼠IRI后1月出现衰老细胞,3月和6月显著增多(P<0.05),对侧肾未见衰老细胞;而p53(-/-)低龄鼠IRI后6月才出现明显的衰老细胞;两种基因型高龄鼠在IRI后0d双肾均见衰老细胞,但p53(+/+)鼠显著多于p53(-/-)鼠(P<0.05),1d后,IRI肾的衰老细胞明显减少(P<0.05),对侧肾无变化。p53(+/+)高龄和低龄鼠细胞增殖无统计学意义(P>0.05),而p53(-/-)低龄和高龄鼠在IRI后3、7d细胞增殖进行性增加,且低龄鼠显著多于高龄鼠、p53(-/-)鼠多于p53(+/+)鼠(P<0.05)。对高龄鼠IRI后1d点细胞衰老和凋亡进行相关分析显示,在p53(+/+)鼠二者显著负相关(r=-0.82,P<0.05),在p53(-/-)鼠,二者无显著相关性(r=0.26,P>0.05)。结论:①IRI可促进正常肾小管上皮细胞衰老的进程;②已经进入衰老状态的肾小管上皮细胞在遭受IRI刺激后,更易走向死亡(坏死和/或凋亡);③p53在IRI所致肾小管上皮细胞演变过程中发挥着重要的调控作用。 展开更多
关键词 缺血再灌注 肾小管上皮细胞 衰老 凋亡 P53
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