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腰舒逐瘀方通过miR-17-5P/MDM2/p53通路调控大鼠椎间盘纤维环细胞增殖与凋亡
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作者 姜海涛 袁韩涛 +4 位作者 黄雯婷 杨蓉蓉 陈晓春 禹宝庆 李四波 《实验动物与比较医学》 2026年第1期55-65,共11页
目的 探讨腰舒逐瘀方调节微RNA-17-5P(microRNA-17-5P,miR-17-5P)/鼠双微基因2(murine double minute 2,MDM2)/p53轴对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖和凋亡的影响及潜在分子机制。方法 取8周龄SPF级雄性SD大鼠的椎间盘纤维环组织,采用酶消... 目的 探讨腰舒逐瘀方调节微RNA-17-5P(microRNA-17-5P,miR-17-5P)/鼠双微基因2(murine double minute 2,MDM2)/p53轴对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖和凋亡的影响及潜在分子机制。方法 取8周龄SPF级雄性SD大鼠的椎间盘纤维环组织,采用酶消化法和机械分散法分离获取纤维环细胞。将纤维环细胞分为6组:C组为空白对照组,纤维环细胞不经白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)处理,直接在RPMI 1640完全培养液中正常培养;β组为10 ng/mL IL-1β处理纤维环细胞24 h构建的退变模型组;β+B组为IL-1β+空白血清组,该组纤维环细胞先经IL-1β处理构建退变模型,后用含5%空白血清的RPMI 1640培养液处理24 h;β+W组为IL-1β+腰舒逐瘀方含药血清组,该组纤维环细胞先经IL-1β处理构建退变模型,后用含5%腰舒逐瘀方含药血清的RPMI 1640培养液处理24 h;β+I组为IL-1β+miR-17-5P inhibitor组,该组纤维环细胞先经IL-1β处理构建退变模型,后转染miR-17-5P inhibitor;β+I+W组为IL-1β+miR-17-5P inhibitor+腰舒逐瘀方含药血清组,该组纤维环细胞先经IL-1β处理构建退变模型,后转染miR-17-5P inhibitor,最后使用含5%腰舒逐瘀方含药血清的RPMI 1640培养液处理24 h。采用CCK-8实验检测各组细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用实时荧光定量PCR检测细胞内miR-17-5P、MDM2mRNA、p53 mRNA表达量;采用蛋白质印迹法检测细胞中MDM2、p53蛋白表达量。双萤光素酶报告系统分析miR-17-5P和MDM2的靶向关系。结果 与C组相比,β组细胞存活率显著下降(P<0.001),细胞凋亡率显著升高(P<0.001),miR-17-5P、p53 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.001),MDM2 mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.001)。与β组相比,β+W组、β+I组、β+I+W组细胞存活率显著升高,凋亡率显著下降,miR-17-5P、p53mRNA及蛋白表达水平显著下降,MDM2 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.001),且β+I+W组上述指标的变化幅度更大(P<0.001)。环状RNA相互作用组预测miR-17-5P与MDM2的3'非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)有特异性结合位点,转染miR-17-5P模拟物可显著降低与之共转染的含野生型MDM2 3'UTR萤光素酶报告质粒的萤光素酶表达水平(P<0.05),但对含突变型MDM2 3'UTR萤光素酶报告质粒共转染细胞的萤光素酶表达无显著影响(P>0.05)。结论 腰舒逐瘀方通过下调miR-17-5P水平,促进MDM2蛋白合成,进而下调p53表达,促进大鼠椎间盘纤维环细胞增殖,抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 椎间盘退变 腰舒逐瘀方 微核糖核酸-17-5P 细胞增殖 细胞凋亡 大鼠
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柴胡皂苷D通过抑制LncRNA-gm33782介导的糖酵解改善肾纤维化
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作者 舒静 谭睿陟 +3 位作者 贾建 李平 王丽 毛楠 《中国实验动物学报》 北大核心 2026年第1期43-55,共13页
目的探讨柴胡皂苷D(SSD)是否通过调控长链非编码RNA-gm33782(LncRNA-gm33782)影响糖酵解途径,从而减轻慢性肾病(CKD)模型中的肾损伤和纤维化。方法建立单侧输尿管梗阻(UUO)诱导C57BL/6小鼠CKD模型。30只小鼠随机分为假手术组、UUO组、SS... 目的探讨柴胡皂苷D(SSD)是否通过调控长链非编码RNA-gm33782(LncRNA-gm33782)影响糖酵解途径,从而减轻慢性肾病(CKD)模型中的肾损伤和纤维化。方法建立单侧输尿管梗阻(UUO)诱导C57BL/6小鼠CKD模型。30只小鼠随机分为假手术组、UUO组、SSD低剂量组(30 mg/(kg·d))、SSD高剂量组(60 mg/(kg·d))、厄贝沙坦组(20 mg/(kg·d)),灌胃给药7 d后处死小鼠收集肾组织,采用苏木素-伊红(HE)、Masson和Sirius red染色评估肾病理损伤;利用免疫组化和Western Blot检测纤维化标志物(FN、α-SMA、Col-Ⅰ)的表达。通过RT-qPCR分析LncRNA-gm33782表达;使用试剂盒检测肾组织乳酸浓度,并通过Western Blot检测糖酵解关键酶己糖激酶2(HK2)的蛋白表达,评估LncRNA-gm33782与肾纤维化及糖酵解的关联。体外研究采用转化生长因子-β(TGF-β)诱导小鼠肾小管上皮细胞(TCMK-1)构建纤维化模型,通过敲低与过表达LncRNA-gm33782,观察其对纤维化指标(FN,Col-Ⅰ)、糖酵解关键酶(HK2,PKM2)表达及线粒体功能(细胞耗氧率(OCR))的影响;进一步在LncRNA-gm33782过表达条件下给予SSD干预,评估其保护效应。结果SSD治疗显著减轻UUO小鼠的肾组织损伤、纤维化程度及乳酸堆积。LncRNA-gm33782在体内及体外纤维化模型中均显著上调(P<0.05),而SSD干预有效降低其表达(P<0.05)。体外实验显示,敲低LncRNA-gm33782可减轻TGF-β诱导的细胞纤维化,并抑制糖酵解活化;反之,过表达LncRNA-gm33782则加剧线粒体OCR抑制、纤维化程度和糖酵解激活,并削弱SSD保护作用(P<0.05)。结论SSD通过靶向抑制LncRNA-gm33782的表达,下调糖酵解活化,恢复线粒体功能,从而阻断肾纤维化进程,LncRNA-gm33782是SSD发挥肾保护作用的关键分子靶点。 展开更多
关键词 慢性肾病 LncRNA-gm33782 柴胡皂苷D 糖酵解 肾纤维化
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miR-532-3p靶向抑制Notch1信号通路对慢性肾脏病大鼠巨噬细胞极化的影响 被引量:3
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作者 徐明芝 安娜 +5 位作者 白亚飞 陈汝满 贺纪清 王春莉 祁永慧 潘明娇 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期310-314,319,共6页
目的:分析miR-532-3p靶向抑制Notch1信号通路对慢性肾脏病(CKD)大鼠巨噬细胞极化的影响。方法:将75只SD大鼠分为对照组、CKD组、ago-NC组、ago-miR-532-3p组、FLI-06组,除对照组外均构建CKD模型并注射相应质粒及抑制剂,对照组与CKD组以... 目的:分析miR-532-3p靶向抑制Notch1信号通路对慢性肾脏病(CKD)大鼠巨噬细胞极化的影响。方法:将75只SD大鼠分为对照组、CKD组、ago-NC组、ago-miR-532-3p组、FLI-06组,除对照组外均构建CKD模型并注射相应质粒及抑制剂,对照组与CKD组以等量生理盐水代替,ELISA测定大鼠血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、TNF-α、IL-1β、IL-10水平,HE染色与Masson染色观察大鼠肾组织病理及肾纤维化,流式细胞术检测巨噬细胞CD11c^(+)和CD206^(+)情况,qRT-PCR检测大鼠肾组织miR-532-3p表达,Western blot检测Notch1蛋白表达;双荧光素酶报告基因测定miR-532-3p与Notch1的靶向结合。结果:对照组大鼠肾小球、肾小管及上皮细胞结构完整,胞界清晰,排列整齐;CKD组大鼠肾小球上皮细胞坏死增多、系膜基质增多、肾小球硬化,炎症细胞浸润,肾纤维化程度加深;与CKD组相比,ago-miR-532-3p组、FLI-06组肾小球、肾小管损伤程度减小,炎症浸润细胞减少,肾纤维化程度减轻;与对照组相比,CKD组大鼠血清Scr、BUN、TNF-α、IL-1β、肾组织巨噬细胞CD11c^(+)比例、CD11c^(+)/CD206^(+)、Notch1蛋白表达升高,血清IL-10水平、肾组织CD206^(+)、miR-532-3p降低(P<0.05);与CKD组相比,ago-miR-532-3p组、FLI-06组大鼠血清Scr、BUN、TNF-α、IL-1β、肾组织巨噬细胞CD11c^(+)比例、CD11c^(+)/CD206^(+)、Notch1蛋白表达降低,血清IL-10水平、肾组织CD206^(+)、miR-532-3p表达升高(P<0.05);miR-532-3p与Notch1靶向结合,miR-532-3p过表达抑制Notch1蛋白表达。结论:促进miR-532-3p表达通过抑制Notch1通路保护CKD大鼠肾组织,其机制可能为调控巨噬细胞极化。 展开更多
关键词 慢性肾脏病 巨噬细胞极化 miR-532-3p NOTCH1
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可同时检测小鼠诺如病毒和轮状病毒的双重实时荧光RT-qPCR检测方法的建立及验证
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作者 李晓波 冯育芳 +5 位作者 王淑菁 王莎莎 李威 秦骁 王吉 付瑞 《实验动物科学》 2025年第5期16-23,共8页
目的建立可同时检测小鼠诺如病毒和轮状病毒的双重实时荧光RT-qPCR检测方法并对其进行方法学验证。方法通过比对NCBI公布的小鼠诺如病毒(MNV)及小鼠轮状病毒(MRV)基因组序列,分别选取MNV VP1基因及MRV NSP5基因保守序列设计引物探针,通... 目的建立可同时检测小鼠诺如病毒和轮状病毒的双重实时荧光RT-qPCR检测方法并对其进行方法学验证。方法通过比对NCBI公布的小鼠诺如病毒(MNV)及小鼠轮状病毒(MRV)基因组序列,分别选取MNV VP1基因及MRV NSP5基因保守序列设计引物探针,通过优化引物及探针浓度,建立可在一次反应中同时检测小鼠诺如病毒和轮状病毒的Taqman实时荧光RT-qPCR检测方法。使用MNV及MRV的RNA标准品验证双重及单重方法的定量范围及最低检测限;MNV及MRV RNA标准品各设10^(1)~10^(5) copies/μL等5个浓度,等体积混合形成浓度矩阵,单因素方差分析比较不同浓度的MNV及MRV之间是否会对定量结果产生干扰;对10^(1),10^(3),10^(5) copies/μL 3个浓度的RNA标准品进行批间及批内检测,验证方法的重复性;通过检测544份小鼠粪便样品验证方法实际应用性能,同时用普通RT-PCR法检测相同的90份小鼠粪便样品,卡方检验比较两种方法结果的差异。结果建立的双重RT-qPCR方法可在10^(1)~10^(8) copies/μL范围实现对MNV及MRV的有效定量,标准曲线各参数均在正常范围:R^(2)值均为0.999,斜率(MNV-3.332,MRV-3.250)、扩增效率(MNV 99.6%,MRV 103.1%)、单重法标准曲线与双重法相似,各参数值差别不大;最低检测限分别为:MNV单重及双重法均为3.125 copies/μL,MRV单重法为6.25 copies/μL,双重法为3.125 copies/μL;批内各浓度Ct值变异系数为0.63%~1.24%,批间变异系数为3.60%~5.57%;干扰实验表明低浓度标准品的检测(MNV10^(1)~10^(3) copies/μL,MRV 10^(2)及10^(3) copies/μL)易受到高浓度对应模板的干扰,导致所测定量值偏高;用所建立的双重RT-qPCR检测临床样品,结果MNV阳性率为1.8%(10/544),MRV未检出阳性样品。检测相同的90份小鼠粪便样品,双重实时荧光RT-qPCR检出10份MNV阳性样品,普通RT-PCR可检出8份;两种方法均可检出1份MRV阳性样品,经卡方检验两者结果无统计学差异。结论本研究所建立的双重实时荧光RT-qPCR方法可用于实验小鼠中MNV及MRV的快速高效的常规健康监测。 展开更多
关键词 小鼠诺如病毒 小鼠轮状病毒(乳鼠流行性腹泻病毒) 双重实时荧光定量反转录聚合酶链式反应
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荷叶碱通过p38MAPK-PPARγ/NF-κB信号通路对肝硬化大鼠的影响 被引量:4
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作者 孟赛 巩林强 +1 位作者 李曙晖 邓延梅 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期595-599,共5页
目的:探讨荷叶碱(Nuci)通过p38MAPK-PPARγ/NF-κB信号通路对肝硬化大鼠肝纤维化及炎症反应的影响。方法:随机取6只SD大鼠作为对照(NC)组,其余大鼠200 mg/kg腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)诱导肝硬化。造模成功大鼠随机分为Model组、Nuci组(20... 目的:探讨荷叶碱(Nuci)通过p38MAPK-PPARγ/NF-κB信号通路对肝硬化大鼠肝纤维化及炎症反应的影响。方法:随机取6只SD大鼠作为对照(NC)组,其余大鼠200 mg/kg腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)诱导肝硬化。造模成功大鼠随机分为Model组、Nuci组(20 mg/kg Nuci)、anisomycin组(5 mg/kg p38MAPK-PPARγ/NF-κB信号通路激活剂anisomycin)、Nuci+anisomycin组(20 mg/kg Nuci+5 mg/kg anisomycin),每组6只,NC组、Model组给予等量生理盐水,1次/d,持续8周。ELISA试剂盒检测血清炎症指标、肝功能指标;HE染色检测肝脏病理变化;Masson染色检测肝组织纤维化;Western blot检测通路相关蛋白水平。结果:NC组细胞结构正常,仅有少量胶原沉积,未见胶原纤维增生现象,肝小叶染色清晰。Model组较NC组肝细胞增大,伴有炎症细胞浸润,且胶原纤维增生现象增加,IL-1β、TNF-α、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、IL-6、透明质酸(HA)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、总胆红素(TBIL)含量、层粘连蛋白(LN)、胶原容积分数、p-p38MAPK/p38MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平显著升高(P<0.05),PPARγ蛋白水平显著下调(P<0.05);Nuci治疗改善了肝组织炎症细胞浸润及坏死现象,IL-1β、IL-6、TNF-α、ALT、AST、TBIL、HA、LN和PCⅢ含量、胶原容积分数、p-p38MAPK/p38MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平显著降低(P<0.05),PPARγ蛋白水平显著升高(P<0.05),而anisomycin组与Nuci组趋势相反;anisomycin消除了Nuci对肝硬化大鼠的治疗作用。结论:Nuci可能通过下调p38MAPK-PPARγ/NF-κB信号通路减轻肝硬化大鼠肝纤维化及炎症反应。 展开更多
关键词 荷叶碱 p38MAPK-PPARγ/NF-κB信号通路 肝硬化 肝纤维化 炎症反应
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Apelin-13调控自发性高血压大鼠心室重构的作用机制
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作者 陈柏荣 龚东 +2 位作者 危小良 罗礼云 卢慧芳 《中国当代医药》 2025年第27期4-9,共6页
目的探究Apelin-13对自发性高血压大鼠心室重构的影响,并揭示其可能的作用机制。方法将自发性高血压(SHR)大鼠随机分为4组:模型组、Apelin-13低剂量组、Apelin-13高剂量组、培哚普利组,每组8只。另设8只WKY大鼠作为正常对照组。采用超... 目的探究Apelin-13对自发性高血压大鼠心室重构的影响,并揭示其可能的作用机制。方法将自发性高血压(SHR)大鼠随机分为4组:模型组、Apelin-13低剂量组、Apelin-13高剂量组、培哚普利组,每组8只。另设8只WKY大鼠作为正常对照组。采用超声心动图评价大鼠心功能;分离大鼠左心室并计算心脏重量指数;苏木精-伊红染色和Masson染色对大鼠心肌组织进行病理形态学分析和纤维化鉴定;酶联免疫吸附法实验检测炎性相关细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1、IL-1β水平;免疫印迹检测核因子κB(NF-κB)/诱导型一氧化氮合酶(iNOS)信号通路相关蛋白表达变化。结果Apelin-13低剂量组、Apelin-13高剂量组、培哚普利组大鼠心功能明显强于模型组,弱于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Apelin-13低剂量组、Apelin-13高剂量组、培哚普利组心脏重量指数和促炎因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平低于模型组,高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Apelin-13低剂量组、Apelin-13高剂量组、培哚普利组心肌组织病理学检测结果明显优于模型组,略差于正常对照组。Apelin-13低剂量组、Apelin-13高剂量组、培哚普利组NF-κB、iNOS蛋白水平低于模型组,高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Apelin-13对自发性高血压大鼠心室重构和心功能可能具有治疗作用,其机制可能与调控NF-κB/iNOS通路有关。 展开更多
关键词 APELIN-13 自发性高血压 核因子κB/诱导型一氧化氮合酶通路 心室重构
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益母草碱通过调节RIP1-RIP3-MLKL通路改善心肌缺血/再灌注损伤大鼠坏死性凋亡 被引量:1
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作者 李明芳 唐碧波 +1 位作者 杨才进 刘超权 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第8期1879-1884,共6页
目的:探讨益母草碱(Leo)通过调节受体相互作用蛋白1(RIP1)-受体相互作用蛋白3(RIP3)-混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)通路对心肌缺血/再灌注(MIR)损伤大鼠坏死性凋亡的影响。方法:随机取15只大鼠作为假手术组(Sham),其余大鼠结扎左冠状... 目的:探讨益母草碱(Leo)通过调节受体相互作用蛋白1(RIP1)-受体相互作用蛋白3(RIP3)-混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)通路对心肌缺血/再灌注(MIR)损伤大鼠坏死性凋亡的影响。方法:随机取15只大鼠作为假手术组(Sham),其余大鼠结扎左冠状动脉前降支构建MIR模型后随机分为MIR组、Leo组(15 mg/kg)、Compound 6i组(1 mg/kg RIP1-RIP3-MLKL通路激活剂Compound 6i)、Leo+Compound 6i组(15 mg/kg Leo+1 mg/kg Compound 6i),每组15只。MIR组和Sham组注射等量生理盐水。超声心电图观察心功能指标;ELISA检测心肌损伤指标及炎症因子水平;HE染色观察心脏病理损伤情况;TTC染色检测心肌梗死面积;TUNEL染色检测细胞凋亡;Western blot检测RIP1-RIP3-MLKL通路蛋白表达。结果:Sham组大鼠心肌细胞完整,排列有序;MIR组心肌细胞排列紊乱和肿胀,肌原纤维收缩,肌膜被破坏,较Sham组射血分数(EF)及心输出量(CO)水平显著降低(P<0.05),Mb、cTnⅠ、CK-Mb含量、IL-6、IL-18水平、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、RIP1、RIP3及MLKL蛋白水平显著升高(P<0.05);与MIR组相比较,Leo组细胞排列杂乱和水肿现象改善,EF、CO水平显著升高(P<0.05),Mb、cTnⅠ、CK-Mb含量、IL-6、IL-18水平、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、RIP1、RIP3及MLKL蛋白水平显著降低(P<0.05),而Compound 6i组趋势相反;Leo+Compound 6i组与MIR组心肌组织结构相似,Compound 6i消除了Leo对MIR大鼠的心脏保护作用。结论:Leo可能通过下调RIP1-RIP3-MLKL通路缓解MIR大鼠心肌细胞坏死性凋亡,进而对MIR起治疗效果。 展开更多
关键词 益母草碱 RIP1-RIP3-MLKL通路 心肌缺血再灌注 坏死性凋亡
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A群轮状病毒和塞内卡病毒双重RT-qPCR检测方法的建立及应用
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作者 刘星 罗霆宇 +5 位作者 张玉 李凯丽 尹博曌 李昌文 夏长友 高彩霞 《实验动物科学》 2025年第3期30-37,共8页
目的 建立A群轮状病毒(PoRVA)和塞内卡病毒(SVA)双重RT-qPCR检测方法,并对其进行初步应用。方法 通过比对A群轮状病毒和塞内卡病毒毒株序列,选取PoRVA NSP3基因、SVA VP1基因保守区域分别设计引物和探针,建立PoRVA和SVA双重RT-qPCR检测... 目的 建立A群轮状病毒(PoRVA)和塞内卡病毒(SVA)双重RT-qPCR检测方法,并对其进行初步应用。方法 通过比对A群轮状病毒和塞内卡病毒毒株序列,选取PoRVA NSP3基因、SVA VP1基因保守区域分别设计引物和探针,建立PoRVA和SVA双重RT-qPCR检测方法。随后对方法的特异性和敏感性进行检测;取浓度为10~6~10^(3)copies/μL 10倍系列稀释的重组质粒标准品,每个浓度做3个平行,重复检测3次,计算组内和组间变异系数,评估方法的重复性和稳定性;用建立的双重RT-qPCR检测方法与《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》和《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》的检测方法进行比对,并检测15份猪粪便样品和35份猪肛拭子样品,评估该方法的实际应用性。结果 建立的双重RT-qPCR方法在10~9~10~1 copies/μL范围Ct值与质粒浓度呈线性关系,PoRVA标准曲线Slope为-3.085,r^(2)值为0.993,扩增效率为110.956%,SVA标准曲线Slope为-3.085,r^(2)值为0.993,扩增效率为110.935%,可检测到的PoRVA和SVA最低限均为10~1 copies/μL;且与其他7种实验猪常见病原不发生交叉反应;重复检测10~6~10^(3 )copies/μL质粒标准品,组内变异系数小于0.15%,组间变异系数小于1.50%。用建立的双重RT-qPCR方法与《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》和《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》方法检测15份猪粪便样品和35份猪肛拭子样品,结果显示,RT-qPCR检测出PoRVA阳性100%(50/50),SVA阳性66%(33/50),《GB/T34756—2017猪轮状病毒病病毒RT-PCR检测方法》检测阳性率100%(50/50),《SN/T 5486—2022塞内卡病毒病检疫技术规范》检测阳性率24%(12/50),阳性符合率达到100%。结论 本研究建立的双重RT-qPCR检测方法可以有效地检测PoRVA和SVA,可为猪群的疫病检测和日常监测提供技术支撑。 展开更多
关键词 A群轮状病毒 塞内卡病毒 双重RT-qPCR检测方法建立及应用
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黄芩通过JAK2/STAT3信号通路联合5-Fu发挥抗C57BL/6J小鼠肺癌的作用 被引量:2
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作者 龙亚丽 刘雅莉 +2 位作者 杨明轩 田启会 张勇 《中国实验动物学报》 北大核心 2025年第4期522-529,共8页
目的基于JAK2/STAT3信号通路研究黄芩联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对Lewis荷瘤模型小鼠肺癌的抑制作用。方法检测黄芩(20 mg/kg)联合5-Fu干预Lewis荷瘤小鼠后的体质量、进食量和瘤体积变化,通过苏木素-伊红(HE)染色观察瘤组织... 目的基于JAK2/STAT3信号通路研究黄芩联合5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对Lewis荷瘤模型小鼠肺癌的抑制作用。方法检测黄芩(20 mg/kg)联合5-Fu干预Lewis荷瘤小鼠后的体质量、进食量和瘤体积变化,通过苏木素-伊红(HE)染色观察瘤组织病理变化,通过免疫组织化学染色观察增殖相关蛋白Ki67表达水平变化,通过TUNEL染色观察瘤组织中细胞凋亡水平变化,通过免疫组织化学染色观察瘤组织中对JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3蛋白表达水平的变化。结果与模型组相比,联合干预后小鼠瘤体积明显变小,具有统计学意义(P<0.01),体质量升高(P<0.05),进食未发生明显变化。瘤组织中增殖相关蛋白Ki67表达明显降低,TUNEL标记的凋亡细胞明显增多;p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高。结论黄芩水煎液可抑制JAK2/STAT3信号通路,并增加5-Fu对小鼠肺癌的抑制作用。 展开更多
关键词 肺癌荷瘤小鼠 黄芩 JAK2/STAT3信号通路 5-FU
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焦亚硫酸钠对雄性小鼠肝脏Caspase-3和转化生长因子β_1表达的影响 被引量:7
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作者 李长力 路军秀 +4 位作者 王旭辉 魏晓 刘志涛 袁向山 马全祥 《新乡医学院学报》 CAS 2008年第4期403-405,共3页
目的研究焦亚硫酸钠对小鼠肝脏中半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法健康雄性昆明小鼠30只随机分为对照组10只和实验组20只,对照组小鼠给予静置自来水饮用;实验组小鼠给予10g.L-1焦... 目的研究焦亚硫酸钠对小鼠肝脏中半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法健康雄性昆明小鼠30只随机分为对照组10只和实验组20只,对照组小鼠给予静置自来水饮用;实验组小鼠给予10g.L-1焦亚硫酸钠溶液饮用。分别于第10天和第30天时处死各组小鼠,快速取出肝脏,Zamboni固定液固定,常规冰冻制片,免疫组织化学染色,光镜观察。结果与对照组比较,实验组小鼠肝脏中Caspase-3阳性表达增强(P<0.01),第10天时实验组变化尤为明显;而实验组小鼠肝脏中TGF-β1阳性表达与对照组比较无显著差异(P>0.05)。结论焦亚硫酸钠喂食后可引起小鼠肝脏中Caspase-3表达增高,TGF-β1无明显改变,提示焦亚硫酸钠促使小鼠肝脏中肝细胞凋亡增加。 展开更多
关键词 焦亚硫酸钠 半胱氨酸天门冬氨酸特异性蛋白酶 转化生长因子Β1 肝脏 小鼠
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实验室能力验证用酯酶-3标准样品的均匀性和稳定性研究 被引量:13
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作者 魏杰 王洪 +1 位作者 李芳芳 岳秉飞 《中国药事》 CAS 2015年第3期277-280,共4页
目的:制备均匀性和稳定性良好的能力验证用酯酶-3样品(a型、c型、ac型),为标准样品的制备、保存和发放等提供基础科研数据。方法:均匀性实验按照随机原则抽取4%比例的样品进行测定。稳定性实验以4℃、室温(RT)和37℃这3个温度为观测纵坐... 目的:制备均匀性和稳定性良好的能力验证用酯酶-3样品(a型、c型、ac型),为标准样品的制备、保存和发放等提供基础科研数据。方法:均匀性实验按照随机原则抽取4%比例的样品进行测定。稳定性实验以4℃、室温(RT)和37℃这3个温度为观测纵坐标,1、4、7、14、30、60、90 d为观测横坐标,在每个坐标交点,a型、c型及ac型样品分别随机抽取2瓶,测定各型别样品在不同条件下的稳定性。结果:在均匀性测定实验中,a型、c型及ac型均表现为各自型别的清晰条带。经稳定性实验测定表明,在4℃条件下,a型、c型和ac型标准样品分别可以稳定存放60、90、30 d;在室温条件下,a型、c型和ac型标准样品分别可以稳定存放7、30、7 d;在37℃条件下,所有样品均可稳定存放1 d。结论:酯酶-3标准样品均匀性良好,符合能力验证标准样品制备、发放和实验的要求;标准样品的稳定性对温度变化比较敏感,应避开高温天气运输或采用冷链运输。 展开更多
关键词 实验室质量管理 能力验证 酯酶-3标准样品 均匀性试验 稳定性试验
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膳食中高n-6/n-3多不饱和脂肪酸比值对小鼠肠道菌群的影响 被引量:8
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作者 张欣 向荣 +5 位作者 李晓曦 林艳 刘珊珊 巩思嘉 潘金顺 赵子建 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第25期4824-4827,4833,共5页
目的:探讨小鼠膳食中高n-6/n-3多不饱和脂肪酸比值对肠道菌群的影响。方法:随机选取健康的30只C57/B6小鼠分为对照组(基础饲料)、花生四烯酸组(基础饲料+10%花生四烯酸)、鱼油组(基础饲料+10%鱼油)。喂食16周,16周后提取小鼠肠道菌群宏... 目的:探讨小鼠膳食中高n-6/n-3多不饱和脂肪酸比值对肠道菌群的影响。方法:随机选取健康的30只C57/B6小鼠分为对照组(基础饲料)、花生四烯酸组(基础饲料+10%花生四烯酸)、鱼油组(基础饲料+10%鱼油)。喂食16周,16周后提取小鼠肠道菌群宏基因组DNA,采用Roche 454测序技术对肠道菌群16Sr RNA基因V3-V5区域进行测序,对菌群的组成结构以及含量的变化进行分析。结果:花生四烯酸组小鼠体内厚壁菌门的含量达到(55.3±5.26)%,与对照组小鼠体内厚壁菌门的含量(30.23±8.75)%相比显著性升高(P<0.05)。并且花生四烯酸组小鼠体内变形菌门的含量(3±0.762)%与对照组(1.5±0.265)%相比也显著性上升(P<0.05)。结论:膳食中高n-6/n-3多不饱和脂肪酸比值会造成小鼠体内肠道菌群组成结构的失衡,导致厚壁菌门以及变形菌门的含量上升。 展开更多
关键词 肠道菌群 多不饱和脂肪酸比值 花生四烯酸
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急性缺血再灌注家兔心肌组织中半胱氨酸蛋白酶-3的表达和细胞凋亡及对心室功能的影响 被引量:5
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作者 武俊芳 许重洁 +1 位作者 范文艳 杨廷桐 《新乡医学院学报》 CAS 2008年第4期325-328,共4页
目的观察家兔急性缺血再灌注后心肌组织中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达和细胞凋亡的变化及对心室功能的影响。方法30只家兔随机分为对照组、缺血组和再灌注组,每组10只。缺血组套扎左冠状动脉前降支30min,再灌注组套扎30min后再灌注... 目的观察家兔急性缺血再灌注后心肌组织中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达和细胞凋亡的变化及对心室功能的影响。方法30只家兔随机分为对照组、缺血组和再灌注组,每组10只。缺血组套扎左冠状动脉前降支30min,再灌注组套扎30min后再灌注120min,对照组游离左冠状动脉前降支不结扎。超声心动图测量左心室收缩功能,原位末端标记检测法(TUNEL)检测细胞凋亡数,反转录-聚合酶连反应(RT-PCR)检测Caspase-3 mRNA的表达,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达。结果缺血组与对照组比较,Caspase-3蛋白表达增高(P<0.05),Caspase-3mRNA表达显著增强(P<0.01),心肌TUNEL阳性细胞数无明显升高(P>0.05),左心室应变率明显降低(P<0.01);再灌注组与缺血组比较,Caspase-3和Caspase-3 mRNA蛋白表达均有所增强(P<0.05),心肌TUNEL阳性数明显增加(P<0.01),左心室应变率有所恢复(P<0.01);再灌注组与对照组比较,各指标均有显著性差异(P<0.01)。结论缺血再灌注激活Caspase-3,导致心肌细胞的凋亡,二者与心室功能的改变存在一定内在联系。 展开更多
关键词 心肌缺血再灌注 半胱氨酸蛋白酶-3 凋亡 心室功能 家兔
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MiR-30e调控心肌肥厚的作用机制研究 被引量:5
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作者 李青 胡斌 +3 位作者 牛鑫 郭尚春 张长青 汪泱 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第20期3804-3806,3813,共4页
目的:预测并鉴定miR-30e的靶基因,阐明miR-30e调控心肌肥厚的分子机制。方法:分离新生大鼠心肌细胞,用苯肾上腺素(PE)处理心肌细胞构建心肌细胞肥大模型,48小时后通过定量PCR方法检测miR-30e的表达水平变化。利用生物信息学方法预测miR-... 目的:预测并鉴定miR-30e的靶基因,阐明miR-30e调控心肌肥厚的分子机制。方法:分离新生大鼠心肌细胞,用苯肾上腺素(PE)处理心肌细胞构建心肌细胞肥大模型,48小时后通过定量PCR方法检测miR-30e的表达水平变化。利用生物信息学方法预测miR-30e的靶基因,并通过荧光素酶报告基因实验和蛋白免疫印迹方法验证miR-30e的靶基因。结果:与对照组相比,PE处理48hr后,心肌肥厚标志基因nppa表达明显升高,肥大心肌细胞中miR-30e明显下调。生物信息学预测细胞骨架调控蛋白Twinfilin-1(Twf1)3'UTR有两个miR-30e的结合位点。过表达miR-30e能抑制含有Twf1 3'UTR的荧光素酶报告基因的表达,降低Twf1的蛋白表达水平。结论:Twf1为miR-30e的靶基因,miR-30e通过抑制Twf1的表达调控心肌肥厚。 展开更多
关键词 心肌肥厚 miR-30e Twf1
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2.45GHz微波辐照后小鼠睾丸Caspase-3 mRNA及凋亡变化的研究 被引量:4
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作者 季惠翔 余争平 +8 位作者 张家华 李新 鄢俊安 沈文浩 魏爱民 郝玉通 张彦文 张广斌 宋波 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第17期3228-3231,共4页
目的:研究2.45GHz微波辐照对小鼠睾丸Caspase-3表达及细胞凋亡诱导作用。方法:采用平均功率密度为65mW/cm2和90mW/cm2的2.45GHz微波辐照小鼠15min,分别于相应时相点取材,采用RT-PCR的方法检测Caspase-3的mRNA表达,用TUNEL方法观察计数... 目的:研究2.45GHz微波辐照对小鼠睾丸Caspase-3表达及细胞凋亡诱导作用。方法:采用平均功率密度为65mW/cm2和90mW/cm2的2.45GHz微波辐照小鼠15min,分别于相应时相点取材,采用RT-PCR的方法检测Caspase-3的mRNA表达,用TUNEL方法观察计数睾丸内细胞的凋亡情况。结果:65mW/cm2及90mW/cm2辐照后Caspase-3mRNA均出现表达升高,65mW/cm2组于12h时达高峰,90mW/cm2组在24h时达到高峰,90mW/cm2升高幅度高于65mW/cm2组;TUNEL结果显示受到微波辐照后,两组小鼠睾丸内均出现凋亡细胞或小体数量增加,但两组之间不存在显著差异。结论:2.45GHz微波能显著促进小鼠睾丸组织Caspase-3mRNA的表达,存在时效和量效依赖关系;2.45GHz微波能显著诱导小鼠睾丸内细胞凋亡,存在时间依赖性。 展开更多
关键词 微波 睾丸 凋亡
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基于RAA-CRISPR/Cas13a技术的小鼠肝炎病毒预警方法的建立与应用
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作者 蔡何清 张旭亮 +3 位作者 陈晓娟 汪洌 戴方伟 李巍 《实验动物科学》 2025年第3期23-29,共7页
目的建立基于环境介质的小鼠肝炎病毒(MHV)快速监测方法,实现实验动物屏障环境的病原早期预警。方法分析MHV的保守序列,对特异重组酶介导等温扩增(RAA)引物及CRISPR/Cas13a反应的crRNA进行设计和优化,建立用于检测MHV的RAA-CRISPR/Cas13... 目的建立基于环境介质的小鼠肝炎病毒(MHV)快速监测方法,实现实验动物屏障环境的病原早期预警。方法分析MHV的保守序列,对特异重组酶介导等温扩增(RAA)引物及CRISPR/Cas13a反应的crRNA进行设计和优化,建立用于检测MHV的RAA-CRISPR/Cas13a检测体系,并验证其特异性、敏感性。为进一步验证其实用性,将该检测体系应用于动物环境粉尘样本的检测。结果针对实验动物生存环境的粉尘样本,建立了基于重组酶介导等温扩增(RAA)结合CRISPR/Cas13a技术的MHV快速检测方法。特异性实验结果表明,该方法对仙台病毒(SeV)、呼肠孤病毒3型(Reo-3)、小鼠肺炎病毒(PVM)、小鼠脑脊髓炎病毒(MEV)及小鼠诺如病毒(MNV)等常见小鼠病毒均无交叉反应;对MHV检测具有高度特异性,最低检测限可达10 copies/μL,具有优越的检测灵敏度。采用PCR法为对照进行临床样本验证,160份随机粉尘样本进行平行检测,两种方法检测结果完全一致,共检出26份核酸阳性样本。结论基于环境粉尘的RAA-CRISPR/Cas13a检测体系为实验动物设施病原监测提供了新的思路及高效灵敏的技术支持。 展开更多
关键词 实验动物 病原预警方法 快速检测 CRISPR/Cas13a MHV
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n-6/n-3多不饱和脂肪酸营养失衡对小鼠精子发生的影响 被引量:3
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作者 丁宁 张欣 +4 位作者 刘姗姗 林艳 李晓曦 李芳红 赵子建 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第21期4001-4006,共6页
目的:探讨n-6/n-3多不饱和脂肪酸营养失衡对小鼠精子发生的影响。方法:健康的30只C57/B6雄鼠随机分为对照组(CON)、高脂组(HF)、花生四烯酸组(HF+AA)。喂食16周,做合笼实验并记录致孕率,通过精子动力分析仪检测小鼠精子活力和数量的变化... 目的:探讨n-6/n-3多不饱和脂肪酸营养失衡对小鼠精子发生的影响。方法:健康的30只C57/B6雄鼠随机分为对照组(CON)、高脂组(HF)、花生四烯酸组(HF+AA)。喂食16周,做合笼实验并记录致孕率,通过精子动力分析仪检测小鼠精子活力和数量的变化,用Elisa试剂盒测血清中睾酮和甘油三酯水平。通过病理组织染色观察小鼠睾丸组织的形态学变化。利用Realtime-PCR的方法检测小鼠睾丸中Dazl基因表达水平的变化。结果:高脂组、花生四烯酸组与对照组相比精子活力[(16±0.01;12.33±2.83 vs72.2±12.73)%,P<0.001],精子数量[(7.5±1.13;6±0.14 vs 13.87±0.35)million/m L,P<0.001],致孕率[(28.57;14.29 vs 78.57)%,P<0.001]及血清睾酮含量[(0.35±0.14;0.27±0.07 vs 3.51±0.7)ng/m L,P<0.001]均显著性降低。高脂组、花生四烯酸组与对照组相比,血清中甘油三酯的含量显著增高[(0.74±0.04;0.74±0.04 vs 0.45±0.04)mmol/L,P<0.001]。病理组织染色观察到花生四烯酸组小鼠睾丸组织出现了明显异形,曲细精管内部的初级精母细胞明显缺失,管腔中从初级精母细胞到精子的发生过程出现了变异,精子的数量也显著性下降。参与精子生成过程中的减数分裂前的有丝分裂增殖期、精原细胞的发育等过程的Dazl基因在高脂组和花生四烯酸组小鼠睾丸中的表达量与对照组相比显著降低(0.87±0.05;0.65±0.03 vs 1.07±0.04,P<0.05)。 展开更多
关键词 精子活力 精子发生障碍 多不饱和脂肪酸
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^(131)I标记Tyr-GX1在荷瘤裸鼠体内分布和显像研究 被引量:2
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作者 李明 殷继鹏 +5 位作者 惠晓丽 康建琴 汪静 马温慧 聂勇战 吴开春 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第9期1601-1604,共4页
目的:设计、合成酪氨酸(Tyr)修饰的肿瘤血管靶向肽GX1,研究131I标记短肽Tyr-GX1在荷人胃癌裸鼠体内的生物学分布与显像,探讨131I-Tyr-GX1短肽作为肿瘤血管靶向诊治药物的可能性。方法:利用Iodogen碘标法对Tyr-GX1进行131I标记,检测其标... 目的:设计、合成酪氨酸(Tyr)修饰的肿瘤血管靶向肽GX1,研究131I标记短肽Tyr-GX1在荷人胃癌裸鼠体内的生物学分布与显像,探讨131I-Tyr-GX1短肽作为肿瘤血管靶向诊治药物的可能性。方法:利用Iodogen碘标法对Tyr-GX1进行131I标记,检测其标记率和体内外稳定性;建立荷人胃癌裸鼠动物模型,尾静脉注射标记肽,分别进行体内生物学分布实验和肿瘤显像实验,结果用PASW Statistics18.0统计软件进行分析。结果:1).纸层析法结果计算表明,131I-Tyr-GX1肽的标记率和放化纯均达90%以上;24 h稳定性测试表明,131I-Tyr-GX1在室温下存放以及与人血清、鼠血清、PBS等溶液混合,其标记率仍然都维持在90%左右,说明其具有良好的体内外稳定性;2).荷瘤裸鼠体内生物学分布研究显示:标记肽在荷瘤裸鼠双肾放射性计数测量最高;其次是肝脏、肿瘤等组织;脑、骨、肌肉组织放射性计数含量较低,给药24 h时,肿瘤/肌肉(T/M)、肿瘤/血液(T/Bl)、肿瘤/脑组织(T/Br)的放射性比值分别是5.78、4.06和23.01;3).体内SPECT显像结果显示:尾静脉注射131I-Tyr-GX1肽后4 h肿瘤部位已开始显影,并随时间的延长,显像逐渐清楚,至18 h时,肿瘤显像最清晰。结论:应用Iodogen碘标法成功标记Tyr-GX1短肽;尾静脉注射131I-Tyr-GX1后,肿瘤部位可以出现放射性浓聚,表明131I-Tyr-GX1短肽可以靶向结合于肿瘤部位,有望成为新一种胃肠道肿瘤诊断与治疗的药物。 展开更多
关键词 131I标记 GX1 生物学分布 SPECT 肿瘤显像
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流体力学注射IL-35质粒对ConA诱导小鼠肝损伤的保护作用 被引量:2
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作者 周艳春 李明才 +2 位作者 牛青霞 柳晓金 谢燕飞 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第6期1097-1099,1068,共4页
目的:观察流体力学注射白细胞介素35(IL-35)质粒对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠肝损伤的干预效果。方法:通过流体力学注射将pcDNA3.1-IL-35导入C57BL/6小鼠体内,对照组注射pcDNA3.1。24h后,以ConA(15mg/kg)尾静脉注射建立小鼠肝损伤模型,... 目的:观察流体力学注射白细胞介素35(IL-35)质粒对刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠肝损伤的干预效果。方法:通过流体力学注射将pcDNA3.1-IL-35导入C57BL/6小鼠体内,对照组注射pcDNA3.1。24h后,以ConA(15mg/kg)尾静脉注射建立小鼠肝损伤模型,检测血清ALT活性和肝组织病理变化。结果:流体力学注射pcDNA3.1-IL-3524h后,肝组织有IL-35mRNA和蛋白的表达。与对照组相比,pcDNA3.1-IL-35预处理组小鼠血清ALT水平明显降低,肝组织病理损伤明显减轻。结论:流体力学注射IL-35质粒对ConA诱导的小鼠肝损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 白细胞介素35 刀豆蛋白A 肝损伤 流体力学注射
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大鼠脑创伤后caspase-3的过度表达与细胞凋亡的关系 被引量:2
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作者 宋朝彦 谢东 +2 位作者 董晓辉 董轩 王春生 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第24期4666-4669,共4页
目的:探讨大鼠脑创伤后海马神经组织中casepase-3表达及其在细胞凋亡中的机制。方法:雄性Wistar大鼠72只随机分成对照组和创伤组,用Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性颅脑创伤,采用免疫组织化学检测海马CA1区神经细胞casepase-3蛋白表达情... 目的:探讨大鼠脑创伤后海马神经组织中casepase-3表达及其在细胞凋亡中的机制。方法:雄性Wistar大鼠72只随机分成对照组和创伤组,用Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性颅脑创伤,采用免疫组织化学检测海马CA1区神经细胞casepase-3蛋白表达情况,原位细胞DNA断裂检测末端标记(TUNEL)法观察大鼠海马CA1区神经细胞凋亡动态变化。同时行TUNEL与caspase-3双标染色。结果:对照组海马区神经细胞casepase-3未见明显表达,创伤组海马CA1区神经细胞casepase-3表达在伤后3小时开始升高,伤后3天达高峰(P<0.01),伤后7天下降明显。对照组海马区未见TUNEL阳性细胞,创伤组海马区TUNEL阳性细胞伤后3小时开始增多,伤后3天达高峰(P<0.01),伤后7天下降。可见创伤组TUNEL染色与caspase-3免疫染色双标阳性的细胞伤后6小时细胞数量逐渐增多,于伤后3天达高峰(P<0.01),伤后7天双标阳性细胞数量下降。Casepase-3表达与TUNEL阳性细胞明显相关(P<0.01)。结论:大鼠脑创伤后casepase-3的过度表达是影响大鼠脑创伤后神经细胞凋亡原因之一,抑制casepase-3活性表达对神经组织起保护作用。 展开更多
关键词 大鼠 颅脑创伤 CASEPASE-3 凋亡
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