霍乱弧菌4种新类型tcpA基因发现及序列分析 被引量：5

1

作者 芮勇宇 阚飙 +1 位作者 高守一 俞守义 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1418-1420,共3页

目的研究中国霍乱弧菌(VC)毒力协同调节菌毛A亚单位基因(tcpA)的多态性.方法分别进行聚合酶链反应及限制性片段长度多态性分析、型特异引物PCR分型、基因测序及序列分析.结果 200株O1群埃尔托型(EVC)产毒株和100株O139群VC产毒株的tcpA... 目的研究中国霍乱弧菌(VC)毒力协同调节菌毛A亚单位基因(tcpA)的多态性.方法分别进行聚合酶链反应及限制性片段长度多态性分析、型特异引物PCR分型、基因测序及序列分析.结果 200株O1群埃尔托型(EVC)产毒株和100株O139群VC产毒株的tcpA基因均与EVC国际标准株N16961株为同一类型(t2型).50株EVC非产毒株中只有3株携带tcpA基因,1株为t2型,另2株为2种新类型.20株O139群VC非产毒株均不携带tcpA基因.20株非O1非O139群VC中只有2株携带tcpA基因,且为2种新类型.4种新类型tcpA基因与国外发现的4种类型比较,基因序列及推测的氨基酸序列同源性分别为58.3%～77.5%和61.0%～85.5%;5′端约102bp基因序列基本一致,推测的氨基酸序列完全一致;3′端约210bp基因序列变异最大,推测的氨基酸序列变异也最大.抗原表位分析,C末端差异最大.结论建立快速准确区分不同类型tcpA基因的方法,并发现4种新类型. 展开更多

关键词 霍乱弧菌 毒力协同调节菌毛A亚单位 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 序列分析

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茯苓酸对SLT-Ⅱe诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌细胞因子的影响 被引量：22

2

作者 周宏超 高立云 +2 位作者 范光丽 刘钟杰 穆祥 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期884-888,共5页

将培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMEC)分为正常对照组、SLT-Ⅱe对照组、不同浓度茯苓酸处理组,采用硝酸还原酶法和ELISA法测定了培养3、6、9和12 h时细胞培养上清液中NO、ET-1、PGI2、TXA2及PAF含量的变化,研究了中药复方有效成分... 将培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMEC)分为正常对照组、SLT-Ⅱe对照组、不同浓度茯苓酸处理组,采用硝酸还原酶法和ELISA法测定了培养3、6、9和12 h时细胞培养上清液中NO、ET-1、PGI2、TXA2及PAF含量的变化,研究了中药复方有效成分茯苓酸对仔猪水肿病的治疗机制。结果显示,1、5、10μg/mL茯苓酸均可下调SLT-Ⅱe诱导的RIMEC NO、TXA2的分泌,10μg/mL茯苓酸可抑制SLT-Ⅱe诱导的RIMEC ET-1的分泌,使其分泌的ET-1含量接近正常水平;不同浓度茯苓酸对SLT-Ⅱe诱导RIMEC过量分泌PGI2、PAF无影响。表明,茯苓酸可通过抑制SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1及TXA2的过量分泌,缓解肠道微循环障碍,阻止血小板聚集,避免微血栓形成,从而达到治疗水肿病的目的。 展开更多

关键词 茯苓酸 志贺样毒素Ⅱ型变异体 大鼠肠黏膜微血管内皮细胞 一氧化氮 内皮素一1 前列环素 血栓素A2 血小板活化因子

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番鸭呼肠孤病毒诱导雏番鸭免疫器官细胞凋亡的研究 被引量：27

3

作者 陈志胜 马春全 +1 位作者 卢玉葵 肖静芸 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期457-458,共2页

以番鸭呼肠孤病毒腿部肌肉接种10龄健康雏番鸭,复制番鸭'花肝病',并研究其不同时期诱导免疫器官细胞凋亡的能力.结果表明,雏番鸭在感染病毒后的12 h、24 h、48 h、72 h、144 h均能观察到胸腺、脾脏、法氏囊细胞凋亡的典型形态... 以番鸭呼肠孤病毒腿部肌肉接种10龄健康雏番鸭,复制番鸭'花肝病',并研究其不同时期诱导免疫器官细胞凋亡的能力.结果表明,雏番鸭在感染病毒后的12 h、24 h、48 h、72 h、144 h均能观察到胸腺、脾脏、法氏囊细胞凋亡的典型形态学变化,在12～24 h达到高峰,72 h后逐渐降低.由此可知,雏番鸭呼肠孤病毒对雏鸭免疫器官的细胞凋亡具有诱导作用.揭示该病毒致病机理与淋巴细胞凋亡从而引起的免疫抑制相关. 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒 雏番鸭 细胞凋亡

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胰岛素、胰高血糖素对体外培养的牛脂肪细胞HSL mRNA和ADPN mRNA丰度的影响 被引量：10

4

作者 丛立新 张才 +2 位作者 车英玉 刘国文 王哲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期741-743,共3页

试验在单层培养的新生犊牛脂肪细胞中,分别添加胰岛素(INS)与胰高血糖素(GN),每个激素设置6个梯度3个重复,通过荧光定量PCR技术,观测2种激素对ADPN mRNA与HSL mRNA丰度的影响。结果表明,胰岛素抑制了脂肪细胞ADPN mRNA与HSL mRNA的表达... 试验在单层培养的新生犊牛脂肪细胞中,分别添加胰岛素(INS)与胰高血糖素(GN),每个激素设置6个梯度3个重复,通过荧光定量PCR技术,观测2种激素对ADPN mRNA与HSL mRNA丰度的影响。结果表明,胰岛素抑制了脂肪细胞ADPN mRNA与HSL mRNA的表达,胰高血糖素促进了ADPN mRNA与HSL mRNA的表达,且ADPNmRNA与HSL mRNA存在相关性。 展开更多

关键词 胰岛素 胰高血糖素 牛脂肪细胞 HSLmRNA ADPNmRNA

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副猪嗜血杆菌蜂胶苗的制备及免疫效果试验 被引量：9

5

作者 赵恒章 赵坤 +3 位作者 余燕 李国旺 马金友 张慧辉 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期72-74,共3页

目的:以原场副猪嗜血杆菌为制苗菌株,制成自家细菌苗,预防本场猪格拉泽氏病。方法:用从河南济源一自繁自养大型养猪场发病猪分离到的副猪嗜血杆菌进行培养,经甲醛灭活,以蜂胶为佐剂,制成原场副猪嗜血杆菌灭活苗,含菌量为200亿/ml。母猪... 目的:以原场副猪嗜血杆菌为制苗菌株,制成自家细菌苗,预防本场猪格拉泽氏病。方法:用从河南济源一自繁自养大型养猪场发病猪分离到的副猪嗜血杆菌进行培养,经甲醛灭活,以蜂胶为佐剂,制成原场副猪嗜血杆菌灭活苗,含菌量为200亿/ml。母猪分别于产前30d和15d各注射4ml/头。仔猪出生后,分别在15、30日龄肌肉注射,1.5ml/头。结果:应用试验证明,该灭活苗保护率达98%。结论:该蜂胶苗安全、可靠,对猪格拉泽氏病有较好的预防作用。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 猪格拉泽氏病 蜂胶苗

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致猪水肿病大肠杆菌鄂E株菌毛F18基因FedF亚基的克隆、表达及其生物学特性 被引量：2

6

作者 刘国平 郭爱珍 +3 位作者 吴斌 钱平 刘正飞 陈焕春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期479-484,共6页

以致猪水肿病大肠杆菌鄂E株为模板,通过PCR的方法扩增大肠杆菌菌毛F18主要亚基FedF的全长及去信号肽亚基因FedFs,扩增片段分别为1000、900 bp。将纯化的扩增产物克隆到pMD18-T中,通过酶切鉴定和序列分析表明,含SacⅠ及HindⅢ酶切位点的... 以致猪水肿病大肠杆菌鄂E株为模板,通过PCR的方法扩增大肠杆菌菌毛F18主要亚基FedF的全长及去信号肽亚基因FedFs,扩增片段分别为1000、900 bp。将纯化的扩增产物克隆到pMD18-T中,通过酶切鉴定和序列分析表明,含SacⅠ及HindⅢ酶切位点的基因全长为967 bp,鄂E株FedF基因编码区全长903 bp,编码301个氨基酸,碱基序列同标准株107/86的同源性为100%。与菌毛AF/R1相比,编码的蛋白质没有同源性。利用pGEX-KG分别构建表达载体,SDS-PAGE检测表明FedFc/pGEX-KG无表达带,FedFs/pGEX-KG则有约58 000的特异性表达带;West-ern blotting检测表明重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白GST-FedF免疫新西兰兔所制备的抗血清,能抑制Ee株与刷状缘细胞的粘附。利用表达的蛋白建立了F18的ELISA检测方法,并检测790份临床送检血样,其中536份呈阳性,血清学阳性率为67.8%。结果表明,FedF是猪大肠杆菌病新型疫苗及F18+E.coli感染鉴别诊断的良好候选抗原,通过本试验建立的ELISA方法揭示国内的F18+E.coli感染严重,血清学阳性率高达67.8%。 展开更多

关键词 大肠杆菌 FedF F18基因 克隆 原核表达

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猪尿中克伦特罗残留的ELISA检测研究 被引量：3

7

作者 李艳 张明洲 +2 位作者 陈宗伦 刘军 胡华军 《浙江农业学报》 CSCD 2006年第5期328-332,共5页

对自主开发研制和德国r-Biopharm公司的p兴奋剂酶联免疫（EUSA）试剂盒的标准曲线线性范围、斜率、B／岛抑制浓度、板内变异系数、板间变异系数、阳性检出率、回收率和交叉反应率等进行了比较试验。结果表明：自制试剂盒的线性范围为0．... 对自主开发研制和德国r-Biopharm公司的p兴奋剂酶联免疫（EUSA）试剂盒的标准曲线线性范围、斜率、B／岛抑制浓度、板内变异系数、板间变异系数、阳性检出率、回收率和交叉反应率等进行了比较试验。结果表明：自制试剂盒的线性范围为0．3～8．1ng／ml时，50％抑制率浓度IC50的平均值为0．93ng／ml；板内变异系数小于2．2％；板间变异系数小于13．8％；样品回收率为85％～96％；实际样品检测和德国r-Biopharm公司的试剂盒阴阳性符合率100％；与克伦特罗和甲基克伦特罗交叉反应率均为100％，与沙丁胺醇和特布他林的交叉反应率分别为88％和86％。 展开更多

关键词 克伦特罗 Β-兴奋剂 ELISA试剂盒 猪尿

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一株鸡源性肠球菌的鉴定及耐药机制分析 被引量：3

8

作者 王涛 杜冬冬 +1 位作者 庄燕飞 常维山 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期165-168,共4页

本试验旨在鉴定一株从肉鸡体内分离的广谱耐药菌,并从分子生物学角度对该株细菌的耐药机理进行探讨。根据《常见细菌系统鉴定手册》标准对该菌进行培养特性、生化试验鉴定,设计1对16SrDNA通用引物扩增其16SrDNA并测序鉴定;根据该菌的药... 本试验旨在鉴定一株从肉鸡体内分离的广谱耐药菌,并从分子生物学角度对该株细菌的耐药机理进行探讨。根据《常见细菌系统鉴定手册》标准对该菌进行培养特性、生化试验鉴定,设计1对16SrDNA通用引物扩增其16SrDNA并测序鉴定;根据该菌的药物敏感性试验结果设计了12对引物扩增其基因组上耐药基因。细菌培养特性和生化试验结果显示该菌为一株肠球菌,PCR扩增出大小为1465bp的目的片段,药敏试验显示该株细菌耐受多种抗生素,PCR扩增其耐药基因发现存在ant(6)-iv、OXA-10、tetM、CTX-M-1、TEM基因。最终鉴定该株细菌为一株肠球菌,耐药基因的存在是其产生耐药性的原因之一。 展开更多

关键词 肠球菌 鉴定 耐药性 耐药基因

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猪肺炎支原体地方毒株P97-R1基因序列分析及原核表达 被引量：5

9

作者 贾丽艳 高玉花 张映 《中国农学通报》 CSCD 2012年第20期77-82,共6页

为克隆和表达猪肺炎支原体(Myeoplasma hyopneumoniae)地方毒株Z株P97-R1基因,探索不同菌株P97-R1基因的差异及其蛋白作为诊断抗原的可能性。本研究根据GenBank登陆的猪肺炎支原体(Mhp)232株P97基因,使用Primer Permier 5.0和DNAman设... 为克隆和表达猪肺炎支原体(Myeoplasma hyopneumoniae)地方毒株Z株P97-R1基因,探索不同菌株P97-R1基因的差异及其蛋白作为诊断抗原的可能性。本研究根据GenBank登陆的猪肺炎支原体(Mhp)232株P97基因,使用Primer Permier 5.0和DNAman设计引物,以猪肺炎支原体地方毒株Z株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增出了P97-R1基因片段,并将该基因片段连接到T-easy和pET-32a载体上分别进行测序和原核表达。测序结果表明:与参考株232株序列对比分析发现Z株P97-R1区发生了多处碱基突变;经DNAstar软件分析表明Z株包含11个5aa重复序列,232株P97-R1区包含15个5aa重复序列,推测Rl重复序列的差异与菌株毒力强弱有关。Z株P97-R1基因原核表达产物经SDS-PAGE分析,得到了分子量约为30KD的蛋白,经Western-blot鉴定表明该表达蛋白具有免疫原性。这为Mhp的诊断、预防及进一步深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪肺炎支原体 P97-R1 序列分析 原核表达

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恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体的制备 被引量：4

10

作者 邹晓楠 龚云飞 +6 位作者 奚茜 李沐洁 张晓峰 方结红 陈宗伦 王唯芬 张明洲 《安徽农业科学》 CAS 2012年第27期13415-13417,共3页

[目的]制备恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体。[方法]采用活性酯法合成恩诺沙星的人工抗原,并通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE电泳对其进行鉴定。利用免疫原(ENR-BSA)免疫新西兰大白兔,制备抗恩诺沙星的高亲和力和高特异性的多克隆抗体。[结果... [目的]制备恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体。[方法]采用活性酯法合成恩诺沙星的人工抗原,并通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE电泳对其进行鉴定。利用免疫原(ENR-BSA)免疫新西兰大白兔,制备抗恩诺沙星的高亲和力和高特异性的多克隆抗体。[结果]恩诺沙星成功地偶联到载体蛋白上。通过动物免疫,获得了高效价的抗血清,最高效价达到1∶100 000,说明人工抗原成功地诱导机体产生免疫应答。[结论]恩诺沙星的人工抗原合成路线简单易行,可为进一步建立恩诺沙星的免疫检测方法奠定了基础。 展开更多

关键词 恩诺沙星 人工抗原 鉴定 多克隆抗体

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抗禽流感H9亚型血凝素单克隆抗体的抗原结合特性分析 被引量：1

11

作者 唐应华 张评浒 +3 位作者 刘金彪 王海燕 李玉君 刘秀梵 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期348-351,共4页

为了解和确定抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体所针对的抗原表位及今后的确切用途,用竞争性结合ELISA试验结合Western-blotting分析,对10株单克隆抗体的抗原结合特性进行了分析。抗体反应增值结果表明,10株单抗针对的是同一大的抗原... 为了解和确定抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体所针对的抗原表位及今后的确切用途,用竞争性结合ELISA试验结合Western-blotting分析,对10株单克隆抗体的抗原结合特性进行了分析。抗体反应增值结果表明,10株单抗针对的是同一大的抗原决定簇,根据增值结果可将10株单抗分成4个亚群。除2A1外,其他9株单抗的ELISA反应增值结果与Western-blot- ting分析结果一致,认为可能是由于2A1与其他9株单抗的免疫原不同所致。 展开更多

关键词 单克隆抗体 竞争性结合ELISA 抗原结合特性 蛋白质印迹法

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应用套式RT-PCR检测SARS患者血液样品中SARS冠状病毒 被引量：1

12

作者 王效义 戴二黑 +15 位作者 杜宗敏 刘海洪 韩延平 庞昕 翟俊辉 江凌晓 陈泽良 邱茂峰 王津 王宏霞 郭兆彪 杨瑞馥 吴清发 李京湘 杨玲 汪建 《生物技术通讯》 CAS 2004年第5期471-473,共3页

建立了套式RT-PCR方法检测SARS患者血液样品中SARS冠状病毒的方法,并检测血液样品257份。同时将RT-PCR与ELISA检测IgG、IgM的方法进行了比较。结果RT-PCR方法的总检出率为72%,IgG总检出率为68%,IgM总检出率为43%。

关键词 检出率 SARS冠状病毒 SARS患者 套式RT-PCR 血液样品 RT-PCR方法 ELISA检测 应用

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H9N2型禽流感病毒传播途径分子机制的研究 被引量：1

13

作者 袁建琴 高斌战 《激光生物学报》 CAS CSCD 2008年第4期509-513,519,共6页

选择禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)A/chicken/Zhuhai/154/2003(H9N2)(AZH154)株作为骨架病毒,与来自A/chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)(SS94)AIV的NA基因和HA基因进行H9N2亚型重排。动物传播性实验发现:AZH154、SS94和3株重排的... 选择禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)A/chicken/Zhuhai/154/2003(H9N2)(AZH154)株作为骨架病毒,与来自A/chicken/Guangdong/SS/94(H9N2)(SS94)AIV的NA基因和HA基因进行H9N2亚型重排。动物传播性实验发现:AZH154、SS94和3株重排的H9N2亚型AIV都可以经直接接触途径传播;5株H9N2 AIV都不经过粪便接触传播;且AZH154株和重组的H9N2亚型AZH154/SSHA能经过气溶胶传播。实验结果表明:AIV(H9N2)的NA基因与该病毒气溶胶传播途径有重要关系,即2003年珠海地区AIV(H9N2)的大流行可能是因为病毒获得气溶胶传播途径的特性,且病毒的NA基因发挥了重要的作用。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 传播途径 基因

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山东省某猪场暴发猪伪狂犬病病毒和支原体肺炎混合感染的调查

14

作者 刘林青 兰邹然 +4 位作者 董雅琴 李艳 李印 张淼洁 翟新验 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期64-66,I0006,共4页

2017年10月15日,山东省某养猪场报告,该场猪群出现大规模咳嗽、气喘等症状,并伴有猪只死亡。经当地县级动物疫病预防控制中心兽医专家到现场核实为该猪场暴发呼吸道疫病,随后调查组到现场开展调查,报告如下。

关键词 猪伪狂犬病病毒 养猪场 支原体肺炎 混合感染 山东 动物疫病预防 控制中心 呼吸道

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动态监测血浆1,3-β-D-葡聚糖评价早产儿真菌性败血症药物疗效的价值

15

作者 李静 庄严 +1 位作者 肖丁良 罗芳梅 《实用临床医药杂志》 CAS 2020年第19期29-33,共5页

目的探讨动态监测1,3-β-D-葡聚糖(BDG)评价早产儿真菌性败血症药物疗效的价值。方法动态监测湖南省儿童医院新生儿重症监护病房(NICU) 2018年1月—2019年12月收治的30例真菌性败血症早产儿的血浆BDG水平。结果抗真菌治疗后,治疗有效患... 目的探讨动态监测1,3-β-D-葡聚糖(BDG)评价早产儿真菌性败血症药物疗效的价值。方法动态监测湖南省儿童医院新生儿重症监护病房(NICU) 2018年1月—2019年12月收治的30例真菌性败血症早产儿的血浆BDG水平。结果抗真菌治疗后,治疗有效患儿28例,其血浆BDG浓度显著降低,其中8例患儿血浆BDG下降至正常水平;2例死亡患儿的血浆BDG呈进行性上升,并处于高水平状态。BDG未降至正常水平患儿的抗菌药物治疗时间长于BDG降至正常水平患儿,差异有统计学意义(P <0.05)。结论动态监测血浆BDG水平可评价所选抗真菌药物的有效性,且在评价真菌性败血症患儿预后方面也有一定的价值。 展开更多

关键词 BDG 真菌性败血症 抗真菌药物 新生儿重症监护病房

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2株鸭源肠球菌的生物学特性的观察

16

作者 韩梅红 谷长勤 《长江大学学报（自科版）（中旬）》 CAS 2007年第3期51-53,共3页

对2株鸭源肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌参考菌株的形态特征、培养特性、生理生化特性、对药物的敏感性等生物学特性进行了初步研究。结果表明,3个被检菌株在光学显微镜下呈球形、革兰氏阳性染色和链状排列方式,能在10℃、45℃和6.5%N... 对2株鸭源肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌参考菌株的形态特征、培养特性、生理生化特性、对药物的敏感性等生物学特性进行了初步研究。结果表明,3个被检菌株在光学显微镜下呈球形、革兰氏阳性染色和链状排列方式,能在10℃、45℃和6.5%NaCl肉汤等条件下生长,能耐热60℃30min,其特性均符合肠球菌属的特征,各菌株生化反应特性均与粪肠球菌特性基本一致,3个菌株均可鉴定为粪肠球菌。药敏试验结果表明,3个菌株均对青霉素、万古霉素、庆大霉素、红霉素和氯霉素敏感而对四环素耐药。 展开更多

关键词 鸭 肠球菌(Enterococcus) 生物学特性

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免疫胶体金技术检测猪繁殖与呼吸综合征

17

作者 徐丽华 李军星 +3 位作者 苏菲 田瑞雨 王赛 袁秀芳 《浙江农业科学》 2018年第6期1028-1032,共5页

采用斑点胶体金技术建立一种快速、简便、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法。运用RT-PCR技术克隆出PRRSV核衣壳蛋白基因,经原核表达与蛋白纯化获得重组的核衣壳蛋白,作为诊断抗原。采用柠檬酸三钠还原法制备了直径为18~20 n... 采用斑点胶体金技术建立一种快速、简便、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法。运用RT-PCR技术克隆出PRRSV核衣壳蛋白基因,经原核表达与蛋白纯化获得重组的核衣壳蛋白,作为诊断抗原。采用柠檬酸三钠还原法制备了直径为18~20 nm的胶体金,对兔抗猪Ig G抗体进行标记后,进一步组装成斑点胶体金免疫检测试剂。经猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)阴性和阳性血清检测,斑点胶体金免疫检测试剂仅与阳性血清发生反应,特异性强,反应30~40 min内就可以在硝酸纤维膜上出现清晰的红色斑点,其灵敏度和Dot-ELISA法相仿。该检测方法可广泛应用于PRRS的临床诊断和流行病学调查,也可作为研究兽医快速诊断的技术基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 斑点胶体金 检测

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猪嵴病毒3C蛋白的原核表达及其结构分析 被引量：3

18

作者 王琛 兰喜 +1 位作者 祝俊鹏 杨彬 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第4期845-853,共9页

为获得猪嵴病毒3C蛋白并了解其晶体结构,本试验以中国西北地区猪嵴病毒swKoV CH441株RNA为模板,通过RT-PCR克隆出3C基因,将其连接到pMD19-T Simple Vector,通过PCR和双酶切鉴定后进行基因序列测定。选择测序正确的质粒经双酶切获得目的... 为获得猪嵴病毒3C蛋白并了解其晶体结构,本试验以中国西北地区猪嵴病毒swKoV CH441株RNA为模板,通过RT-PCR克隆出3C基因,将其连接到pMD19-T Simple Vector,通过PCR和双酶切鉴定后进行基因序列测定。选择测序正确的质粒经双酶切获得目的片段并将其连接到pET-30a载体以构建重组质粒,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,检测3C蛋白的表达情况。结果显示,本试验成功获得全长为576bp的3C基因,可编码192个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,重组菌在37℃经0.5mmol/L IPTG诱导6h时重组蛋白表达量最高,表达的蛋白主要以包涵体的形式存在,大小约为28ku。生物信息学分析结果显示3C蛋白为不稳定的非分泌蛋白,没有跨膜区,有多个磷酸化位点,主要参与蛋白水解过程,不同嵴病毒株间3C序列差异较大。3C蛋白作为小RNA病毒的共同裂解酶,在病毒复制、转录、翻译及多聚蛋白成熟过程中起着极为重要的作用。本研究成功构建了3C蛋白原核表达载体并对其结构进行了预测为进一步制备猪嵴病毒3C蛋白晶体及研究其结构奠定了基础。 展开更多

关键词 猪嵴病毒 3C基因 原核表达 蛋白结构预测

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驴源马疱疹病毒8型ORF72基因原核表达及多克隆抗体制备 被引量：2

19

作者 许丹丹 张敬文 +2 位作者 张健鹏 王长法 刘文强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2023年第1期117-121,共5页

为了获得驴源马疱疹病毒8型ORF72基因编码的糖蛋白D(glycoprotein D,gD)和多克隆抗体,试验根据GenBank上公布的EHV-8 gD基因序列,设计了特异性引物,使用PCR方法扩增得到主要抗原区和跨膜区片段共960 bp,并构建pET-32a-gD960原核表达载... 为了获得驴源马疱疹病毒8型ORF72基因编码的糖蛋白D(glycoprotein D,gD)和多克隆抗体,试验根据GenBank上公布的EHV-8 gD基因序列,设计了特异性引物,使用PCR方法扩增得到主要抗原区和跨膜区片段共960 bp,并构建pET-32a-gD960原核表达载体。将重组质粒pET-32a-gD960转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导并优化表达,获得gD重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定表达产物。使用包涵体蛋白纯化试剂盒纯化gD重组蛋白,并免疫小鼠,共免疫3次,每次间隔2周。三免2周后,通过Western-blot对鼠抗EHV-8 gD多克隆抗体进行鉴定,并使用间接ELISA测定其效价。结果表明:试验成功构建EHV-8 gD960基因表达载体并获得gD重组蛋白,gD重组蛋白分子质量约为65 ku,与预期大小相符,且特异性良好。小鼠血清中鼠抗EHV-8 gD960多克隆抗体效价为1∶16 000,该多克隆抗体可以与EHV-8 gD960蛋白发生免疫反应。说明成功表达了EHV-8 gD960重组蛋白并制备了多克隆抗体,多克隆抗体的效价较高,免疫原性较好。 展开更多

关键词 驴 马疱疹病毒8型 ORF72基因 原核表达 多克隆抗体

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浅谈武术的起源与伏羲的关系

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作者 李子伟 《天水行政学院学报（哲学社会科学版）》 2008年第6期120-123,共4页

武术,旧称"国术",是我国古老的、传统的、最有代表性的"国粹"之一。文章探讨了武术的起源,"开物成务"、观象制器与武械的发明,伏羲创世文明与天水武术的渊源。

关键词 武术 起源 伏羲时代

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