恶苗病是危害性强的水稻常见真菌性病害,严重影响水稻产量。为明确高抗品种响应恶苗病菌的上调差异蛋白质,采用TMT (tandem mass tag)定量蛋白质组学技术比较感染恶苗病菌前后的蛋白质组,筛选P≤0.05且差异倍数(fold change,FC)>1.2...恶苗病是危害性强的水稻常见真菌性病害,严重影响水稻产量。为明确高抗品种响应恶苗病菌的上调差异蛋白质,采用TMT (tandem mass tag)定量蛋白质组学技术比较感染恶苗病菌前后的蛋白质组,筛选P≤0.05且差异倍数(fold change,FC)>1.2或<0.83的显著差异表达蛋白质。结果表明,共筛选出124个上调差异表达蛋白质和75个下调差异表达蛋白质。将上调表达的124个蛋白质进行GO(gene ontology)富集分析,得到88个富集条目,其中显著性富集条目4个,包括生物过程2个、分子功能2个,分别为对应激的反应、对氧化应激的反应及过氧化物酶活性、血红素结合,有利于清除水稻芽组织内过氧化物,对细胞起保护作用。KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)富集分析共得到45条通路,其中上调差异蛋白质显著富集通路3条,分别为苯丙素生物合成、次生代谢物的生物合成和苯丙氨酸代谢,有利于提高水稻抗病性。在显著性GO富集的4个条目和KEGG显著性富集的3条通路中,共有的上调差异蛋白质有3个(Os01t0327400-01、Os12t0112000-01、Os01t0963000-04),推测这3个上调差异蛋白质是抗恶苗病的关键蛋白。以上研究结果为抗病研究工作提供科学的基础理论依据。展开更多
白喉毒素突变体蛋白(cross-reacting material 197, CRM197)是一种常用的多糖结合疫苗载体,其在大肠杆菌体系中往往以包涵体形式表达。为了改善通过包涵体复性来制备CRM197而导致的收率低、操作烦琐等不足,研究设计了一种基于SUMO标签...白喉毒素突变体蛋白(cross-reacting material 197, CRM197)是一种常用的多糖结合疫苗载体,其在大肠杆菌体系中往往以包涵体形式表达。为了改善通过包涵体复性来制备CRM197而导致的收率低、操作烦琐等不足,研究设计了一种基于SUMO标签串联的策略,改善重组CRM197的可溶性,同时使用Origami B (DE3)大肠杆菌宿主,成功使重组CRM197蛋白上清液可溶比例提高至95%以上。同时简化了CRM197蛋白的获取途径,经两步Ni亲和层析和一步酶切除去融合标签等手段建立了从破菌上清液中纯化CRM197的方法,获得纯度高于98%的CRM197且收率大于80%。通过圆二色光谱及荧光发射光谱分析等证实纯化所得CRM197空间结构折叠正确。抗原性ELISA实验结果表明所制得的CRM197蛋白与CRM197标准品蛋白抗原性相当。研究结果表明串联双SUMO标签对重组CRM197在大肠杆菌中高效、可溶表达具有促进作用,并建立了快速纯化体系,获得了具有较好免疫原性的CRM197蛋白,为改善重组蛋白在原核表达体系的可溶表达设计提供了新思路。展开更多
文摘恶苗病是危害性强的水稻常见真菌性病害,严重影响水稻产量。为明确高抗品种响应恶苗病菌的上调差异蛋白质,采用TMT (tandem mass tag)定量蛋白质组学技术比较感染恶苗病菌前后的蛋白质组,筛选P≤0.05且差异倍数(fold change,FC)>1.2或<0.83的显著差异表达蛋白质。结果表明,共筛选出124个上调差异表达蛋白质和75个下调差异表达蛋白质。将上调表达的124个蛋白质进行GO(gene ontology)富集分析,得到88个富集条目,其中显著性富集条目4个,包括生物过程2个、分子功能2个,分别为对应激的反应、对氧化应激的反应及过氧化物酶活性、血红素结合,有利于清除水稻芽组织内过氧化物,对细胞起保护作用。KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)富集分析共得到45条通路,其中上调差异蛋白质显著富集通路3条,分别为苯丙素生物合成、次生代谢物的生物合成和苯丙氨酸代谢,有利于提高水稻抗病性。在显著性GO富集的4个条目和KEGG显著性富集的3条通路中,共有的上调差异蛋白质有3个(Os01t0327400-01、Os12t0112000-01、Os01t0963000-04),推测这3个上调差异蛋白质是抗恶苗病的关键蛋白。以上研究结果为抗病研究工作提供科学的基础理论依据。
文摘白喉毒素突变体蛋白(cross-reacting material 197, CRM197)是一种常用的多糖结合疫苗载体,其在大肠杆菌体系中往往以包涵体形式表达。为了改善通过包涵体复性来制备CRM197而导致的收率低、操作烦琐等不足,研究设计了一种基于SUMO标签串联的策略,改善重组CRM197的可溶性,同时使用Origami B (DE3)大肠杆菌宿主,成功使重组CRM197蛋白上清液可溶比例提高至95%以上。同时简化了CRM197蛋白的获取途径,经两步Ni亲和层析和一步酶切除去融合标签等手段建立了从破菌上清液中纯化CRM197的方法,获得纯度高于98%的CRM197且收率大于80%。通过圆二色光谱及荧光发射光谱分析等证实纯化所得CRM197空间结构折叠正确。抗原性ELISA实验结果表明所制得的CRM197蛋白与CRM197标准品蛋白抗原性相当。研究结果表明串联双SUMO标签对重组CRM197在大肠杆菌中高效、可溶表达具有促进作用,并建立了快速纯化体系,获得了具有较好免疫原性的CRM197蛋白,为改善重组蛋白在原核表达体系的可溶表达设计提供了新思路。
