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题名构建高效糖配体再生重组菌生物催化合成莱鲍迪苷D
被引量：4
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作者
费理文
王勇
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机构
上海市农业科学院食用菌研究所
中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所
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出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第22期116-122,共7页
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基金
国家自然科学基金面上项目(31670099)
中国科学院STS项目(KFJ-SW-STS-164-08)。
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文摘
利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)蔗糖合酶AtSUS3构建活化糖配体尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate glucose,UDPG)再生体系,与高效催化莱鲍迪苷D(rebaudioside D,RD)合成的糖基转移酶协同偶联完成RD的高效生物催化。从拟南芥cDNA克隆获得AtSUS3基因,将其装配至pET28a获得表达质粒pLW105,随后pLW105与携带糖基转移酶EUGT11基因的质粒共转化大肠杆菌BL21(DE3)构建双酶共表达工程菌。在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸(uridine diphosphate,UDP)的条件下,以上述双酶共表达工程菌全细胞催化莱鲍迪苷A(RA)获得的底物摩尔转化率大于80%,RD产量达到930 mg/L。随后构建双酶基因串连质粒pLW108及双酶共表达大肠杆菌BL21(DE3)工程菌。用串连质粒构建的工程菌催化效果与双质粒共转化相同。采用共表达双酶工程菌的发酵破碎粗酶进行催化,结果显示以粗酶催化可简化催化体系,并可将细胞催化体系所需高质量浓度蔗糖用量降至质量浓度5 g/100 mL,同时在不添加外源UDPG的条件下实现RD的高效生物催化,RA底物摩尔转化率达到93%,RD产量约为1 051 mg/L。
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关键词
甜菊糖苷
莱鲍迪苷D
尿苷二磷酸葡萄糖
蔗糖合酶
UDP-糖基转移酶
生物催化
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Keywords
steviol glycosides
rebaudioside D
uridine diphosphate glucose(UDPG)
sucrose synthase
uridine diphosphate glycosyltransferase(UDP-glycosyltransferase)
biocatalysis
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分类号
Q815A
[生物学—生物工程]
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