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3D培养血管基质成分自组装复杂结构血管化成骨类器官
1
作者 吴佳洲 钱陶 +4 位作者 刘泽贤 武艳斌 何莹 李亚洲 彭江 《中国组织工程研究》 北大核心 2026年第11期2681-2690,共10页
背景:相较于2D培养技术,3D培养技术能够更准确地模拟细胞自然生长的体内环境,成为基础科学研究和转化医学领域的关键焦点。目的:通过3D培养技术构建预血管化的成骨类器官。方法:从同一人体脂肪组织中分别分离提取血管基质成分、脂肪间... 背景:相较于2D培养技术,3D培养技术能够更准确地模拟细胞自然生长的体内环境,成为基础科学研究和转化医学领域的关键焦点。目的:通过3D培养技术构建预血管化的成骨类器官。方法:从同一人体脂肪组织中分别分离提取血管基质成分、脂肪间充质干细胞,通过流式细胞学鉴定细胞组分。将血管基质成分、脂肪间充质干细胞分别接种于96孔U型板内,培养3 d后血管基质成分自组装成型、脂肪间充质干细胞成球,培养第14天,通过苏木精-伊红染色与细胞骨架染色观察球体内部结构和细胞形态;培养0,7,14,21 d,Presto Blue实验检测细胞活性;培养3 d后分别进行成骨、成软骨与成脂诱导分化,诱导14 d后,茜素红染色观察成骨分化,阿利新蓝染色观察成软骨分化,油红O染色观察成脂分化,免疫荧光染色共定位成骨诱导后CD31(内皮细胞标志物)、RUNX2(早期成骨标志物)、CD44(间充质干细胞标志物)、Ⅰ型胶原(晚期成骨标志物)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(成脂标志物)的表达,qRT-PCR检测成骨诱导后RUNX2、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原、Sp7转录因子、CD31和血管内皮生长因子mRNA表达。结果与结论:①流式细胞分析表明,血管基质成分包含脂肪间充质干细胞和内皮细胞等多种细胞类型,脂肪间充质干细胞球主要由脂肪间充质干细胞构成;②苏木精-伊红染色及细胞骨架染色显示,相对于脂肪间充质干细胞球,血管基质成分类器官结构更贴近天然组织,细胞排列有序,细胞外基质更丰富;细胞活性测试显示,脂肪间充质干细胞球培养7 d的细胞活性高于血管基质成分类器官(P<0.05),培养21 d的细胞活性低于血管基质成分类器官(P<0.05),说明血管基质成分类器官的细胞活性持续时间更长;③相较于脂肪间充质干细胞球,血管基质成分类器官具有更优的骨、软骨和脂肪形成能力;多色免疫荧光共定位显示,血管基质成分类器官中血管网络和成骨标志物表达丰富,细胞间和细胞-基质相互作用复杂,脂肪间充质干细胞球结构单一且缺乏内皮细胞基因表达;qRT-PCR检测结果显示,血管基质成分类器官中RUNX2、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原、Sp7转录因子、CD31和血管内皮生长因子mRNA表达均高于脂肪间充质干细胞球(P<0.05);④结果表明,血管基质成分类器官具备复杂的生理结构和更强的血管形成和骨形成能力,以及更持久的细胞活性。 展开更多
关键词 三维培养 血管基质成分 脂肪间充质干细胞 内皮细胞 类器官 成骨分化 血管生成 工程化材料
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企业生产任务驱动课程教学任务开发——以“动物细胞培养技术”课程为例
2
作者 刘影 卢洪秀 +4 位作者 徐莉 代书玲 蒋惠男 汤梦远 范丽平 《教育进展》 2025年第12期963-968,共6页
为了培养符合企业需求的动物细胞培养人才,聚焦高职《动物细胞培养技术》课程教学改革。以生物医药企业典型生产任务为切入点,开发“动物细胞培养”教学任务,运用BOPPPS教学模式实施任务教学,有效解决“学校培养与岗位需求脱节”问题。
关键词 动物细胞培养 典型生产任务 教学任务 BOPPPS教学模式
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邻苯二甲酸二丁酯人工抗原合成及单克隆抗体制备
3
作者 刘静静 张琦 +2 位作者 刘雨茹 张文静 李春生 《河北省科学院学报》 2025年第4期47-52,共6页
以邻苯二甲酸二丁酯(DBP)为研究目标,通过重氮化法合成了人工抗原DBAP-KLH、DBAP-BSA,经紫外光谱扫描分析鉴定,证实人工抗原合成成功。动物免疫后,经细胞融合和筛选得到杂交瘤细胞,制备出抗DBP单克隆抗体。研究结果表明,单克隆抗体DBP-... 以邻苯二甲酸二丁酯(DBP)为研究目标,通过重氮化法合成了人工抗原DBAP-KLH、DBAP-BSA,经紫外光谱扫描分析鉴定,证实人工抗原合成成功。动物免疫后,经细胞融合和筛选得到杂交瘤细胞,制备出抗DBP单克隆抗体。研究结果表明,单克隆抗体DBP-2C7具有较高的亲和力和灵敏度,其效价为1∶1024000,对DBP的半数抑制浓度为24.3μg/L。特异性分析显示,该抗体与半抗原的交叉反应率为28.6%,与其他邻苯二甲酸酯类化合物的交叉反应率小于1%。本研究制备了DBP人工抗原和单克隆抗体,为邻苯二甲酸二丁酯免疫测定方法的建立和应用提供了重要的实验依据和基础原料。 展开更多
关键词 邻苯二甲酸二丁酯 单克隆抗体 免疫学检测
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杏组培技术研究进展及其在育种中的应用
4
作者 王维 王毅敏 +4 位作者 吕丽霞 王秀荣 师阳阳 韩丽娜 丁洁 《辽宁农业科学》 2025年第2期81-87,共7页
杏组织培养技术是杏优良品种扩繁保存、新品种选育以及遗传转化体系建立的有效途径。文中综述了近些年来国内外杏组织培养研究现状,涵括了外植体选择及灭菌方法、培养基类型及其添加物、组培所需环境条件及存在问题、育种过程中的应用... 杏组织培养技术是杏优良品种扩繁保存、新品种选育以及遗传转化体系建立的有效途径。文中综述了近些年来国内外杏组织培养研究现状,涵括了外植体选择及灭菌方法、培养基类型及其添加物、组培所需环境条件及存在问题、育种过程中的应用现状以及对杏组培研究的前景展望,旨在对我国杏组培技术的研究进展和存在问题进行梳理并提出相应建议,以资借鉴。 展开更多
关键词 杏 组培技术 遗传转化 研究进展
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3D细胞培养系统在顶复门原虫研究中的应用 被引量：1
5
作者 谢月华 谢福杰 +1 位作者 索勋 闫文朝 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1540-1548,共9页
顶复门原虫包含隐孢子虫、弓形虫、疟原虫、艾美耳球虫等和人类、动物健康相关的寄生虫。它们可以感染广泛的宿主且不易被免疫系统发现,引起急性和慢性疾病。由于其在自然宿主中进行研究的伦理和实际问题,加之顶复门原虫具有复杂的生活... 顶复门原虫包含隐孢子虫、弓形虫、疟原虫、艾美耳球虫等和人类、动物健康相关的寄生虫。它们可以感染广泛的宿主且不易被免疫系统发现,引起急性和慢性疾病。由于其在自然宿主中进行研究的伦理和实际问题,加之顶复门原虫具有复杂的生活史且动物模型建立通常比较困难,使得人们对这些病原体生物学特性的了解仍然有限。最近使用的3D细胞培养系统促进和拓展了顶复门原虫的研究,使人们能模拟宿主-病原体互作,为疫苗开发、药物筛选、寄生虫生物学研究及其他应用提供平台。本综述总结了3D细胞培养系统应用在顶复门原虫研究中的进展,以期为读者从事相关研究提供参考。 展开更多
关键词 3D细胞培养系统 隐孢子虫 弓形虫 疟原虫 艾美耳球虫
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二倍体青钱柳愈伤组织诱导及次生代谢物积累 被引量：1
6
作者 李卓穗 高一琳 +1 位作者 刘寒 尚旭岚 《植物研究》 北大核心 2025年第4期533-545,共13页
为探索激素组合对二倍体青钱柳(Cyclocarya paliurus)愈伤组织诱导和增殖的影响,以及继代增殖过程中主要次生代谢产物的积累规律,该研究以二倍体青钱柳叶片为外植体材料,采用正交试验设计,研究不同激素组合对愈伤组织诱导和继代增殖过... 为探索激素组合对二倍体青钱柳(Cyclocarya paliurus)愈伤组织诱导和增殖的影响,以及继代增殖过程中主要次生代谢产物的积累规律,该研究以二倍体青钱柳叶片为外植体材料,采用正交试验设计,研究不同激素组合对愈伤组织诱导和继代增殖过程中次生代谢物积累的影响,以总三萜、总多酚、总黄酮、粗多糖产量为指标,采用熵权法筛选优良继代配方。处理2(0.5 mg·L^(-1)6-BA+1 mg·L^(-1)2,4-D+0.2 mg·L^(-1)NAA)下二倍体青钱柳愈伤组织诱导率最高,为100%,其次是处理9(2.5 mg·L^(-1)6-BA+1.5 mg·L^(-1)2,4-D+0.2 mg·L^(-1)NAA)和处理5(1.5 mg·L^(-1)6-BA+1 mg·L^(-1)2,4-D+0.4 mg·L^(-1)NAA),愈伤组织诱导率分别为96.67%、93.64%。影响诱导率的因素主次顺序为2,4-D>NAA>6-BA,2,4-D最佳质量浓度为1.0 mg·L^(-1),NAA最佳质量浓度为0.2 mg·L^(-1),6-BA无显著影响;诱导出的愈伤组织颜色有嫩绿色、黄绿色,愈伤组织形态均呈现疏松质地。采用不同激素组合配方进行继代增殖,各处理的愈伤组织生长及代谢产物积累存在差异,同一处理下不同继代增殖过程中愈伤组织生长性状变化也较大;按综合得分排序第1的配方为处理4(0.2 mg·L^(-1)KT+0.5 mg·L^(-1)6-BA+0.75 mg·L^(-1)NAA+0.4 mg·L^(-1)2,4-D),得分为0.44,其次是处理2(0.75 mg·L^(-1)6-BA+0.75 mg·L^(-1)NAA+0.2 mg·L^(-1)2,4-D)和处理6(0.2 mg·L^(-1)KT+1.0 mg·L^(-1)6-BA+0.5 mg·L^(-1)NAA+0.2 mg·L^(-1)2,4-D),综合得分分别为0.31、0.26。处理4下愈伤组织继代培养至第8代时,主要次生代谢物产量普遍达到较高水平,总三萜产量为28.91 mg·瓶-1,总多酚产量为6.89 mg·瓶-1,总黄酮产量为1.77 mg·瓶-1,粗多糖产量为57.45 mg·瓶-1。综上,最佳的二倍体青钱柳愈伤组织诱导配方为MS+0.5 mg·L^(-1)6-BA+1.0 mg·L^(-1)2,4-D+0.2 mg·L^(-1)NAA,继代增殖配方为MS+0.2 mg·L^(-1)KT+0.5 mg·L^(-1)6-BA+0.75 mg·L^(-1)NAA+0.4 mg·L^(-1)2,4-D。该研究可为利用青钱柳愈伤组织培养及进一步的细胞悬浮培养生产次生代谢物提供参考。 展开更多
关键词 青钱柳 愈伤组织诱导 植物激素 继代增殖 次生代谢物
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小鼠骨髓源性巨噬细胞诱导及冻存方法的优化 被引量：1
7
作者 魏琼 赵梦竹 +2 位作者 程序 刘梦华 张冬梅 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第3期611-618,共8页
目的:探讨小鼠骨髓源性巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)诱导及冻存的适宜方法。方法:将小鼠成纤维细胞(L929细胞)于不同温度、接种密度、血清浓度培养条件下培养,ELISA法检测细胞上清中巨噬细胞集落刺激因子(macrophag... 目的:探讨小鼠骨髓源性巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)诱导及冻存的适宜方法。方法:将小鼠成纤维细胞(L929细胞)于不同温度、接种密度、血清浓度培养条件下培养,ELISA法检测细胞上清中巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)浓度;提取小鼠骨髓细胞,细胞差速贴壁法将骨髓细胞预培养4 h,流式细胞术检测骨髓原驻留巨噬细胞比例;使用L929细胞上清或重组M-CSF诱导细胞7 d,倒置显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测诱导后细胞F4/80及CD11b双阳性占比;中性红法及ELISA法检测C57BL/6N和C57BL/6J两种亚型来源BMDMs吞噬能力和炎症反应水平;将提取的骨髓细胞即刻冻存后复苏再诱导,或将已成功诱导的BMDMs冻存后复苏,倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,中性红法检测吞噬能力。结果:33℃、10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)培养7 d条件下的L929细胞上清中富集高浓度M-CSF;骨髓细胞经预培养4 h,贴壁细胞中F4/80+占比显著高于悬浮细胞(P<0.01);经L929上清或重组M-CSF诱导7 d后细胞F4/80+CD11b+占比无显著差异(P>0.05);与C57BL/6J亚型来源BMDMs相比,C57BL/6N亚型来源BMDMs具有更强的吞噬能力(P<0.01),释放较低水平TNF-α(P<0.01)和IL-6(P<0.05),以及较高水平IL-1β(P<0.05);相较于将已成功诱导的BMDMs冻存后复苏,骨髓细胞提取后即刻冻存、复苏再诱导的BMDMs具有更好的巨噬细胞形态,更高的细胞活力(P<0.01)和更强的吞噬能力(P<0.01)。结论:通过33℃、10%FBS培养7 d的L929细胞上清富含更高浓度M-CSF,可成功诱导骨髓细胞分化为小鼠骨髓源性巨噬细胞,细胞差速贴壁法预培养可去除原骨髓驻留巨噬细胞,C57BL/6N和C57BL/6J两种亚型来源BMDMs吞噬能力和炎症反应水平不同,将提取的骨髓细胞即刻冻存后复苏再诱导是较好的BMDMs冻存方法。 展开更多
关键词 小鼠骨髓源性巨噬细胞 原代细胞 成纤维细胞 巨噬细胞集落刺激因子
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小鼠桑椹胚玻璃化冷冻前后生物频谱处理对体外发育的影响 被引量：6
8
作者 朱士恩 王海彦 +4 位作者 曾申明 王永胜 张忠诚 周林 陈锟 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期109-113,共5页
本试验利用周林频谱仪（WS－302）照射玻璃化冷冻前后小鼠桑椹胚，研究对其体外发育的影响，结果表明：胚胎在10％EG溶液中处理5min后移入EFS30中处理1min的二步法冷冻组，解冻后经照射5～20min后的胚胎发育率（95％～100％）与对照组... 本试验利用周林频谱仪（WS－302）照射玻璃化冷冻前后小鼠桑椹胚，研究对其体外发育的影响，结果表明：胚胎在10％EG溶液中处理5min后移入EFS30中处理1min的二步法冷冻组，解冻后经照射5～20min后的胚胎发育率（95％～100％）与对照组（94％）比较无显著性差异（P＞0．05）。当在EFS40中处理1min的一步法冷冻组的胚胎，照射后发育率由对照组的54％提高到97％差异极显著（P＜0.01）。改用GFS40一步法冷冻的胚胎照射后的发育率也明显高于对照组（P＜0．05）。另外，对冷冻前胚胎进行照射，其解冻后发育率（87％）也得到了显著提高（P＜0．01）。 展开更多
关键词 小鼠 桑椹胚 玻璃化冷冻前后 生物频谱处理 体外发育
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马BMSCs成软骨细胞诱导分化及其关键lncRNAs-mRNAs的筛选分析
9
作者 赵方歆 魏奥 +12 位作者 凌宇 房君 朱纯霄 焦如月 赵赟瑶 韩静 吴凯峰 李雪琼 李涛 曹俊伟 周欢敏 张焱如 刘春霞 《中国农业大学学报》 北大核心 2025年第2期94-106,共13页
为进一步筛选BMSCs(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成软骨细胞诱导分化中关键lncRNAs、mRNAs,本研究以马BMSCs为研究对象,对向软骨细胞诱导不同分化阶段的细胞开展全转录组测序,筛选出在BMSCs成软骨细胞分化中具有重要功能... 为进一步筛选BMSCs(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成软骨细胞诱导分化中关键lncRNAs、mRNAs,本研究以马BMSCs为研究对象,对向软骨细胞诱导不同分化阶段的细胞开展全转录组测序,筛选出在BMSCs成软骨细胞分化中具有重要功能的lncRNAs和mRNAs,并对mRNAs和lncRNAs及其靶基因进行验证,并构建lncRNAs对BMSCs成软骨细胞分化的调控网络。结果表明:1)体外成功建立了马BMSCs系,并成功诱导分化成软骨细胞。2)对不同分化阶段的BMSCs进行高通量转录组测序后,共鉴定出3592个lncRNAs,其中,差异高表达的lncRNAs有250个,低表达的116个,差异高表达的mRNAs有280条,低表达的105条。3)筛选并验证了5个调控马BMSCs向软骨细胞诱导分化中的潜在候选因子,包括lnc-cpm、lnc-traf3、lnc-22173、lnc-acvr2a及lnc-pde4d,以及9个对应靶标基因MDM2、TRAF3、USP25、ACVR2A、PDE4D、BCL2、WAF1、SIRT1及NRF2。4)构建了差异表达的lncRNA与mRNA互作调控网络,主要富集于Wnt信号通路、p53信号通路、MAPK及NF-κb信号通路中。综上,本研究经全转录组测序与分析,成功筛选到马BMSCs分化为软骨细胞过程中表达显著的差异基因,可为后续进一步揭示软骨细胞分化过程中lncRNAs与靶基因的互作机制奠定了必要的前期基础,为BMSCs用于软骨修复的细胞治疗提供了科学依据。 展开更多
关键词 马 BMSCS 诱导分化 软骨细胞 lncRNA
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微囊化共培养诱导骨髓间充质干细胞体外定向成骨分化研究 被引量：6
10
作者 刘洋 于滨滨 +2 位作者 王为 马小军 贺欣 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第6期993-999,共7页
为了模拟体内成骨微环境,为骨组织工程提供一种调控干细胞体外向成骨细胞定向分化的共培养新方法,SD大鼠骨髓间充质干细胞和包埋在海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-poly-lysine-alginate,APA)微胶囊中的SD大鼠成骨细胞进行体外共... 为了模拟体内成骨微环境,为骨组织工程提供一种调控干细胞体外向成骨细胞定向分化的共培养新方法,SD大鼠骨髓间充质干细胞和包埋在海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-poly-lysine-alginate,APA)微胶囊中的SD大鼠成骨细胞进行体外共培养。共培养过程中,通过碱性磷酸酶(ALP)定量、定性分析以及钙化结节(von Kossa)染色等手段来评价骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向分化。结果表明在体外微囊化共培养过程中,被诱导细胞的胞内ALP酶活性逐渐高于对照组的干细胞,接近于成骨细胞;ALP以及von Kossa定性染色证实被诱导细胞具有较高的ALP活性以及具有分泌钙基质的能力。微囊化成骨细胞和外部干细胞的共培养体系较好地模拟了体内干细胞向成骨细胞转化的成骨微环境,促进了干细胞向成骨细胞的体外定向分化;微胶囊膜将成骨细胞和干细胞进行了隔离,避免了两者的直接接触和可能的细胞交叉污染混合,同时利于分离目的细胞,这种微囊化共培养体系为骨组织工程提供了一种安全调控干细胞体外成骨定向分化的工程化新方法。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 定向分化 体外共培养 微胶囊
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胚胎的培养液平均拥有量和单独或群体培养对牛体外受精胚胎发育的影响 被引量：5
11
作者 李荣凤 薛晓先 旭日干 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期669-672,共4页
采用化学成分明确的培养系统,研究了胚胎的培养液平均拥有量以及单独或群体培养对牛IVF卵体外发育的影响.将牛体外受精(IVF)卵分别以每100、50和20μl培养液小滴内10枚卵子的形式进行发育培养,三个处理组的囊胚发育率分别为:6.0%、9.4%... 采用化学成分明确的培养系统,研究了胚胎的培养液平均拥有量以及单独或群体培养对牛IVF卵体外发育的影响.将牛体外受精(IVF)卵分别以每100、50和20μl培养液小滴内10枚卵子的形式进行发育培养,三个处理组的囊胚发育率分别为:6.0%、9.4%和14.3%,三者间无显著差异.在此基础上,选择培养效果较好的每枚胚胎2μl的培养液量,分别在20、10、4、2μl小滴内培养10、5、2、1枚胚胎,四个组的囊胚发育率分别为:10.0%、16.4%、10.0%、4.0%,5枚胚胎/10μl小滴处理组的囊胚率显著高于1枚胚胎/2μl处理组(p<0.05).研究结果表明:不同培养液拥有量以及单独或群体培养都可支持部分胚胎发育至囊胚阶段,降低培养液体积和群体培养更有助于牛IVF卵的体外发育. 展开更多
关键词 胚胎发育 牛体外受精胚胎 培养液 平均拥有量 单独培养 群体培养 体外发育
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大鼠和小鼠胃平滑肌细胞的分离、鉴定及原代培养
12
作者 黄佳怡 陈琼 +4 位作者 杨子龙 宗阳 张露蓉 王斐 袁琴 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第8期1658-1664,共7页
目的:建立大鼠和小鼠胃平滑肌细胞的分离、鉴定、原代培养及评价方法。方法:取SD大鼠和C57BL/6小鼠各30只,分别随机分为3组,每组10只,进行3次平行实验,无菌条件下分离原代胃平滑肌细胞。采用形态学观察、免疫荧光与蛋白印迹等方法对分... 目的:建立大鼠和小鼠胃平滑肌细胞的分离、鉴定、原代培养及评价方法。方法:取SD大鼠和C57BL/6小鼠各30只,分别随机分为3组,每组10只,进行3次平行实验,无菌条件下分离原代胃平滑肌细胞。采用形态学观察、免疫荧光与蛋白印迹等方法对分离的细胞进行鉴定,流式细胞术分析细胞纯度,台盼蓝拒染法评价复苏后的细胞活力。结果:分离的大鼠和小鼠原代胃平滑肌细胞呈梭形或多边形;免疫荧光与蛋白印迹结果显示大鼠和小鼠胃平滑肌细胞均能表达α-平滑肌肌动蛋白;流式细胞术结果显示大鼠胃平滑肌细胞中阳性表达率为99.6%,小鼠胃平滑肌细胞中阳性表达率为97.4%。冻存后复苏的大鼠和小鼠胃平滑肌细胞的活细胞率可以达到97%以上。结论:本研究建立了稳定、可靠的大鼠和小鼠原代胃平滑肌细胞分离培养方法与评价指标。 展开更多
关键词 胃平滑肌细胞 鉴定 Α-平滑肌肌动蛋白 原代培养 流式细胞术
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牛体外受精卵与牛胎儿睾丸支持细胞体外共培养研究 被引量：2
13
作者 刘赛 赵云程 +3 位作者 陈静波 海丽且木 赵晓娥 马保华 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第2期23-26,33,共5页
【目的】研究牛胎儿睾丸支持细胞对牛早期胚胎的体外发育是否有促进作用。【方法】从屠宰场采集5-7月龄胎牛睾丸，经原代和传代培养制备牛胎儿睾丸支持细胞（sertoli cells，SCs）饲养层，对比原代和传代胎牛睾丸SCs与牛体外受精卵共培... 【目的】研究牛胎儿睾丸支持细胞对牛早期胚胎的体外发育是否有促进作用。【方法】从屠宰场采集5-7月龄胎牛睾丸，经原代和传代培养制备牛胎儿睾丸支持细胞（sertoli cells，SCs）饲养层，对比原代和传代胎牛睾丸SCs与牛体外受精卵共培养时受精卵的发育情况；分别以4×10^4，2×10^4mL。两个密度接种传代胎牛睾丸SCs与牛受精卵体外共培养，并以培养液中无牛胎儿睾丸SCs饲养层为对照，研究体外牛胎儿睾丸支持细胞（sertoli cells，SCs）对牛受精卵体外发育的影响。【结果】与牛受精卵体外共培养时，接种密度为2×10^4mL^-1传代胎牛睾丸SCs饲养层共培养组的卵裂率（79．3％）高于原代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组（69．2％），但差异不显著（P〉0．05）；囊胚发育率（41．3％）极显著地高于原代SCs饲养层共培养组（16．7％）（P〈0．01）。接种密度为4×10^4mL^-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组的卵裂率大于接种密度为2×10^4mL^-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组和对照组，但差异不显著；胚胎发育率极显著地低于接种密度为2×10^4mL^-1传代牛胎儿睾丸SCs饲养层共培养组和对照组。【结论】制备的传代牛胎儿睾丸SCs饲养层，能有效促进牛体外受精卵的体外发育，提高囊胚发育率；接种的传代牛胎儿睾丸SCs饲养层密度过大，将严重影响牛体外受精卵的发育。 展开更多
关键词 支持细胞 共培养 体外受精卵 牛胎儿
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诱导调节性T细胞抑制缺血性脑卒中神经炎症的研究
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作者 亢天放 马爱青 +5 位作者 陈丽琦 龚含 欧阳佳城 潘璠 潘宏 蔡林涛 《生物化学与生物物理进展》 北大核心 2025年第4期946-956,共11页
目的神经炎症在缺血性脑卒中的发生和发展过程中起着至关重要的作用,并显著影响中枢神经系统的恢复。过度的神经炎症可能导致继发性神经元损伤,进一步加重脑损害并阻碍功能恢复。因此,有效调控和减少脑内神经炎症已成为改善缺血性脑卒... 目的神经炎症在缺血性脑卒中的发生和发展过程中起着至关重要的作用,并显著影响中枢神经系统的恢复。过度的神经炎症可能导致继发性神经元损伤,进一步加重脑损害并阻碍功能恢复。因此,有效调控和减少脑内神经炎症已成为改善缺血性脑卒中预后的关键治疗策略。在众多方法中,通过免疫调节控制炎症反应逐渐受到广泛关注。本研究旨在探讨体外诱导的调节性T细胞(Treg细胞)在抑制缺血性脑卒中后神经炎症中的作用及其潜在的治疗效果。通过研究Treg细胞发挥免疫调节功能的机制,希望为缺血性脑卒中的治疗策略提供新的科学依据。方法采用阴性选择的方法从小鼠脾脏中分离初始CD4+T细胞,以确保高纯度,然后通过添加特定细胞因子在体外诱导其分化为Treg细胞。评估Treg细胞移植在缺血性脑卒中小鼠模型中的抗炎作用及治疗潜力。在大脑中动脉闭塞(MCAO)模型中,移植Treg细胞后,观察其是否能顺利到达脑梗死区域,以及对神经炎症水平的影响。分析细胞因子表达的变化及其对免疫细胞相互作用的影响。测定梗死面积及行为学评分,以评估Treg细胞在神经保护方面的效果。通过整合多种指标,全面探讨Treg细胞在缺血性脑卒中治疗中的潜在优势。结果Treg细胞在体外和体内均显著调节了促炎和抗炎因子的表达水平,有效平衡免疫反应并抑制过度炎症。此外,Treg细胞能够抑制炎症细胞的激活和活性,从而减少神经炎症。在MCAO小鼠模型中,观察到Treg细胞在脑梗死区域富集,显著降低了梗死面积,显示出其神经保护作用。此外,Treg细胞治疗显著改善了行为学评分,提示其对功能恢复的促进作用,并且提高了缺血性脑卒中小鼠的存活率,突出了其作为卒中治疗潜在策略的应用价值。结论体外诱导的Treg细胞能够有效抑制缺血性脑卒中引发的神经炎症,展现出良好的临床应用前景。通过调节促炎和抗炎因子平衡,Treg细胞可抑制神经系统中的免疫反应来减少神经元损伤。Treg细胞还能调控免疫微环境,抑制炎症细胞的激活,促进组织修复。此外,Treg细胞的治疗作用还包括增强卒中后恢复、改善行为学表现以及提高缺血性脑卒中小鼠的存活率。凭借其抑制神经炎症的特性,Treg细胞疗法为缺血性脑卒中的治疗提供了一种新颖且有效的策略,在临床免疫治疗和再生医学领域具有广阔的应用潜力。 展开更多
关键词 调节性T细胞 缺血性脑卒中 神经炎症 细胞治疗 免疫调控
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大鼠骨髓来源的c-met^+β_2m^-细胞向肝细胞样细胞诱导分化的实验研究 被引量：3
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作者 南雪 王韫芳 +5 位作者 尉承泽 梁峰 张锐 岳慧敏 岳文 裴雪涛 《自然科学进展》 北大核心 2006年第1期32-39,共8页
为了观察大鼠骨髓来源的c-met+β2m-细胞在体内外是否可定向诱导分化为肝细胞样细胞,将雄性F344大鼠的c-met+β2m-细胞通过肝门静脉移植入由丙烯醇诱导损伤的F344雌鼠体内,观察移植细胞在受鼠肝内整合、增殖、分化、成熟以及损伤后的修... 为了观察大鼠骨髓来源的c-met+β2m-细胞在体内外是否可定向诱导分化为肝细胞样细胞,将雄性F344大鼠的c-met+β2m-细胞通过肝门静脉移植入由丙烯醇诱导损伤的F344雌鼠体内,观察移植细胞在受鼠肝内整合、增殖、分化、成熟以及损伤后的修复作用;通过模拟丙烯醇肝损伤大鼠体内微环境,将c-met+β2m-细胞与损伤肝细胞共培养,观察了c-met+β2m-细胞的形态变化,并检测了肝细胞特异性蛋白的表达和肝细胞特异性功能的变化．结果表明,大鼠 c-met+β2m-细胞在体内外均可以分化为成熟的有功能的肝细胞,提示微环境在成体干细胞定向诱导分化中起决定性作用,这为骨髓成体干细胞移植治疗各种原因引发的肝功能障碍提供了新的途径． 展开更多
关键词 移植 诱导分化 微环境
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生物3D打印中的雕刻刀:牺牲式墨水的研究与应用进展 被引量：1
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作者 李晶 郭科 《组织工程与重建外科》 2025年第2期188-192,共5页
生物3D打印技术的核心在于生物墨水的开发与优化。长期以来,相关研究一直致力于寻找能够平衡可打印性和细胞活性之间关系的生物墨水。然而,传统的生物墨水往往存在局限性,限制了可打印结构的复杂性和规模。近年来,牺牲式墨水的出现为该... 生物3D打印技术的核心在于生物墨水的开发与优化。长期以来,相关研究一直致力于寻找能够平衡可打印性和细胞活性之间关系的生物墨水。然而,传统的生物墨水往往存在局限性,限制了可打印结构的复杂性和规模。近年来,牺牲式墨水的出现为该领域带来了重大突破,使得原本不太适合打印的生物墨水能够精确地构建出体积更大、更复杂的结构。这种墨水的独特之处在于其被用来支撑和定位生物墨水,但打印完成后会被移除,不作为最终打印结构的一部分,且状态转换和去除条件的温和性,使得在墨水“牺牲”时能够最大限度地减少对细胞的损伤。通过牺牲式墨水的应用,生物3D打印技术不仅能够制造出更加逼真和复杂的组织结构,还有望在未来的临床治疗和再生医学领域提供更广阔的应用前景。 展开更多
关键词 生物打印 牺牲式墨水 生物材料 再生医学
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一种新型冷冻保护剂冻存组织和细胞的效果 被引量：1
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作者 王清芳 张芬 +9 位作者 昌广萍 李子晗 邢岚 彭浩 曾秀萍 钟桂强 陈辉 刘波 刘振宇 梁晓 《中国组织工程研究》 北大核心 2025年第36期7816-7826,共11页
背景:冷冻保存技术能够使组织/细胞于低温环境中长久贮存并维持活性与功能的完整性,这对细胞治疗、组织工程及生物样本库的构建有重大意义。冷冻保护剂常含二甲基亚砜和血清,为规避二甲基亚砜的毒副作用、血清成分的复杂性以及免疫反应... 背景:冷冻保存技术能够使组织/细胞于低温环境中长久贮存并维持活性与功能的完整性,这对细胞治疗、组织工程及生物样本库的构建有重大意义。冷冻保护剂常含二甲基亚砜和血清,为规避二甲基亚砜的毒副作用、血清成分的复杂性以及免疫反应等问题,部分成品冷冻保护剂虽已上市,但面临着成本高、应用受限等诸多难题,因此,迫切需要研发出一种成分明晰且能够解决上述问题的冷冻保护剂。目的:旨在评估一种新型冷冻保护剂对不同来源组织和细胞冻存效果的影响。方法:将新型冷冻保护剂作为实验组,市售及广泛使用的冷冻保护剂作为对照组,分别应用于脐带华通氏胶组织、脐带间充质干细胞、脐血/外周血单个核细胞、NK细胞及CIK细胞冻存,从冻存前和复苏后的细胞形态、数量、活率、表面标志物、分化潜能、细胞杀伤毒性等多方面进行对比分析,确认新型冷冻保护剂的冻存效果及潜在的应用价值。结果与结论:(1)采用新型冷冻保护剂能实现冻存脐带华通氏胶组织复苏后间充质干细胞形态正常,在细胞复苏回收率、表面标志物、分化潜能方面,实验组与对照组均无显著性差异;(2)实验组和对照组脐血/外周血单个核细胞冷冻复苏后的细胞数量和活率无显著性差异,且实验组和对照组NK细胞/CIK细胞冷冻复苏后的细胞数量和活率同样无显著性差异;(3)对于脐血/外周血单个核细胞衍生分化的NK细胞,实验组和对照组CD56^(+)CD16^(+)细胞亚群比例无显著差异,对于脐血/外周血单个核细胞衍生分化的CIK细胞,实验组和对照组CD3^(+)CD8^(+)和CD3^(+)CD56^(+)细胞亚群比例无显著差异;(4)在细胞杀伤毒性方面,当免疫细胞和黑色素瘤细胞系Mel624效靶比为20∶1时,无论是脐血还是外周血单个核细胞衍生分化的NK细胞/CIK细胞,实验组和对照组细胞杀瘤活性无显著差异。结果表明:新型冷冻保护剂能够替代现有的市售和广泛使用的冷冻保护剂,且对于脐带华通氏胶组织、脐带间充质干细胞、脐血/外周血单个核细胞、NK细胞及CIK细胞均适用,为通用冷冻保护剂的规模化、标准化、市场化提供了良好的技术基础。 展开更多
关键词 冷冻保护剂 脐带华通氏胶组织 脐带间充质干细胞 脐血单个核细胞 外周血单个核细胞 NK细胞 CIK细胞
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大桥虎耳草叶片高效再生体系的建立
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作者 韩伟 梁泳欣 +4 位作者 黄倩 谢冬玉 包英华 曾志斌 于白音 《种子》 北大核心 2025年第1期217-224,共8页
以大桥虎耳草组培苗的叶片为外植体,研究植物生长调节剂对叶片愈伤组织和不定芽诱导、不定芽增殖及丛芽生根培养的影响,进一步探讨两种生根方法对幼苗生长的影响,建立了完善的离体培养体系和植株再生体系。结果表明,大桥虎耳草组培苗叶... 以大桥虎耳草组培苗的叶片为外植体,研究植物生长调节剂对叶片愈伤组织和不定芽诱导、不定芽增殖及丛芽生根培养的影响,进一步探讨两种生根方法对幼苗生长的影响,建立了完善的离体培养体系和植株再生体系。结果表明,大桥虎耳草组培苗叶片愈伤组织和不定芽诱导的培养基为1/2 MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,1/2 MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L和1/2 MS+TDZ 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L,愈伤组织诱导率达97.78%以上,芽诱导率达96.67%以上,丛芽诱导率达87.04%以上;不定芽增殖培养基为1/2 MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.2 mg/L,芽增殖系数为4.03;丛芽生根培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L,生根率为100%,生根条数为10.81(组培苗可瓶外生根)。组培苗移栽后生长良好,移栽成活率达95.56%以上。 展开更多
关键词 大桥虎耳草 叶片 愈伤组织诱导 不定芽 再生体系
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不同来源牛血清对流感病毒在细胞中增殖能力的影响
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作者 徐水林 马桂兰 +5 位作者 暴艳敏 马鸣远 丁功涛 周雪雁 张海霞 马忠仁 《特产研究》 2025年第6期1-5,共5页
牛源血清品质对于流感病毒在犬肾上皮细胞(Madin-darbey canine kidney cell,MDCK)中增殖活力具有重要作用。然而,目前牛血清质量对流感疫苗毒株在细胞中增殖的影响尚未见报道。因此,本研究旨在探究不同来源牛血清培养的MDCK细胞对流感... 牛源血清品质对于流感病毒在犬肾上皮细胞(Madin-darbey canine kidney cell,MDCK)中增殖活力具有重要作用。然而,目前牛血清质量对流感疫苗毒株在细胞中增殖的影响尚未见报道。因此,本研究旨在探究不同来源牛血清培养的MDCK细胞对流感病毒增殖的影响。本研究利用季节性流感疫苗株与MDCK细胞作为研究平台,分别通过检测不同来源牛血清培养的MDCK细胞对病毒增殖活力的影响程度。结果表明,虽然类胎牛和新生牛的血清能够维持流感病毒在MDCK细胞中的增殖活力,但与澳洲胎牛血清和民海胎牛血清培养的MDCK细胞相比,其对流感病毒增殖的能力较差。然而,民海胎牛血清所培养的MDCK细胞对流感病毒增殖的能力已接近澳洲胎牛血清。这一发现对于国内相关疫苗企业在生产以MDCK细胞为基质的流感疫苗过程中大大降低生产材料采购的成本,将会有助于生产疫苗时使用的血清国产化。因此,民海胎牛血清和澳洲胎牛血清在品质上的差距不断缩小,对于疫苗生产具有重要的实践意义。 展开更多
关键词 血清 MDCK细胞 培养 增殖 胎牛血清
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低氧环境对组织工程血管移植物胶原蛋白含量的提升作用 被引量：1
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作者 林展翼 肖聪 +3 位作者 许健宜 刘青 孙盱衡 方丽君 《华南理工大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期129-135,共7页
在血管组织工程领域,目前的主要技术方向集中于利用血管平滑肌细胞(VSMCs)在体外增殖和分泌富含胶原蛋白的细胞外基质(ECM),并且施加特定力学刺激重构出具有所需力学性能的生物材料。合适的氧气含量对于体外细胞三维培养至关重要,但在... 在血管组织工程领域,目前的主要技术方向集中于利用血管平滑肌细胞(VSMCs)在体外增殖和分泌富含胶原蛋白的细胞外基质(ECM),并且施加特定力学刺激重构出具有所需力学性能的生物材料。合适的氧气含量对于体外细胞三维培养至关重要,但在组织工程血管移植物(TEVG)应用方面还缺乏足够研究。为此通过设计不同的氧气含量培养环境,对VSMCs增殖活性检测以确定细胞培养的氧气含量最佳值;进而,在常规氧含量和低氧含量下,对胶原蛋白的基因表达和蛋白分泌情况进行检测,并通过羟脯氨酸检测法对沉积在细胞层中的总胶原含量进行定量;最后,在聚乙醇酸(PGA)支架材料上接种VSMCs进行三维培养形成TEVG,通过组织切片染色和总胶原定量来观察低氧环境下TEVG的培养效果。结果显示:7%氧气条件下VSMCs细胞活性增长最快;低氧环境下VSMCs的Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)基因表达有所上调,在第5至第9天可以检测到更多胶原蛋白分泌到细胞培养基中,尤其是ColⅢ,并且第11天细胞层ECM中总胶原蛋白的含量为常氧组的3.1倍;7%氧气条件可促进PGA支架上VSMCs三维培养过程的胶原沉积,与常氧组相比总胶原含量提高至2.09倍,并形成更致密的胶原纤维。结果表明,选择低氧环境可以促进组织工程血管移植物胶原蛋白的含量,可为进一步优化TEVG的体外培养条件提供依据。 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 低氧环境 组织工程血管移植物 胶原蛋白
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