[目的]探究miR-325-3p靶向PRDX4对肾细胞癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。[方法]设肾细胞癌细胞Caki-1组、miR-NC组、miR-325-3p-mimics组(过表达)、miR-325-3p-inhibitor组(低表达),测定各组细胞增殖、单克隆形成数目、凋亡率、侵袭水...[目的]探究miR-325-3p靶向PRDX4对肾细胞癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。[方法]设肾细胞癌细胞Caki-1组、miR-NC组、miR-325-3p-mimics组(过表达)、miR-325-3p-inhibitor组(低表达),测定各组细胞增殖、单克隆形成数目、凋亡率、侵袭水平以及miR-325-3p、PRDX4水平。[结果]miR-325-3p-inhibitor组OD值(0.93±0.03)、存活率(86.58±6.36)%、单克隆形成数目(1062.29±102.78)、穿膜数(1917.34±425.35)、PRDX4 mRNA和蛋白表达水平(4.63±0.28、1.82±0.18)高于miR-325-3p-mimics组[(0.42±0.02)、(42.25±7.20)%、(239.89±35.27)个、(293.85±95.28)个、(2.04±0.24)、(0.38±0.07)](P<0.05),细胞凋亡率(1.12±0.29)%、miR-325-3p表达水平(1.42±0.38)低于miR-325-3p-mimics组(7.14±1.11)%、(5.68±0.37)(P<0.05)。[结论]miR-325-3p上调可以抑制肾细胞癌细胞的增殖(76.59%±7.30%vs 42.25%±7.20%)、迁移侵袭(702.28±111.52 vs 293.85±95.28),同时诱导细胞凋亡(3.46±1.04 vs 7.14±1.11),而这些过程主要是通过miR-325-3p与PRDX4的相互作用实现的。展开更多
[目的]利用shRNA慢病毒载体构建敲低CTNNB1的A549细胞系,检测其对细胞增殖迁移及对趋化因子CCL4表达的影响。[方法]设计靶向CTNNB1基因的shRNA序列,克隆至pLKO.1慢病毒载体中得到重组干扰质粒。运用三质粒系统包装慢病毒;转导A549细胞...[目的]利用shRNA慢病毒载体构建敲低CTNNB1的A549细胞系,检测其对细胞增殖迁移及对趋化因子CCL4表达的影响。[方法]设计靶向CTNNB1基因的shRNA序列,克隆至pLKO.1慢病毒载体中得到重组干扰质粒。运用三质粒系统包装慢病毒;转导A549细胞后用梯度稀释法得到阳性单克隆细胞;采用Western blotting和qRT-PCR检测CTNNB1及其下游基因的mRNA和蛋白质表达水平;采用实时无标记细胞分析实验检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验评估细胞迁移能力。[结果]成功构建稳定敲低CTNNB1的A549细胞系,与A549-shNC相比,A549-shCTNNB1细胞中CTNNB1的mRNA表达降低(1.01±0.05 vs 0.40±0.004,P<0.0001),β-catenin的蛋白表达降低(0.95±0.10 vs 0.47±0.16,P<0.05);细胞增殖有减缓的趋势,增殖相关基因COX2、CCND1、c-MYC的mRNA表达降低(0.978±0.02 vs 0.66±0.09,P<0.01);MMP2/9的mRNA表达降低(0.98±0.001 vs 0.20±0.08,P<0.0001),MMP2/9蛋白表达降低(0.96±0.05 vs 0.70±0.05,P<0.05),细胞迁移能力减弱(0.91±0.02 vs 0.69±0.05,P<0.01);CCL4的mRNA表达上调(1.87±0.39 vs 6.27±0.60,P<0.001)。[结论]敲低CTNNB1的A549细胞增殖速度减缓,迁移能力减弱,且趋化因子CCL4的mRNA表达上调。展开更多
[目的]探讨PAD4通过JAK/STAT3通路调控三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖的潜在机制。[方法]采用乳腺正常细胞系及TNBC细胞系进行实验,通过慢病毒感染TNBC细胞系以敲低或过表达PAD4并使用JAK激动剂和抑制剂处理细胞。使用细胞计数试剂盒(CCK-8...[目的]探讨PAD4通过JAK/STAT3通路调控三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖的潜在机制。[方法]采用乳腺正常细胞系及TNBC细胞系进行实验,通过慢病毒感染TNBC细胞系以敲低或过表达PAD4并使用JAK激动剂和抑制剂处理细胞。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖水平,通过高通量测序和通路分析检测mRNA表达水平,免疫共沉淀检测JAK1分子相互作用,免疫印迹检测JAK和STAT3的磷酸化水平,以及RNA抽取与实时荧光定量PCR分析基因表达。[结果]PAD4在TNBC患者组织中的表达水平高于非TNBC患者(9.49±0.67 vs 14.43±2.30,P<0.05),且中位生存期更长(P<0.05)。敲低PAD4抑制TNBC细胞系的增殖(1.55±0.14 vs 1.00±0.05,P<0.05),而过表达PAD4则促进增殖(1.65±0.14 vs 3.03±0.13,P<0.05)。过表达PAD4使JAK/STAT3通路活性上升,表现为JAK和STAT3的磷酸化水平增加;敲低PAD4则使其磷酸化水平下降。使用JAK激动剂处理敲低PAD4的TNBC细胞系或使用JAK抑制剂处理过表达PAD4的TNBC细胞系后,细胞增殖水平无变化。[结论]PAD4在TNBC中高表达并通过激活JAK/STAT3通路促进细胞增殖(1.65±0.14 vs 3.03±0.13)。调控PAD4可能是TNBC治疗的潜在策略。展开更多
文摘[目的]探究miR-325-3p靶向PRDX4对肾细胞癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。[方法]设肾细胞癌细胞Caki-1组、miR-NC组、miR-325-3p-mimics组(过表达)、miR-325-3p-inhibitor组(低表达),测定各组细胞增殖、单克隆形成数目、凋亡率、侵袭水平以及miR-325-3p、PRDX4水平。[结果]miR-325-3p-inhibitor组OD值(0.93±0.03)、存活率(86.58±6.36)%、单克隆形成数目(1062.29±102.78)、穿膜数(1917.34±425.35)、PRDX4 mRNA和蛋白表达水平(4.63±0.28、1.82±0.18)高于miR-325-3p-mimics组[(0.42±0.02)、(42.25±7.20)%、(239.89±35.27)个、(293.85±95.28)个、(2.04±0.24)、(0.38±0.07)](P<0.05),细胞凋亡率(1.12±0.29)%、miR-325-3p表达水平(1.42±0.38)低于miR-325-3p-mimics组(7.14±1.11)%、(5.68±0.37)(P<0.05)。[结论]miR-325-3p上调可以抑制肾细胞癌细胞的增殖(76.59%±7.30%vs 42.25%±7.20%)、迁移侵袭(702.28±111.52 vs 293.85±95.28),同时诱导细胞凋亡(3.46±1.04 vs 7.14±1.11),而这些过程主要是通过miR-325-3p与PRDX4的相互作用实现的。
文摘[目的]利用shRNA慢病毒载体构建敲低CTNNB1的A549细胞系,检测其对细胞增殖迁移及对趋化因子CCL4表达的影响。[方法]设计靶向CTNNB1基因的shRNA序列,克隆至pLKO.1慢病毒载体中得到重组干扰质粒。运用三质粒系统包装慢病毒;转导A549细胞后用梯度稀释法得到阳性单克隆细胞;采用Western blotting和qRT-PCR检测CTNNB1及其下游基因的mRNA和蛋白质表达水平;采用实时无标记细胞分析实验检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验评估细胞迁移能力。[结果]成功构建稳定敲低CTNNB1的A549细胞系,与A549-shNC相比,A549-shCTNNB1细胞中CTNNB1的mRNA表达降低(1.01±0.05 vs 0.40±0.004,P<0.0001),β-catenin的蛋白表达降低(0.95±0.10 vs 0.47±0.16,P<0.05);细胞增殖有减缓的趋势,增殖相关基因COX2、CCND1、c-MYC的mRNA表达降低(0.978±0.02 vs 0.66±0.09,P<0.01);MMP2/9的mRNA表达降低(0.98±0.001 vs 0.20±0.08,P<0.0001),MMP2/9蛋白表达降低(0.96±0.05 vs 0.70±0.05,P<0.05),细胞迁移能力减弱(0.91±0.02 vs 0.69±0.05,P<0.01);CCL4的mRNA表达上调(1.87±0.39 vs 6.27±0.60,P<0.001)。[结论]敲低CTNNB1的A549细胞增殖速度减缓,迁移能力减弱,且趋化因子CCL4的mRNA表达上调。
文摘[目的]探讨PAD4通过JAK/STAT3通路调控三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖的潜在机制。[方法]采用乳腺正常细胞系及TNBC细胞系进行实验,通过慢病毒感染TNBC细胞系以敲低或过表达PAD4并使用JAK激动剂和抑制剂处理细胞。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖水平,通过高通量测序和通路分析检测mRNA表达水平,免疫共沉淀检测JAK1分子相互作用,免疫印迹检测JAK和STAT3的磷酸化水平,以及RNA抽取与实时荧光定量PCR分析基因表达。[结果]PAD4在TNBC患者组织中的表达水平高于非TNBC患者(9.49±0.67 vs 14.43±2.30,P<0.05),且中位生存期更长(P<0.05)。敲低PAD4抑制TNBC细胞系的增殖(1.55±0.14 vs 1.00±0.05,P<0.05),而过表达PAD4则促进增殖(1.65±0.14 vs 3.03±0.13,P<0.05)。过表达PAD4使JAK/STAT3通路活性上升,表现为JAK和STAT3的磷酸化水平增加;敲低PAD4则使其磷酸化水平下降。使用JAK激动剂处理敲低PAD4的TNBC细胞系或使用JAK抑制剂处理过表达PAD4的TNBC细胞系后,细胞增殖水平无变化。[结论]PAD4在TNBC中高表达并通过激活JAK/STAT3通路促进细胞增殖(1.65±0.14 vs 3.03±0.13)。调控PAD4可能是TNBC治疗的潜在策略。
基金supported by a grant from The National Natural Science Foundation of China (30170914)Research Special Foundation of Higher School of Education Bureau of Liaoning (20060966,2008768,2004D162)~~
