两种快速细菌菌种鉴定方法的比较 被引量：7

1

作者 姜艳彬 王海 +3 位作者 侯东军 杨红菊 李颖 于雷 《中国测试》 CAS 2010年第5期41-44,共4页

采用Riboprinter全自动核糖体RNA指纹分析系统,进行了两株送测细菌的鉴定,同时与16S rDNA序列测定结合生理生化实验的方法进行比较。结果表明,两种方法均成功、快速地完成了送测菌株的鉴定,其分别为大肠杆菌和铜绿假单胞菌。相比而言,Ri... 采用Riboprinter全自动核糖体RNA指纹分析系统,进行了两株送测细菌的鉴定,同时与16S rDNA序列测定结合生理生化实验的方法进行比较。结果表明,两种方法均成功、快速地完成了送测菌株的鉴定,其分别为大肠杆菌和铜绿假单胞菌。相比而言,Riboprinter系统更为简洁,可以在8h内完成未知菌株的鉴定,最大化避免了其他因素对实验的影响,且在鉴定到种的基础上可以进一步分类,进行溯源分析。 展开更多

关键词 分子生物学 菌种鉴定 Riboprinter系统 指纹分析 16SrDNA 理化性质

在线阅读 下载PDF 职称材料

靶向性质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV·Egr-1CDglyTK的构建及转染研究 被引量：11

2

作者 唐瑶云 肖健云 +3 位作者 赵素萍 唐爱发 夏昆 陈主初 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 CAS 2003年第1期34-37,共4页

目的 构建靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK并进行转染研究。方法采用PCR、RT—PCR、融合PCR、酶切、连接等技术构建pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK表达载体,成功转染鼻咽癌CNE—2细胞,绘制细胞相对存活率曲线... 目的 构建靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK并进行转染研究。方法采用PCR、RT—PCR、融合PCR、酶切、连接等技术构建pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK表达载体,成功转染鼻咽癌CNE—2细胞,绘制细胞相对存活率曲线,初步研究该载体在前体药物干预下对CNE—2细胞生长的影响。结果 表达pcDNAA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK的CNE—2细胞在5—FC/GCV干预下生长受到抑制。结论pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK可作为鼻咽癌基因治疗的载体。 展开更多

关键词 基因治疗 EGR-1启动子 CDGLYTK 鼻咽癌

在线阅读 下载PDF 职称材料

表达禽流感病毒H5HA、H7HA基因DNA疫苗的免疫原性研究 被引量：4

3

作者 张芳芳 姜永萍 +3 位作者 刘光亮 陈怀涛 乔传玲 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-5,共5页

为研究双顺反子DNA疫苗对禽流感病毒(AIV)的保护作用,将H5和H7亚型AIV的HA基因克隆到同一表达载体上,构建了双顺反子HA基因表达质粒pCI-H5HA-H7HA。以此质粒肌注免疫4周龄SPF鸡,首次免疫后3周加强免疫,同时设pCI-H5HA和pCI-H7HA联合免... 为研究双顺反子DNA疫苗对禽流感病毒(AIV)的保护作用,将H5和H7亚型AIV的HA基因克隆到同一表达载体上,构建了双顺反子HA基因表达质粒pCI-H5HA-H7HA。以此质粒肌注免疫4周龄SPF鸡,首次免疫后3周加强免疫,同时设pCI-H5HA和pCI-H7HA联合免疫组及空白对照组,每周采血用微量血凝抑制法检测HI抗体。加强免疫后3周分别以100LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)和A/FPV/Rostock/34(H7N1)进行致死性攻击。结果显示各免疫组均可刺激鸡体产生H5、H7特异性抗体,pCI-H5HA-H7HA诱导产生的抗体对H5N1和H7N1的攻毒保护分别为50%和10%,而pCI-H5HA和pCI-H7HA联合免疫的攻毒保护均为70%。表明双顺反子质粒可诱导鸡产生较好或一定的保护,但免疫效果不够理想,推测与DNA的摄取及其体内表达有关,可望通过调整DNA疫苗的多种因素提高免疫效果。 展开更多

关键词 禽流感 H5亚型 H7亚型 HA基因 DNA疫苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

栖热菌属热稳定DNA聚合酶 被引量：11

4

作者 陈朝银 刘丽 贲昆龙 《生物技术》 CAS CSCD 2001年第4期31-34,共4页

关键词 DNA聚合酶 栖热菌属 耐热性 同源性

在线阅读 下载PDF 职称材料

DNA重组酶Cre介导载体间基因的重组转移 被引量：3

5

作者 王文棋 盖颖 +2 位作者 陆海 李义 蒋湘宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1210-1215,共6页

DNA重组酶Cre可以识别LoxP位点,使含有LoxP位点的DNA分子发生重组:2个同向LoxP之间的DNA片段被删除,2个环状DNA分子被整合为一个大分子.基于Cre酶的这些作用特性,构建了一套载体间基因的重组转移体系,在Cre酶的作用下,gfp基因被从基因供... DNA重组酶Cre可以识别LoxP位点,使含有LoxP位点的DNA分子发生重组:2个同向LoxP之间的DNA片段被删除,2个环状DNA分子被整合为一个大分子.基于Cre酶的这些作用特性,构建了一套载体间基因的重组转移体系,在Cre酶的作用下,gfp基因被从基因供体pTLG上切除下来,然后转移到基因受体pET-LoxP上,从而快速、简便地完成了gfp基因高效表达载体pET-gfp的构建.gfp基因在大肠杆菌BL21(DE3)中被诱导表达,使菌落产生了可视的绿色荧光.通过对荧光菌落的计数分析,比较了环状基因供体pTLG和线性基因供体pTLG对有效重组率的影响.使繁琐的传统载体构建变为简单的酶促反应,极大地简化了载体构建步骤,为Cre酶在基因克隆和亚克隆中的应用提供了很好的研究基础. 展开更多

关键词 DNA重组酶Cre 基因供体pTLG 基因受体pET-LoxP GFP基因 绿色荧光菌落

在线阅读 下载PDF 职称材料

ACE基因多态性与老年人原发性高血压的关系 被引量：4

6

作者 巩云霞 庞小芬 +1 位作者 朱理敏 沈戈 《实用老年医学》 CAS 2001年第5期238-240,共3页

目的　探讨血管紧张素Ⅰ转换酶 (ACE)基因多态性与老年人原发性高血压 (EH)的相关性。　 方法　采用一步PCR 3条引物法 ,对 2 87例老年EH(高血压组 )和 30 1例正常老年人 (对照组 )进行ACE基因I/D多态性分型 ,并进行基因型及等位基因频... 目的　探讨血管紧张素Ⅰ转换酶 (ACE)基因多态性与老年人原发性高血压 (EH)的相关性。　 方法　采用一步PCR 3条引物法 ,对 2 87例老年EH(高血压组 )和 30 1例正常老年人 (对照组 )进行ACE基因I/D多态性分型 ,并进行基因型及等位基因频率计数 ,组间采用 χ2 检验进行统计学分析。　 结果 　高血压组DD型基因频率及D等位基因频率分别为 10 4 %和 30 5 %,对照组分别为 9 3 %和 31 2 %,经 χ2 检验 ,2组间无显著差别 (P >0 0 5 )。　 结论 　ACE基因多态性与老年人原发性高血压 (EH)无关。一步PCR 3条引物法更准确可靠 ,可减少DD型错判率。 展开更多

关键词 ACE基因多态性 原发性高血压 靶器官损害 老年人

在线阅读 下载PDF 职称材料

DNA连接酶同工酶的研究进展 被引量：3

7

作者 张波 孟紫强 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期639-641,共3页

DNA连接酶是生物体内重要的酶 ,其所催化的反应在DNA的复制和修复过程中起重要作用 .DNA连接酶分为两大类 :一类是利用ATP的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA连接酶 ,另一类是利用NAD+ 的能量催化两个核苷酸链之... DNA连接酶是生物体内重要的酶 ,其所催化的反应在DNA的复制和修复过程中起重要作用 .DNA连接酶分为两大类 :一类是利用ATP的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖ATP的DNA连接酶 ,另一类是利用NAD+ 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖NAD+ 的DNA连接酶 .研究发现 ,细菌的DNA连接酶都是依赖NAD+ 的 ,且有非常相似的序列和相近的分子质量 ,其酶分子分为两个功能区 :N端区与NAD+ 结合形成酶 腺苷酸中间物 ;C端区催化两条DNA链的连接 .所有真核生物的DNA连接酶都是利用ATP提供能量 ,且一种真核生物含有多种DNA连接酶 ,不同的DNA连接酶催化不同的DNA修复和复制过程 :DNA连接酶Ⅰ的作用是将岗畸片段连接起来形成完整的DNA链以及进行碱基切除修复 (BER) ;DNA连接酶Ⅲ主要是在DNA修复中起作用 ,即催化单核苷酸碱基切除修复 . 展开更多

关键词 蛋白质结构 岗畸片段 DNA修复 DNA复制 DNA连接酶同工酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

不同源性H5亚型禽流感病毒株HA基因序列分析 被引量：1

8

作者 王伟利 肖成蕊 +2 位作者 周宇 刘明 钱爱东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期41-43,共3页

本研究对1株鹅源和一株鸽源的H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因进行扩增、克隆和序列分析。结果表明,所扩增的片段长均为1 707 bp,包含完整的开放阅读框架,编码568个氨基酸;该毒株有7个潜在糖基化位点;在HA裂解位点附近有6个碱性氨基... 本研究对1株鹅源和一株鸽源的H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因进行扩增、克隆和序列分析。结果表明,所扩增的片段长均为1 707 bp,包含完整的开放阅读框架,编码568个氨基酸;该毒株有7个潜在糖基化位点;在HA裂解位点附近有6个碱性氨基酸序列插入。两毒株间核苷酸与氨基酸的同源性均为96.7%。该毒株与参考毒株的序列比较分析结果表明:核苷酸同源率分别为95.3%￣99%;氨基酸同源率分别为95.1%￣99.3%。 展开更多

关键词 鹅 鸽 禽流感病毒 血凝素基因 序列分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

酵母细胞的高效转化方法 被引量：5

9

作者 王正祥 方慧英 诸葛健 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 1998年第3期1-4,共4页

运用醋酸锂处理酵母细胞，建立并优化了酵母完整细胞的高效质粒转化体系，转化率达１０４μｇ－１．通过对影响转化的诸因子的研究，发现载运ＤＮＡ是影响酵母完整细胞转化效率的最主要因素，热休克处理及处理时间、聚乙二醇相对分子质... 运用醋酸锂处理酵母细胞，建立并优化了酵母完整细胞的高效质粒转化体系，转化率达１０４μｇ－１．通过对影响转化的诸因子的研究，发现载运ＤＮＡ是影响酵母完整细胞转化效率的最主要因素，热休克处理及处理时间、聚乙二醇相对分子质量及浓度等对转化率也有显著影响。 展开更多

关键词 酵母细胞 质粒 转化 脱氧核糖核酸

在线阅读 下载PDF 职称材料

SARS相关冠状病毒及与动物冠状病毒的关系 被引量：1

10

作者 张显升 王少杰 +3 位作者 任艳 魏艳丽 李红梅 杨合同 《山东科学》 CAS 2004年第2期19-23,32,共6页

比较了6株人、5株禽、4株鼠、7株牛、2株猫、9株猪、4株犬和5株人非典型肺炎共42株冠状病毒S糖蛋白基因序列。DNAstar软件比较表明,人冠状病毒S基因核苷酸序列同源性介于27 2%～99 5%;禽的介于81 5%～100%;鼠的介于79 5%～89 6%;牛的介... 比较了6株人、5株禽、4株鼠、7株牛、2株猫、9株猪、4株犬和5株人非典型肺炎共42株冠状病毒S糖蛋白基因序列。DNAstar软件比较表明,人冠状病毒S基因核苷酸序列同源性介于27 2%～99 5%;禽的介于81 5%～100%;鼠的介于79 5%～89 6%;牛的介于97 7%～100%;猫的介于56 2%～93 9%;猪的介于54 8%～100%;犬的介于64 9%～98 8%;人非典型肺炎病毒的介于99 9%～100%。非典型肺炎冠状病毒与所有比较的42株序列的同源性均低于30 8%,预示该病毒似乎不是其它病毒株变异进化的结果,而是人类和畜禽从未接触过的一种新型病毒。 展开更多

关键词 SARS病毒 动物冠状病毒 S糖蛋白基因 序列比较

在线阅读 下载PDF 职称材料

一种改良质粒DNA提取方法在实验课中的应用 被引量：2

11

作者 陈春艳 张有福 刘素云 《北方园艺》 CAS 北大核心 2010年第4期147-149,共3页

改良碱裂解质粒DNA提取方法,将溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、无水乙醇的反应时间分别缩短为0、0、10、0 min;用针式滤器除去残余蛋白质,替代了传统的酚/氯仿抽提方式,缩短DNA提取时间,使其在1 h内完成,并减少有毒物质对人体造成的伤害。获得的质粒DN... 改良碱裂解质粒DNA提取方法,将溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、无水乙醇的反应时间分别缩短为0、0、10、0 min;用针式滤器除去残余蛋白质,替代了传统的酚/氯仿抽提方式,缩短DNA提取时间,使其在1 h内完成,并减少有毒物质对人体造成的伤害。获得的质粒DNA质量好、产率高,能满足常规分子生物学实验的要求。 展开更多

关键词 质粒DNA 提取方法 改良

在线阅读 下载PDF 职称材料

TaqDNA聚合酶一步法获得TGF-β_1基因片段的RT-PCR扩增产物 被引量：1

12

作者 刘超 高国全 +1 位作者 区庆嘉 马涧泉 《中山医科大学学报》 CSCD 1997年第3期186-188,共3页

以组织细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，加入ＴａｑＤＮＡ聚合酶和一对以ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ为模板设计的引物，经变性、退火、延伸共３０次循环后，可以得到以ｃＤＮＡ为模板的扩增产物。实验证实ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有逆转录酶活性，... 以组织细胞中提取的总ＲＮＡ为模板，加入ＴａｑＤＮＡ聚合酶和一对以ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ为模板设计的引物，经变性、退火、延伸共３０次循环后，可以得到以ｃＤＮＡ为模板的扩增产物。实验证实ＴａｑＤＮＡ聚合酶具有逆转录酶活性，用一步常规聚合酶链反应即可获取逆转录聚合酶链反应的ＴＧＦβ１４６８ｂｐ扩增产物。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 转化生长因子 β1 基因扩增

在线阅读 下载PDF 职称材料

一种用PUC质粒高效克隆PCR产物的方法 被引量：1

13

作者 叶军 孔杰 《海洋水产研究》 CSCD 1995年第1期72-75,共4页

关键词 聚合酶链反应 克隆 PUC质粒 分子生物学

在线阅读 下载PDF 职称材料

DNA分子标记技术在大麻遗传多样性研究中的应用 被引量：2

14

作者 郭佳 裴黎 +1 位作者 彭建雄 张贵芹 《云南警官学院学报》 2008年第1期53-56,共4页

随着实验方法和研究技术的发展,植物遗传多样性的研究从形态学水平,细胞学水平,生化水平发展到了DNA分子水平。利用这些分析方法,我们可以有效地研究植物的遗传多样性。通过大麻DNA分子标记技术的遗传多样性研究,可获取大麻DNA的遗传标... 随着实验方法和研究技术的发展,植物遗传多样性的研究从形态学水平,细胞学水平,生化水平发展到了DNA分子水平。利用这些分析方法,我们可以有效地研究植物的遗传多样性。通过大麻DNA分子标记技术的遗传多样性研究,可获取大麻DNA的遗传标记及检测方法;我们可以鉴别毒品原植物的品种和产地,帮助公安机关对相关案件的侦破与预防。 展开更多

关键词 分子标记 遗传多样性 大麻 AFLP

在线阅读 下载PDF 职称材料

抑制聚ADP核糖聚合酶1活性的短发夹RNA载体构建

15

作者 沙焱 庄志雄 +4 位作者 何云 胡大林 胡恭华 杨建平 涂晓志 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期10-12,共3页

目的构建抑制人聚ADP核糖聚合酶1(hPARP1)活性的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达载体。方法化学合成2对编码短发夹RNA序列的、靶向hPARP1基因的寡核苷酸,各69对碱基,退火,然后利用BamHⅡ及EcoRⅠ与pSIRENRetroQ载体连接。用EcoRⅠ... 目的构建抑制人聚ADP核糖聚合酶1(hPARP1)活性的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达载体。方法化学合成2对编码短发夹RNA序列的、靶向hPARP1基因的寡核苷酸,各69对碱基,退火,然后利用BamHⅡ及EcoRⅠ与pSIRENRetroQ载体连接。用EcoRⅠ及BglⅡ切取其中U6启动子及下游的shRNA部分,与pEGFPC1载体重组构建pEGFPC1shRNA载体。结果重组构建的pEGFPC1P1、pEGFPC1P2、pEGFPC1N载体经双酶切电泳分析及插入基因片段序列分析,结果表明330个碱基成功插入到预计位点。结论载体的成功构建,为进一步研究聚ADP核糖聚合酶在DNA修复过程中的功能打下基础。 展开更多

关键词 RNAI SHRNA PEGFP-C1

在线阅读 下载PDF 职称材料

端粒酶系统与衰老、寿命关系的研究进展 被引量：1

16

作者 刘明贤 渠立明 《临沂医学专科学校学报》 2003年第4期317-319,共3页

关键词 端粒 端粒酶 寿命 衰老

在线阅读 下载PDF 职称材料

人PNGase片段的克隆表达和多克隆抗体制备

17

作者 赵国杰 郝凤进 +1 位作者 王彪 张丽君 《贵阳医学院学报》 CAS 2008年第1期5-9,共5页

目的:利用分子生物学技术克隆、表达、纯化PNGase的N端片段,并制备其多克隆抗体。方法:利用内切酶从人PNGase全长质粒上切下PNGaseN端97个氨基酸的编码序列克隆入pGEX4t1载体,进行原核系统诱导表达并纯化出目的蛋白,用该蛋白免疫大白兔... 目的:利用分子生物学技术克隆、表达、纯化PNGase的N端片段,并制备其多克隆抗体。方法:利用内切酶从人PNGase全长质粒上切下PNGaseN端97个氨基酸的编码序列克隆入pGEX4t1载体,进行原核系统诱导表达并纯化出目的蛋白,用该蛋白免疫大白兔制备其多克隆抗体,经免疫印记检测。结果:重组的PN-GaseN端片段经测序显示构建成功,制备的抗体可以特异性识别小鼠组织内源性PNGase。结论:本研究结果为进一步的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 分子 克隆 电泳 兔 多肽:PNGase 寡糖酶 抗体制备

在线阅读 下载PDF 职称材料

牛ME1基因cDNA编码序列的克隆与分析

18

作者 李武峰 许尚忠 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第6期567-571,共5页

在NCBI中GenBank里查询已登录的牛的ME1 mRNA序列(GenBank Accession:XM-613987),发现其1-69 bp序列与已知的人、猪和小鼠的ME1基因mRNA序列没有任何相似性,因此,认为这段序列有误。研究利用人的ME1基因mRNA序列作为电子探针共找到44段... 在NCBI中GenBank里查询已登录的牛的ME1 mRNA序列(GenBank Accession:XM-613987),发现其1-69 bp序列与已知的人、猪和小鼠的ME1基因mRNA序列没有任何相似性,因此,认为这段序列有误。研究利用人的ME1基因mRNA序列作为电子探针共找到44段牛的相关ESTs序列,然后利用此ESTs重叠群拼接成的序列设计了三对引物。提取牛的肝脏和肌肉总RNA,从中克隆测序得到M1为525 bp、M2为1039 bp和M3为1171bp的三段序列,拼接成长度为2015 bp的序列。此段序列与前述ESTs重叠群一致序列完全相同,并与人、猪和小鼠的ME1基因mRNA序列相似性分别达89%、85%和84%,从而证实了本序列的正确性。本序列已在NCBI登录(GenBank Accession:FJ495084)。研究为进一步研究牛的ME1基因结构提供了真实的序列信息。 展开更多

关键词 ESTs重叠群 牛 ME1基因 基因克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

基于连接酶检测反应的并行分型系统检测AGT M235T和ACE I/D基因多态性 被引量：5

19

作者 张世扬 肖振贤 +2 位作者 赵建龙 肖君华 曹慧敏 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1050-1054,共5页

基因多态性蕴藏着大量遗传信息,分型技术是研究多态性的主要研究手段。本文建立了一个基于连接酶检测反应的基因多态性并行检测系统,该系统应用连接酶检测反应与基因芯片技术。对AGT M 235T 3种基因型和ACE I/D 3种基因型分型,同直接测... 基因多态性蕴藏着大量遗传信息,分型技术是研究多态性的主要研究手段。本文建立了一个基于连接酶检测反应的基因多态性并行检测系统,该系统应用连接酶检测反应与基因芯片技术。对AGT M 235T 3种基因型和ACE I/D 3种基因型分型,同直接测序分型结果一致。将该系统应用于168份临床样本,经过统计学分析,用卡方检验发现高血压组和正常组AGT M 235T多态性存在显著差异(2χ=6.191,P<0.05),但ACE I/D多态性没有显著差异(χ2=5.241,P>0.05)。 展开更多

关键词 AGT ACE 基因芯片 连接酶检测反应

在线阅读 下载PDF 职称材料

光谱法研究三氯生与人类肿瘤相关DNA的相互作用 被引量：3

20

作者 李莉 鲁嘉 +2 位作者 刘雪梅 李卉卉 杨小弟 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期951-956,共6页

采用紫外光谱、荧光光谱和圆二色谱等多种光谱方法研究了三氯生与人类肿瘤相关DNA(抑癌基因p53 DNA和癌基因C-myc DNA)的相互作用,以期为从分子水平上评价三氯生与人类肿瘤发生的危害性提供科学依据。紫外减色效应、KI猝灭受到抑制及圆... 采用紫外光谱、荧光光谱和圆二色谱等多种光谱方法研究了三氯生与人类肿瘤相关DNA(抑癌基因p53 DNA和癌基因C-myc DNA)的相互作用,以期为从分子水平上评价三氯生与人类肿瘤发生的危害性提供科学依据。紫外减色效应、KI猝灭受到抑制及圆二色谱正负峰强度减弱等结果表明三氯生以弱嵌插模式与两种DNA发生作用,三氯生与DNA的结合位点数均小于1,以及DNA解链温度小幅升高等结果证实三氯生部分嵌插入DNA的沟区,影响了DNA的双螺旋结构。 展开更多

关键词 三氯生 DNA 人类肿瘤 光谱法 相互作用

在线阅读 下载PDF 职称材料