CD20是B细胞淋巴瘤表面标志蛋白,其膜外区是特异性抗体和药物的作用靶点。为了获得靶向CD20的特异性适配体,首先根据密码子简并性对CD20胞外区基因进行优化,使之易于在大肠杆菌中表达;然后将优化后的基因克隆到pGEX-4T-1载体中,转化到...CD20是B细胞淋巴瘤表面标志蛋白,其膜外区是特异性抗体和药物的作用靶点。为了获得靶向CD20的特异性适配体,首先根据密码子简并性对CD20胞外区基因进行优化,使之易于在大肠杆菌中表达;然后将优化后的基因克隆到pGEX-4T-1载体中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达;蛋白纯化后用SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定;通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选出与融合蛋白特异性结合的ssDNA适配体,并用流式细胞术检测适配体与CD20的亲和力;再通过细胞毒性试验检测适配体抑制B淋巴瘤细胞的效果。本研究建立了CD20的原核表达方法,获得了特异性结合CD20胞外区蛋白的适配体,为靶向CD20的治疗药物的开发奠定了基础。展开更多
为探究中华卤虫(Artemia sinica)热激蛋白HSP70的分子功能及其在生态适应中的作用机制,文章以运城盐湖中华卤虫为研究对象,通过RT-PCR扩增获得AsHSP70基因完整开放阅读框(ORF)。将目的片段克隆至pGEX-4T-1表达载体,转化BL21(DE3)plySs...为探究中华卤虫(Artemia sinica)热激蛋白HSP70的分子功能及其在生态适应中的作用机制,文章以运城盐湖中华卤虫为研究对象,通过RT-PCR扩增获得AsHSP70基因完整开放阅读框(ORF)。将目的片段克隆至pGEX-4T-1表达载体,转化BL21(DE3)plySs感受态细胞。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导后可成功表达约98.3 kDa的GST-AsHSP70融合蛋白。通过优化表达条件,发现37℃、1 mM IPTG诱导4 h总蛋白表达量最高;25℃、0.5 mM IPTG诱导4 h可显著提高蛋白产量。文章建立了运城盐湖卤虫AsHSP70基因的高效原核表达体系,为后续解析HSP70在极端环境适应中的分子机制以及开发其作为免疫佐剂的潜在应用提供了技术基础。展开更多
文摘CD20是B细胞淋巴瘤表面标志蛋白,其膜外区是特异性抗体和药物的作用靶点。为了获得靶向CD20的特异性适配体,首先根据密码子简并性对CD20胞外区基因进行优化,使之易于在大肠杆菌中表达;然后将优化后的基因克隆到pGEX-4T-1载体中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达;蛋白纯化后用SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定;通过指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选出与融合蛋白特异性结合的ssDNA适配体,并用流式细胞术检测适配体与CD20的亲和力;再通过细胞毒性试验检测适配体抑制B淋巴瘤细胞的效果。本研究建立了CD20的原核表达方法,获得了特异性结合CD20胞外区蛋白的适配体,为靶向CD20的治疗药物的开发奠定了基础。
文摘为探究中华卤虫(Artemia sinica)热激蛋白HSP70的分子功能及其在生态适应中的作用机制,文章以运城盐湖中华卤虫为研究对象,通过RT-PCR扩增获得AsHSP70基因完整开放阅读框(ORF)。将目的片段克隆至pGEX-4T-1表达载体,转化BL21(DE3)plySs感受态细胞。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导后可成功表达约98.3 kDa的GST-AsHSP70融合蛋白。通过优化表达条件,发现37℃、1 mM IPTG诱导4 h总蛋白表达量最高;25℃、0.5 mM IPTG诱导4 h可显著提高蛋白产量。文章建立了运城盐湖卤虫AsHSP70基因的高效原核表达体系,为后续解析HSP70在极端环境适应中的分子机制以及开发其作为免疫佐剂的潜在应用提供了技术基础。
