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题名Ⅱ型人多巴胺受体逆转录病毒载体的构建及表达
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作者
赵焕英
赵春礼
鲁玲玲
鲁强
刘延英
杨慧
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机构
首都医科大学北京神经科学研究所北京市神经再生修复重点实验室
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出处
《解剖学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第4期356-360,共5页
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基金
北京市自然科学基金B类和北京市教委科技发展规划重点项目(KZ200310025009)
北京市自然科学基金资助项目(7022005)
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文摘
目的构建人全长D2R基因真核表达载体,研究D2R在帕金森病(PD)中的作用和机制。方法将D2RcDNA片段克隆于pLNCX2逆转录病毒载体,转染成纤维包装细胞系PT67,G418筛选单克隆后进行传代培养,通过原位杂交、免疫组织化学和Westernblot检测其表达效果。病毒上清再感染骨髓基质细胞(MSCs),免疫荧光检测D2R基因表达率。结果成功构建了逆转录病毒表达载体pLNCX2_D2R,原位杂交证实D2R基因在PT_67表达的阳性率为80%以上,免疫组织化学检测可见其蛋白分布在胞浆和胞膜,细胞裂解后Westernblot蛋白电泳可检测到约48·84kD的蛋白。经转染D2R基因的PT67细胞能分泌病毒并感染MSCs。结论逆转录病毒介导的D2R基因经PT67细胞包装后,能够产生病毒颗粒,收集含病毒颗粒的上清可进一步感染MSCs,这种经逆转录病毒介导的DR基因可用来作针对帕金森病进行基因治疗的研究。
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关键词
多巴胺D2受体
帕金森病
基因治疗
原位杂交
人
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Keywords
Dopamine D2 receptor
Parkinson disease
Gene therapy
In situ hybridization
Human
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分类号
Q742.5
[生物学—分子生物学]
Q781
[生物学—分子生物学]
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