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多种计算设计策略结合改善α-氨基酸酯酰基转移酶性质的研究
1
作者 田少伟 张婷 +2 位作者 冯丹 王子源 贾红华 《生物加工过程》 2025年第4期405-413,共9页
α-氨基酸酯酰基转移酶(AET)可以氨基酸甲酯为供体,氨基酸为受体进行二肽高效合成。本文以来自Sphingobacterium siyangense SY1的SyAET,通过多种策略进行计算设计和虚拟筛选,以改善其性质。首先通过Alphafold 2构建SyAET的结构模型并... α-氨基酸酯酰基转移酶(AET)可以氨基酸甲酯为供体,氨基酸为受体进行二肽高效合成。本文以来自Sphingobacterium siyangense SY1的SyAET,通过多种策略进行计算设计和虚拟筛选,以改善其性质。首先通过Alphafold 2构建SyAET的结构模型并预测其进化保守性后,采用MAESTROweb、FoldX 5.0、Duet和iDeepddg软件对SyAET进行突变计算筛选,最终得到6个预测突变位点。此后,通过定点突变实验进行突变体构建,对突变体的酶活和热稳定性研究后发现,与野生型酶相对比(纯酶的比酶活为144.80 U/mg),突变体N280M、S54L和Q465L的相对酶活分别提高到163%、152%和217%。在25℃下孵育3.5 h后,突变体Q465L的相对酶活降至初始酶活的一半,而野生型酶则完全失活。此外,突变体Q465L对Ala-OMe的K m要小于SyAET,表明其对Ala-OMe的亲和力增加。 展开更多
关键词 α-氨基酸酯酰基转移酶 二肽 计算设计 突变
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γ-谷氨酰转肽酶的酶学性质及其转肽反应机制 被引量：12
2
作者 汪前 姚忠 +3 位作者 荀志金 徐晓滢 徐虹 韦萍 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第2期288-293,共6页
γ–谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)能专一地催化γ-谷氨酰基的转移,在γ-谷氨酰基类衍生物的合成方面具有重要的应用价值。今利用Bacillus subtilis NX-2发酵生产GGT,上清液中的GGT经硫酸铵沉淀后,以DEAE Sepharose FF和... γ–谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)能专一地催化γ-谷氨酰基的转移,在γ-谷氨酰基类衍生物的合成方面具有重要的应用价值。今利用Bacillus subtilis NX-2发酵生产GGT,上清液中的GGT经硫酸铵沉淀后,以DEAE Sepharose FF和Source15Q两步离子交换进行纯化。以γ-D-Gln-L-Trp(SCV-07)为目的产物,研究了GGT的基本酶学性质,确定了其最适反应温度为40℃,最适pH值10.0,供体/受体浓度为5:7,最适反应时间为4h,产物转化率可高达42%。结合反应进程曲线,分析了GGT的作用机制,并通过实验证实了GGT不仅具有转肽活性,还可催化产物的不可逆水解,这是导致产物回收率下降的关键原因。经测定得到GGT的转肽反应米氏常数(Km)为5.08mmol·L-1,最大反应速率(rmax)为0.034mmol·(min·L)-1;对γ-D-Gln-L-Trp的水解反应米氏常数(Km’)为2.267mmol·L-1,最大反应速率(rmax’)为0.012mmol·(min·L)-1。 展开更多
关键词 Γ-谷氨酰转肽酶 纯化 性质 γ-D-谷氨酰-L-色氨酸 转肽反应机制
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无名质区破坏的Wistar大鼠脑内胆碱乙酰转移酶和生长抑素活性的变化及相互关系 被引量：18
3
作者 吴江 张淑琴 +3 位作者 饶明俐 张昱 朱德志 姚迪 《中风与神经疾病杂志》 CSCD 北大核心 1995年第3期130-132,共3页
本研究选用Ｗｉｓｔａｒ系雄性大鼠，通过向鼠脑的无名质区注射Ｉｂｏｔｅｎｉｃａｃｉｄ，造成中枢胆碱能系统破坏的动物模型。采用放免方法，测定了无名质区破坏后大鼠不同脑区ＣｈＡＴ活性和ＳＳ含量的变化。结果发现：大鼠一侧无名... 本研究选用Ｗｉｓｔａｒ系雄性大鼠，通过向鼠脑的无名质区注射Ｉｂｏｔｅｎｉｃａｃｉｄ，造成中枢胆碱能系统破坏的动物模型。采用放免方法，测定了无名质区破坏后大鼠不同脑区ＣｈＡＴ活性和ＳＳ含量的变化。结果发现：大鼠一侧无名质区破坏后，同侧大脑皮质额叶，顶叶的ＣｈＡＴ活性显著下降，同时同侧额叶、顶叶及海马的ＳＳ含量也明显降低。结果提示：中枢胆碱能系统和生长抑素系统有极密切的关系，无名质区破坏后脑内ＳＳ含量的下降，可能是伴随着胆碱能系统损伤的继发性改变。推测ＳＳ系统可能接受胆碱能系统的传入，参与对学习、记忆的调节。 展开更多
关键词 胆碱乙酰 转移酶 生长抑素 基底神经核 无名质
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肉毒碱棕榈酰基转移酶1A的研究进展 被引量：18
4
作者 魏婷 张永煜 张庆华 《生命科学》 CSCD 2013年第6期614-620,共7页
在真核生物的脂肪酸代谢过程中,肉毒碱棕榈酰基转移酶(carnitine palmitoyltransferase 1A,CPT1A)是长链脂肪酸由胞浆转移到线粒体氧化供能的关键限速酶。CPT1A基因可受到体内多种转录因子、激素以及代谢物的调节,同时影响相关代谢类疾... 在真核生物的脂肪酸代谢过程中,肉毒碱棕榈酰基转移酶(carnitine palmitoyltransferase 1A,CPT1A)是长链脂肪酸由胞浆转移到线粒体氧化供能的关键限速酶。CPT1A基因可受到体内多种转录因子、激素以及代谢物的调节,同时影响相关代谢类疾病的发生发展,是疾病治疗和药物开发的新靶点和热点。全面综述了CPT1A基因在生理过程中的作用和调节,与疾病的相互关系以及相关药物的研究进展。 展开更多
关键词 肉毒碱棕榈酰基转移酶1A 脂肪酸β氧化 长链脂肪酸 代谢性疾病
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应用咖啡因作为探针研究中国人 N-乙酰化酶多态性 被引量：3
5
作者 卢建丰 曹晓梅 +2 位作者 易涛 卓海通 凌树森 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期46-49,共4页
本研究探讨了咖啡因代谢物在Ｎ－乙酰化酶活性评价中的意义。用ＨＰＬＣ法测定咖啡因代谢物，所有代谢物均能良好分离。以５－乙酰胺基－６－甲酰胺基－３－甲基尿嘧啶（ＡＦＭＵ）和１－甲基黄嘌呤（１Ｘ）摩尔浓度比值作为评价Ｎ－乙... 本研究探讨了咖啡因代谢物在Ｎ－乙酰化酶活性评价中的意义。用ＨＰＬＣ法测定咖啡因代谢物，所有代谢物均能良好分离。以５－乙酰胺基－６－甲酰胺基－３－甲基尿嘧啶（ＡＦＭＵ）和１－甲基黄嘌呤（１Ｘ）摩尔浓度比值作为评价Ｎ－乙酰化酶的代谢指标。对１２０名志愿者进行了Ｎ－乙酰化酶多态性分析，受试者可明显划分为快乙酰化和慢乙酰化者，快、慢乙酰化表型之比为１００：２０。与同时用磺胺二甲嘧啶作为探针进行乙酰化分型的结果一致。因此以咖啡因作为探针评价人体Ｎ－乙酰化酶活性，不失为一种可行、简便的方法。 展开更多
关键词 咖啡因 探针 乙酰化酶 多态性
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谷朊粉水解物对微生物谷氨酰胺转胺酶稳定性的影响 被引量：3
6
作者 彭灿 常忠义 +2 位作者 王疆元 袁君宜 高红亮 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第8期171-174,179,共5页
为了比较几种多肽类物质对液体微生物谷氨酰胺酶(TGase)热稳定性的影响,利用复合蛋白酶FV酶解谷朊粉,制备了不同水解程度的谷朊粉水解物(WGPHs),并对添加了WGPHs的TGase热稳定性进行了分析。结果表明,添加一定量的谷朊粉水解物能明显提... 为了比较几种多肽类物质对液体微生物谷氨酰胺酶(TGase)热稳定性的影响,利用复合蛋白酶FV酶解谷朊粉,制备了不同水解程度的谷朊粉水解物(WGPHs),并对添加了WGPHs的TGase热稳定性进行了分析。结果表明,添加一定量的谷朊粉水解物能明显提高谷氨酰胺转胺酶的热稳定性,而水解植物蛋白、蛋白胨的添加对TGase的热稳定性无影响,大豆低聚肽甚至降低了TGase的热稳定性;复合蛋白酶FV水解谷朊粉过程中所产生的水解物-小麦肽具有抗氧化能力;添加水解时间为20 min的谷朊粉水解物到TGase液中,50℃处理2 h后,其酶活残存率为95.90%,较对照高30.90%,但随着水解的进行,谷朊粉水解物对提高TGase热稳定性的作用减小,甚至降低了TGase的热稳定性。由此可见,以谷朊粉水解物作为保护剂,在添加量相同的条件下,水解20 min时的谷朊粉水解物保护效果更佳。 展开更多
关键词 谷朊粉水解物 谷氨酰胺转胺酶 热稳定性 还原力
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香菇谷氨酰胺转氨酶的分离和动力学研究 被引量：2
7
作者 邹佩贞 朱必凤 +2 位作者 彭凌 张钟兰 钟水明 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期46-51,共6页
采用超滤,DEAE-纤维素和SephadexG-100层析,研究了香菇谷氨酰胺转氨酶的制备方法,对酶反应动力学的最适温度、最适pH、酶的稳定性和酶催化激活剂等进行了研究。结果表明,获得了香菇谷氨酰胺转氨酶,经SDS-PAGE电泳检测,为一均一性蛋白;... 采用超滤,DEAE-纤维素和SephadexG-100层析,研究了香菇谷氨酰胺转氨酶的制备方法,对酶反应动力学的最适温度、最适pH、酶的稳定性和酶催化激活剂等进行了研究。结果表明,获得了香菇谷氨酰胺转氨酶,经SDS-PAGE电泳检测,为一均一性蛋白;香菇谷氨酰胺转氨酶酶动力学研究结果显示,最适温度为40℃,酶促反应的Vmax为0.020 4 mg/(mL.min),米氏常数Km为1.520 mg/mL。Na+、Ca2+、Pb2+、K+、Mg2+、Cu2+等离子对酶活影响甚微,为非Ca2+依赖性酶。该酶由2个亚基组成,分子量分别为53 ku和27 ku,pI为5.33。 展开更多
关键词 谷氨酰胺转氨酶 分离纯化 酶学性质 动力学 香菇
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WRK对枯草芽孢杆菌NX-2产出的γ-谷氨酰转肽酶的不可逆抑制动力学 被引量：2
8
作者 肖彦羚 周治 +5 位作者 姚忠 宋希文 佘维娜 刘步云 徐虹 韦萍 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第1期87-92,共6页
γ-谷氨酰转肽酶(GGT;EC2.3.2.2)催化的酰基转移反应可用于制备各种具有生理活性的谷氨酰化合物,对其开展酶活力不可逆抑制动力学研究对于阐明GGT的作用机制具有重要意义。今以化学抑制剂Woodward's Reagent K(WRK)与枯草芽孢杆菌N... γ-谷氨酰转肽酶(GGT;EC2.3.2.2)催化的酰基转移反应可用于制备各种具有生理活性的谷氨酰化合物,对其开展酶活力不可逆抑制动力学研究对于阐明GGT的作用机制具有重要意义。今以化学抑制剂Woodward's Reagent K(WRK)与枯草芽孢杆菌NX-2产出的GGT进行不可逆抑制反应,根据邹氏理论测得WRK对GGT不可逆抑制反应的微观速率常数ki为0.03015s-1,WRK与酶结合常数KI为1.352mmol·L-1。有抑制剂存在下GGT与供体γ-谷氨酰对硝基苯胺的亲和力常数Km*=3.245mmol·L-1,GGT酰基化最大反应速度Vmax*=0.3771mmol·(L·s)-1。通过对GGT的失活动力学分析得到,失活反应级数为1.313,说明在GGT活性部位至少有一个谷氨酸(或天冬氨酸)残基参与催化反应。 展开更多
关键词 γ-谷氨酰转肽酶:不可逆抑制 动力学 WRK
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吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶两种同源异形体的鉴定及性质分析 被引量：1
9
作者 崔文璟 杜坤 +3 位作者 周丽 刘中美 丁旭 周哲敏 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第7期949-953,共5页
目的探讨吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase,EC 2.3.2.13)的两种同源异形体成熟酶TGases A和TGases B的分子差异,并进行系统分析和鉴定。方法吸水链霉菌培养上清液经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化后,将纯化产物... 目的探讨吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase,EC 2.3.2.13)的两种同源异形体成熟酶TGases A和TGases B的分子差异,并进行系统分析和鉴定。方法吸水链霉菌培养上清液经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化后,将纯化产物再经阴离子交换层析,分析纯化产物的分子表面带电性质,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和远紫外圆二色谱(far ultra-violet circular dichroism spectrometry,Far-UV CD)法分析纯化产物的肽段序列及二级结构的差异,并检测成熟酶N-末端氨基酸序列。结果经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化获得TGases的两种成熟酶TGases A和TGases B,均具有酶活性;TGase A和TGase B成熟酶分子具有不同的表面带电性质,酶活分别为(28.33±1.45)U/mg和(22.54±1.77)U/mg;TGases A和TGases B在质荷比(m/z)4 536.481和4 873.393处两个低丰度肽段有差异,但N-末端6个氨基酸序列完全相同;两者二级结构均以α-螺旋为主,但二级结构存在一定差异。结论吸水链霉菌TGases A和TGases B是由同一种酶原活化产生的同源异形体,两者的表面电荷性质、肽段序列及分子二级结构均有差异。 展开更多
关键词 吸水链霉菌 谷氨酰胺转氨酶 同源异形体 酶原
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Ca^(2+)对枯草芽孢杆菌γ-谷氨酰转肽酶活性和热稳定性的影响 被引量：1
10
作者 宋希文 肖彦羚 +3 位作者 周治 姚忠 徐虹 韦萍 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第1期85-90,共6页
γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)可将γ-谷氨酰基从酰基供体催化转移至相应的受体上,形成新的γ-谷氨酰基化合物。今针对GGT稳定性差的缺陷,采用添加Ca2+的方法对其进行稳定化。研究了Ca2+对枯草芽孢杆菌GGT活性及热稳... γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)可将γ-谷氨酰基从酰基供体催化转移至相应的受体上,形成新的γ-谷氨酰基化合物。今针对GGT稳定性差的缺陷,采用添加Ca2+的方法对其进行稳定化。研究了Ca2+对枯草芽孢杆菌GGT活性及热稳定性的影响。以4 mmol·L-1 CaCl2于37℃下处理30 min后,GGT的热稳定性得到了显著改善,且随温度升高Ca2+处理的效果更明显;测定了Ca2+处理后GGT酰基化反应动力学常数Km、Vmax和反应活化能Ea,其值分别为0.23 mmol·L-1,0.015 mmol·L-1·min-1和10.50 kJ·mol-1。与未经Ca2+处理时相比,酰基化反应米氏常数和反应活化能显著降低;GGT的失活反应活化能Ed为60.47 kJ·mol-1,与未加Ca2+时(50.42 kJ·mol-1)相比明显提高。表明Ca2+能提高GGT的活性和热稳定性,有效缓解酶的受热失活。 展开更多
关键词 Γ-谷氨酰转肽酶 热稳定性 CA2+ 反应动力学 活化能
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多肽酰胺化酶的结构与功能 被引量：1
11
作者 刘深基 陈松森 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第3期195-197,共3页
Ｃ端酰胺化是许多神经内分泌多肽重要的翻译后加工过程，是在酰胺化酶的催化下分两步进行的，ＰＨＭ和ＰＡＬ分别催化这两步反应．ＰＨＭ由两个结构相似的结构域组成，每个结构域均为九链β折叠组成的三明治样结构，分别由三个Ｈｉｓ或... Ｃ端酰胺化是许多神经内分泌多肽重要的翻译后加工过程，是在酰胺化酶的催化下分两步进行的，ＰＨＭ和ＰＡＬ分别催化这两步反应．ＰＨＭ由两个结构相似的结构域组成，每个结构域均为九链β折叠组成的三明治样结构，分别由三个Ｈｉｓ或两个Ｈｉｓ和一个Ｍｅｔ螯合一个Ｃｕ组成活性中心．在一个反应周期中，两个Ｃｕ分别独立地与抗坏血酸和分子氧发生单电子传递的氧化还原反应。 展开更多
关键词 多肽酰胺化酶 结构 机制
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卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺乏综合征 被引量：4
12
作者 张庭廷 夏晓凯 《生命的化学》 CAS CSCD 1999年第6期294-296,共3页
关键词 LCAT HDL 动脉粥样硬化 遗传性疾病 基因突变
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一种脑胆碱乙酰基转移酶活性测定法 被引量：2
13
作者 孟繁平 杨康鹃 M.Markerink 《延边医学院学报》 CAS 1995年第2期83-85,共3页
对测定胆碱乙酰基转移酶的Ｆｏｎｎｕｍ法稍加改进，并严格控制操作条件。应用改进的方法测定了大鼠脑胆碱乙酰基转移酶活性，结果更准确。
关键词 胆碱 乙酰基 转移酶 大鼠 活性 测定
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N-乙酰基转移酶表现型及基因型多态性 被引量：1
14
作者 沈建华 林国芳 +1 位作者 项翠琴 顾祖维 《劳动医学》 1999年第1期51-52,共2页
Ｎ－乙酰基转移酶（ＮＡＴｓ）系统酶学名称为乙酰辅酶Ａ－芳香胺Ｎ－乙酰基转移酶（Ｅ．Ｃ．２．３．１．５），ＮＡＴｓ主要催化乙酰基从乙酰辅酶Ａ转向芳香族伯胺或肼的功能基团，生成乙酰胺或乙酰肼。ＮＡＴｓ在芳香胺类外源化合物... Ｎ－乙酰基转移酶（ＮＡＴｓ）系统酶学名称为乙酰辅酶Ａ－芳香胺Ｎ－乙酰基转移酶（Ｅ．Ｃ．２．３．１．５），ＮＡＴｓ主要催化乙酰基从乙酰辅酶Ａ转向芳香族伯胺或肼的功能基团，生成乙酰胺或乙酰肼。ＮＡＴｓ在芳香胺类外源化合物代谢中起重要作用，尤其是与染料生产... 展开更多
关键词 乙酰基转移酶 表现型 基因型 多态性
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肉碱棕榈酰基转移酶Ⅱ缺陷症的生化学研究 被引量：5
15
作者 蔡敏 姚敏 +1 位作者 木户博 姚登兵 《交通医学》 2010年第6期592-595,F0004,共5页
目的:分析肉碱棕榈酰基转移酶Ⅱ(CPTⅡ)缺陷症患者细胞生化学特性,为研究CPTⅡ缺陷导致能量代谢障碍分子机制提供基本数据。方法:通过基因组序列分析,确定CPTⅡ基因突变类型;通过检测CPTⅡ残基酶活性和酶促动力学特征,分析正常和缺陷CP... 目的:分析肉碱棕榈酰基转移酶Ⅱ(CPTⅡ)缺陷症患者细胞生化学特性,为研究CPTⅡ缺陷导致能量代谢障碍分子机制提供基本数据。方法:通过基因组序列分析,确定CPTⅡ基因突变类型;通过检测CPTⅡ残基酶活性和酶促动力学特征,分析正常和缺陷CPTⅡ残基酶两者活性与CPTⅡ基因突变类型间关系;测定两者线粒体脂肪酸β-氧化和ATP生成水平;分析两者细胞膜电位。结果:生化学特性分析结果显示CPTⅡ缺陷症患者细胞的CPTⅡ残基酶活性明显降低,且呈热不稳定性;细胞线粒体脂肪酸β-氧化和ATP生成水平显著不足;细胞膜电位显著较低。结论:CPTⅡ是一个热不稳定蛋白酶,CPTⅡ缺陷导致CPTⅡ残基酶活性明显降低,脂肪酸β-氧化和ATP生成水平显著不足。 展开更多
关键词 肉碱棕榈酰基转移酶Ⅱ缺陷症 酶活性 脂肪酸β-氧化 三磷酸腺苷 膜电位
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大鼠坐骨神经Wallerian溃变的分子机制研究 被引量：2
16
作者 姚登兵 王勇军 顾晓松 《交通医学》 2013年第6期580-584,F0003,共6页
目的:运用基因芯片和蛋白芯片技术及生物信息学分析,系统分析大鼠坐骨神经损伤后远端神经组织Wallerian溃变的差异表达基因和蛋白,从基因和蛋白水平探讨Wallerian溃变的分子机制。方法:建立大鼠损伤坐骨神经远端Wallerian溃变模型,利用... 目的:运用基因芯片和蛋白芯片技术及生物信息学分析,系统分析大鼠坐骨神经损伤后远端神经组织Wallerian溃变的差异表达基因和蛋白,从基因和蛋白水平探讨Wallerian溃变的分子机制。方法:建立大鼠损伤坐骨神经远端Wallerian溃变模型,利用表达谱基因芯片和抗体蛋白芯片,进行表达趋势分析、功能分析、京都基因与基因组百科全书信号通路分析。通过生物信息学方法全面系统分析,大鼠坐骨神经损伤后远端Wallerian溃变的基因和蛋白表达变化。结果:在Wallerian溃变和再生过程中,共有6076个基因差异表达和23种表达趋势,有93个蛋白差异表达,108种信号通路参与形成Wallerian溃变的信号调控网络。结论:大鼠坐骨神经损伤后Wallerian溃变过程中,有大量基因的表达变化和多种关键因子的调控,本研究为进一步阐明Wallerian溃变的分子机制提供了基本数据,为经典的Wallerian溃变学说增添了新的内容。 展开更多
关键词 周围神经损伤 Wallerian溃变 坐骨神经 差异基因 基因芯片 抗体阵列蛋白芯片 生物信息学分析 信号调控网络 大鼠
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利用DNA shuffling技术鉴定草甘膦N-乙酰转移酶抗性相关位点
17
作者 金丹 陈明 +2 位作者 马瑞强 杨志荣 陈建 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2007年第5期110-114,共5页
为研究高抗草甘膦N-乙酰转移酶(glyphosate N-acetyltransferase,GAT)的草甘膦抗性相关位点,以高抗草甘膦的gat1基因和不具草甘膦抗性的gat2基因为出发基因,通过一轮双基因DNA shuffling,获得了抗性较野生型gat1下降的突变体14个:10个... 为研究高抗草甘膦N-乙酰转移酶(glyphosate N-acetyltransferase,GAT)的草甘膦抗性相关位点,以高抗草甘膦的gat1基因和不具草甘膦抗性的gat2基因为出发基因,通过一轮双基因DNA shuffling,获得了抗性较野生型gat1下降的突变体14个:10个单位点突变,3个双位点突变,1个3位点突变。其中,MTGAT3(H41Q)、MTGAT5(S52P)、MTGAT6(I53M)、MTGAT7(F56L)、MTGAT8(R82G)、MTGAT11(I19T/P22L)和MTGAT14(Y70H/L98P/K119E)7个突变体的草甘膦抗性几乎丧失。本工作为深入研究GAT1蛋白分子结构与功能之间的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 草甘膦 草甘膦N-乙酰转移酶 DNA SHUFFLING 点突变
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聚丙烯膜固定化转谷氨酰胺酶的条件优化
18
作者 钱镭 任德财 +3 位作者 韩春然 张娜 刘颖 马永强 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期74-79,共6页
研究了转谷氨酰胺酶在聚丙烯微孔膜上固定化的影响因素。采用响应面分析方法对紫外接枝反应条件进行优化,确定了最佳的膜固定化方法。结果表明,照射距离为10.1 cm,单体浓度为18.85%,二次照射时间为21.4 min时,接枝率可达34.62%。转谷氨... 研究了转谷氨酰胺酶在聚丙烯微孔膜上固定化的影响因素。采用响应面分析方法对紫外接枝反应条件进行优化,确定了最佳的膜固定化方法。结果表明,照射距离为10.1 cm,单体浓度为18.85%,二次照射时间为21.4 min时,接枝率可达34.62%。转谷氨酰胺酶固定化的条件为:己二胺质量分数为20%,胺烷基化时间90 min,胺烷基化温度50℃;戊二醛浓度2%,戊二醛作用时间40 min;酶晶体溶液质量浓度15 mg/mL,4℃条件下固定化时间为24 h。 展开更多
关键词 转谷氨酰胺酶 紫外接枝 固定化
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抑制肝癌细胞N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ表达导致细胞未折叠蛋白质反应
19
作者 张毅 张力 +1 位作者 方欢 申宗侯 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期517-521,共5页
目的探讨N乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnTⅤ)对细胞基因表达和功能的影响。方法用WesternBlot验证GnTⅤ的反义cDNA稳转的细胞株AsGnTⅤ7721(AsGnTⅤSMMC7721)中GnTⅤ表达,用基因芯片技术比较AsGnTⅤ7721与7721(SMMC7721)细胞的基因表达差异... 目的探讨N乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnTⅤ)对细胞基因表达和功能的影响。方法用WesternBlot验证GnTⅤ的反义cDNA稳转的细胞株AsGnTⅤ7721(AsGnTⅤSMMC7721)中GnTⅤ表达,用基因芯片技术比较AsGnTⅤ7721与7721(SMMC7721)细胞的基因表达差异,同时用RTPCR和WesternBlot检测AsGnTⅤ7721细胞中未折叠蛋白质反应信号通路关键分子Bip和XBP1的表达变化。结果基因芯片检测到的AsGnTⅤ7721细胞中的基因表达变化表明,细胞中产生未折叠蛋白质反应。同时AsGnTⅤ7721细胞中未折叠蛋白质反应信号途径中的关键分子Bip的mRNA和蛋白表达升高,XBP1mRNA被剪接。结论GnTⅤ表达受阻能导致细胞产生未折叠蛋白质反应。 展开更多
关键词 未折叠蛋白质反应 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ 肝癌细胞
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酶法测定卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性
20
作者 钱江潮 龚邦强 +1 位作者 曹进新 张嗣良 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期152-155,共4页
催化血浆中游离胆固醇酯化反应的卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)是胆固醇逆向运输过程中的关键酶之一。本研究针对原测定方法中本底过高的问题,改变了对照本底的反应条件,使原反应体系中的前两步酶反应无法进行,最终测得的反应速率真实... 催化血浆中游离胆固醇酯化反应的卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)是胆固醇逆向运输过程中的关键酶之一。本研究针对原测定方法中本底过高的问题,改变了对照本底的反应条件,使原反应体系中的前两步酶反应无法进行,最终测得的反应速率真实地反映了样品中本底(甘油-3-磷酸)的水平。经改进的测定方法除成功地用于人血清测定外,还应用于细胞培养液和兔血清的测定,对于相关药物的研究和筛选具有实际应用价值。 展开更多
关键词 卵磷脂胆固醇酰基转移酶 LCAT 酶活测定 药物筛选 胆固醇 逆向运输 测定方法
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