Taq DNA耐热聚合酶在大肠杆菌中的克隆和高表达 被引量：7

1

作者 杜汉森 季朝能 +3 位作者 徐迈 马匆匆 郑佐华 毛裕民 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期503-507,共5页

从水生栖热菌(Thermus aquaticus)YT-1中分离得到的Taq DNA 聚合酶是一种广泛应用于PCR的耐热DNA聚合酶。由于天然菌株酶产量较低,培养条件要求严格,酶的纯化过程极为繁琐而使产品成本较高,因而促使人们构建适合于大规模生产的基因工程... 从水生栖热菌(Thermus aquaticus)YT-1中分离得到的Taq DNA 聚合酶是一种广泛应用于PCR的耐热DNA聚合酶。由于天然菌株酶产量较低,培养条件要求严格,酶的纯化过程极为繁琐而使产品成本较高,因而促使人们构建适合于大规模生产的基因工程菌株。已有人分别通过不同的途径,使用不同的载体,成功地在大肠杆菌菌株中表达了Taq 耐热DNA聚合酶基因。我们通过与前人不同的途径,把这一基因克隆到大肠杆菌的载体质粒pJLA503上并使其得以高表达,为降低生产成本和进一步研究该酶的各种特性提供了有利条件。 展开更多

关键词 DNA聚合酶 耐热聚合酶 基因克隆 水生栖热菌

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猪肺血管紧张素转换酶的制备 被引量：15

2

作者 孙凤祥 曲梅花 +1 位作者 高佩林 任维栋 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2002年第3期122-123,共2页

目的利用猪肺制备血管紧张素转换酶 (ACE)。方法将新鲜猪肺匀浆 ,6 0 0 0×g离心 30min后 ,经 1 .6～ 2 .6mol/L (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀 ,SephadexG 2 0 0 ,QHyperD离子交换色谱 ,得到经SDS PAGE显示一条带的ACE纯品。结果猪肺 30 0... 目的利用猪肺制备血管紧张素转换酶 (ACE)。方法将新鲜猪肺匀浆 ,6 0 0 0×g离心 30min后 ,经 1 .6～ 2 .6mol/L (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀 ,SephadexG 2 0 0 ,QHyperD离子交换色谱 ,得到经SDS PAGE显示一条带的ACE纯品。结果猪肺 30 0g可制备出ACE 1 1 .2 5mg,活力回收率为 2 0 .70 % ,比活力为 1 4 80 .0u/mg,较组织匀浆上清提纯提高 42 8.99倍。结论此法结果较理想 。 展开更多

关键词 血管紧张素转换酶 制备 分离 纯化

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重组丝氨酸羟甲基转移酶活性测定及酶促反应条件的优化研究 被引量：6

3

作者 陈志宏 吴梧桐 +1 位作者 项冰 高鹏 《药物生物技术》 CAS CSCD 1998年第2期75-79,共5页

本文采用了高效液相色谱法测定重组丝氨酸羟甲基转移酶活力 ,并利用该法将一系列的反应条件 (温度、p H、辅因子浓度等 )加以优化 ,从而确定了该酶促反应的最佳反应条件。在该反应条件下 ,对底物甘氨酸的转化率可达 78%。

关键词 重组 丝氨酸羟甲基 转移酶 活性测定 优化 HPLC

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人红细胞门冬氨酸氨基转移酶的提纯及有关性质研究 被引量：5

4

作者 孟泽 史利宁 李勇 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期69-72,共4页

目的为研制ＡＳＴ测定用的酶参考品。方法　　从人红细胞中提取了胞质型ＡＳＴ（Ｃ－ＡＳＴ），并对其有关性质进行了研究。结果提纯的ＡＳＰ比活达１０５ｋＵ／ｇ蛋白，几乎不含杂酶（未检出ＬＤ、ＧＧＴ、ＣＫ、ＡＬＰ、ＡＣＰ、ＡＬ... 目的为研制ＡＳＴ测定用的酶参考品。方法　　从人红细胞中提取了胞质型ＡＳＴ（Ｃ－ＡＳＴ），并对其有关性质进行了研究。结果提纯的ＡＳＰ比活达１０５ｋＵ／ｇ蛋白，几乎不含杂酶（未检出ＬＤ、ＧＧＴ、ＣＫ、ＡＬＰ、ＡＣＰ、ＡＬＴ、ＭＤＨ（苹果酸脱氢酶）、ＧＬＤＨ（谷氨酸脱氢酶）、ＣｈＥ及Ａｍｙ］。聚丙烯酸胺凝胶电泳后酶染色呈单－ＧＡＳＴ区带，蛋白质染色显示相应的主区带及一条更向阳极的次区带。其酶动力学性质（如Ｍｉｃｈｅｎｉｕｓ常数，Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ关系，最适ｐＨ）与血清ＡＳＴ非常接近。结论 本提制品可用于研制ＡＳＴ参考品。 展开更多

关键词 门冬氨酸氨基转移酶 酶参考品 人红细胞 酶提纯 AST

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血管紧张素转换酶纯化与性质研究 被引量：13

5

作者 刘宏 陈兰英 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第6期788-792,共5页

为了深入了解猪肺血管紧张素转换酶 (angiotensin converting enzyme,ACE)的性质和功能 ,对猪肺 ACE的分离纯化以及部分酶学性质进行了研究 .猪肺组织匀浆经 1 .6～ 2 .6mol/L硫酸铵分级沉淀等步骤后 ,利用亲和胶进行亲和层析分离 .2 0 ... 为了深入了解猪肺血管紧张素转换酶 (angiotensin converting enzyme,ACE)的性质和功能 ,对猪肺 ACE的分离纯化以及部分酶学性质进行了研究 .猪肺组织匀浆经 1 .6～ 2 .6mol/L硫酸铵分级沉淀等步骤后 ,利用亲和胶进行亲和层析分离 .2 0 0 g猪肺组织中提纯出 0 .79mg ACE,比活力 38.8U/mg,SDS- PAGE电泳鉴定为一条带 ,分子量约 1 80 k D,等电点 (p I)为 p H4.5,糖含量约 2 3.6% ,氨基酸组成分析发现猪肺 ACE分子中含有 1 346个氨基酸 ,其中酸性氨基酸含量较高 ,碘乙酸的修饰结果表明猪肺 ACE中巯基基团未参与酶的催化反应 .酶反应动力学结果显示 ,ACE催化 Fa PGG底物反应时的最适 p H大约为 p H 7.6,反应活化能 Ea=4.37× 1 0 4 J/mol,酶活性部位附近的组氨酸和具有类似 α-氨基性质的氨基酸可能参与了 ACE催化反应 .有关猪肺 ACE的基本生化性质、氨基酸组成以及酶学性质的结果 ,为今后深入研究奠定了基础 . 展开更多

关键词 血管紧张素转换酶 分离纯化 亲和层析 酶学性质

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全染料染色法测定末端脱氧核苷酰转移酶活力

6

作者 张军 林卓坤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1994年第6期544-546,共3页

介绍一种末端脱氧核苷酰转移酶活力测定的新方法，利用全染料（ｓｔａｉｎｓ─ａｌｌ）对单链寡聚核苷酸片段灵敏度较高的特点，建立了电泳─全染料染色法测定ＴｄＴ酶活力，ＴｄＴ酶促加长的寡聚核苷酸片段样本，经聚丙烯酰胺凝胶电泳... 介绍一种末端脱氧核苷酰转移酶活力测定的新方法，利用全染料（ｓｔａｉｎｓ─ａｌｌ）对单链寡聚核苷酸片段灵敏度较高的特点，建立了电泳─全染料染色法测定ＴｄＴ酶活力，ＴｄＴ酶促加长的寡聚核苷酸片段样本，经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、全染料染色后即可根据寡聚核苷酸片段的泳动距离推算ＴｄＴ酶活力。此法所用试剂便宜，操作简便，无需大型仪器及灵敏度较高，适用于临床上白血病患者白细胞中ＴｄＴ酶活力的半定量检测及基因工程中ＴｄＴ工具酶活力的测定。 展开更多

关键词 末端 脱氧核苷酰 转移酶 全染料染色法 白血病

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人肝线粒体天冬氨酸氨基转移酶提纯及比活性研究

7

作者 李绍冰 魏素珍 方丁 《河北医科大学学报》 CAS 1998年第3期149-152,共4页

目的：建立人肝线粒体型天冬氨酸氨基转移酶（ｍＡＳＴ）提纯方法，制备兔抗人ｍＡＳＴ抗血清，为免疫法测定人血清ｍＡＳＴ作准备。方法：采用ＤＥＡＥ纤维素柱层析及亲和层析从人肝中提纯ｍＡＳＴ。应用淋巴结注射法制备兔... 目的：建立人肝线粒体型天冬氨酸氨基转移酶（ｍＡＳＴ）提纯方法，制备兔抗人ｍＡＳＴ抗血清，为免疫法测定人血清ｍＡＳＴ作准备。方法：采用ＤＥＡＥ纤维素柱层析及亲和层析从人肝中提纯ｍＡＳＴ。应用淋巴结注射法制备兔抗人ｍＡＳＴ抗血清。结果：ｍＡＳＴ比活为３０００００Ｕ／ｍｇ蛋白，达到电泳纯和免疫纯，抗血清效价为１∶１６。结论：ＤＥＡＥ纤维素柱层析及亲和层析能够制备高纯度人ｍＡＳＴ，制备的兔抗人ｍＡＳＴ抗血清效价较高，为建立免疫方法测定ｍＡＳＴ创造了条件。 展开更多

关键词 肝线粒体 天冬氨酸 氨基转移酶 提纯m-AST

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动物组织及细胞DNA拓扑异构酶Ⅱ提取及解结活性的比较研究 被引量：1

8

作者 钱毅 曾桂超 +1 位作者 张迺蘅 程乃乾 《生物化学杂志》 CSCD 1990年第2期123-128,共6页

本文用改进的方法从一些动物组织中抽提了DNA拓扑异构酶Ⅱ,并用电镜、电泳方法对该酶解结活性进行了鉴定。酶活力测定结果表明该酶在不同组织中分布不尽相同,增殖较旺盛的组织具有相对较高的酶活性。pH值、温度、一些激动剂、抑制剂及... 本文用改进的方法从一些动物组织中抽提了DNA拓扑异构酶Ⅱ,并用电镜、电泳方法对该酶解结活性进行了鉴定。酶活力测定结果表明该酶在不同组织中分布不尽相同,增殖较旺盛的组织具有相对较高的酶活性。pH值、温度、一些激动剂、抑制剂及组织的状态均对酶活力有影响。 展开更多

关键词 DNA拓扑异构酶 DNA解结反应 细胞 动物 组织

原文传递

酪蛋白酶解产生阿片活性物质的条件确立 被引量：2

9

作者 张源淑 张春珍 +1 位作者 陈伟华 邹思湘 《宁夏农学院学报》 1999年第2期28-31,共4页

酪蛋白经充分溶解，用猪胃蛋白酶准确消化１５ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，６０ｍｉｎ，９０ｍｉｎ和１２０ｍｉｎ，离心上清消化液，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和细胞生物学方法，结果发现，只有在ｐＨ１．４和３７℃时，酪蛋白经胃蛋白酶消化... 酪蛋白经充分溶解，用猪胃蛋白酶准确消化１５ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，６０ｍｉｎ，９０ｍｉｎ和１２０ｍｉｎ，离心上清消化液，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和细胞生物学方法，结果发现，只有在ｐＨ１．４和３７℃时，酪蛋白经胃蛋白酶消化２ｈ其酶解液中有阿片样物质存在。 展开更多

关键词 酪蛋白 胃蛋白酶 阿片样物质 酶解液

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猪肾“轻型”GGT的提纯及动力学研究

10

作者 罗光华 孟泽 李勇 《医学研究生学报》 CAS 1996年第4期36-39,共4页

提纯出比活为３２０ｋＵ／ｇ蛋白的猪肾“轻型”γ－谷氨酰基移换酶（ＧＧＴ），经羟磷灰石柱层析后的最终产品每１００ＵＧＧＴ中仅含０．２６Ｕ的乳酸脱氢酶，不含其它污染酶类。聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳显示一条ＧＧＴ活性区带。其催... 提纯出比活为３２０ｋＵ／ｇ蛋白的猪肾“轻型”γ－谷氨酰基移换酶（ＧＧＴ），经羟磷灰石柱层析后的最终产品每１００ＵＧＧＴ中仅含０．２６Ｕ的乳酸脱氢酶，不含其它污染酶类。聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳显示一条ＧＧＴ活性区带。其催化特性和人血清ＧＧＴ非常相似，最适ｐＨ为７．８。供体底物Ｌ－γ－谷氨酰－３－羧基－４－硝基苯胺的米氏常数（ＫＤｍ）为０．９６ｍｍｏｌ／Ｌ，受体底物甘氨酰甘氨酸的米氏常数（ＫＡｍ）为１２．７ｍｍｏｌ／Ｌ。 展开更多

关键词 酶活性 γ-谷氨酰基移换酶 动力学研究

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小鼠再生肝胞浆磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶的纯化和性质研究

11

作者 杨云 王玉环 吴国利 《生物化学杂志》 CSCD 1992年第2期216-224,共9页

以^(32)P(Tyr)-Poly Glu,Tyr(4:1)为底物,用于研究小鼠再生肝胞浆磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)的分离纯化和性质。再生肝胞浆经60％饱和度硫酸铵盐析,二次DEAE纤维素层析,Sephadex G-200柱层析和Poly Glu,Tyr-Sepha-rose 4B亲和层析后,... 以^(32)P(Tyr)-Poly Glu,Tyr(4:1)为底物,用于研究小鼠再生肝胞浆磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)的分离纯化和性质。再生肝胞浆经60％饱和度硫酸铵盐析,二次DEAE纤维素层析,Sephadex G-200柱层析和Poly Glu,Tyr-Sepha-rose 4B亲和层析后,得到的PTPP分子量为67000,纯度提高1123倍,活性回收率为28％,对^(32)P(Tyr)-Poly Glu,Tyr有很高的活力,对^(32)P(Ser/Thr)-Casein(酪蛋白)和PNPP(对硝基苯酚磷酸盐)没有作用,其最适pH为6.8～7.1,对热不稳定。EDTA对酶有激活作用,Zn^(2+)、PNPP、P-Tyr、多胺化合物、焦磷酸根、钼酸根、柠檬酸根对酶有明显的抑制作用。酶对Na_3VO_4不敏感。碱性蛋白质组蛋白、鱼精蛋白对酶活力有抑制作用,酸性蛋白质酪蛋白和酸性多糖物质肝素对酶活力有激活作用,且后者能减弱前者的抑制作用。 展开更多

关键词 磷酸酪氨酸 蛋白磷酸酶 再生肝

原文传递

人心肌线粒体天门冬氨酸氨基转移酶的纯化及性质

12

作者 王晓明 张桂茹 +1 位作者 崔月花 孙荣武 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1998年第6期669-671,共3页

目的：提纯线粒体型天门冬氨酸氨基转移酶，分析其性质。方法：采用匀浆、热处理、硫酸铵分离，进一步用离子交换层析和亲合层析，并经免疫电泳和SDS—PAGE电泳鉴定，且对其分子量、等电点和氨基酸组成进行分析。结果；获得的m一AST纯... 目的：提纯线粒体型天门冬氨酸氨基转移酶，分析其性质。方法：采用匀浆、热处理、硫酸铵分离，进一步用离子交换层析和亲合层析，并经免疫电泳和SDS—PAGE电泳鉴定，且对其分子量、等电点和氨基酸组成进行分析。结果；获得的m一AST纯品比活为256U／mg，达到了免疫纯和电泳纯。结论：提纯品经鉴定分析确定为m—AST，其理化性质与文献报道一致。 展开更多

关键词 心肌 线粒体 AST 纯化 亲合层析

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血清ALT测定的实验条件探讨

13

作者 杜云 《输血通讯》 1996年第6期26-26,共1页

关键词 血清 谷丙转氨酶 活性 溶血 温度 反应时间

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