烷烃单加氧酶的结构与功能

1

作者 宗紫薇 赵静 肖蓉 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第12期1765-1772,共8页

全球每年约有多达8亿吨的碳氢化合物进入环境,其中大部分是烷烃。烷烃非常不活跃,凝固点高,因此给环境生态和石油回收带来了严重问题。烷烃单加氧酶(alkane monooxygenase,AlkB)是一种跨膜金属蛋白酶,隶属于膜结合脂肪酸去饱和酶(fatty ... 全球每年约有多达8亿吨的碳氢化合物进入环境,其中大部分是烷烃。烷烃非常不活跃,凝固点高,因此给环境生态和石油回收带来了严重问题。烷烃单加氧酶(alkane monooxygenase,AlkB)是一种跨膜金属蛋白酶,隶属于膜结合脂肪酸去饱和酶(fatty acid desaturase,FADS)家族,能够在由微生物介导的烷烃降解的第一步反应中将直链烷烃转化为相应的伯醇,从而在碳的全球循环和石油污染的生物修复中发挥关键作用。本文围绕不同微生物来源AlkB的特性、结构、活性位点、催化机制、以及重组菌的构建等方面进行综述,强调AlkB在环境修复以及石油开采领域中的重要意义,旨在为AlkB对碳氢化合物污染场所的生物修复和石油采收率的提高提供新思路。 展开更多

关键词 烷烃单加氧酶 碳氢化合物污染 烷烃降解 微生物降解

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产碱杆菌DN25苯酚羟化酶基因及酶特性分析

2

作者 宋文红 李青云 +1 位作者 颜少慧 刘幽燕 《生物技术》 2025年第2期146-151,158,共7页

[目的]分析产碱杆菌DN25编码的苯酚羟化酶基因及氨基酸序列,并探究K亚基对酶活性的影响。[方法]使用NCBI分析产碱杆菌DN25与其他菌属中苯酚羟化酶基因结构与编码氨基酸序列的相似性。通过PCR扩增获取基因簇与K亚基缺失基因序列,构建重... [目的]分析产碱杆菌DN25编码的苯酚羟化酶基因及氨基酸序列,并探究K亚基对酶活性的影响。[方法]使用NCBI分析产碱杆菌DN25与其他菌属中苯酚羟化酶基因结构与编码氨基酸序列的相似性。通过PCR扩增获取基因簇与K亚基缺失基因序列,构建重组质粒与重组菌。使用SDS-PAGE对重组菌进行表达分析,测定酶液中苯酚羟化酶活性。通过温度、pH因素考察酶特性及K亚基缺失对酶活性的影响。[结果]产碱杆菌DN25编码多组分苯酚羟化酶的基因与其他菌株中同类基因遗传结构相同,氨基酸序列相似性在43.12%~86.63%之间。完整苯酚羟化酶与K亚基缺失酶的活性分别为174.5 U/mg、82.8 U/mg。完整酶在20~50℃、pH 6~9范围内的活性均在60%以上,而K亚基缺失的酶活性仅在20~40℃、pH 6~7范围较高。[结论]产碱杆菌DN25编码的多组分苯酚羟化酶氨基酸序列与其他菌属有一定差异。K亚基缺失不会使苯酚羟化酶失活,但会使苯酚羟化酶活性以及温度、pH值稳定性降低。 展开更多

关键词 产碱杆菌 多组分酶 苯酚羟化酶 基因分析 基因重组 基因缺失 原核表达 亚基

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肉桂酸抑制酪氨酸酶催化反应的动力学研究 被引量：19

3

作者 龚盛昭 杨卓如 程江 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第2期345-349,共5页

在30℃,pH=6.8的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲体系中,采用酶动力学方法研究了肉桂酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的抑制动力学。实验结果表明,肉桂酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有良好抑制作用,对单酚酶和二酚酶活力的相对抑制率达到50%的... 在30℃,pH=6.8的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲体系中,采用酶动力学方法研究了肉桂酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的抑制动力学。实验结果表明,肉桂酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有良好抑制作用,对单酚酶和二酚酶活力的相对抑制率达到50%的肉桂酸浓度(IC50)约分别为0.37mmol·L-1和0.61mmol·L-1,比熊果苷抑制二酚酶活性的IC50值5.3mmol·L-1小得多。肉桂酸能明显延长单酚酶的迟滞时间,0.4mmol·L-1肉桂酸能使迟滞时间由1.1min延长至2.3min。Lineweaver-Burk图显示肉桂酸对二酚酶的抑制作用表现为非竞争性抑制,表观米氏常数(Km)为0.68mmol·L-1,抑制常数(KI)为0.58mmol·L-1。 展开更多

关键词 酪氨酸酶 肉桂酸 抑制作用 动力学 单酚酶 二酚酶

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胆固醇7α-羟化酶基因研究进展 被引量：4

4

作者 杜雪 李进军 +1 位作者 卢立志 赵阿勇 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期755-760,共6页

胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)是胆汁酸经典合成途径中的限速酶,对维持机体胆固醇代谢平衡起关键作用。目前已知CYP7A1基因的表达受包括该基因自身的多态性在内的多种因子调控。CYP7A1代谢途径作为脂类代谢通... 胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)是胆汁酸经典合成途径中的限速酶,对维持机体胆固醇代谢平衡起关键作用。目前已知CYP7A1基因的表达受包括该基因自身的多态性在内的多种因子调控。CYP7A1代谢途径作为脂类代谢通路的重要一部分,其活性发生改变后可能会引起与脂类代谢紊乱有关的胆结石、胆囊癌和心血管疾病等。就有关CYP7A1基因的最新研究进展进行了较系统的综述。 展开更多

关键词 动物学 胆固醇7α-羟化酶基因 基因表达调控 胆汁酸代谢 综述

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高等植物脂氧合酶活性测定方法的研究进展 被引量：6

5

作者 李会容 赵昶灵 +2 位作者 杨焕文 邓建华 毛自朝 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第15期217-223,共7页

本文系统归纳了高等植物脂氧合酶活性检测方法的研究进展。常规检测方法可分为两类:一类基于检测脂氧合酶催化反应产生氢过氧化物的速度,包括胡萝卜素脱色法、Fe(CNS)3显色法、标准分光光度法、2-硫代巴比妥酸显色法、碘化钾-淀粉法、... 本文系统归纳了高等植物脂氧合酶活性检测方法的研究进展。常规检测方法可分为两类:一类基于检测脂氧合酶催化反应产生氢过氧化物的速度,包括胡萝卜素脱色法、Fe(CNS)3显色法、标准分光光度法、2-硫代巴比妥酸显色法、碘化钾-淀粉法、二甲苯酚橙法;另一类基于检测反应中底物摄取氧的速度,包括量压法、氧电极法、亚甲基蓝染色法。此外还有酶联免疫法、超弱发光发射光谱法以及放射性同位素标记法。其中,标准分光光度法和氧电极法为脂氧合酶活性检测的标准方法。本文可为特定高等植物脂氧合酶活性的高效、准确测定提供参考。 展开更多

关键词 脂氧合酶 活性 测定方法

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黄嘌呤氧化酶的研究进展及其发展前景 被引量：13

6

作者 王成华 邢新会 《广西科学》 CAS 2017年第1期15-24,共10页

本文综述了黄嘌呤氧化酶(XOD)的研究进展及其发展前景。首先总结了XOD的基因、蛋白结构、催化机制和生物合成机制,其次介绍了与XOD催化相关的嘌呤代谢途径及其生理病理作用和相关的疾病,再次综述了目前已有商品化XOD及其生产现状和存在... 本文综述了黄嘌呤氧化酶(XOD)的研究进展及其发展前景。首先总结了XOD的基因、蛋白结构、催化机制和生物合成机制,其次介绍了与XOD催化相关的嘌呤代谢途径及其生理病理作用和相关的疾病,再次综述了目前已有商品化XOD及其生产现状和存在的问题,然后概述了XOD的应用进展和发展前景,最后探讨了XOD基础和应用研究存在的问题并提出发展建议。 展开更多

关键词 黄嘌呤氧化酶 酶生物合成及其调控 辅助装配 代谢途径 低嘌呤食品 检测试剂盒 细胞工厂

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Aeromonas sp.XJ-6双加氧酶基因的克隆、表达及对酪氨酸的降解 被引量：2

7

作者 杨杨 杨江科 +3 位作者 熊炜 梁建芳 段魏魏 晁群芳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期59-67,共9页

目的:从Aeromonas sp.XJ-6中克隆双加氧酶基因,初步探索该酶的功能,为芳香烃化合物的生物降解提供基因资源。方法:PCR扩增双加氧酶基因dio6,并实现该基因在大肠杆菌(Escherichia coli)中的诱导表达。产物经Ni-NTA柱纯化后,通过薄层层析(... 目的:从Aeromonas sp.XJ-6中克隆双加氧酶基因,初步探索该酶的功能,为芳香烃化合物的生物降解提供基因资源。方法:PCR扩增双加氧酶基因dio6,并实现该基因在大肠杆菌(Escherichia coli)中的诱导表达。产物经Ni-NTA柱纯化后,通过薄层层析(TLC)和HPLC检测双加氧酶dio6对Tyr的降解效果,再结合LC-MS检测降解产物,并分析其可能的降解途径。结果:Aeromonas sp.XJ-6双加氧酶基因dio6大小为1 194bp;通过金属鳌合亲和层析(MCAC)纯化后dio6表达产物的大小为44.9k Da。双加氧酶dio6对Tyr具有较强的降解作用。TLC和HPLC检测表明,在60μl酶量和30℃反应温度等条件下,Tyr降解较快;Mg^(2+)、Ca^(2+)略微抑制酶促反应,Mn^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)、Ca^(2+)促进底物降解,其中Mn^(2+)对双加氧酶影响最大。LC-MS分析表明,在双加氧酶dio6作用下,Tyr被降解为延胡索酸。结论:Aeromonas sp.XJ-6双加氧酶dio6是一种苯环开环酶,为芳香烃化合物的生物降解提供了良好的基因资源。 展开更多

关键词 双加氧酶 纯化 苯环 HPLC LC-MS

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苯丙氨酸羟化酶的研究进展 被引量：3

8

作者 王芳 奚耕思 +1 位作者 刘丽萍 刘晓明 《生命科学》 CSCD 2013年第4期372-377,共6页

苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)是人体内苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)转化成酪氨酸的关键酶。该酶肽链合成障碍导致其活性降低或缺失,从而引发不同的症状,从轻度的高苯丙氨酸血症(hyperphenylalaninemia,HPA)到经典的... 苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)是人体内苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)转化成酪氨酸的关键酶。该酶肽链合成障碍导致其活性降低或缺失,从而引发不同的症状,从轻度的高苯丙氨酸血症(hyperphenylalaninemia,HPA)到经典的苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)。简述了苯丙氨酸羟化酶基因的结构、表达调控和突变;该酶的分布、结构和反应机制;在其他生物中的研究概况和人类苯丙酮尿症的致病机理、诊断和治疗的方法,这对苯丙酮尿症的预防和治疗有着重要的意义。 展开更多

关键词 苯丙氨酸羟化酶 结构与功能 人类苯丙酮尿症

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胆固醇7α-羟化酶基因多态性与小儿血脂的关系 被引量：2

9

作者 王程强 汪春红 张妍 《海南医学院学报》 CAS 2008年第1期6-8,11,共4页

目的:探讨胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)基因多态性与湖北儿童血脂水平的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对216例健康儿童CYP7A1基因的A-204C基因座进行Eco31I酶切多态性分析... 目的:探讨胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7A1)基因多态性与湖北儿童血脂水平的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)对216例健康儿童CYP7A1基因的A-204C基因座进行Eco31I酶切多态性分析,血脂测定在全自动化分析仪上进行。结果:研究人群中CYP7A1基因的3型频率分别为:AA型6.0%,AC型26.4%、CC型67.6%。AA基因型在LDL-C,TC,Lp(a)水平上均低于其他基因型,并且其差异具有显著性。CC基因型在HDL-C水平上均高于其他基因型,并且其差异具有显著性。3型在ApoA上两两之间均存在显著性差异,而在TG中无显著性差异。结论:CC基因型在研究人群中所占的比例最高,AA基因型所占的比例最小。CYP7A1的基因多态性与儿童的血脂水平存在密切的关系。 展开更多

关键词 胆固醇7α-羟化酶基因 单核苷酸多态性 血脂 儿童

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芳香族氨基酸羟化酶家族结构与催化功能 被引量：1

10

作者 涂光伟 邹祥 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期14-22,共9页

芳香族氨基酸羟化酶(AAAH)家族是一类单加氢酶,包括苯丙氨酸羟化酶(PAH)、酪氨酸羟化酶(TH)和色氨酸羟化酶(TPH).在辅因子四氢生物蝶呤、铁原子及氧存在下,分别催化苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的羟化反应.多种疾病如苯丙酮尿症、帕金森氏... 芳香族氨基酸羟化酶(AAAH)家族是一类单加氢酶,包括苯丙氨酸羟化酶(PAH)、酪氨酸羟化酶(TH)和色氨酸羟化酶(TPH).在辅因子四氢生物蝶呤、铁原子及氧存在下,分别催化苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的羟化反应.多种疾病如苯丙酮尿症、帕金森氏病以及神经相关疾病的发病机制均与这类酶有关.本文综述近年来对芳香族氨基酸羟化酶家族蛋白结构功能、底物特异性、催化机制等方面的研究进展,为该类酶的定向进化及功能应用提供新思路. 展开更多

关键词 芳香族氨基酸羟化酶 辅因子 蛋白结构 催化机制 定向进化

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胆固醇和脂肪酸对CYP7A1的调节 被引量：1

11

作者 李燕 凌文华 《中山大学研究生学刊（自然科学与医学版）》 2003年第4期7-12,共6页

胆固醇7α-羟化酶是胆固醇转化为胆酸过程中的关键酶,对维持机体的胆固醇内环境稳定起着重要作用。胆固醇对7α-羟化酶有诱导作用,在种属之间有很大差异。新近发现胆固醇并不单独决定该酶的活性,膳食中的脂肪酸和胆固醇的组合最终决定... 胆固醇7α-羟化酶是胆固醇转化为胆酸过程中的关键酶,对维持机体的胆固醇内环境稳定起着重要作用。胆固醇对7α-羟化酶有诱导作用,在种属之间有很大差异。新近发现胆固醇并不单独决定该酶的活性,膳食中的脂肪酸和胆固醇的组合最终决定该酶的活性。这些调节作用主要通过LXRα、RXRα和PPARα对胆固醇的7α-羟化酶在转录水平调节实现。 展开更多

关键词 脂肪酸 胆固醇7Α-羟化酶 胆酸 酶活性 调节作用 LXRΑ RXRα PPARΑ CYP7A1 胆固醇代谢 临床意义

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间羟苯甲酸4-羟化酶的化学计量学研究

12

作者 陈瑞 细川桂一 +1 位作者 黄如彬 赵慧芳 《首都医科大学学报》 CAS 1997年第2期110-113,共4页

用扫描分光光度计对酶所催化的反应进行化学计量学研究。在反应开始后的不同时间，在２００～４００ｎｍ波长范围内扫描，观察到不同的吸收波谱，直到吸收波谱不再改变为止，由此得到间羟苯甲酸４羟化酶催化间羟苯甲酸转变成３，４... 用扫描分光光度计对酶所催化的反应进行化学计量学研究。在反应开始后的不同时间，在２００～４００ｎｍ波长范围内扫描，观察到不同的吸收波谱，直到吸收波谱不再改变为止，由此得到间羟苯甲酸４羟化酶催化间羟苯甲酸转变成３，４二羟苯甲酸随时间变化的吸收波谱。用摩尔消光系数计算每种成分的浓度，在２次独立的实验中，底物与产物的摩尔比值分别为１：０．９９８和１：１．０８５，提示来源于Ｃｏ．ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｉＫＨ１２２３Ｓ菌株的ＭＯＢ４ＨＯａｓｅ与文献报道的来源于Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒ菌株的ＭＯＢ４ＨＯａｓｅ所催化的反应是相同的。 展开更多

关键词 间羟苯甲酸4 羟化酶 化学计量学

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分光光度计法分析检测家蚕酪氨酸羟化酶的活性

13

作者 张振旺 李梦茜 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第6期281-283,共3页

家蚕酪氨酸羟化酶(Bm TH)是一种以酪氨酸为底物、铁离子和四氢生物喋呤为辅因子,可催化氧化酪氨酸形成多巴的芳香族氨基酸羟化酶,目前检测分析酪氨酸羟化酶活性的方法耗时、繁琐且工作量大。建立了分光光度计检测法快速测定家蚕酪氨酸... 家蚕酪氨酸羟化酶(Bm TH)是一种以酪氨酸为底物、铁离子和四氢生物喋呤为辅因子,可催化氧化酪氨酸形成多巴的芳香族氨基酸羟化酶,目前检测分析酪氨酸羟化酶活性的方法耗时、繁琐且工作量大。建立了分光光度计检测法快速测定家蚕酪氨酸羟化酶活性的新方法,采用高碘酸钠氧化反应产物L-多巴生成多巴色素发色团,其在475 nm处有最高吸收峰。该方法快速准确,可用于酪氨酸羟化酶活性的测定。 展开更多

关键词 酪氨酸羟化酶 分光光度计 体外表达 L-酪氨酸 L-多巴 活性测定

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对羟苯甲酸3-羟化酶初步纯化及进化起源探讨

14

作者 陈瑞 细川桂一 《首都医科大学学报》 CAS 2002年第2期101-104,共4页

经超声破碎、硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤、离子交换层析和SDS PAGE ,从Comamonastestosteroni菌株中获得了相对分子质量为 4 .5万的对羟苯甲酸 3 羟化酶 (POB3 HOase) ;测定了其N 末端 2 1个氨基酸序列 ,并与文献报道来源于不同菌株的POB... 经超声破碎、硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤、离子交换层析和SDS PAGE ,从Comamonastestosteroni菌株中获得了相对分子质量为 4 .5万的对羟苯甲酸 3 羟化酶 (POB3 HOase) ;测定了其N 末端 2 1个氨基酸序列 ,并与文献报道来源于不同菌株的POB3 HOase序列进行了同源性比较 ,结果提示它们具有相同的进化起源。 展开更多

关键词 对羟苯甲酸3-羟化酶 纯化 进化起源 丛毛单孢菌 氨基酸序列

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甲烷单加氧酶的化学模拟——酚氧双羧酸根桥联Fe_2(Ⅲ)和Mn_2(Ⅲ)配合物合成、表征及催化性能 被引量：7

15

作者 魏俊发 何地平 +1 位作者 俞贤达 金道森 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第4期415-422,共8页

合成表征了酚氧、双羧基桥联双组氨酸的手性双铁核配合物和双锰核配合物,研究了它们催化亚碘酸苯对烯烃的环氧化反应和对环烷烃的羟化反应.结果表明这种Fe_2(Ⅲ)和Mn_2(Ⅲ)配合物均是有效的甲烷单加氧酶(MMO)模型化合物,其中Fe_2配合物... 合成表征了酚氧、双羧基桥联双组氨酸的手性双铁核配合物和双锰核配合物,研究了它们催化亚碘酸苯对烯烃的环氧化反应和对环烷烃的羟化反应.结果表明这种Fe_2(Ⅲ)和Mn_2(Ⅲ)配合物均是有效的甲烷单加氧酶(MMO)模型化合物,其中Fe_2配合物能较好地再现MMO的某些性质,如电子光谱等.Fe_2配合物催化苯乙烯环氧化反应生成环氧苯乙烷的产率为840％(以催化剂计),且R-(+)-构型对映体过量(e.e.)达45.4％,相应的Mn_2配合物则以7080％产率给出环氧苯乙烷,R-(+)-构型对映体过量51.6％.Mn_2配合物还能够催化环己烯和环己烷的氧化反应,产物及其分布分别为环氧环己烷3880、环己烯醇603、环己烯酮189和环己醇1053、环己酮639％(以催化剂计).EPR研究表明MM=O是反应的活性中间体. 展开更多

关键词 甲烷单加氧酶 模型化合物 甲醇合成 催化剂 模拟

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人皮肤脯氨酰羟化酶的纯化 被引量：1

16

作者 吴秉毅 许绍辉 +1 位作者 孔宪涛 于嘉屏 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期270-273,共4页

人皮肤脯氨酰羟化酶的纯化吴秉毅，许绍辉，孔宪涛，于嘉屏羟脯氨酸对于维持胶原稳定的三螺旋结构起重要作用。羟脯氨酸由翻译后的原胶原上的脯氨酸羟化而来，该反应由脯氨酰羟化酶（Ｐｒｏｌｙｌｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，ＰＨ，ＥＣｌ... 人皮肤脯氨酰羟化酶的纯化吴秉毅，许绍辉，孔宪涛，于嘉屏羟脯氨酸对于维持胶原稳定的三螺旋结构起重要作用。羟脯氨酸由翻译后的原胶原上的脯氨酸羟化而来，该反应由脯氨酰羟化酶（Ｐｒｏｌｙｌｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，ＰＨ，ＥＣｌ．１４．１１２）所催化。ＰＨ是胶原... 展开更多

关键词 脯氨酰羟化酶 皮肤 纯化

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查尔酮合酶基因重复-歧化的遗传学效应 被引量：2

17

作者 朱子超 柴友荣 杨光伟 《安徽农学通报》 2009年第1期25-30,共6页

基因的重复-歧化是生物进化的重要机制。查尔酮合酶(CHS)是类黄酮途径的第一个关键酶,影响植物的多种性状。本文综述了CHS基因经重复-歧化后的假基因化、亚功能化、新功能化、基因互作这4种遗传学效应的表现和发生原因,并从系统发生的... 基因的重复-歧化是生物进化的重要机制。查尔酮合酶(CHS)是类黄酮途径的第一个关键酶,影响植物的多种性状。本文综述了CHS基因经重复-歧化后的假基因化、亚功能化、新功能化、基因互作这4种遗传学效应的表现和发生原因,并从系统发生的角度综述了亚功能化和新功能化的成员在分子进化树上的聚类式样。 展开更多

关键词 查尔酮合酶 歧化 重复 基因互作 新功能化 假基因化 亚功能化

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半定量RT-PCR检测猪延髓中色氨酸羟化酶2基因表达方法的建立

18

作者 马红娜 邓衔柏 +6 位作者 马勇江 何敏 习欠云 宁章勇 张桂红 卢培成 张曼玉 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第7期1-6,共6页

利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,测定仔猪延髓组织中色氨酸羟化酶2(TPH-2)基因mRNA表达水平,以β-actin为内标,分析相对表达量及其与驱赶应激的关系。通过探讨和优化PCR体系中退火温度、Mg2+浓度和循环次数等参数,建立了检... 利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,测定仔猪延髓组织中色氨酸羟化酶2(TPH-2)基因mRNA表达水平,以β-actin为内标,分析相对表达量及其与驱赶应激的关系。通过探讨和优化PCR体系中退火温度、Mg2+浓度和循环次数等参数,建立了检测延髓组织中色氨酸羟化酶-2基因mRNA表达的半定量RT-PCR体系。通过分析色氨酸羟化酶-2 PCR产物与β-actin PCR产物电泳后的灰度比值,可知驱赶应激对TPH-2基因mRNA表达量的影响。 展开更多

关键词 色氨酸羟化酶2 逆转录-聚合酶链反应 应激

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地高辛标记探针原位杂交检测猪延髓TPH2 mRNA的表达

19

作者 钱慧慧 何敏 +5 位作者 谢玉萍 郑声陶 钟帆 剡海阔 马勇江 邓衔柏 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第12期8-10,179,共4页

为了从组织学水平研究色氨酸羟化酶2(TPH2)在猪体的表达通路,探讨5-羟色胺(5-HT)与猪厌食、呕吐的关系,试验采用PCR法对猪TPH2 cDNA探针进行地高辛(digoxigenin,DIG)标记,应用核酸分子原位杂交技术检测猪延髓组织内TPH2 mRNA的表达。结... 为了从组织学水平研究色氨酸羟化酶2(TPH2)在猪体的表达通路,探讨5-羟色胺(5-HT)与猪厌食、呕吐的关系,试验采用PCR法对猪TPH2 cDNA探针进行地高辛(digoxigenin,DIG)标记,应用核酸分子原位杂交技术检测猪延髓组织内TPH2 mRNA的表达。结果表明:地高辛标记的TPH2cDNA探针使用简便,灵敏度高,特异性强,杂交结果直观,探针保存时间较长,无放射性污染;猪延髓组织内的血管壁、蛛网膜、下橄榄核区与极后区的神经元均有阳性反应,TPH2 mRNA的表达较高,提示了TPH2在这些部位的存在与5-HT的转运具有相关性。 展开更多

关键词 探针 延髓 猪 原位杂交

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人血红素加氧酶同工酶的分离纯化初报

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作者 夏振炜 俞善昌 +2 位作者 李云珠 申庆祥 奚正德 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第3期327-331,共5页

首次报道了人肝脏血红素加氧酶（hemeoxggenase，HO）的同工酶的分离纯化，并初步探讨了它们的性质．采用DEAE-SephadexA-25和羟基磷灰石柱层析法从人肝脏分离纯化H0的同工酶，酶活性检测、SDS-PAGE分析结果显示，人肝脏微粒体含HO的同... 首次报道了人肝脏血红素加氧酶（hemeoxggenase，HO）的同工酶的分离纯化，并初步探讨了它们的性质．采用DEAE-SephadexA-25和羟基磷灰石柱层析法从人肝脏分离纯化H0的同工酶，酶活性检测、SDS-PAGE分析结果显示，人肝脏微粒体含HO的同工酶，按洗脱先后顺序分别得到分子量为30000和36000的HO-1和HO-2．酶促反应中需相同辅酶参与，其中酶活性HO-1明显高于HO-2，两者之比为2.4:1，从分子量和酶的催化活性分析发现，HO-1属诱导型的传统HO.HO-2为新发现的非诱导型HO的同工酶． 展开更多

关键词 血红素加氧酶 同工酶 分离 纯化

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