目的以重组毕赤酵母发酵液冻干粉为原料,分离纯化超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)与人类Ⅰ型免疫缺陷病毒表达的反式转录激活因子(trans-activator of transcription,TAT)蛋白转导结构域的融合蛋白TATSOD。方法利用乙醇沉淀...目的以重组毕赤酵母发酵液冻干粉为原料,分离纯化超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)与人类Ⅰ型免疫缺陷病毒表达的反式转录激活因子(trans-activator of transcription,TAT)蛋白转导结构域的融合蛋白TATSOD。方法利用乙醇沉淀、大孔树脂柱层析、SP-650离子交换柱层析、TritonX-114相分离法去除TAT-SOD中的色素和细菌内毒素。结果70%乙醇沉降TAT-SOD的酶活力回收率达(98.50±1.71)%,纯化倍数为(1.04±0.02)倍。大孔树脂分离纯化TAT-SOD的效果总体优于SP-650;纯化倍数为(3.07±0.06)倍,略高于SP-650[(2.78±0.05)倍];色素去除率为(95.16±1.65)%,远高于SP-650[(44.73±0.77)%];酶活力回收率为(61.17±1.06)%,略低于SP-650[(69.93±1.21)%]。TritonX-114相分离法纯化TAT-SOD,细菌内毒素去除率为(99.89±1.73)%,酶活力回收率为(95.02±1.66)%。最后获得的TAT-SOD的比活力为(10110±175)U/mg。结论乙醇沉降-大孔树脂柱层析-TritonX-114相分离法对TAT-SOD有良好的分离纯化效果,有望为TAT-SOD工业化分离纯化提供新的选择。展开更多
文摘目的以重组毕赤酵母发酵液冻干粉为原料,分离纯化超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)与人类Ⅰ型免疫缺陷病毒表达的反式转录激活因子(trans-activator of transcription,TAT)蛋白转导结构域的融合蛋白TATSOD。方法利用乙醇沉淀、大孔树脂柱层析、SP-650离子交换柱层析、TritonX-114相分离法去除TAT-SOD中的色素和细菌内毒素。结果70%乙醇沉降TAT-SOD的酶活力回收率达(98.50±1.71)%,纯化倍数为(1.04±0.02)倍。大孔树脂分离纯化TAT-SOD的效果总体优于SP-650;纯化倍数为(3.07±0.06)倍,略高于SP-650[(2.78±0.05)倍];色素去除率为(95.16±1.65)%,远高于SP-650[(44.73±0.77)%];酶活力回收率为(61.17±1.06)%,略低于SP-650[(69.93±1.21)%]。TritonX-114相分离法纯化TAT-SOD,细菌内毒素去除率为(99.89±1.73)%,酶活力回收率为(95.02±1.66)%。最后获得的TAT-SOD的比活力为(10110±175)U/mg。结论乙醇沉降-大孔树脂柱层析-TritonX-114相分离法对TAT-SOD有良好的分离纯化效果,有望为TAT-SOD工业化分离纯化提供新的选择。
