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RNA干扰抑制c-myc基因对体外培养大鼠血管平滑肌细胞活性的影响 被引量：7
1
作者 吴海卫 沈中华 +2 位作者 王军 景华 李德闽 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2012年第1期11-16,共6页
目的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖是导致移植静脉再狭窄的主要原因之一,早期应答基因c-myc是促进平滑肌细胞持续增殖的关键基因。探讨针对c-myc基因的RNA干扰对体外培养平滑肌细胞增殖和活性的影响。方法体... 目的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖是导致移植静脉再狭窄的主要原因之一,早期应答基因c-myc是促进平滑肌细胞持续增殖的关键基因。探讨针对c-myc基因的RNA干扰对体外培养平滑肌细胞增殖和活性的影响。方法体外培养大鼠VSMCs,构建3对针对c-myc基因的RNA干扰序列(siRNA-1#、siRNA-2#、siRNA-3#)和1组阴性对照序列,以Lipo2000为载体转染体外培养细胞,Q-RT-PCR检测c-myc mRNA表达,Western blot检测转染c-myc蛋白表达,MTT法检测细胞增殖状态和活性。结果转染3对siRNA序列48h后,各组c-myc mRNA表达水平显著低于阴性对照组和正常细胞组,3组转染组之间c-myc mRNA表达无显著差异。转染siRNA-1#、siRNA-2#序列后,c-myc蛋白表达低于转染siRNA-3#序列组、阴性对照组和正常细胞组,而转染siRNA-3#序列组c-myc蛋白表达与阴性对照组和正常细胞组相比无明显差异。转染24 h各组间细胞活性未见显著差异,48h时细胞活性与24h相比无显著增加,至72h时各组细胞活性有明显增加,以转染siRNA-1#序列组增加量最少。阴性对照组和正常细胞组抑制效率基本保持为零水平。转染siRNA-1#、siRNA-2#序列后,24、48、72 h后抑制效率逐渐增加,转染siRNA-3#序列后72h后其抑制效率开始降低,各相同时间点以转染siRNA-1#序列后抑制效率最高。结论体外转染c-myc基因siRNA序列,能显著降低平滑肌细胞c-myc基因mRNA和蛋白表达,抑制细胞活性和增殖。随着作用时间延长,RNA干扰(RNA interference,RNAi)后细胞活性缓慢增加,而抑制效应持续显著增加,以siRNA-1#序列抑制作用最为明显。 展开更多
关键词 C-MYC 血管平滑肌细胞 RNA干扰
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转移性大肠癌LoVo细胞特异性核酸适配子W14的生物活性和血浆稳定性 被引量：1
2
作者 李婉明 周琳琳 方瑾 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期112-116,共5页
目的:分析转移性大肠癌LoVo细胞特异性核酸适配子W14的生物活性和血浆稳定性。方法:采用荧光显微镜流式细胞术分析W14在25℃和37℃下与靶细胞LoVo的特异结合活性;流式细胞术检测W14在血浆环境下对LoVo细胞的特异识别能力;37℃下W14分别... 目的:分析转移性大肠癌LoVo细胞特异性核酸适配子W14的生物活性和血浆稳定性。方法:采用荧光显微镜流式细胞术分析W14在25℃和37℃下与靶细胞LoVo的特异结合活性;流式细胞术检测W14在血浆环境下对LoVo细胞的特异识别能力;37℃下W14分别在完全培养基和人血浆中孵育0.5、1、1.5、2、3、4、6 h,琼脂糖凝胶电泳检测W14的生物稳定性;用2、4、8、10μmol/L的W14处理LoVo细胞24、48、72 h,MTS实验测定W14的细胞毒性。结果:W14在不同温度和血浆环境中以及不同温度条件下都能特异性地识别和结合靶细胞LoVo,能稳定地存在于血浆中6 h不发生降解,且对细胞没有明显的毒性作用。结论:转移性大肠癌特异性核酸适配子W14具有良好的适应能力和特异性结合能力,有较好的生物稳定性和低毒性,适应于人体内应用。 展开更多
关键词 核酸适配子 W14 大肠癌 LOVO细胞 生物活性 稳定性
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腺嘌呤合成ATP的转化条件优化 被引量：1
3
作者 杨光辉 杨善岩 +1 位作者 裘娟萍 朱家荣 《浙江工业大学学报》 CAS 北大核心 2011年第6期625-629,共5页
采用毛霉菌为菌种,以腺嘌呤为底物转化合成ATP,用Na2HPO4代替反应液中价格较高的K2HPO4,设计单因素实验、正交试验研究其转化条件,初步探索了分批加入Na2HPO4对ATP产率、反应时间的影响.结果表明:转化反应最佳pH为6.5;反应2h后,添加1%... 采用毛霉菌为菌种,以腺嘌呤为底物转化合成ATP,用Na2HPO4代替反应液中价格较高的K2HPO4,设计单因素实验、正交试验研究其转化条件,初步探索了分批加入Na2HPO4对ATP产率、反应时间的影响.结果表明:转化反应最佳pH为6.5;反应2h后,添加1%的二甲苯,反应2h后,反应液静置2h,可显著提高ATP产率;反应液最佳配方为毛霉菌体500g/L,葡萄糖120g/L,Na2HPO490g/L,MgCl24g/L,MnCl22g/L,腺嘌呤3g/L,二甲苯1%;通过分批加入Na2HPO4使ATP产率由6.218g/L提高至10.046g/L,提高61.56%,反应时间缩短2h. 展开更多
关键词 ATP 腺嘌呤 毛霉菌
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核酸检测与酶免检测平行筛查血液在基层血站的应用效果评价 被引量：16
4
作者 陈艳萍 《实验与检验医学》 CAS 2018年第4期623-625,共3页
目的探讨核酸检测与酶免检测平行筛查血液在基层血站的应用效果评价。方法选取2016年1月-2017年7月本基层血站无偿献血者标本34680例,采用核酸检测与酶免检测两种检测方法平行筛查,对酶免检测阴性的标本分别采用核酸检测NAT进行HBV DNA/... 目的探讨核酸检测与酶免检测平行筛查血液在基层血站的应用效果评价。方法选取2016年1月-2017年7月本基层血站无偿献血者标本34680例,采用核酸检测与酶免检测两种检测方法平行筛查,对酶免检测阴性的标本分别采用核酸检测NAT进行HBV DNA/HIV RNA/HCV RNA的检测。将核酸检测阳性标本进行分项定量检测和乙肝血清学补充试验,分析检测结果。结果经ELISA筛查HBsAg、抗-HCV和抗-HIV-1/2无反应性及仅1种试剂为反应性的标本共32456例,经核酸NAT检测阳性标本72例,阳性检出率为0.21%,ELISA筛查HB-sAg,抗-HBs,抗-HBe,HBeAg,抗-HBc,最终确认阳性标本48例,确认阳性率为66.67%(P<0.05);72例NAT检测阳性标本进行定量检测,其中定量检测HBV DNA阳性36例,阳性率为75.00%(36/48),未检测出HIV RNA阳性和HCV RNA阳性。结论核酸检测与酶免检测平行筛查,两种手段相互补充,可使输血传播疾病残余风险极大得到降低,预防经输血传播的病毒性疾病,从可有效地保障血液安全。 展开更多
关键词 核酸检测 酶免检测 筛查 基层血站
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建立梯度模型探讨溶血对TMA核酸检测的影响 被引量：1
5
作者 田耘博 魏兰 +1 位作者 李维 欧阳熊妍 《实验与检验医学》 CAS 2019年第4期557-561,581,共6页
目的通过建立溶血程度和病毒浓度的梯度模型,研究标本溶血对基于转录介导扩增(TMA)核酸检测(NAT)结果的影响。方法采用超声波破坏红细胞制造溶血标本,验证游离血红蛋白(Hb)浓度并建立溶血梯度模型;按照多因素实验设计中的析因设计方式,... 目的通过建立溶血程度和病毒浓度的梯度模型,研究标本溶血对基于转录介导扩增(TMA)核酸检测(NAT)结果的影响。方法采用超声波破坏红细胞制造溶血标本,验证游离血红蛋白(Hb)浓度并建立溶血梯度模型;按照多因素实验设计中的析因设计方式,在不同溶血程度的标本模型中加入不同浓度的检测目标病毒。溶血程度根据血浆Hb浓度分为5个梯度,依次为0g/L、5g/L、10g/L、20g/L、40g/L。HIV、HCV、HBV浓度分为2个水平,低水平组分别为:20IU/ml、10IU/ml、5IU/ml;高水平组分别为:60IU/ml、20IU/ml、15IU/ml。采用基于TMA技术的全自动系统进行NAT。对检测数据进行收集、整理和统计学分析。结果本研究所建立的每个Hb梯度内各标本管的Hb浓度之间比较差异无统计学意义(P>α)。核酸检测分3个批次进行测试,每个批次80例样本,共计240例。其中225个测试标本呈反应性,15个对照标本呈非反应性。结论在标本血浆Hb浓度≤40g/L时,溶血对基于TMA技术的NAT结果无显著性影响。 展开更多
关键词 梯度模型 溶血 转录介导的扩增(TMA) 核酸检测(NAT)
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电镜核酸分子原位杂交技术的探索
6
作者 焦仁杰 于文斗 +1 位作者 丁明孝 翟中和 《电子显微学报》 CAS CSCD 1990年第3期111-111,共1页
显微水平的核酸分子原位杂交技术已广泛地应用于基因在染色体上的定位,发育过程中的基因表达等方面,但电镜水平的原位杂交技术却仍在探索之中,主要因为剧烈的核酸分子杂交条件与样品精细结构的保存之间存在着矛盾,为此,我们分别在分级... 显微水平的核酸分子原位杂交技术已广泛地应用于基因在染色体上的定位,发育过程中的基因表达等方面,但电镜水平的原位杂交技术却仍在探索之中,主要因为剧烈的核酸分子杂交条件与样品精细结构的保存之间存在着矛盾,为此,我们分别在分级抽提的整装细胞,L-K_4包埋或Epon812包埋的超薄切片样品以及DGD包埋-去包埋样品中对进行电镜分子原位杂交研究的可行性和杂交条件进行了一些探索,目前在整装细胞样品中已取得初步的结果。 展开更多
关键词 核酸分子 原位杂交技术 电镜
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人神经营养素-3基因真核表达载体的构建和鉴定
7
作者 陈昌杰 赵莉 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第6期652-654,共3页
目的:构建含有人NT-3基因真核表达载体pcDNA3.1-NT-3。方法:采用PCR技术,扩增编码神经营养素-3基因,克隆到PMD18-T载体上,再亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1的Hind Ⅲ和BamHI位点。结果:重组真核表达载体pcDNA3.1-NT-3经酶切鉴定证明NT-3... 目的:构建含有人NT-3基因真核表达载体pcDNA3.1-NT-3。方法:采用PCR技术,扩增编码神经营养素-3基因,克隆到PMD18-T载体上,再亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1的Hind Ⅲ和BamHI位点。结果:重组真核表达载体pcDNA3.1-NT-3经酶切鉴定证明NT-3基因正向插入真核表达载体中,碱基序列的测定证明重组质粒中含有人的NT-3基因序列。结论:构建的真核表达载体携有人NT-3cDNA序列,并且含有巨细胞病毒强启动子、ploy(A)加尾信号和neo标志基因,可能具有转染多种哺乳类细胞通用性,可用于NT-3基因的真核表达及基因治疗的研究。 展开更多
关键词 神经营养素-3 真核表达载体
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鼠伤寒沙门氏菌嘌呤生物合成调控研究Ⅺ. PUR box的突变分析 被引量：2
8
作者 龙海霞 马伟军 +1 位作者 秦俊川 王敖全 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第5期462-467,共6页
为研究１６ｂＰ ＰＵＲ ｂｏｘ中除第３位的Ｇ与第１４位的Ｃ外，余下６个完全保守碱基的４个在与ＰｕｒＲ阻遏蛋白结合中的功能，对它们分别做了定点突变，使其分别从Ｃ、Ａ、Ａ和Ｔ突变为Ｇ、Ｇ、Ｇ和Ｃ。凝胶阻滞实验结果表明，含上... 为研究１６ｂＰ ＰＵＲ ｂｏｘ中除第３位的Ｇ与第１４位的Ｃ外，余下６个完全保守碱基的４个在与ＰｕｒＲ阻遏蛋白结合中的功能，对它们分别做了定点突变，使其分别从Ｃ、Ａ、Ａ和Ｔ突变为Ｇ、Ｇ、Ｇ和Ｃ。凝胶阻滞实验结果表明，含上述指定突变的ＰＵＲ ｂｏｘ均不能与ＰｕｒＲ阻遏蛋白结合。由此证明，这４个保守碱基对维持ＰＵＲ ｂｏｘ的功能是必须的，其中任一改变都导致ＰＵＲ ｂｏｘ功能的丧失。 展开更多
关键词 PURbox 鼠伤寒沙门氏菌 嘌呤 生物合成 调控
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环介导等温扩增(LAMP)技术的研究进展与展望 被引量：13
9
作者 杜芳玲 王婷婷 +1 位作者 刘洋 万腊根 《实验与检验医学》 CAS 2018年第4期509-512,565,共5页
环介导等温扩增(LAMP)是2000年报道的一种新的核酸扩增技术,此技术在恒温条件下即可完成核酸的扩增。因具有成本低、耗时少、技术要求低等优点,近年来已被广泛用于病毒、细菌、寄生虫等各种病原体的相关研究。本文就这一技术的研究进展... 环介导等温扩增(LAMP)是2000年报道的一种新的核酸扩增技术,此技术在恒温条件下即可完成核酸的扩增。因具有成本低、耗时少、技术要求低等优点,近年来已被广泛用于病毒、细菌、寄生虫等各种病原体的相关研究。本文就这一技术的研究进展和展望作如下综述。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 病原体 检测
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RNA中的假尿苷修饰：形成、功能及鉴定 被引量：3
10
作者 李笑雨 孙芳芳 伊成器 《生命科学》 CSCD 2014年第3期239-247,共9页
假尿苷修饰是目前已知丰度最高的RNA修饰,广泛存在于多个物种的多类RNA中。作为尿苷的5位异构体,假尿苷在真核生物中的形成机制主要有两种:依赖于假尿苷合酶或是依赖于H/ACA核糖核蛋白复合体。假尿苷修饰在多个生物学过程中发挥作用,同... 假尿苷修饰是目前已知丰度最高的RNA修饰,广泛存在于多个物种的多类RNA中。作为尿苷的5位异构体,假尿苷在真核生物中的形成机制主要有两种:依赖于假尿苷合酶或是依赖于H/ACA核糖核蛋白复合体。假尿苷修饰在多个生物学过程中发挥作用,同时不同位点的假尿苷修饰具有不同的功能。而人为地在mRNA终止密码子中引入假尿苷修饰则可以使其具有编码能力,这改变了传统的中心法则。目前对于RNA中假尿苷的研究主要是通过2D-TLC及液质联用对其进行定量分析,使用CMCT标记假尿苷及RNase H和SCARLET的方法对其进行定位。 展开更多
关键词 假尿苷 形成 功能 定位
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