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土壤细菌16S rRNA基因实时荧光定量PCR标准品的制备及稳定性探究
1
作者 朱璧如 廖万金 徐冰 《生物学杂志》 北大核心 2026年第1期97-102,共6页
实时荧光定量PCR(qPCR)被越来越多地用于测量微生物的绝对数量,使用该方法的关键是制备合适的标准品并建立稳定的实验方案。本研究成功构建了一个含有土壤细菌16S rRNA基因全长的质粒标准品,该标准品可以被4对细菌16S rRNA基因的通用引... 实时荧光定量PCR(qPCR)被越来越多地用于测量微生物的绝对数量,使用该方法的关键是制备合适的标准品并建立稳定的实验方案。本研究成功构建了一个含有土壤细菌16S rRNA基因全长的质粒标准品,该标准品可以被4对细菌16S rRNA基因的通用引物扩增。使用其中2对引物进行绝对定量qPCR实验,熔解曲线均为单峰,标准曲线的扩增效率分别为87.4%和71.9%,拟合优度均大于0.99。1 d内使用同一套梯度稀释的标准品进行3次qPCR实验,使用TE或TE_(0.1)缓冲液进行稀释或4℃低温存放均能提高标准曲线扩增效率和拟合优度的稳定性。质粒标准品-20℃存放30 d后,标准曲线的扩增效率和拟合优度并未显著降低,但在不同时间测得的扩增效率有波动,使用TE或TE_(0.1)缓冲液进行标准品稀释可减小这种波动。保证标准品在存放和使用过程中的稳定性,有助于提高不同空间和时间进行绝对定量qPCR实验的准确性和复现性。 展开更多
关键词 绝对定量qPCR 质粒克隆 标准曲线 扩增效率 拟合优度
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基于荧光标记的毛细管电泳技术检测蛋白质标准品含量
2
作者 刘丽 方三华 +2 位作者 杨丹 黄琼 李艳伟 《实验室检测》 2026年第4期45-49,共5页
目的探讨不同荧光标记方法下毛细管电泳技术定量检测蛋白质标准品中的准确性。方法采用毛细管电泳技术,分别利用Chromeo P503和Alexa Fluor 488对蛋白质样本进行荧光标记,通过分析毛细管电泳信号峰面积与样本浓度的相关性,评估两种标记... 目的探讨不同荧光标记方法下毛细管电泳技术定量检测蛋白质标准品中的准确性。方法采用毛细管电泳技术,分别利用Chromeo P503和Alexa Fluor 488对蛋白质样本进行荧光标记,通过分析毛细管电泳信号峰面积与样本浓度的相关性,评估两种标记方法的定量准确性。结果两种荧光标记方法在毛细管电泳检测中均表现出良好的定量准确性,信号峰面积与样本浓度之间具有显著的相关性。结论Chromeo P503和Alexa Fluor 488标记方法均可用于蛋白质的准确定量,研究结果为后续开发更多荧光标记生物组织特定蛋白定量检测方法提供技术支撑和实践思路。 展开更多
关键词 毛细管电泳 荧光标记 蛋白质 定量
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拟缺香茶菜水提物显著改善肿瘤细胞荧光成像分辨率
3
作者 郑然 刘馨慧 +2 位作者 林平昊 侯欣艺 黄华 《生命科学研究》 2026年第1期53-62,共10页
荧光成像分析是生物医学领域中用于研究目的蛋白亚细胞定位及蛋白质相互作用的常用手段,但很多模式细胞的荧光成像效果不佳,其成像分辨率提升受限于细胞的自身厚度和体积。膨胀显微成像是解决此问题的技术手段之一,但现有方法操作复杂... 荧光成像分析是生物医学领域中用于研究目的蛋白亚细胞定位及蛋白质相互作用的常用手段,但很多模式细胞的荧光成像效果不佳,其成像分辨率提升受限于细胞的自身厚度和体积。膨胀显微成像是解决此问题的技术手段之一,但现有方法操作复杂、稳定性差且对免疫荧光抗体的浓度要求较高。笔者团队在前期研究中发现,拟缺香茶菜的分离提取物Reniformin A对肿瘤细胞有放大作用。基于上述背景,本研究旨在探索低成本且操作便捷的提升荧光成像分辨率的方法。首先,考察了不同质量浓度及不同处理时间下,拟缺香茶菜水提物对A549、MDA-MB-231和HeLa 3种肿瘤细胞的影响,结果显示:拟缺香茶菜水提物对A549和MDA-MB-231细胞有显著的体积放大作用,且能有效提高荧光成像分辨率,其最佳处理时间和质量浓度分别为24 h和8 mg/m L;同时,拟缺香茶菜水提物对HeLa细胞无显著放大效果,提示其作用具有细胞特异性。随后,对关键细胞器及细胞骨架进行了形态学分析,结果显示,拟缺香茶菜水提物并不影响A549和MDA-MB-231细胞的基本骨架结构(α-tubulin、F-actin)及关键细胞器(溶酶体、线粒体)的形态和分布特性。接下来,以A549细胞为模型,用已知定位信息的3个蛋白质(METTL6、SLC38A7和MYH9)进行了亚细胞定位验证,结果显示,拟缺香茶菜水提物处理没有改变3个蛋白质的原有定位特性,且没有引发非特异性共定位现象。最后,以A549细胞为模型,通过免疫荧光实验初步探究了拟缺香茶菜水提物提升肿瘤细胞荧光成像分辨率的潜在机制,推测拟缺香茶菜水提物可能是通过增强整合素功能、稳定黏着斑、优化黏着斑动态,进而为细胞体积增大提供更好的支撑作用。以上结果表明:高质量浓度(8 mg/m L)拟缺香茶菜水提物对部分肿瘤细胞有放大效应,可有效提升荧光成像分析的便利度和分辨率,且不影响原有细胞结构的形态及分布特性,未来具有较大的应用前景和进一步开发价值。 展开更多
关键词 拟缺香茶菜 肿瘤细胞 放大效应 荧光成像 分布特性
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ISIS与ICP-MS耦联检测儿童全血11种微量元素的方法建立及应用研究
4
作者 刘军霞 唐伟锋 +5 位作者 刘晓宁 黄贤 袁理利 敖俊杰 沈袁恒 张前龙 《现代检验医学杂志》 2026年第2期16-22,共7页
目的建立一体化进样系统(ISIS)与电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)联用的快速检测全血11种微量元素的方法,并在儿童群体中进行初步应用。方法采用直接稀释法前处理样本,ISIS耦联ICP-MS检测200例儿童全血样本,并对方法的线性范围、检出限... 目的建立一体化进样系统(ISIS)与电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)联用的快速检测全血11种微量元素的方法,并在儿童群体中进行初步应用。方法采用直接稀释法前处理样本,ISIS耦联ICP-MS检测200例儿童全血样本,并对方法的线性范围、检出限、定量限、精密度及准确度进行评估。结果11种微量元素的线性范围为0.10~500.00ng/ml,相关系数(r^(2))均>0.990;检出限范围为0.02~0.89ng/ml,定量限范围为0.06~2.95ng/ml;低、中、高浓度加标样本的日内和日间精密度均<15.00%,回收率为89.70%~114.96%。200例儿童血样有毒重金属铅、汞、砷的超标率分别为1.00%、4.50%和7.00%。结论ISIS耦联ICP-MS检测全血中11种微量元素性能良好,在儿童微量元素评估中具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 微量元素 电感耦合等离子体质谱法 一体化进样系统 儿童
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重组Ⅱ型人源化胶原蛋白的分离与纯化工艺
5
作者 孟子璇 石伟伟 +5 位作者 章麦菲 季磊 杜家富 张部昌 黄训端 吴杭 《生物学杂志》 北大核心 2026年第1期91-96,共6页
为建立重组Ⅱ型人源化胶原蛋白Ⅱ-23k的分离与纯化工艺,先通过对不同离子交换柱纯化效果的比较,确定层析柱类型;再考察发酵液的澄清过滤、浓缩换液、离子交换层析的纯化效果,建立Ⅱ-23k的分离与纯化工艺。结果表明,与Q强阴离子、SP强阳... 为建立重组Ⅱ型人源化胶原蛋白Ⅱ-23k的分离与纯化工艺,先通过对不同离子交换柱纯化效果的比较,确定层析柱类型;再考察发酵液的澄清过滤、浓缩换液、离子交换层析的纯化效果,建立Ⅱ-23k的分离与纯化工艺。结果表明,与Q强阴离子、SP强阳离子和CM弱阳离子交换柱相比,DEAE弱阴离子柱层析效果最佳,在缓冲液pH为7.0时,经DEAE柱流穿模式层析,得到的Ⅱ-23k纯度大于95%,回收率大于90%。采用切向流过滤(tangential flow filtration, TFF)的中空纤维微滤进行发酵液的澄清过滤、TFF平板膜包超滤进行浓缩换液、离子交换层析进行纯化,建立澄清过滤-浓缩换液-DEAE柱流穿-冻干的分离与纯化工艺,得到的Ⅱ-23k纯度约95%,无色素残留,浓缩换液的平均回收率约75%,DEAE柱流穿的平均回收率约78%,总回收率最高接近60%。研究建立了基于TFF和一步柱流穿模式层析的重组Ⅱ型人源化胶原蛋白分离与纯化工艺,为其放大生产及工业化制备提供参考。 展开更多
关键词 重组Ⅱ型人源化胶原蛋白 分离与纯化 离子交换层析 流穿模式 切向流过滤
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微孔板成像系统在高表达荧光蛋白单克隆细胞株筛选中的应用
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作者 沈链链 管强东 +3 位作者 丁竞竞 熊建平 王丽 吴炜 《南京医科大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第2期213-220,共8页
目的:建立一种基于微孔板成像系统筛选稳定转染后高表达荧光蛋白的单克隆细胞株的筛选流程。方法:利用慢病毒将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因转至人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cell,HBE),通过流式... 目的:建立一种基于微孔板成像系统筛选稳定转染后高表达荧光蛋白的单克隆细胞株的筛选流程。方法:利用慢病毒将绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因转至人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cell,HBE),通过流式细胞术分选荧光信号强的单个细胞入96孔板。按照所建立的筛选流程,通过4轮基于微孔板成像系统的成像与分析功能进行逐步筛选:分选当天确认含单细胞的孔;待大多数克隆团细胞数>20个时,筛选出可形成克隆团的孔;将筛选孔中的细胞消化并转移至新孔后,进一步筛选出细胞平均荧光强度较高的孔;待生长最快的细胞增殖4~8倍时,筛选出细胞正常增殖的孔。稳定转染细胞持续培养,培养条件同单克隆细胞。待单克隆细胞增殖至数量足够,利用流式细胞术与荧光成像比较最终筛选所得单克隆细胞株与稳定转染细胞在荧光强度方面的差异。结果:依照筛选流程,依次筛选得到89个含单细胞的孔,19个可形成克隆团的孔,6个细胞平均荧光强度较高的孔,以及3个细胞正常增殖的孔。流式细胞术结果显示:与稳定转染细胞相比,来源于这3个孔的单克隆细胞株的平均荧光强度提高了近9倍,GFP荧光信号强的细胞占比也显著提高。微孔板成像结果亦显示单克隆细胞株的GFP荧光强度明显高于稳定转染细胞。结论:应用微孔板成像系统,结合本研究所建立的筛选流程,可逐步、高效地筛选出稳定转染后高表达荧光蛋白的单克隆细胞株。相比传统的显微镜观察或其他成像方法,该方法操作简单、方便,具备良好的推广应用价值。 展开更多
关键词 单克隆细胞株 荧光蛋白 微孔板成像系统 筛选
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基于核酸适配体的生物传感器的研究进展
7
作者 戚敏钰 张颖 +2 位作者 吕狄亚 王冬尧 曹岩 《海军军医大学学报》 北大核心 2026年第1期97-104,共8页
生物传感器是一类以生物分子作为识别元件,将分析物与生物分子间的相互作用转化为可识别的光、电等信号的传感器设备。适配体是能够与靶分子高亲和力和高特异性结合的单链寡核苷酸序列,具有稳定性高、批次间差异小、易进行化学修饰的优... 生物传感器是一类以生物分子作为识别元件,将分析物与生物分子间的相互作用转化为可识别的光、电等信号的传感器设备。适配体是能够与靶分子高亲和力和高特异性结合的单链寡核苷酸序列,具有稳定性高、批次间差异小、易进行化学修饰的优点,在生物传感器中的应用越来越广泛。本文主要介绍了将适配体作为光学、电化学、压电生物传感器的识别元件用于检测小分子化合物、病毒、抗原等分析物的研究进展,并对适配体生物传感器的应用情况进行总结。 展开更多
关键词 适配体 生物传感器 识别元件 检测技术
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图像识别技术在血浆EB病毒抗体间接免疫荧光检测中的应用研究
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作者 马浩林 李军 +3 位作者 覃炜玲 冀火金 梁俊 汤敏中 《现代检验医学杂志》 2026年第1期75-79,127,共6页
目的该研究旨在探讨图像识别软件在血浆EB病毒(EBV)抗体荧光免疫检测自动化分析中的应用。方法选取2022年9月~2023年10月就诊于梧州市红十字会医院病理确诊的鼻咽癌患者86例作为鼻咽癌组,非鼻咽癌干扰对照样本45例作为干扰对照组,健康... 目的该研究旨在探讨图像识别软件在血浆EB病毒(EBV)抗体荧光免疫检测自动化分析中的应用。方法选取2022年9月~2023年10月就诊于梧州市红十字会医院病理确诊的鼻咽癌患者86例作为鼻咽癌组,非鼻咽癌干扰对照样本45例作为干扰对照组,健康体检人群170例作为健康体检组。通过间接免疫荧光法检测入组对象血浆EBV免疫球蛋白A(IgA)/EBV衣壳抗原(VCA)抗体水平,并利用ImageJ软件进行图像分析和抗体滴度推算,将结果与手工法进行比较。结果在EBV免疫荧光检测定量分析中,健康体检组和干扰对照组的秩和检验结果差异无统计学意义(Z=-1.633、-0.631,均P>0.05),而在鼻咽癌组中的数据差异具有统计学意义(Z=-6.498,P<0.0001)。在定性数据分析中,基于图像识别的技术与手工法在三组样本中结果具有高度的一致性(χ^(2)=137.286、63.202、44.083,均P>0.05)。结论基于ImageJ的图像识别技术应用于免疫荧光分析中可以定量地得出抗体的荧光强度及滴度,其相比于手工法的优势在于自动化,且结果分析更为客观,具有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 EB病毒抗体 间接免疫荧光法 IMAGEJ 图像识别
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三种天然植物提取物的抑菌作用及机制研究
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作者 申羽佳 黄云瑞 +5 位作者 程诗越 王崧 吴晓杰 王佳怡 张嘉盈 曹翔宇 《山西化工》 2026年第1期115-119,共5页
对橘皮、艾草及银杏叶的黄酮提取物进行提取,并通过测定菌液电导率、AKP酶活性及胞内蛋白浓度,探究其抑菌机理。结果表明:橘皮黄酮提取物能显著抑制大肠杆菌生长(MIC值为25 mg/mL),银杏叶黄酮提取物能显著抑制金黄色葡萄球菌生长(MIC值... 对橘皮、艾草及银杏叶的黄酮提取物进行提取,并通过测定菌液电导率、AKP酶活性及胞内蛋白浓度,探究其抑菌机理。结果表明:橘皮黄酮提取物能显著抑制大肠杆菌生长(MIC值为25 mg/mL),银杏叶黄酮提取物能显著抑制金黄色葡萄球菌生长(MIC值为12.5 mg/mL)。三种天然植物提取物除具备良好的抑菌性能,均通过破环细菌壁/膜来达到抑菌效果,且橘皮黄酮提取物的作用效果优于艾草黄酮提取物和银杏叶黄酮提取物。 展开更多
关键词 橘皮黄酮提取物 艾草黄酮提取物 银杏叶黄酮提取物 抑菌机理
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全自动时间分辨荧光免疫分析技术检测血清抑制素A的方法建立及性能评价
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作者 谭玉华 冯健明 +3 位作者 于婷 余海枷 陈龙 戴林彬 《现代检验医学杂志》 2026年第2期23-28,45,共7页
目的建立一种全自动时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术检测血清抑制素A(INH A)的方法,并对其性能进行评价。方法抑制素βA单克隆抗体包被微孔板作为微孔反应板,铕标记抑制素α单克隆抗体作为铕标记物,采用全自动TRFIA仪定量检测孕妇血清... 目的建立一种全自动时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术检测血清抑制素A(INH A)的方法,并对其性能进行评价。方法抑制素βA单克隆抗体包被微孔板作为微孔反应板,铕标记抑制素α单克隆抗体作为铕标记物,采用全自动TRFIA仪定量检测孕妇血清中INH A浓度,对其分析灵敏度、准确度、回收率、线性、精密度、校准品均匀性和特异度等性能指标进行评价。选择69例孕周在14~21周的无溶血、黄疸和脂血的孕妇血清样本同时进行化学发光法及TRFIA法检测进行方法学比对试验,一致性采用t检验、线性相关分析、回归分析和Bland-Altman法分析。结果抑制素βA单克隆抗体最适包被浓度为4μg/ml,铕标记抑制素α单克隆抗体母液最适稀释比为1:1000,检测低限、生物检测限和功能灵敏度分别为0.75、10.00和25.00pg/ml,检测国际标准品的相对偏差在-9.28%~-2.17%,回收试验的平均回收率在92.71%~100.79%。在20.00~2000.00pg/ml范围内,线性相关系数可达0.9995,批内和批间变异系数(CV)分别在1.56%~1.71%和1.61%~2.22%,校准品B~F的瓶间CV在2.23%~3.47%。交叉反应中,检测高浓度的人促甲状腺激素(hTSH)、人促黄体激素(hLH)、泌乳素(PRL)、人促卵泡激素(hFSH)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、人甲胎蛋白(hAFP)、α2-巨球蛋白(AMG)、激活素A(ACTA)、激活素AB(ACTAB)、激活素B(ACTB)、抑制素B(INH B)和卵泡抑素(FST),结果均不高于10pg/ml。自建方法与对比方法定量测定结果高度相关(r=0.9968,t_(r)=101.99,P<0.05),95.65%的相对偏差数据点在95%一致性限(-7.48%,7.63%)内,且95%一致性限的置信区间(-9.07%,9.24%)在±10%内。结论自建方法具有灵敏度高、准确度好、线性范围宽、精密度好和特异度高等优点,与对比方法检测结果具有高度的相关性和一致性,满足临床检测需求。 展开更多
关键词 时间分辨荧光免疫分析 抑制素A 性能评价
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基于邻近标记技术建立高尔基蛋白73(GP73)相互作用蛋白谱及初步分析
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作者 刘慕仪 张畅 +3 位作者 杨孟欣 阎新龙 万禄明 魏从文 《生物化学与生物物理进展》 北大核心 2026年第3期711-723,共13页
目的 邻近标记是近年发展起来的一种研究活细胞内蛋白质相互作用的技术手段,能够捕捉细胞内瞬时和微弱的蛋白质相互作用,本研究以高尔基体膜蛋白GP73为研究对象,建立APEX2介导的邻近标记技术,进一步解析GP73蛋白的生理病理功能。方法 构... 目的 邻近标记是近年发展起来的一种研究活细胞内蛋白质相互作用的技术手段,能够捕捉细胞内瞬时和微弱的蛋白质相互作用,本研究以高尔基体膜蛋白GP73为研究对象,建立APEX2介导的邻近标记技术,进一步解析GP73蛋白的生理病理功能。方法 构建GP73与APEX2融合表达的稳定细胞系,加入生物素-苯酚(biotin-phenol)和H_(2)O_(2)催化GP73邻近蛋白的生物素化反应,链霉抗生物素蛋白(streptavidin)磁珠富集生物素化的蛋白质,联合质谱检测GP73的相互作用蛋白,进一步进行生物信息学分析。结果 本研究成功构建了基于APEX2的邻近标记体系,鉴定出95个GP73的高置信度相互作用蛋白。富集分析表明,GP73相互作用蛋白与核糖体结合(ribosome binding)功能相关,提示其可能发挥调控细胞翻译的功能,进一步的实验验证了GP73与真核翻译起始因子EIF3的亚基EIF3G和EIF3I存在直接的相互作用,而SUnSET(surface sensing of traslation)实验则证明了GP73能够促进细胞中的蛋白质翻译过程。结论 本研究通过APEX2介导的邻近标记技术系统研究了GP73的相互作用蛋白,揭示了其调控细胞内蛋白质翻译的新功能,加深了对GP73蛋白功能的认知与理解,并为进一步解析复杂的生物大分子相互作用和生物学过程奠定了技术基础。 展开更多
关键词 邻近标记 蛋白质相互作用 高尔基蛋白73 生物信息学分析 翻译
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RNA合成生物学:基因回路设计与精准医疗应用
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作者 戴亦含 《生物化学与生物物理进展》 北大核心 2026年第2期309-326,共18页
RNA合成生物学通过将RNA分子设计为可编程的生物调控元件,以实现对基因表达的高时空精度控制,为精准医疗提供了强大工具。本文系统综述该领域的研究进展。首先聚焦于核糖开关、RNA温度计、Toehold开关等核心元件的结构可编程性与功能多... RNA合成生物学通过将RNA分子设计为可编程的生物调控元件,以实现对基因表达的高时空精度控制,为精准医疗提供了强大工具。本文系统综述该领域的研究进展。首先聚焦于核糖开关、RNA温度计、Toehold开关等核心元件的结构可编程性与功能多样性,总结了天然元件挖掘、理性设计与化学修饰等关键技术突破,探讨了miRNA响应型开关、工程化circRNA及siRNA自组装系统等合成RNA调控元件的设计与优化策略;其次,阐述逻辑门等RNA的合成基因回路设计原理与优化方案;接着评述RNA合成系统在癌症、代谢性疾病、神经退行性疾病等重大疾病精准治疗中的应用转化案例;最后,探讨递送瓶颈、表达噪声、脱靶效应等关键挑战,并展望智能化递送平台的发展方向。本综述旨在为RNA合成生物学的技术发展路径与临床转化应用提供理论参考。 展开更多
关键词 RNA合成生物学 RNA元件 基因回路 精准医疗 递送系统
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基于RPA-CRISPR/Cas12a的猴痘病毒基因检测方法建立
13
作者 董小旭 牛楠楠 +5 位作者 赵印震 杜学利 李灵轲 王继创 李玉林 王云龙 《郑州大学学报(理学版)》 北大核心 2026年第1期87-94,共8页
利用基于重组酶聚合酶等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)和簇状规则间隔短回文重复序列相关蛋白12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)建立猴... 利用基于重组酶聚合酶等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)和簇状规则间隔短回文重复序列相关蛋白12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)建立猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)核酸快速检测体系,并与侧向层析(lateral flow assay,LFA)相结合,构建基于RPA-CRISPR/Cas12a的MPXV核酸层析快速检测系统,实现可视化快速检测。实验结果表明:RPA最佳反应条件为37℃、15 min;CRISPR体系Cas12a、crRNA、NEBuffer、ssDNA最佳加入量分别为1.0,0.25,3.0,0.25μL。整个检测流程仅需1 h,与灭活的甲、乙型流感病毒原液以及牛痘、天花质粒对照无交叉反应,最低检测限为10 copies/μL。成功开发了基于RPA-CRISPR/Cas12a灵敏度高、特异性强、快速检测MPXV的方法,可应用于现场检测,为MPXV检测提供了一种简便快速的检测方法。 展开更多
关键词 猴痘病毒 簇状规则间隔短回文重复序列相关蛋白12a 重组酶聚合酶等温扩增技术 胶体金试纸条
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锁环探针荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌耐药性及耐药突变基因的应用研究
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作者 朱秀兰 邓玉玲 +5 位作者 莫丽英 蒲荣 陈凤钻 韦学武 卢雪茹 张帅 《现代检验医学杂志》 2026年第1期111-115,131,共6页
目的分析锁环探针荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性及耐药突变基因的临床应用价值。方法收集2021年1月~2024年5月广东医科大学附属东莞松山湖中心医院165例涂阳肺结核患者痰液标本,均行痰涂片镜检、MTB培养/鉴定、比例法药... 目的分析锁环探针荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性及耐药突变基因的临床应用价值。方法收集2021年1月~2024年5月广东医科大学附属东莞松山湖中心医院165例涂阳肺结核患者痰液标本,均行痰涂片镜检、MTB培养/鉴定、比例法药敏试验及基于锁环探针的荧光定量PCR技术检测利福平(RFP)、异烟肼(INH)耐药性及耐药基因突变位点。以比例法药敏试验结果为参考标准,评价锁环探针荧光定量PCR技术检测耐药MTB的效能。结果经分离培养证实151株为MTB,比例法药敏试验检出RFP耐药36株,INH耐药42株。锁环探针荧光定量PCR技术检出RFP、INH耐药,与比例法药敏试验检测结果差异无统计学意义(χ^(2)=0.018、0.067,均P>0.05)。以药敏试验为参考,锁环探针荧光定量PCR技术检测RFP耐药的敏感度、特异度、准确度分别为91.67%(33/36)、98.26%(113/115)、96.69%(146/151),检测一致性Kappa值为0.895;检测INH耐药的敏感度、特异度、准确度分别为83.33%(35/42)、95.41%(104/109)、92.05%(139/151),检测一致性Kappa值为0.867。锁环探针荧光定量PCR技术检出RFP耐药菌株rpoB基因突变中96.97%为单一位点突变,以531位点突变为主约占57.58%,其次为526位点突变约占27.27%;检出INH耐药菌株katG/INH A基因突变,以katG 315位点突变为主,其中80.56%为katG单一位点突变,16.67%为INH A单一位点突变。结论涂阳肺结核患者应用锁环探针荧光定量PCR技术行痰标本RFP、INH耐药筛查具有较高的诊断效能,可作为临床快速诊断耐药基因位点突变及筛查耐药结核病的补充手段,为临床诊疗提供依据。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 锁环探针 荧光定量PCR技术 利福平 异烟肼 耐药性 耐药基因突变
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胰岛素增敏剂的双靶点协同与时空递送研究新进展
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作者 谢莲 《福建轻纺》 2026年第2期39-48,共10页
2型糖尿病(T2DM)已成为全球性重大健康挑战,其核心病理机制与胰岛素信号通路的复杂紊乱密切相关。近年来,针对胰岛素增敏通路及其关键分子调节剂的小分子药物研发取得了一系列重要突破。其中,过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和蛋... 2型糖尿病(T2DM)已成为全球性重大健康挑战,其核心病理机制与胰岛素信号通路的复杂紊乱密切相关。近年来,针对胰岛素增敏通路及其关键分子调节剂的小分子药物研发取得了一系列重要突破。其中,过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)作为经典药物靶点,其配体药物的构效关系研究不仅深化了对作用机制的理解,也为设计新一代疗法提供了关键范式。本文梳理了该领域的最新进展,重点阐述:(1)PPARγ激动剂的分子设计与优化历程;(2)PTP1B抑制剂的理性设计策略与挑战;(3)基于系统生物学方法发现的新兴调控靶点及其治疗潜力。未来,胰岛素增敏剂的开发需突破传统单靶点模式的局限,整合具有时空精准性的药物递送系统,并融合代谢组学等多维度信息以推动个体化治疗。全新研究策略的开发不仅为T2DM的临床干预开辟了新路径,也为代谢性疾病的精准医疗奠定了重要的理论基础。 展开更多
关键词 胰岛素增敏剂 PPARΓ激动剂 PTP1B抑制剂 小分子化合物 2型糖尿病
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变流体核酸扩增装置的技术创新及应用前景分析
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作者 相双红 《中文科技期刊数据库(全文版)自然科学》 2026年第2期005-009,共5页
作为现代生物学研究和临床诊断的重要支柱,核酸扩增技术经过多年发展,已从传统的聚合酶链式反应(PCR)逐步演变出多种先进技术,变流体核酸扩增装置作为这一领域的新兴力量,凭借其独特的技术优势和创新的设计,正逐渐在生物检测领域崭露头... 作为现代生物学研究和临床诊断的重要支柱,核酸扩增技术经过多年发展,已从传统的聚合酶链式反应(PCR)逐步演变出多种先进技术,变流体核酸扩增装置作为这一领域的新兴力量,凭借其独特的技术优势和创新的设计,正逐渐在生物检测领域崭露头角,该装置的诞生,为解决传统核酸扩增技术中设备庞大,操作复杂,检测效率低下等问题提供了新的思路和方法,有望推动核酸检测技术进入新的发展阶段,并在疾病诊断、生物安全监测等多个领域发挥关键作用。鉴于此,本文聚焦于新型核酸扩增装置,深入探讨其技术创新,通过与传统装置的对比,凸显新型装置优点,展示其为相关领域带来的变革性影响。 展开更多
关键词 核酸扩增装置 热交换机制 高精度控温 快速扩增 自动化
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基于YOLOv11的微滴式数字PCR液滴检测与计数研究
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作者 陈筱 朱强军 +1 位作者 王震宇 李孝成 《信息技术与信息化》 2026年第2期50-53,共4页
针对数字PCR图像因光照不均匀、液滴边缘模糊及背景干扰等问题导致的液滴检测性能偏低的核心瓶颈,文章提出了一种基于深度学习的数字PCR液滴检测与统计方法,旨在提升复杂图像场景下液滴检测的准确性与鲁棒性。在数据准备阶段,采用T-Rex ... 针对数字PCR图像因光照不均匀、液滴边缘模糊及背景干扰等问题导致的液滴检测性能偏低的核心瓶颈,文章提出了一种基于深度学习的数字PCR液滴检测与统计方法,旨在提升复杂图像场景下液滴检测的准确性与鲁棒性。在数据准备阶段,采用T-Rex Label自动定位与人工检查修正相结合的方式完成液滴标注,同时引入K-means聚类算法及像素平均值法实现阴、阳性液滴的快速区分,显著缩短了数据标注周期,提升了标注质量。模型构建环节,采用YOLOv11算法作为基础检测框架,结合多种数据增强策略开展模型训练与预测,并针对高、低两种亮度等级的图像分组设计对照实验,以验证方法在不同光照条件下的适应性。实验结果表明,所提方法在测试集上的检测准确度达97.64%,假阳性率低至2.28%;在高亮度组和低亮度组图像中,检测准确度分别为95.9%和95.4%,展现出优异的光照适应性与抗干扰能力。该研究提出的鲁棒性液滴检测方案,有效解决了数字PCR图像液滴检测中的关键技术问题,可为密集型多类别目标检测任务提供可靠的技术参考与实践范式。 展开更多
关键词 数字PCR液滴图像 YOLOv11 CLAHE T-Rex Label 液滴识别与计数
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单细胞PCR技术及其应用
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作者 张丽桐 朱建华 《生命的化学》 2026年第1期38-44,共7页
聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是分子生物学实验的基础,而单细胞聚合酶链式反应(single-cell polymerase chain reaction,sc-PCR)是在单细胞水平上解析基因表达和基因组差异的技术,避免了多细胞水平研究带来的诸多问题... 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是分子生物学实验的基础,而单细胞聚合酶链式反应(single-cell polymerase chain reaction,sc-PCR)是在单细胞水平上解析基因表达和基因组差异的技术,避免了多细胞水平研究带来的诸多问题,为揭示细胞异质性、追踪细胞谱系和解析复杂生物系统提供了强大工具,为生命科学研究开辟了新的视野。近年来,sc-PCR技术在灵敏度、特异性和多重检测能力等方面都取得了显著进展,已成为一种较成熟的研究方法。本文系统综述了sc-PCR技术的操作流程、关键技术难点,并重点结合其在基因表达谱构建与基因分析中的研究方法与应用成果,为相关领域研究提供更具参考价值的综述内容。 展开更多
关键词 单细胞聚合酶链式反应 膜片钳 基因表达谱 基因分析
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外泌体分离技术研究进展 被引量：1
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作者 李帅 刘亚婷 仰大勇 《化学学报》 北大核心 2025年第4期428-438,共11页
外泌体是来源于母细胞的小细胞外囊泡,包裹有核酸、蛋白等内容物,能够动态实时地反映母细胞的生理病理状态,因此在药物递送、疾病诊断和治疗等生物医学领域有广泛的应用.外泌体应用的第一步是分离和纯化,不管是从血液、唾液等体液还是... 外泌体是来源于母细胞的小细胞外囊泡,包裹有核酸、蛋白等内容物,能够动态实时地反映母细胞的生理病理状态,因此在药物递送、疾病诊断和治疗等生物医学领域有广泛的应用.外泌体应用的第一步是分离和纯化,不管是从血液、唾液等体液还是细胞培养上清中获取外泌体,都需要对其进行分离纯化,以去除不需要的杂质.基于外泌体的尺寸、密度、电荷、组成,已经开发出了诸多分离方法,比如超速离心、超滤、尺寸排阻色谱、聚合物沉淀、免疫亲和等,这些传统的分离方法已经非常成熟,尤其是超速离心,被誉为是外泌体分离的金标准,为广大研究者所接受.然而这些方法在分离纯度、效率、处理量、操作便捷性等方面各有优缺点,因此将多种分离方法联用是一种新思路.此外,随着化学、材料学、生物学、医学、工程学、机械学等学科的发展和交叉,越来越多新兴的技术被开发出来,比如微流控法、基于流体流动原理分离、热泳法、脂质识别分离、DNA适配体亲合法等,在一定程度上提高了外泌体的分离效率和纯度.在本综述中,详细总结了传统分离方法和新兴分离方法的最新进展,并对未来发展进行了展望,以期促进该领域的发展,推动外泌体技术的产业化. 展开更多
关键词 外泌体 外泌体分离 细胞外囊泡 微流控 DNA适配体
原文传递
西安地区糖尿病筛查人群异常血红蛋白表型和基因突变分析 被引量：1
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作者 许楠 郭智 +2 位作者 梁亮 耿燕 李友琼 《现代检验医学杂志》 2025年第1期13-16,23,共5页
目的 了解西安地区糖尿病筛查人群异常血红蛋白的突变谱和表型。方法 选取2022年1~12月西安交通大学第二附属医院就诊的30 356例患者,采用高效液相色谱法检测糖化血红蛋白Hb A1c,当提示有异常峰时,同时进行血细胞检测分析和血红蛋白分析... 目的 了解西安地区糖尿病筛查人群异常血红蛋白的突变谱和表型。方法 选取2022年1~12月西安交通大学第二附属医院就诊的30 356例患者,采用高效液相色谱法检测糖化血红蛋白Hb A1c,当提示有异常峰时,同时进行血细胞检测分析和血红蛋白分析,最后Sanger法进行DNA序列分析。结果 西安地区糖尿病筛查人群的异常血红蛋白检出率为0.092%(28/30 356)。共检出7种异常血红蛋白28例,分别为Hb E(10例)、Hb G-Coushatta(6例)、Hb G-Taibei(6例)、Hb Q-Thailand(2例)、Hb North Manchester(2例)、Hb Ottawa(1例)和Hb Queens(1例)。其中1例是Hb GTaibei并发IVS Ⅱ-659_664 (-GCAATA),为首次世界报道。有7例Hb E血液学表型改变外,其他异常血红蛋白表型是正常的。除了Hb G-Coushatta和Hb Ottawa未见干扰糖化检测外,其他5种异常血红蛋白均影响了糖化检测结果。结论 西安地区糖尿病筛查人群存在一定的异常血红蛋白携带,以Hb E,Hb G-Taibei,Hb G-Coushatta为主。绝大部分异常血红蛋白的血液学表型是正常的,但是它们会干扰Hb A1c检测结果。 展开更多
关键词 西安地区 异常血红蛋白 高效液相色谱法 糖化血红蛋白
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