通过稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)卵膜蛋白质组测序鉴定黏性卵膜中富集的透明带蛋白(Zona pellucida glycoproteins,Zps),建立可用于卵型研究的稀有鮈鲫zp基因突变体和转基因斑马鱼(Danio rerio)。实验收集稀有鮈鲫胚胎(1hour post fert...通过稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)卵膜蛋白质组测序鉴定黏性卵膜中富集的透明带蛋白(Zona pellucida glycoproteins,Zps),建立可用于卵型研究的稀有鮈鲫zp基因突变体和转基因斑马鱼(Danio rerio)。实验收集稀有鮈鲫胚胎(1hour post fertilization,hpf),分离收集足量卵膜,提取卵膜中的蛋白质进行测序分析。将测序数据进行拼接并与鲤科鱼类蛋白质进行比对,选取匹配度和丰度最高的基因zp2l2和zp4l进行实验。分别在zp2l2和zp4l的第一个外显子、第六个外显子设计CRISPR/Cas9敲除靶点,构建zp基因突变体。扩增斑马鱼zp3.2基因上游启动子序列(2874 base pairs,bps)和zp2l2、zp4l编码序列(1137、3009 bp),通过无缝克隆(Infusion cloning)将zp3.2启动子连接进入具有Tol2转座元件的质粒中,构得质粒pT2AL-zp3.2-eGPF;再将zp2l2、zp4l编码序列克隆到pT2AL-zp3.2-eGPF质粒中,得到可用于胚胎注射的转基因质粒pT2AL-zp3.2-zp2l2-eGPF和pT2AL-zp3.2-zp4l-eGPF。体外转录合成转座酶mRNA与构建的转基因质粒混合进行斑马鱼胚胎显微注射。通过稀有鮈鲫胚胎显微注射及三代鉴定,成功在稀有鮈鲫中敲除zp2l2和zp4l获得稳定遗传的纯合突变体;稀有鮈鲫zp转基因斑马鱼经传代鉴定,筛选得到了可稳定遗传的转基因品系Tg(zp3.2:zp2l2-eGPF)和Tg(zp3.2:zp4l-eGPF),这2个转基因品系的绿色荧光蛋白在斑马鱼胚胎发育的15d(days post fertilization,dpf)开始在卵巢和肝脏中表达。实验构建zp2l2和zp4l稀有鮈鲫突变体和转基因斑马鱼的方法,为鲤科鱼类卵型形成机制的研究提供了可行的实验思路和技术路线。展开更多
传统的超扫描技术无法直接揭示社会互动与脑间同步之间的因果关系。群脑刺激技术通过对交互个体特定脑区实施同步的非侵入性经颅电刺激(transcranial electrical stimulation,t ES),主动操纵脑间同步水平,为因果机制的解析提供了全新的...传统的超扫描技术无法直接揭示社会互动与脑间同步之间的因果关系。群脑刺激技术通过对交互个体特定脑区实施同步的非侵入性经颅电刺激(transcranial electrical stimulation,t ES),主动操纵脑间同步水平,为因果机制的解析提供了全新的实验途径。群脑刺激中,经颅交流电刺激(transcranial alternating current stimulation,t ACS)基于“跨脑夹带”机制,通过特定频率和相位施加交流电直接诱导多脑振荡的协同活动,从而优化跨脑信息传递,经颅直流电刺激(transcranial direct current stimulation,tDCS)则通过调节社会脑区的兴奋性,间接调控神经信息处理与行为协同。实证研究表明,群脑刺激能有效提升社会协作中的行为同步性、优化人际沟通效率以及增强社会学习效果,在多项研究中显示出对各类互动表现的改善作用。群脑刺激通过多层级机制影响社会互动:首先调节脑间同步水平,继而促进表征对齐、降低预测误差,并最终驱动互动行为。未来研究应致力于推动刺激参数标准化,提升复杂社会互动情境下的生态效度,并加速相关技术在教育优化、临床干预和组织管理等领域的应用转化,推动人际神经科学迈向因果解析与精准干预的新阶段。展开更多
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是全球范围内的一个重大卫生健康问题。HBV免疫耐受期是指在一定条件下,机体免疫系统在HBV刺激后,所表现出的特异性免疫低应答或无应答状态。HBV免疫耐受期的发病机制较为复杂,涉及HBV基因突变...乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是全球范围内的一个重大卫生健康问题。HBV免疫耐受期是指在一定条件下,机体免疫系统在HBV刺激后,所表现出的特异性免疫低应答或无应答状态。HBV免疫耐受期的发病机制较为复杂,涉及HBV基因突变、超螺旋共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的形成、抑制宿主细胞免疫、宿主基因多态性等。患者临床常表现为HBVe抗原(hepatitis Be antigen,HBeAg)阳性、HBV-脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)载量升高、血清谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)正常,肝脏活检可见轻度损伤。HBV免疫耐受期临床常给予抗病毒治疗,具有一定的疗效,但目前针对HBV免疫耐受期是否有必要接受抗病毒治疗仍存在争议。基于此,本文对HBV感染免疫耐受期发病机制、临床特征及治疗进行综述,以期对慢性HBV感染免疫耐受期患者的个体化精准治疗提供理论依据。展开更多
文摘通过稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)卵膜蛋白质组测序鉴定黏性卵膜中富集的透明带蛋白(Zona pellucida glycoproteins,Zps),建立可用于卵型研究的稀有鮈鲫zp基因突变体和转基因斑马鱼(Danio rerio)。实验收集稀有鮈鲫胚胎(1hour post fertilization,hpf),分离收集足量卵膜,提取卵膜中的蛋白质进行测序分析。将测序数据进行拼接并与鲤科鱼类蛋白质进行比对,选取匹配度和丰度最高的基因zp2l2和zp4l进行实验。分别在zp2l2和zp4l的第一个外显子、第六个外显子设计CRISPR/Cas9敲除靶点,构建zp基因突变体。扩增斑马鱼zp3.2基因上游启动子序列(2874 base pairs,bps)和zp2l2、zp4l编码序列(1137、3009 bp),通过无缝克隆(Infusion cloning)将zp3.2启动子连接进入具有Tol2转座元件的质粒中,构得质粒pT2AL-zp3.2-eGPF;再将zp2l2、zp4l编码序列克隆到pT2AL-zp3.2-eGPF质粒中,得到可用于胚胎注射的转基因质粒pT2AL-zp3.2-zp2l2-eGPF和pT2AL-zp3.2-zp4l-eGPF。体外转录合成转座酶mRNA与构建的转基因质粒混合进行斑马鱼胚胎显微注射。通过稀有鮈鲫胚胎显微注射及三代鉴定,成功在稀有鮈鲫中敲除zp2l2和zp4l获得稳定遗传的纯合突变体;稀有鮈鲫zp转基因斑马鱼经传代鉴定,筛选得到了可稳定遗传的转基因品系Tg(zp3.2:zp2l2-eGPF)和Tg(zp3.2:zp4l-eGPF),这2个转基因品系的绿色荧光蛋白在斑马鱼胚胎发育的15d(days post fertilization,dpf)开始在卵巢和肝脏中表达。实验构建zp2l2和zp4l稀有鮈鲫突变体和转基因斑马鱼的方法,为鲤科鱼类卵型形成机制的研究提供了可行的实验思路和技术路线。
文摘传统的超扫描技术无法直接揭示社会互动与脑间同步之间的因果关系。群脑刺激技术通过对交互个体特定脑区实施同步的非侵入性经颅电刺激(transcranial electrical stimulation,t ES),主动操纵脑间同步水平,为因果机制的解析提供了全新的实验途径。群脑刺激中,经颅交流电刺激(transcranial alternating current stimulation,t ACS)基于“跨脑夹带”机制,通过特定频率和相位施加交流电直接诱导多脑振荡的协同活动,从而优化跨脑信息传递,经颅直流电刺激(transcranial direct current stimulation,tDCS)则通过调节社会脑区的兴奋性,间接调控神经信息处理与行为协同。实证研究表明,群脑刺激能有效提升社会协作中的行为同步性、优化人际沟通效率以及增强社会学习效果,在多项研究中显示出对各类互动表现的改善作用。群脑刺激通过多层级机制影响社会互动:首先调节脑间同步水平,继而促进表征对齐、降低预测误差,并最终驱动互动行为。未来研究应致力于推动刺激参数标准化,提升复杂社会互动情境下的生态效度,并加速相关技术在教育优化、临床干预和组织管理等领域的应用转化,推动人际神经科学迈向因果解析与精准干预的新阶段。
