扫描离子电导显微镜(Scanning ion conductance microscopy,SICM)由HANSMA PK等^([1])于1989年提出,是一种用于样品高分辨率和非接触成像的显微镜技术。作为一种扫描探针显微镜技术,SICM最初利用在玻璃移液管内的电极和本体溶液中的第2...扫描离子电导显微镜(Scanning ion conductance microscopy,SICM)由HANSMA PK等^([1])于1989年提出,是一种用于样品高分辨率和非接触成像的显微镜技术。作为一种扫描探针显微镜技术,SICM最初利用在玻璃移液管内的电极和本体溶液中的第2个电极之间流动的离子电流来产生表面敏感反馈信号。表面的形貌可以通过在界面上横向扫描移液管来记录,其中离子电流的变化用于报告移液管尖端相对于表面的位置。随着跨学科研究界在仪器、探针设计和方法方面的稳步发展,SICM已发展成为生物学、医学和材料科学在界面及电化学科学研究中的多功能工具,其在细胞表面生物过程和微纳结构三维成像及细胞电化学特征的研究逐年增加。展开更多
文摘扫描离子电导显微镜(Scanning ion conductance microscopy,SICM)由HANSMA PK等^([1])于1989年提出,是一种用于样品高分辨率和非接触成像的显微镜技术。作为一种扫描探针显微镜技术,SICM最初利用在玻璃移液管内的电极和本体溶液中的第2个电极之间流动的离子电流来产生表面敏感反馈信号。表面的形貌可以通过在界面上横向扫描移液管来记录,其中离子电流的变化用于报告移液管尖端相对于表面的位置。随着跨学科研究界在仪器、探针设计和方法方面的稳步发展,SICM已发展成为生物学、医学和材料科学在界面及电化学科学研究中的多功能工具,其在细胞表面生物过程和微纳结构三维成像及细胞电化学特征的研究逐年增加。
文摘目的:观察化瘀祛痰方(Huayu-Qutan formula,HYQT)含药血清对油酸诱导的HepG2细胞脂质损伤及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的影响,探讨HYQT防治脂代谢紊乱的可能机制。方法:以不同终浓度的油酸诱导HepG2细胞,CCK8法、油红O染色和ELISA法筛选油酸诱导及HYQT含药血清干预的最佳浓度及时间。将HepG2细胞分为对照(control)组、模型(model)组、HYQT组、毒胡萝卜素(thapsigargin,Tg;ERS激动剂)组和Tg+HYQT组。油红O染色观察细胞脂质沉积情况;ELISA法检测细胞甘油三酯(triglyceride,TG)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量变化;透射电镜观察细胞内质网结构变化;RT-qPCR和Wes全自动蛋白定量分析系统检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regula⁃tory element binding protein 1c,SREBP1c)、乙酰辅酶A羧化酶1(acetyl coenzyme A carboxylase 1,ACC1)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)和硬脂酰辅酶A去饱和酶l(stearoyl coenzyme A desaturase 1,SCD1)的mRNA和蛋白表达情况。结果:1000μmol/L油酸诱导HepG2细胞脂质沉积效果明显,10%含药血清作用48 h作为后续实验的相对最佳浓度和时间。与control组比较,model组胞浆中橘红色脂滴形成明显增多,内质网扩张,发生ERS,细胞核固缩;TG和FFA含量明显增多(P<0.01);GRP78、SREBP1c、ACC1、FAS和SCD1 mRNA及蛋白表达量显著增高(P<0.01);与model组比较,HYQT含药血清干预后细胞内橘红色脂滴明显减少,内质网形态基本恢复正常,TG和FFA含量明显减少(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01);加入Tg后细胞内橘红色脂滴形成更多,内质网扩张程度更明显,内质网形态迥异,大小不一,呈空泡状改变,部分可见融合成簇现象,TG和FFA含量增多(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量增高(P<0.01);与Tg组比较,Tg+HYQT组细胞内橘红色脂滴减少,内质网扩张程度减轻,空泡体积减小和数量减少;TG和FFA含量明显减少(P<0.01),ERS及脂肪酸从头合成相关因子的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01)。结论:HYQT含药血清可以减轻油酸诱导的HepG2细胞脂质损伤,其机制可能与抑制ERS介导的脂肪酸从头合成有关。
