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地高辛标记的原位杂交法检测神经肽Y表达的条件优化 被引量：1
1
作者 武永飞 张建华 李生斌 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2004年第14期1260-1262,共3页
目的 :优化用地高辛标记的原位杂交法检测小鼠海马结构中神经肽Y的表达 .方法 :用体外转录法获得地高辛标记的神经肽Y的反义和正义RNA探针 .用kainicacid诱导小鼠脑组织中神经肽Y表达 ,2h后牺牲小鼠 ,制备 1 2 μm厚的海马组织切片 .然... 目的 :优化用地高辛标记的原位杂交法检测小鼠海马结构中神经肽Y的表达 .方法 :用体外转录法获得地高辛标记的神经肽Y的反义和正义RNA探针 .用kainicacid诱导小鼠脑组织中神经肽Y表达 ,2h后牺牲小鼠 ,制备 1 2 μm厚的海马组织切片 .然后比较不同pH值 (7.5～ 9.5 )的固定剂 ,不同的固定时间 ,不同的杂交前预处理 ,以及不同预杂交及杂交液对杂交信号的影响 .结果 :从pH 7.5～ 9.5 ,不同碱性固定液对杂交信号没有明显影响 .30min的固定时间足以获得满意的杂交结果 .用蛋白酶K部分消化切片或用TritonX 1 0 0打孔反而降低了杂交信号 .4 0mg/LSalmonspermDNA或 2 5 0mg/LbakersyeastRNA可获得与Denhardt s杂交液相同的杂交信号 .结论 :通过优化 ,我们获得了一种简便而又有效的地高辛标记的原位杂交法 。 展开更多
关键词 原位杂交 地高辛配基 神经肽Y 脑切片
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Endonuclease G参与小鼠海马神经元的凋亡
2
作者 武永飞 张建华 李生斌 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2004年第21期1925-1927,共3页
目的 :研究Endonuclease (EndoG)是否参与由兴奋性氨基酸所诱导的神经细胞凋亡 .方法 :用Westernblotting法检测EndoG+ - 小鼠及EndoG+ + 小鼠海马结构中EndoG的表达 .用KA诱导抽搐反应及神经细胞凋亡 .用TUNEL法分析En doG+ - 小鼠... 目的 :研究Endonuclease (EndoG)是否参与由兴奋性氨基酸所诱导的神经细胞凋亡 .方法 :用Westernblotting法检测EndoG+ - 小鼠及EndoG+ + 小鼠海马结构中EndoG的表达 .用KA诱导抽搐反应及神经细胞凋亡 .用TUNEL法分析En doG+ - 小鼠及EndoG+ + 小鼠海马结构中神经细胞凋亡的情况 .结果 :EndoG在EndoG+ - 小鼠海马结构中的表达比在En doG+ + 小鼠中降低 4 0 %以上 .KA作用后 ,EndoG+ - 小鼠与EndoG+ + 小鼠表现出相同的神经兴奋性 .KA作用后 ,与En doG+ + 相比 ,EndoG+ - 小鼠海马结构CA3,CA1亚区细胞凋亡下降了约 35 % .结论 :EndoG参与了由兴奋性毒性所诱发的神经细胞凋亡 . 展开更多
关键词 脱氧核糖核酸酶BamHI 凋亡 兴奋性毒性 红藻氨酸 海马
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