生物氧化是生物化学代谢部分的重要内容,因其复杂性和抽象性不易被学生理解。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native polyacrylamide gel electrophoresis, Native-PAGE)构建了适用于本科实验教学的“线粒体复合体酶I活性方法”。从锥虫...生物氧化是生物化学代谢部分的重要内容,因其复杂性和抽象性不易被学生理解。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native polyacrylamide gel electrophoresis, Native-PAGE)构建了适用于本科实验教学的“线粒体复合体酶I活性方法”。从锥虫中提取线粒体粗体物,以10μg/孔样品蛋白上样量,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳, NADH脱氢酶酶促反应时间为30分钟,可得到分辨率高、条带清晰的特异性酶活性条带。将Native-PAGE方法应用到本科生化实验中,可有效拓展教学内容,有助于教学紧密联系科研,对本科生化实验教学的开展有借鉴意义。展开更多
RNA结合蛋白(RBPs)在细胞中广泛存在,在多种生物学过程中发挥着重要作用。紫外交联和蛋白质免疫共沉淀(UV cross-linking and immunoprecipitation,CLIP)技术是一种用于鉴定蛋白质直接结合RNA的技术。随着高通量测序技术的发展,CLIP技...RNA结合蛋白(RBPs)在细胞中广泛存在,在多种生物学过程中发挥着重要作用。紫外交联和蛋白质免疫共沉淀(UV cross-linking and immunoprecipitation,CLIP)技术是一种用于鉴定蛋白质直接结合RNA的技术。随着高通量测序技术的发展,CLIP技术已成为鉴定RNA结合蛋白所结合的具体RNA种类和序列的关键方法。为了满足不断增长的科研需求,CLIP技术经历了多次改进,衍生出多种版本,如HITS-CLIP、PAR-CLIP和iCLIP等。日益完善的CLIP技术在揭示新型蛋白质-RNA相互作用、解析RNA修饰和调控机制等方面具有重要价值,在RNA生物学研究中不可或缺。本文详细回顾了这些技术的演进与创新,比较了它们的优势与局限性,探讨了近年来CLIP技术在非经典蛋白质-RNA相互作用的研究中的应用,并展望了CLIP技术在未来RNA生物学中的创新应用与发展方向。展开更多
目的:肠道微生物的研究日益成为热点,如何获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA是肠道微生物研究中的关键。本文通过对酚/氯仿法提取总DNA过程进行考察和优化,建立一种简便酚/氯仿抽提法。方法:考察和优化酚/氯仿法提取总DNA的过程,...目的:肠道微生物的研究日益成为热点,如何获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA是肠道微生物研究中的关键。本文通过对酚/氯仿法提取总DNA过程进行考察和优化,建立一种简便酚/氯仿抽提法。方法:考察和优化酚/氯仿法提取总DNA的过程,并根据DNA产量、纯度以及ERIC-PCR及16S rNDA-RFLP所反映的微生物群落结构特性的指标,并与QIAamp?DNA Stool Mini Kit提取的进行比较,评价了所建立的快速提取方法。结果:用简便酚/氯仿法得到基本完整的基因组DNA,ERIC-PCR和16S rDNA-RFLP结果与QIAamp?DNA Stool Mini Kit法基本相同。结论:该方法快速并成本低,适合肠道微生物研究中总DNA提取,尤其适合处理大批量的样品。展开更多
文摘RNA结合蛋白(RBPs)在细胞中广泛存在,在多种生物学过程中发挥着重要作用。紫外交联和蛋白质免疫共沉淀(UV cross-linking and immunoprecipitation,CLIP)技术是一种用于鉴定蛋白质直接结合RNA的技术。随着高通量测序技术的发展,CLIP技术已成为鉴定RNA结合蛋白所结合的具体RNA种类和序列的关键方法。为了满足不断增长的科研需求,CLIP技术经历了多次改进,衍生出多种版本,如HITS-CLIP、PAR-CLIP和iCLIP等。日益完善的CLIP技术在揭示新型蛋白质-RNA相互作用、解析RNA修饰和调控机制等方面具有重要价值,在RNA生物学研究中不可或缺。本文详细回顾了这些技术的演进与创新,比较了它们的优势与局限性,探讨了近年来CLIP技术在非经典蛋白质-RNA相互作用的研究中的应用,并展望了CLIP技术在未来RNA生物学中的创新应用与发展方向。
文摘目的:肠道微生物的研究日益成为热点,如何获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA是肠道微生物研究中的关键。本文通过对酚/氯仿法提取总DNA过程进行考察和优化,建立一种简便酚/氯仿抽提法。方法:考察和优化酚/氯仿法提取总DNA的过程,并根据DNA产量、纯度以及ERIC-PCR及16S rNDA-RFLP所反映的微生物群落结构特性的指标,并与QIAamp?DNA Stool Mini Kit提取的进行比较,评价了所建立的快速提取方法。结果:用简便酚/氯仿法得到基本完整的基因组DNA,ERIC-PCR和16S rDNA-RFLP结果与QIAamp?DNA Stool Mini Kit法基本相同。结论:该方法快速并成本低,适合肠道微生物研究中总DNA提取,尤其适合处理大批量的样品。
