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组氨酸标签位置对重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母外切菊粉酶活性的影响
被引量:
3
1
作者
马君燕
谭海东
+2 位作者
王文霞
杜昱光
尹恒
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2016年第3期218-223,277,共7页
为了研究His_6-tag标签位置对鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶(Kluyveromyces cicerisporus CBS4857 exo-inulinase,KcINU1)酶活性的影响,实验首先根据Swiss-Model构建的KcINU1三维模型预测了组氨酸标签在KcINU1的位置,然后将编码H...
为了研究His_6-tag标签位置对鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶(Kluyveromyces cicerisporus CBS4857 exo-inulinase,KcINU1)酶活性的影响,实验首先根据Swiss-Model构建的KcINU1三维模型预测了组氨酸标签在KcINU1的位置,然后将编码His_6-tag的基因通过PCR方法分别引入到kcINU1的N端和C端,并将重组的kcINU1基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA,重组质粒进一步经电转化法整合到毕赤酵母宿主菌X-33中,最后用甲醇诱导进行分泌表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,DNS去进行外切菊粉酶的活性测定。结果显示,实验中成功表达了具有活性的、His_6-tag标签位置不同的重组蛋白,并且N-His_6-KcINU1糖基化程度比KcINU1-His-C高,后者的比活是前者的82.2%,表明N端携带His_6-tag标签不影响蛋白的糖基化修饰,可以保持较高的酶活。该研究为获得高活性且便于分离纯化的重组KcINU1奠定了基础,对糖苷水解酶32家族标签位置的选择具有指导意义。
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关键词
组氨酸标签位置
鹰嘴豆孢克鲁维酵母
外切菊粉酶
酶活性
糖苷水解酶32家族
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职称材料
题名
组氨酸标签位置对重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母外切菊粉酶活性的影响
被引量:
3
1
作者
马君燕
谭海东
王文霞
杜昱光
尹恒
机构
中国科学院大连化学物理研究所天然产物与糖工程研究组
大连大学医学院
中国科学院大学
中国科学院过程工程研究所
出处
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2016年第3期218-223,277,共7页
基金
国家高技术研究发展规划(863计划)项目(2011AA10A205
2012AA021205)
文摘
为了研究His_6-tag标签位置对鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶(Kluyveromyces cicerisporus CBS4857 exo-inulinase,KcINU1)酶活性的影响,实验首先根据Swiss-Model构建的KcINU1三维模型预测了组氨酸标签在KcINU1的位置,然后将编码His_6-tag的基因通过PCR方法分别引入到kcINU1的N端和C端,并将重组的kcINU1基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA,重组质粒进一步经电转化法整合到毕赤酵母宿主菌X-33中,最后用甲醇诱导进行分泌表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,DNS去进行外切菊粉酶的活性测定。结果显示,实验中成功表达了具有活性的、His_6-tag标签位置不同的重组蛋白,并且N-His_6-KcINU1糖基化程度比KcINU1-His-C高,后者的比活是前者的82.2%,表明N端携带His_6-tag标签不影响蛋白的糖基化修饰,可以保持较高的酶活。该研究为获得高活性且便于分离纯化的重组KcINU1奠定了基础,对糖苷水解酶32家族标签位置的选择具有指导意义。
关键词
组氨酸标签位置
鹰嘴豆孢克鲁维酵母
外切菊粉酶
酶活性
糖苷水解酶32家族
Keywords
His6-tag position
Kluyveromyces cicerisporus
exoinulinase
enzyme activity
glycoside hydrolase family 32
分类号
O814.1 [理学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
组氨酸标签位置对重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母外切菊粉酶活性的影响
马君燕
谭海东
王文霞
杜昱光
尹恒
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2016
3
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