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大鼠pEGFP-N1-PLZF真核表达载体的构建和意义
1
作者 夏伟 白杨 +2 位作者 曾甫清 王振迪 叶哲伟 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2007年第8期6-8,13,共4页
目的构建真核表达载体pEGFP-N1-PLZF,为基因水平研究早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)在精原干细胞增殖和分化中的调控机制提供理论参考。方法参考分子克隆技术,采用RT-PCR的方法从大鼠睾丸组织中扩增PLZF,将该基因连接克隆到含有增强型... 目的构建真核表达载体pEGFP-N1-PLZF,为基因水平研究早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)在精原干细胞增殖和分化中的调控机制提供理论参考。方法参考分子克隆技术,采用RT-PCR的方法从大鼠睾丸组织中扩增PLZF,将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,以构建重组质粒pEGFP-N1-PLZF。结果实验从大鼠睾丸组织中提取总RNA,以RT-PCR方法获取编码PLZF基因的全序列cDNA。构建PLZF的cDNA真核表达质粒时将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在PLZF基因,并经酶切后DNA电泳鉴定及DNA测序证实结果。结论构建重组质粒pEGFP-N1-PLZF成功,实验中将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在PLZF基因的3’端。提高PLZF在真核细胞中的表达,而且不影响其目的蛋白的结构和功能,对研究PLZF调控精原干细胞增殖和分化机制具有重要的意义。 展开更多
关键词 PLZF 基因表达 绿色荧光蛋白
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