目的目前国内尚未有针对猫主要过敏原(Fel d 1)的商品化定量检测试剂盒,为建立Fel d 1快速检测方法,本研究制备了Fel d 1蛋白的单克隆抗体。方法本研究利用大肠杆菌密码子偏好性,对Fel d 1基因进行优化与合成,构建原核表达质粒pET-28a-F...目的目前国内尚未有针对猫主要过敏原(Fel d 1)的商品化定量检测试剂盒,为建立Fel d 1快速检测方法,本研究制备了Fel d 1蛋白的单克隆抗体。方法本研究利用大肠杆菌密码子偏好性,对Fel d 1基因进行优化与合成,构建原核表达质粒pET-28a-Fel d 1,随后表达并纯化Fel d 1重组蛋白;对BALB/c小鼠进行免疫,制备单克隆抗体。以重组Fel d 1作为包被蛋白建立间接ELISA方法,筛选杂交瘤细胞株;利用Western blot法验证单克隆抗体的特异性并鉴定其抗原表位。将筛选出的杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠腹腔,大量制备单克隆抗体。结果成功构建了重组质粒pET-28a-Fel d 1,对表达条件进行优化后获得了可溶性表达的Fel d 1蛋白。Western blot法及抗体效价测定结果显示,获得了2株稳定分泌抗Fel d 1特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为7D11和5H4;抗体鉴定结果显示,5H4抗体亚型为IgG2a,可识别Fel d 1第105-163位氨基酸区域;7D11抗体亚型为IgG1,可识别Fel d 1第1-59位氨基酸区域。结论本研究获得的高纯度重组Fel d 1蛋白将为临床免疫治疗猫毛过敏提供一种备选方案;此外,制备的单克隆抗体将为深入研究Fel d 1的生物学功能及ELISA检测方法的研发奠定物质基础。展开更多
化疗药物普遍缺乏特异性,开发一种可主动靶向递送化疗药物、对生物体无免疫原性的载体越来越受到人们的关注。本研究通过滚环扩增技术(rolling circle amplification,RCA)将合成的具有串联重复序列的DNA长单链与几条包含适配体AS1411的...化疗药物普遍缺乏特异性,开发一种可主动靶向递送化疗药物、对生物体无免疫原性的载体越来越受到人们的关注。本研究通过滚环扩增技术(rolling circle amplification,RCA)将合成的具有串联重复序列的DNA长单链与几条包含适配体AS1411的短链DNA杂交来构筑含有多价适配体的核酸载体(multivalent aptamer,Multi-Apt),利用其双螺旋结构大量负载抗肿瘤药物阿霉素(doxorubicin,Dox),用于靶向治疗小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)。通过琼脂糖凝胶电泳优化了RCA产物与短链的结合比例,利用酶标仪探究了Dox的负载及释放,并采用荧光显微镜、流式细胞术、酶标仪、CCK-8法和划痕实验考察了Multi-Apt-Dox对B16细胞的靶向性和生长抑制情况。实验结果显示,RCA产物与3条短链的最佳物质的量比为1∶50。荧光显微镜照片、流式细胞术和酶标仪实验结果表明,每个Multi-Apt可负载约200个Dox分子,而且其对B16细胞的亲和性是单价适配体的46倍。细胞实验表明,Multi-Apt在细胞内降解并释放药物后诱导产生选择性细胞毒性,从而极大降低Dox对正常细胞的毒性,为肿瘤治疗的靶向给药提供一种新的策略。展开更多
本文搜集梳理了大量的国内外文献,基于Web of Science核心合集数据库,采用VOSviewer分析软件,以1990—2022年期间文献为信息数据基础,对钼在环境领域的发展进行了可视化分析,为该领域的深入研究提供直观参考;文章综述了钼在自然界中的...本文搜集梳理了大量的国内外文献,基于Web of Science核心合集数据库,采用VOSviewer分析软件,以1990—2022年期间文献为信息数据基础,对钼在环境领域的发展进行了可视化分析,为该领域的深入研究提供直观参考;文章综述了钼在自然界中的分布以及污染来源的情况;针对含钼废水的若干处理技术进行归纳总结,目前处理的方法主要包括化学沉淀法、吸附法、离子交换法、膜吸附法和生物法等,针对不同的方法从去除效果、机理及影响因素进行解析,对比分析了不同处理技术的优点与缺点,并对含钼废水处理的未来研究方向进行展望。展开更多
文摘目的目前国内尚未有针对猫主要过敏原(Fel d 1)的商品化定量检测试剂盒,为建立Fel d 1快速检测方法,本研究制备了Fel d 1蛋白的单克隆抗体。方法本研究利用大肠杆菌密码子偏好性,对Fel d 1基因进行优化与合成,构建原核表达质粒pET-28a-Fel d 1,随后表达并纯化Fel d 1重组蛋白;对BALB/c小鼠进行免疫,制备单克隆抗体。以重组Fel d 1作为包被蛋白建立间接ELISA方法,筛选杂交瘤细胞株;利用Western blot法验证单克隆抗体的特异性并鉴定其抗原表位。将筛选出的杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠腹腔,大量制备单克隆抗体。结果成功构建了重组质粒pET-28a-Fel d 1,对表达条件进行优化后获得了可溶性表达的Fel d 1蛋白。Western blot法及抗体效价测定结果显示,获得了2株稳定分泌抗Fel d 1特异性抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为7D11和5H4;抗体鉴定结果显示,5H4抗体亚型为IgG2a,可识别Fel d 1第105-163位氨基酸区域;7D11抗体亚型为IgG1,可识别Fel d 1第1-59位氨基酸区域。结论本研究获得的高纯度重组Fel d 1蛋白将为临床免疫治疗猫毛过敏提供一种备选方案;此外,制备的单克隆抗体将为深入研究Fel d 1的生物学功能及ELISA检测方法的研发奠定物质基础。
文摘化疗药物普遍缺乏特异性,开发一种可主动靶向递送化疗药物、对生物体无免疫原性的载体越来越受到人们的关注。本研究通过滚环扩增技术(rolling circle amplification,RCA)将合成的具有串联重复序列的DNA长单链与几条包含适配体AS1411的短链DNA杂交来构筑含有多价适配体的核酸载体(multivalent aptamer,Multi-Apt),利用其双螺旋结构大量负载抗肿瘤药物阿霉素(doxorubicin,Dox),用于靶向治疗小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)。通过琼脂糖凝胶电泳优化了RCA产物与短链的结合比例,利用酶标仪探究了Dox的负载及释放,并采用荧光显微镜、流式细胞术、酶标仪、CCK-8法和划痕实验考察了Multi-Apt-Dox对B16细胞的靶向性和生长抑制情况。实验结果显示,RCA产物与3条短链的最佳物质的量比为1∶50。荧光显微镜照片、流式细胞术和酶标仪实验结果表明,每个Multi-Apt可负载约200个Dox分子,而且其对B16细胞的亲和性是单价适配体的46倍。细胞实验表明,Multi-Apt在细胞内降解并释放药物后诱导产生选择性细胞毒性,从而极大降低Dox对正常细胞的毒性,为肿瘤治疗的靶向给药提供一种新的策略。
文摘本文搜集梳理了大量的国内外文献,基于Web of Science核心合集数据库,采用VOSviewer分析软件,以1990—2022年期间文献为信息数据基础,对钼在环境领域的发展进行了可视化分析,为该领域的深入研究提供直观参考;文章综述了钼在自然界中的分布以及污染来源的情况;针对含钼废水的若干处理技术进行归纳总结,目前处理的方法主要包括化学沉淀法、吸附法、离子交换法、膜吸附法和生物法等,针对不同的方法从去除效果、机理及影响因素进行解析,对比分析了不同处理技术的优点与缺点,并对含钼废水处理的未来研究方向进行展望。
