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站所一体化下闭塞分区追踪运行动走线高峰时段收发车能力影响因素研究 被引量：2
1
作者 熊盛 宋政雨 +1 位作者 陈韬 徐梦婷 《铁道运输与经济》 北大核心 2025年第1期102-114,127,共14页
随着新建高速铁路车站和动车运用所规模进一步扩大,部分动车所动走线高峰时段收发车能力在实际运用中难以达到设计值,存在能力不足的情况,有必要探究站所一体化下动走线高峰时段收发车能力的影响因素。研究探讨了站所一体化下闭塞分区... 随着新建高速铁路车站和动车运用所规模进一步扩大,部分动车所动走线高峰时段收发车能力在实际运用中难以达到设计值,存在能力不足的情况,有必要探究站所一体化下动走线高峰时段收发车能力的影响因素。研究探讨了站所一体化下闭塞分区追踪运行动走线高峰时段收发车能力计算方法,基于列车运动学,分析了动走线追踪间隔时间的影响因素。从站所一体化下动走线追踪间隔时间、动走线布置及站所高峰时段行车组织方案等方面,对动走线高峰时段收发车能力影响因素进行定性及定量研究,并设计实例进行验证。研究结果表明,压缩动走线追踪间隔时间、提升轮对踏面检测设备限速值、缩短动走线长度、增加动走线数量、合理的动走线管理运用形式和优化高峰时段车站行车组织方案都可以提高动走线高峰时段收发车能力。研究为复杂站所关系动走线设计、运用优化提供了技术支撑。 展开更多
关键词 站所一体化 动走线 收发车能力 间隔时间 行车组织
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免疫磁珠-超高效液相色谱串联质谱法检测黄曲霉毒素B1
2
作者 熊盛 张紫杰 曹旭妮 《分析试验室》 北大核心 2025年第11期1681-1687,共7页
建立了免疫磁珠-超高效液相色谱串联质谱检测黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))的方法。分子对接研究表明黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))与大豆蛋白间存在较强的相互作用;实际样本分析显示食品基质中存在的干扰物严重影响测定结果的准确性。本研究以... 建立了免疫磁珠-超高效液相色谱串联质谱检测黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))的方法。分子对接研究表明黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))与大豆蛋白间存在较强的相互作用;实际样本分析显示食品基质中存在的干扰物严重影响测定结果的准确性。本研究以琼脂糖Protein A/G磁珠固定抗AFB_(1)抗体,制备了AFB_(1)免疫磁珠。免疫磁珠的抗体固定量为7.95μg/μL;每20μL免疫磁珠对AFB_(1)的最大吸附量为0.548μg。以10%乙酸乙腈溶液作为洗脱液,以超高压效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)法对AFB_(1)进行测定。在0.06~10μg/mL范围内,质谱信号与AFB_(1)浓度呈线性关系,检出限为0.033μg/mL。采用该免疫磁珠对玉米淀粉进行净化前处理,玉米淀粉中AFB_(1)的加标回收率为94.0%~105.9%。该免疫磁珠可用于食品淀粉抽提液中AFB_(1)的富集净化。 展开更多
关键词 基质效应 黄曲霉毒素B_(1) 免疫磁珠 前处理 超高压液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)
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克氏针斜行固定联合钢丝经末节横行骨隧道环扎治疗新鲜锤状指畸形
3
作者 黄小龙 熊胜 +3 位作者 王本元 赵强 王桂洋 巨积辉 《实用手外科杂志》 2025年第3期280-282,288,共4页
目的探讨克氏针斜行固定联合钢丝经末节横行骨隧道环扎治疗新鲜锤状指畸形的临床疗效。方法2019年6月-2022年6月,对20例新鲜锤状指畸形患者采用克氏针斜行固定联合末节指骨穿孔后钢丝环扎的方法治疗,其中骨性锤状指12例,腱性锤状指8例... 目的探讨克氏针斜行固定联合钢丝经末节横行骨隧道环扎治疗新鲜锤状指畸形的临床疗效。方法2019年6月-2022年6月,对20例新鲜锤状指畸形患者采用克氏针斜行固定联合末节指骨穿孔后钢丝环扎的方法治疗,其中骨性锤状指12例,腱性锤状指8例。术后4周取出克氏针,并行主动屈、伸指功能训练,术后8~12周取出钢丝。结果术后2例失访,18例获得随访,随访时间4~20个月,平均8个月;切口均一期愈合,无皮缘坏死,指体末梢血运、感觉正常;2例未及时取出克氏针,术后12周复查,克氏针断裂,予同时取出克氏针及钢丝。根据Dargan标准评定患指关节功能:优14例,良3例,可1例,优良率94.4%。结论应用克氏针斜行固定联合钢丝经末节横行骨隧道环扎治疗新鲜锤状指畸形,操作简便,可早期取出克氏针,早期功能训练,临床效果满意。 展开更多
关键词 锤状指 斜行固定 远侧指间关节 骨隧道
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舰船电力电子设备测试性设计现状及技术分析 被引量：6
4
作者 吴旭升 杨刚 +2 位作者 孙盼 熊胜 肖寰煜 《海军工程大学学报》 CAS 北大核心 2021年第2期14-18,共5页
为提高系统供电的连续性水平,舰船电力系统对设备自身的状态可感知能力提出了很高要求,测试性是实现该要求的有效途径。针对舰船电力电子设备在设计阶段未充分考虑测试性问题而导致故障诊断、使用管理和维修保障困难问题,阐述了目前舰... 为提高系统供电的连续性水平,舰船电力系统对设备自身的状态可感知能力提出了很高要求,测试性是实现该要求的有效途径。针对舰船电力电子设备在设计阶段未充分考虑测试性问题而导致故障诊断、使用管理和维修保障困难问题,阐述了目前舰船电力电子设备测试性设计的研究现状;结合舰船电力电子设备的特点,对测试性需求分析、测试性建模和测试性验证等测试性设计关键技术进行了分析。 展开更多
关键词 电力电子设备 测试性 舰船电力系统
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隧道自主除尘系统设计与应用 被引量：3
5
作者 熊胜 杨猛虎 +1 位作者 伍毅敏 凌涛 《施工技术》 CAS 2020年第9期67-70,共4页
传统隧道施工过程中机械通风、除尘方式存在成本高、效率低、烟雾弥漫巷道等问题,为此,在排烟除尘研究的基础上,采用可移动装置,主动将废气吸入过滤箱进行处理。将物理与化学净化结合,自主深度除尘降害、净化洞内空气,实现短时间内改善... 传统隧道施工过程中机械通风、除尘方式存在成本高、效率低、烟雾弥漫巷道等问题,为此,在排烟除尘研究的基础上,采用可移动装置,主动将废气吸入过滤箱进行处理。将物理与化学净化结合,自主深度除尘降害、净化洞内空气,实现短时间内改善洞内作业环境,为隧道安全、快速施工提供保障。工程实践应用表明,该除尘系统效率高、净化率高、成本低、安全、易操作。 展开更多
关键词 隧道工程 除尘系统 通风 空气净化 排烟
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气相色谱法测定黄瓜和土壤中代森锰锌的残留及其消解动态分析 被引量：7
6
作者 王寒 龚道新 +3 位作者 陈恒辉 陈玲 熊胜 徐钰哲 《环境监测管理与技术》 CSCD 2018年第3期56-59,共4页
采用GC-FPD(S)法测代森锰锌在黄瓜和土壤中的残留,通过优化前处理和检测条件,使方法在0.007 6 mg/L^3.80 mg/L范围内线性良好,在黄瓜和土壤中的方法检出限分别为5.12μg/kg和2.35μg/kg。黄瓜和土壤3个质量比水平的空白加标回收率分别为... 采用GC-FPD(S)法测代森锰锌在黄瓜和土壤中的残留,通过优化前处理和检测条件,使方法在0.007 6 mg/L^3.80 mg/L范围内线性良好,在黄瓜和土壤中的方法检出限分别为5.12μg/kg和2.35μg/kg。黄瓜和土壤3个质量比水平的空白加标回收率分别为91.1%~96.5%和82.4%~90.5%,7次测定结果的RSD为5.0%~6.5%和2.4%~4.1%。将该方法用于研究代森锰锌在黄瓜和土壤中的消解动态,得知代森锰锌在黄瓜中的半衰期为3.63 d^4.77 d,在土壤中的半衰期为4.19 d^7.33 d。 展开更多
关键词 代森锰锌 气相色谱法 消解动态 黄瓜 土壤
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地铁隧道施工钢板超前支护应用分析 被引量：6
7
作者 熊胜 邵帅 +1 位作者 周浩 凌涛 《交通科学与工程》 2020年第2期16-21,共6页
针对在富水软弱地层中采用浅埋暗挖法修筑隧道过程中易发生变形过大、失稳等问题,以长沙地铁5号线工程为依托,在隧道断面外轮廓线布置正、反向邻接的拉森钢板进行水平方向的超前支护试验研究,并通过ABAQUS有限元软件对钢板加固段支护效... 针对在富水软弱地层中采用浅埋暗挖法修筑隧道过程中易发生变形过大、失稳等问题,以长沙地铁5号线工程为依托,在隧道断面外轮廓线布置正、反向邻接的拉森钢板进行水平方向的超前支护试验研究,并通过ABAQUS有限元软件对钢板加固段支护效果进行模拟分析。研究结果表明:该方法有效地提高了隧道初期支护结构的抗变形能力,增强了隧道开挖时掌子面的稳定性,从而有效减少了地表和管线的沉降变形,具有良好的超前支护效果。 展开更多
关键词 隧道工程 富水软弱地层 拉森钢板 超前支护
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湖北长寿岛国家湿地公园维管植物多样性及区系研究 被引量：3
8
作者 李玉奇 陈鹏飞 +3 位作者 夏定阳 雷婷 熊升 谭荔夫 《湿地科学与管理》 2023年第2期31-35,共5页
湿地植物多样性及区系研究对湿地植被恢复、生物多样性保护和合理开发利用具有重要意义。以湖北长寿岛湿地作为研究对象,分析了其维管植物种类组成、主要草本植物群落、优势种及植物区系。结果表明:湖北长寿岛湿地维管植物丰富多样,共有... 湿地植物多样性及区系研究对湿地植被恢复、生物多样性保护和合理开发利用具有重要意义。以湖北长寿岛湿地作为研究对象,分析了其维管植物种类组成、主要草本植物群落、优势种及植物区系。结果表明:湖北长寿岛湿地维管植物丰富多样,共有103科324属489种,其中少种科和单种科合计占总科数的77.67%,寡属科和单属科合计占总科数的93.20%,少种属和单种属共计占总属数的98.46%。湿地主要由禾本科、菊科、蝶形花科、蔷薇科和莎草科等草本植物组成。常见的水生植物群落有眼子菜群落、水鳖群落和双穗雀稗群落,湿生植物群落为狗牙根群落和小鱼仙草群落。植物区系主要有14个类型和9个变型,热带成分占比45.88%,温带成分占比54.12%,呈现出由热带过渡到温带的区系特点。 展开更多
关键词 湖北长寿岛国家湿地公园 植物多样性 植物区系
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1991—2021年江山仙霞岭省级自然保护区土地覆被动态变化遥感监测 被引量：3
9
作者 金伟 余著成 +4 位作者 徐全 熊胜 王梅芳 陈卓 童哲 《自然保护地》 CSCD 2024年第4期84-94,共11页
【目的】分析江山仙霞岭省级自然保护区土地覆被动态变化,评估自然保护区生态环境质量状况。【方法】以1991、2001和2021年三期Landsat遥感影像为数据源,采用最大似然法和转移矩阵对江山仙霞岭省级自然保护区土地覆被动态变化及其转变... 【目的】分析江山仙霞岭省级自然保护区土地覆被动态变化,评估自然保护区生态环境质量状况。【方法】以1991、2001和2021年三期Landsat遥感影像为数据源,采用最大似然法和转移矩阵对江山仙霞岭省级自然保护区土地覆被动态变化及其转变情况进行分析。【结果】(1)最大似然法能够较准确地提取保护区土地覆被类型,总体精度在90%以上,阔叶林易被错分为针叶林。保护区土地覆盖类型以阔叶林为主,其次是针叶林和竹林。(2)1991—2021年,无林地和竹林面积显著减少,分别减少了77.74%和55.91%。阔叶林和针叶林面积显著增加,分别增加了19.26%和114.44%。(3)保护区土地覆被转入和转出面积最大的类型分别是阔叶林和竹林,分别为1 916和1 201 hm^(2);阔叶林增加主要来源于竹林和无林地,两者分别占阔叶林转入总面积的53.08%和30.48%。需要对毛竹林入侵针叶林和阔叶林现象加强管控,避免生物多样性退化。【结论】近30年江山仙霞岭省级自然保护区植被质量显著提升,自然保护区建设为生态环境和生物多样性保护起到重要作用。 展开更多
关键词 江山仙霞岭省级自然保护区 土地覆被 遥感监测 动态变化 转移特点
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绿色地铁建设及主要问题探讨 被引量：5
10
作者 熊胜 凌涛 +1 位作者 舒海英 付旻 《工程建设》 2019年第1期81-86,共6页
结合长沙地铁5号线一标地铁项目建设实际情况,积极探索绿色地铁的绿色施工标准及具体做法,认真践行"四节一环保"的技术措施,总结了一些现场绿色地铁建设的经验,提出了一些思考问题,以期为绿色地铁建设提供借鉴作用。
关键词 绿色地铁 建设 思考
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浅埋暗挖地下通道分部超前注浆支护方法 被引量：1
11
作者 熊胜 孙逸玮 凌涛 《工程建设》 2021年第9期50-55,共6页
浅埋隧道因其赋存条件复杂、地质条件差,同时常受地下水的影响,给施工带来很大困难,加之围岩的变形控制要求,在隧道开挖时进行超前注浆加固很有必要。而传统超前注浆支护采用全断面水平超前注浆,要达到超前注浆效果,普遍存在注浆距离长... 浅埋隧道因其赋存条件复杂、地质条件差,同时常受地下水的影响,给施工带来很大困难,加之围岩的变形控制要求,在隧道开挖时进行超前注浆加固很有必要。而传统超前注浆支护采用全断面水平超前注浆,要达到超前注浆效果,普遍存在注浆距离长、注浆时间长、注浆效果没保障、不经济、影响施工进度等缺点。本文结合长沙地铁5号线高桥南站暗挖地下通道工程,提出一种平顶直墙暗挖隧道分部超前注浆支护方法,为浅埋软弱地质段隧道超前注浆提供更为有效、精准、快捷、相对成本较低的超前注浆方法,以保障后续开挖支护施工安全。 展开更多
关键词 平顶直墙隧道 浅埋暗挖法 分部超前注浆 新型工法
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面向再制造的油漆清洗技术综述 被引量：12
12
作者 武爽爽 贾秀杰 +3 位作者 熊胜 王兴 马明亮 任远 《表面技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第3期51-65,共15页
再制造清洗是再制造中极为重要的环节,清洗的质量会直接影响再制造产品的质量。油漆是再制造清洗中必不可少的一种污垢类型,相比于其他污垢,具有与基体结合时间长,结合情况复杂,清洗难度大的特点。目前,清洗油漆主要采用传统清洗技术,... 再制造清洗是再制造中极为重要的环节,清洗的质量会直接影响再制造产品的质量。油漆是再制造清洗中必不可少的一种污垢类型,相比于其他污垢,具有与基体结合时间长,结合情况复杂,清洗难度大的特点。目前,清洗油漆主要采用传统清洗技术,如酸碱溶液清洗、高温热分解、干喷丸清洗等,而对近几年出现的油漆绿色清洗技术的推广应用不够,并且没有一个系统的整理总结用于指导实际应用。针对这一现状,基于国内外学者对油漆绿色清洗技术的研究成果,首先从油漆的性质方面进行整理,如:油漆与基体的结合情况,油漆表面微观形貌以及主要成分等。然后总结了机械领域常用的绿色油漆清洗技术,如熔盐清洗技术、干冰清洗技术、激光清洗技术、高压水射流清洗技术、湿喷丸清洗技术、超声波清洗技术以及超临界CO_(2)清洗技术,重点阐述了各种清洗技术的油漆清洗机理及优缺点,并以清洗效率为衡量标准,对各种清洗技术进行对比分析,为使用者选择清洗技术提供参考。最后根据现有油漆清洗技术存在的局限性,对清洗技术的发展前景进行了展望,提出了绿色化、复合化和智能化的发展理念,为新型油漆清洗技术的提升以及现有油漆清洗技术改进提供思路,促进清洗技术的进一步发展。 展开更多
关键词 再制造 油漆 清洗技术 清洗机理
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氟吡菌胺和吡唑醚菌酯在葡萄和土壤中的残留分析 被引量：11
13
作者 陈恒辉 龚道新 +3 位作者 王寒 杨丽华 熊胜 徐钰哲 《农药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期112-114,124,共4页
[目的]建立高效液相色谱法同时检测葡萄、土壤中氟吡菌胺和吡唑醚菌酯残留的方法。[方法]葡萄和土壤样品均用乙腈提取,提取液用PSA及C18吸附剂分散固相萃取净化,高效液相色谱检测,外标法定量。[结果]方法的线性范围为0.05～5.00 mg/L,... [目的]建立高效液相色谱法同时检测葡萄、土壤中氟吡菌胺和吡唑醚菌酯残留的方法。[方法]葡萄和土壤样品均用乙腈提取,提取液用PSA及C18吸附剂分散固相萃取净化,高效液相色谱检测,外标法定量。[结果]方法的线性范围为0.05～5.00 mg/L,氟吡菌胺相关系数为1.0000,吡唑醚菌酯相关系数为0.9999;在0.05、0.50、2.00 mg/kg 3个添加水平下,葡萄中氟吡菌胺和吡唑醚菌酯的平均回收率分别为86.7%～97.8%和90.6%～95.6%,相对标准偏差分别为2.55%～8.49%和2.14%～7.80%,土壤中氟吡菌胺和吡唑醚菌酯的平均回收率分别为79.1%～93.6%和83.4%～98.9%,相对标准偏差分别为5.29%～6.78%、1.69%～7.34%;在上述检测条件下,氟吡菌胺的最小检出量(LOD)为0.1 ng,在葡萄和土壤中的最低检测浓度(LOQ)均为0.05 mg/kg;吡唑醚菌酯的最小检出量(LOD)为0.1 ng,在葡萄和土壤中的最低检测浓度(LOQ)均为0.05 mg/kg。[结论]该方法具有简单可靠,分析样品时间短,准确度、精密度和灵敏度符合农药残留分析要求等特点,可以用于同时检测葡萄、土壤上氟吡菌胺和吡唑醚菌酯的残留量。 展开更多
关键词 氟吡菌胺 吡唑醚菌酯 葡萄 土壤 高效液相色谱
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游离下腹部穿支皮瓣修复手部创面 被引量：4
14
作者 朱卫 巨积辉 +2 位作者 熊胜 金光哲 侯瑞兴 《中国美容整形外科杂志》 CAS 2018年第6期331-334,共4页
目的 探讨采用游离下腹部穿支皮瓣修复手部皮肤软组织缺损创面的临床疗效。方法 自2010年3月至2013年12月,对收治的28例手部皮肤软组织缺损患者采用以腹壁浅动脉为蒂(20例)、旋髂浅动脉为蒂(8例)的游离下腹部穿支皮瓣修复,切取皮瓣面... 目的 探讨采用游离下腹部穿支皮瓣修复手部皮肤软组织缺损创面的临床疗效。方法 自2010年3月至2013年12月,对收治的28例手部皮肤软组织缺损患者采用以腹壁浅动脉为蒂(20例)、旋髂浅动脉为蒂(8例)的游离下腹部穿支皮瓣修复,切取皮瓣面积为8.0 cm×4.0 cm～16.0 cm×12.0 cm。结果 28例穿支皮瓣均一期成活。其中1例术后感染,经创面细菌培养并采用敏感抗生素换药后愈合良好;12例二期行皮瓣修薄整形手术;3例因出现瘢痕挛缩而影响手指伸屈活动,行二期瘢痕改形后手指活动功能获得改善。随访5～24个月,皮瓣质地柔软。腹部皮瓣供区愈合良好,无明显的不适感觉,仅留线性瘢痕。结论 采用游离下腹部穿支皮瓣修复,其切取方便,并可获得较大的切取面积,能一次完成创面覆盖;供区较隐藏,可直接缝合,是修复手部皮肤软组织缺损的一种理想方法。 展开更多
关键词 手部创面 下腹部 穿支皮瓣 修复
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气相色谱法快速检测小麦中醚菌酯和噻呋酰胺的残留 被引量：7
15
作者 宋天玮 熊胜 +3 位作者 陈恒辉 徐钰哲 陈玲 龚道新 《农药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期285-287,共3页
[目的]使用气相色谱检测小麦中醚菌酯和噻呋酰胺的残留,建立相应的分析方法。[方法]小麦籽粒及小麦秆经过乙腈提取,过层析柱净化,用0.22μm滤膜过滤,待GC-ECD检测。[结果]在0.01、0.05、0.5 mg/kg^3个添加水平下,醚菌酯在小麦籽中的添... [目的]使用气相色谱检测小麦中醚菌酯和噻呋酰胺的残留,建立相应的分析方法。[方法]小麦籽粒及小麦秆经过乙腈提取,过层析柱净化,用0.22μm滤膜过滤,待GC-ECD检测。[结果]在0.01、0.05、0.5 mg/kg^3个添加水平下,醚菌酯在小麦籽中的添加回收率为82.5%～114.6%,相对标准偏差(RSD)为3.88%～4.65%;在小麦秆中的添加回收率为82.4%～108.8%,相对标准偏差(RSD)为5.11%～5.34%;噻呋酰胺在小麦籽中的添加回收率为88.1%～117.7%,相对标准偏差(RSD)为3.93%～8.88%;在小麦秆中的添加回收率为90.3%～116.4%;相对标准偏差(RSD)为6.11%～8.10%。[结论]由数据可得醚菌酯和噻呋酰胺在0.01～5.0 mg/L范围内都呈现出良好的线性关系,2种药的最低检测浓度都是0.01 mg/kg。该方法简单易操作、灵敏度高、数据可靠,可应用于小麦中醚菌酯和噻呋酰胺残留量的测定。 展开更多
关键词 醚菌酯 噻呋酰胺 小麦 气相色谱 农药残留
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高效液相色谱法同时测定甘蓝中虱螨脲和顺式氯氰菊酯的残留量 被引量：3
16
作者 邓小岚 龚道新 +3 位作者 王寒 熊胜 罗傲 张宸宇 《精细化工中间体》 CAS 2020年第4期69-72,共4页
建立了高效液相色谱法同时检测甘蓝中虱螨脲和顺式氯氰菊酯残留的方法。使用乙腈提取,高效液相色谱检测,外标法定量。方法的线性范围为0.05~5.00 mg·L^-1,虱螨脲相关系数为0.9994,顺式氯氰菊酯相关系数为0.9994。在0.05、0.10、1.0... 建立了高效液相色谱法同时检测甘蓝中虱螨脲和顺式氯氰菊酯残留的方法。使用乙腈提取,高效液相色谱检测,外标法定量。方法的线性范围为0.05~5.00 mg·L^-1,虱螨脲相关系数为0.9994,顺式氯氰菊酯相关系数为0.9994。在0.05、0.10、1.00、5.00 mg·kg^-14个添加水平下,甘蓝中虱螨脲和顺式氯氰菊酯的平均回收率分别为87.3%~101.9%和89.4%~105.2%,相对标准偏差分别为2.61%~9.16%和3.35%~8.57%,定量限均为0.05 mg·kg^-1。该方法可用于同时检测甘蓝虱螨脲和顺式氯氰菊酯的残留量。 展开更多
关键词 虱螨脲 顺式氯氰菊酯 甘蓝 高效液相色谱
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MFG-E8作为外泌体载体蛋白的作用与功能 被引量：1
17
作者 黎智康 刘晨雪璇 +2 位作者 谭楚敏 熊盛 谢秋玲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期288-294,共7页
构建MFG-E8全长和截短体的重组质粒,分析各截短体蛋白能否将目的蛋白带到外泌体上并确定其位置,以探讨MFG-E8各结构域功能及其作为外泌体上载体蛋白的效率。利用PCR扩增出带有信号肽的MFG-E8及其截短体基因,与EGFP基因连接,构建7种重组... 构建MFG-E8全长和截短体的重组质粒,分析各截短体蛋白能否将目的蛋白带到外泌体上并确定其位置,以探讨MFG-E8各结构域功能及其作为外泌体上载体蛋白的效率。利用PCR扩增出带有信号肽的MFG-E8及其截短体基因,与EGFP基因连接,构建7种重组质粒。之后PEI介导瞬转HEK293F细胞进行表达,利用EGFP的荧光,通过Western blot和激光共聚焦显微镜检测蛋白表达情况及其在胞内的位置。同时提取转染细胞分泌的外泌体,通过Western blot和电镜检测重组蛋白在外泌体中的情况。最后将含有重组蛋白的外泌体转染293T细胞,荧光显微镜观察外泌体将重组蛋白带入受体细胞中的情况。结果表明,成功构建MFG-E8全长及截短体重组质粒并在HEK293F细胞中表达,各重组蛋白在胞内均有表达,其中EGF-L表达量最高,C2最低,细胞上清中只能检测到EGF-L、C1、EC1的表达。转染细胞分泌的外泌体只检测到MFG-E8、EC1和C1C2三种蛋白。含有这3种蛋白的外泌体转染HEK293T细胞,3组细胞均有荧光,其中MFG-E8-EGFP的外泌体效果最好。MFG-E8能够作为蛋白载体将目的蛋白带到外泌体膜上,其C1、C2结构域对该过程至关重要,EGF-L的存在可以促进蛋白表达。 展开更多
关键词 乳脂肪球表皮生长因子Ⅷ(MFG-E8) 截短体 外泌体 载体蛋白 结构域功能
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超高效液相色谱-串联质谱法同时检测葡萄中吡唑醚菌酯、氟吡菌胺及其代谢物（BAM）残留 被引量：5
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作者 罗傲 陈恒辉 +3 位作者 熊胜 张宸宇 邓小岚 龚道新 《精细化工中间体》 CAS 2019年第5期68-72,共5页
建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)快速检测葡萄中吡唑醚菌酯、氟吡菌胺及其代谢物2,6-二氯苯甲酰胺(BAM)残留量的方法。葡萄样品用乙腈提取,过0.22μm有机系滤膜后,在电喷雾正离子模式下以多反应监测(MRM)模式测定,基质校正... 建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)快速检测葡萄中吡唑醚菌酯、氟吡菌胺及其代谢物2,6-二氯苯甲酰胺(BAM)残留量的方法。葡萄样品用乙腈提取,过0.22μm有机系滤膜后,在电喷雾正离子模式下以多反应监测(MRM)模式测定,基质校正标准溶液外标法定量。结果表明:方法的线性范围为0.05~2.00 mg·kg-1,决定系数(r)>0.99;在0.05 mg·kg-1、0.50 mg·kg-1和2.00 mg·kg-1,3个添加水平下,吡唑醚菌酯、氟吡菌胺和2,6-二氯苯甲酰胺(BAM)的平均回收率为91%~97%、91%~93%和94%~100%,相对标准偏差为4%~7%、1%~3%和2%~3%,定量限为0.05 mg·kg-1。该处理方法准确、简单、快速,是葡萄中吡唑醚菌酯、氟吡菌胺和BAM残留检测理想的办法。 展开更多
关键词 超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS) 葡萄 吡唑醚菌酯 氟吡菌胺 2 6-二氯苯甲酰胺(BAM)
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液相色谱-串联质谱法检测水稻中噁唑酰草胺及其代谢物残留 被引量：6
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作者 罗傲 陈恒辉 +3 位作者 熊胜 张宸宇 邓小岚 龚道新 《精细化工中间体》 CAS 2020年第3期77-80,共4页
建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)快速检测水稻植株、稻壳、糙米中噁唑酰草胺及其代谢物(HFMPA、HPFMPA、6-CBO)残留量的方法。样品用乙腈提取PSA净化处理,过0.22μm有机系滤膜后,以乙腈-甲酸水为流动相,在电喷雾正离子模式... 建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)快速检测水稻植株、稻壳、糙米中噁唑酰草胺及其代谢物(HFMPA、HPFMPA、6-CBO)残留量的方法。样品用乙腈提取PSA净化处理,过0.22μm有机系滤膜后,以乙腈-甲酸水为流动相,在电喷雾正离子模式下以多反应监测(MRM)模式测定,用标准溶液外标法定量。结果表明:方法的线性范围为0.05~1.00 mg·kg^-1,决定系数(R^2)>0.99;在0.05、0.50、1.00 mg·kg^-13个添加水平下,该方法平均回收率为82%~109%,相对标准偏差为2%~8%,定量限为0.01 mg·kg^-1。该处理方法操作简便快速、准确率高、灵敏度高,适用于实际操作,是水稻中噁唑酰草胺及其代谢物(HFMPA、HPFMPA、6-CBO)残留检测较理想的办法。 展开更多
关键词 超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS) 水稻 噁唑酰草胺 HFMPA HPFMPA 6-CBO
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TNF-α纳米抗体的筛选、表达及特异性检测 被引量：1
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作者 蔺士新 刘东晨 +2 位作者 雷云 熊盛 谢秋玲 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期15-21,共7页
目的:构建肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)纳米抗体的噬菌体文库,筛选并表达与TNF-α具有亲和特异性的纳米抗体。方法:(1)利用TNF-α免疫羊驼,提取外周血淋巴细胞总RNA,构建噬菌体文库;多次淘洗筛选到与TNF-α有亲和力的克隆。... 目的:构建肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)纳米抗体的噬菌体文库,筛选并表达与TNF-α具有亲和特异性的纳米抗体。方法:(1)利用TNF-α免疫羊驼,提取外周血淋巴细胞总RNA,构建噬菌体文库;多次淘洗筛选到与TNF-α有亲和力的克隆。(2)通过ExPASy分析其分子量和亲疏水性等理化性质,并将筛选得到的VHH基因在大肠杆菌E.coli DH5α中表达。(3)表达的NbTNF-α蛋白质经过Ni金属螯合亲和层析纯化,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测蛋白质的抗原特异性和亲和力。结果:(1)通过噬菌体文库的构建和淘洗,筛选到8个与TNF-α有亲和力的VHH基因片段。(2)通过软件预测,这8个NbTNF-α蛋白均为亲水性蛋白,其分子量为19.6~20.1kDa;在大肠杆菌中重组表达这8个抗体蛋白。(3)ELISA检测结果表明,有5株纳米抗体NbTNF-α-1、NbTNF-α-2、NbTNF-α-3、NbTNF-α-4和NbTNF-α-5能与TNF-α特异性结合。结论:成功筛选并表达了5株具有TNF-α特异性的纳米抗体,可能成为抗TNF-α的候选药物。 展开更多
关键词 纳米抗体 肿瘤坏死因子 噬菌体文库 筛选
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