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基于重组酶聚合酶扩增-CRISPR/Cas12a的沙门氏菌可视化检测方法的建立 被引量:1
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作者 黄建飞 陈晶 +3 位作者 张倩 肖承荣 吴燕蕙 赖心田 《食品安全质量检测学报》 2025年第8期122-130,共9页
目的建立基于重组酶聚合酶扩增-CRISPR/Cas12a的沙门氏菌可视化检测方法。方法本研究将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术与成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白12a(clustered regularly interspaced... 目的建立基于重组酶聚合酶扩增-CRISPR/Cas12a的沙门氏菌可视化检测方法。方法本研究将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术与成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白12a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated protein 12a,CRISPR/Cas12a)系统相结合,以沙门氏菌invA作为目标基因,设计并合成RPA引物和CRISPR引导RNA(CRISPR-derived RNA,crRNA),通过荧光法和试纸条两种方法读取结果。对优化的RPA-CRISPR/Cas12检测体系进行特异性和灵敏度实验,并应用于食品样本检测。结果本研究成功研制纳米金核酸试纸条,建立的RPA-CRISPR/Cas12a体系可在1.5 h内特异性完成沙门氏菌的检测,灵敏度为80 CFU/mL。利用此方法对21个食品样本进行检测,荧光法、试纸条法与国家标准法检测结果完全一致,沙门氏菌检出率为4.8%。结论本研究建立的沙门氏菌RPA-CRISPR/Cas12a可视化检测方法具有高特异性和灵敏度,在沙门氏菌的现场快速检测方面具有应用价值。 展开更多
关键词 沙门氏菌 成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白12a 试纸条 重组酶聚合酶扩增 可视化检测
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酸枣仁提取物对慢性不可预知温和应激致抑郁失眠小鼠的治疗作用研究 被引量:6
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作者 程宏愽 刘献 +6 位作者 尚慧莹 高熔 党万云 高也卉 肖成荣 高月 马增春 《中国中药杂志》 北大核心 2025年第7期1817-1829,共13页
探讨酸枣仁提取物对慢性不可预知温和应激(CUMS)抑郁失眠模型小鼠的影响。采用CUMS处理小鼠3周构建CUMS抑郁失眠模型。小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药地西泮组(2 mg·kg^(-1))以及酸枣仁提取物低(1.95 g·kg^(-1))、中(3.9... 探讨酸枣仁提取物对慢性不可预知温和应激(CUMS)抑郁失眠模型小鼠的影响。采用CUMS处理小鼠3周构建CUMS抑郁失眠模型。小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药地西泮组(2 mg·kg^(-1))以及酸枣仁提取物低(1.95 g·kg^(-1))、中(3.9 g·kg^(-1))、高(7.8 g·kg^(-1))剂量组,每组18只。造模第15天灌胃给药,每日1次,持续7 d。随后分别进行戊巴比妥钠协同翻正实验、旷场实验、高架十字迷宫实验;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测小鼠血清及丘脑中神经递质5-羟色胺(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)含量,测定血清中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)水平;采用苏木精-伊红(HE)染色和尼氏染色观察小鼠海马区神经元损伤情况;采用Western blot法检测小鼠丘脑组织中色氨酸羟化酶2(TPH2),5-羟色胺转运体(SERT),单胺氧化酶A(MAOA),5-HT受体阻遏结合蛋白1(Freud1),突触可塑性相关蛋白[原癌基因蛋白(C-FOS)、突触后致密蛋白95(PSD95)、突触素1(SYN1)、细胞骨架活性调节蛋白(ARC)],血脑屏障(BBB)通透性相关蛋白[紧密连接蛋白1(ZO-1)、咬合蛋白(occludin)、闭合蛋白1(claudin 1)],炎症反应相关蛋白[NOD样受体热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、消皮素D(GSDMD)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)、胱天蛋白酶-8(caspase-8)],抗氧化相关蛋白[核因子E2相关因子2(NRF2)、血红素加氧酶1(HO1)]的表达。结果显示,与模型组相比,酸枣仁提取物各剂量处理均能显著缩短睡眠潜伏期,显著延长睡眠持续时间;酸枣仁提取物各剂量组小鼠旷场中央区访问次数、访问路程及时间占比均显著增加,小鼠进入高架十字迷宫开臂区的路程及时间占比显著提高;酸枣仁提取物各剂量组小鼠血清及丘脑中5-HT及5-HIAA含量均出现不同程度升高,血清中CRH、ACTH、CORT含量均有不同程度降低。另外,酸枣仁提取物能不同程度提高小鼠丘脑组织中TPH2蛋白的表达,降低MAOA、SERT、Freud1蛋白的表达,降低C-FOS蛋白的表达,增加PSD95、ARC、SYN1蛋白的表达,减轻小鼠海马组织病理损伤,增加小鼠丘脑组织中ZO-1、occludin、claudin 1蛋白的表达,降低小鼠丘脑组织中NLRP3、GSDMD、ASC、caspase-3和caspase-8蛋白的表达,升高HO1、NRF2蛋白的表达。上述结果表明,酸枣仁提取物能有效改善CUMS模型小鼠睡眠障碍和抑郁样行为,其作用可能与调节5-HT合成代谢过程及下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴相关激素水平、减轻海马组织病理损伤、提高突触可塑性、修复BBB完整性以及缓解炎症反应及氧化应激损伤有关。 展开更多
关键词 酸枣仁提取物 慢性不可预知温和应激 失眠 抑郁 神经递质 突触可塑性 氧化应激
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低压低氧致小鼠胃肠应激损伤的研究 被引量:2
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作者 魏雪 尚慧莹 +3 位作者 叶岸平 肖成荣 高月 马增春 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1482-1488,共7页
目的通过低压氧舱模拟高原缺氧环境,探究缺氧不同时间对小鼠胃肠应激损伤的影响。方法根据低压低氧不同时间设置正常对照组、低压低氧1、3、5天模型组,低压低氧处理完成后检测小肠推进率、内脏敏感性变化及胃肠道病理损伤程度;酶联免疫... 目的通过低压氧舱模拟高原缺氧环境,探究缺氧不同时间对小鼠胃肠应激损伤的影响。方法根据低压低氧不同时间设置正常对照组、低压低氧1、3、5天模型组,低压低氧处理完成后检测小肠推进率、内脏敏感性变化及胃肠道病理损伤程度;酶联免疫吸附法(ELISA)检测胃肠道IL-1β、IL-6、TNF-α含量变化,肠组织胃肠激素及肠黏膜损伤标志物二胺氧化酶、D-乳酸含量变化;Western blot实验检测肠组织紧密连接蛋白及紧密连接损伤通路相关蛋白表达变化。结果与对照组相比,模型组小鼠小肠推进率加快,肠道敏感性升高;肠黏膜损伤标志物表达升高;肠组织抑制胃肠蠕动激素降低,促胃肠蠕动激素升高;紧密连接蛋白ZO-1、claudin-1、occludin及紧密连接损伤相关通路蛋白VASP表达降低,紧密连接损伤相关通路中的NF-κB、HIF-1α、VEGF表达升高;胃肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α表达升高;胃组织胃蛋白酶含量升高;胃肠组织1天组损伤较轻,3天、5天组损伤较重;结论在低氧低氧环境中不同时间小鼠胃肠发生应激损伤,暴露3天时胃肠功能损伤较为严重,其中肠损伤机制可能与NF-κB/HIF-1α/VEGF/VASP信号通路被激活有关。 展开更多
关键词 低压低氧 小鼠 胃肠应激 小肠推进率 肠黏膜损伤 紧密连接
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RPA等温扩增技术检测副溶血性弧菌 被引量:9
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作者 刘小青 严琼英 +4 位作者 陈国培 王远洋 肖承荣 张永鑫 陈晶 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第1期112-118,共7页
目的:建立副溶血性弧菌的RPA-exo荧光探针快速检测方法。方法:采用重组酶聚合酶扩增技术,以irgB为靶基因设计副溶血性弧菌的RPA-exo引物探针,对引物探针进行组合筛选,建立RPA-exo荧光探针快速检测方法,并对其特异性、灵敏度、模拟污染... 目的:建立副溶血性弧菌的RPA-exo荧光探针快速检测方法。方法:采用重组酶聚合酶扩增技术,以irgB为靶基因设计副溶血性弧菌的RPA-exo引物探针,对引物探针进行组合筛选,建立RPA-exo荧光探针快速检测方法,并对其特异性、灵敏度、模拟污染实验及实际应用效果进行测试。结果:建立的方法15 min可获得结果,具有高特异性,无交叉反应;灵敏度为1.0×10^3 CFU/m L,DNA检测限为0.35 pg/μL,质粒检测限为1×10^3 copies/μL;模拟污染实验中加入终浓度为1.36×10^3 CFU/m L时,无需增菌即可被检出;实际样品检测中,10份水产品,有3份样品被检出,检测结果与国标GB 4789.7-2013结果一致。结论:本研究成功建立了副溶血性弧菌的RPA-exo快速检测方法。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 irgB 等温扩增 RPA-exo
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低剂量乌头碱持续给药重塑hiPSCs-CM线粒体能量代谢模式 被引量:8
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作者 刘泓 岳兰昕 +4 位作者 邱丽珍 肖成荣 王淑美 周维 高月 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期617-623,共7页
目的探究低剂量乌头碱对人诱导多能干细胞分化心肌细胞(human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes,hiPSCs-CM)代谢的影响。方法100 nmol·L^(-1)乌头碱对hiPSCs诱导分化的hiPSCs-CM细胞持续给药后,能量代谢分析... 目的探究低剂量乌头碱对人诱导多能干细胞分化心肌细胞(human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes,hiPSCs-CM)代谢的影响。方法100 nmol·L^(-1)乌头碱对hiPSCs诱导分化的hiPSCs-CM细胞持续给药后,能量代谢分析仪(Seahorse)检测代谢表型变化;微电极阵列(Microelectrode array,MEA)检测电生理参数;qRT-PCR检测脂糖代谢关键基因的表达;Western blot检测hiPSCs-CM中多能性转录因子的表达。结果100 nmol·L^(-1)乌头碱持续给药后,hiPSCs-CM代谢表型从氧化磷酸化向糖酵解方向偏移;脂代谢调控关键基因表达降低,而葡萄糖转运蛋白1(facilitative glucose transporters 1,Glut1)与转运蛋白4(facilitative glucose transporters 4,Glut4)比值明显升高;hiPSCs-CM收缩力降低(收缩频率增加且振幅减弱)、兴奋传导延迟,但未见明显心律失常指征。结论低剂量乌头碱持续给药会诱导心肌功能出现明显变化、能量代谢模式发生明显重构,这可能与其导致心肌细胞多能性增强和/或能量代谢底物选择改变密切相关。 展开更多
关键词 乌头碱 低剂量 hiPSCs-CM 能量代谢 氧化磷酸化 糖酵解
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麦冬皂苷D通过铁死亡途径减轻麦冬皂苷D'所致心肌细胞损伤 被引量:22
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作者 林毅 杨春启 +4 位作者 连闻雨 肖成荣 谭洪玲 高月 王宇光 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期2241-2247,共7页
本文研究麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OPD)对麦冬皂苷D'(ophiopogonin D',OPD')诱导大鼠心肌细胞损伤的干预作用及可能机制,为中药麦冬的临床使用提供相关的实验依据。采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测麦冬皂苷D'及... 本文研究麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OPD)对麦冬皂苷D'(ophiopogonin D',OPD')诱导大鼠心肌细胞损伤的干预作用及可能机制,为中药麦冬的临床使用提供相关的实验依据。采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测麦冬皂苷D'及麦冬皂苷D与麦冬皂苷D'共处理对大鼠心肌细胞存活率的影响;流式细胞仪检测细胞内活性氧(reaction oxygen species,ROS)含量;FerroOrange荧光探针检测细胞内Fe^(2+)含量变化;相应的试剂盒检测细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)含量的变化;Western blot检测转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1,TFR1)、环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX2)、NADPH氧化酶1(NADPH oxidase 1,NOX1)、长链脂酰辅酶A合成酶4(long-chain acyl-CoA synthetase 4,ACSL4)、阳离子氨基酸转运蛋白11(cationic amino acid transporter 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)及铁蛋白重链1(ferritin heavy chain 1,FTH1)等铁死亡相关蛋白表达的变化,探究麦冬皂苷D保护心肌细胞损伤的作用机制是否与铁死亡有关。实验结果显示,1μmol·L^(-1)的麦冬皂苷D'可显著诱导铁死亡相关蛋白的表达,导致细胞Fe^(2+)、ROS和GSH-Px含量明显升高,GSH含量明显降低;经不同浓度麦冬皂苷D(0.5、1和2μmol·L^(-1))处理后在一定程度上逆转麦冬皂苷D'引起的心肌细胞损伤,并且剂量在1~2μmol·L^(-1)时效果最佳。结果表明,麦冬皂苷D可干预麦冬皂苷D'引起的铁死亡,进而对大鼠心肌细胞产生保护作用。 展开更多
关键词 麦冬 麦冬皂苷D 麦冬皂苷D' 心肌细胞 铁死亡
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基于HK-2细胞的左金丸中生物碱类组分体外毒性筛选及机制初探 被引量:8
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作者 杨春启 连闻雨 +6 位作者 林毅 谢光辉 马增春 谭洪玲 肖成荣 王宇光 高月 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期110-118,共9页
目的基于肾小管上皮细胞HK-2筛选左金丸中主要生物碱类组分对肾细胞损伤。方法采用CCK-8法和高内涵筛选技术筛选左金丸主要生物碱中潜在肾细胞损伤成分。通过细胞形态、乳酸脱氢酶和细胞色素C释放率及凋亡相关蛋白表达等进行确证,初步... 目的基于肾小管上皮细胞HK-2筛选左金丸中主要生物碱类组分对肾细胞损伤。方法采用CCK-8法和高内涵筛选技术筛选左金丸主要生物碱中潜在肾细胞损伤成分。通过细胞形态、乳酸脱氢酶和细胞色素C释放率及凋亡相关蛋白表达等进行确证,初步确定造成细胞损伤作用的生物碱,为组分中药配伍组方和配伍减毒提供体外毒理学依据。结果采用CCK-8法和高内涵技术初步筛选,表明吴茱萸碱(EVO)能够显著降低细胞数目,升高细胞膜通透性,降低线粒体膜电位。此外,细胞形态、细胞凋亡和细胞色素C表达与高内涵筛选结果一致,Western blot实验表明EVO能够诱导细胞凋亡造成肾细胞损伤。结论 EVO可明显导致肾细胞损伤,可能是通过影响线粒体、细胞色素C及细胞膜通透性诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 左金丸 吴茱萸碱 高内涵 肾毒性 凋亡 HK-2细胞
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Tetramethylpyrazine protects lymphocytes from radiationinduced apoptosis through nuclear factor-κB 被引量:7
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作者 WANG xiao-Yan MA Zeng-Chun +6 位作者 WANG Yu-Guang TAN Hong-Ling xiao cheng-rong LIANG Qian-De TANG Xiang-Lin CHENG Yu GAO Yue 《Chinese Journal of Natural Medicines》 SCIE CAS CSCD 2014年第10期730-737,共8页
AIM: Radiation induces an important apoptosis response in irradiated organs. The objective of this study was to investigate the radioprotective effect of tetramethylpyrazine(TMP) on irradiated lymphocytes and discover... AIM: Radiation induces an important apoptosis response in irradiated organs. The objective of this study was to investigate the radioprotective effect of tetramethylpyrazine(TMP) on irradiated lymphocytes and discover the possible mechanism of protection. METHOD: Lymphocytes were pretreated for 12 h with TMP(25-200 μmol·L-1) and then exposed to 4 Gy radiation. Cell apoptosis and the signaling pathway were analyzed. RESULTS: Irradiation increased cell death, DNA fragmentation, activated caspase activation and cytochrome c translocation, downregulated B-cell lymphoma 2(Bcl-2) and up-regulated Bcl-2-associated X protein(Bax). Pretreated with TMP significantly reversed this tendency. Several anti-apoptotic characteristics of TMP, including the ability to increase cell viability, inhibit caspase-9 activation, and upregulate Bcl-2 and down-regulate Bax in 4Gy-irradiated lymphocytes were determined. Signal pathway analysis showed TMP could translate nuclear factor-κB(NF-κB) from cytosol into the nucleus. CONCLUSION: The results suggest that TMP had a radioprotective effect through the NF-κB pathway to inhibit apoptosis, and it may be an effective candidate for treating radiation diseases associated with cell apoptosis. 展开更多
关键词 TETRAMETHYLPYRAZINE RADIOPROTECTION NF-κB APOPTOSIS
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黄连碱通过线粒体损伤及内质网应激PERK-ATF4-CHOP通路导致L02细胞毒性 被引量:5
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作者 连闻雨 杨春启 +5 位作者 林毅 谭洪玲 肖成荣 马增春 王宇光 高月 《军事医学》 CAS 2021年第11期834-842,共9页
目的研究黄连碱(coptisine)对正常人肝细胞L02的细胞毒性及作用机制,为临床安全用药提供参考。方法分别以不同浓度黄连碱作用于L02细胞24 h,通过CCK-8法检测黄连碱对L02细胞存活率的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位和细胞内... 目的研究黄连碱(coptisine)对正常人肝细胞L02的细胞毒性及作用机制,为临床安全用药提供参考。方法分别以不同浓度黄连碱作用于L02细胞24 h,通过CCK-8法检测黄连碱对L02细胞存活率的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位和细胞内活性氧(ROS)含量的改变,激光扫描共聚焦显微镜观察线粒体膜电位和细胞内钙离子水平的变化,Western印迹检测L02细胞内Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、细胞色素C(cytochrome C)、免疫球蛋白结合蛋白(BIP)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、CCAAT增强子结合蛋白(CHOP)、激活转录因子4(ATF4)、真核生物启动因子2α(eIF2α)、caspase-12蛋白表达水平,探讨黄连碱细胞毒性的可能作用机制。结果黄连碱能以浓度依赖方式抑制细胞存活,诱导L02细胞凋亡,可促使细胞内ROS大量蓄积,线粒体膜电位下降,细胞色素C、Bax蛋白表达量上升;同时,还可激活内质网应激PERK-ATF4-CHOP通路,显著影响相关蛋白的表达,其中BIP、CHOP、ATF4蛋白表达量升高,PERK、eIF2α蛋白表达量下降,明显诱导细胞内钙离子含量升高,激活下游因子caspase-12、caspase-3蛋白表达。结论黄连碱可通过线粒体途径和内质网应激(ERS)途径诱导L02肝细胞凋亡,其潜在的肝毒性风险及对中药黄连安全性的影响有待进一步研究。 展开更多
关键词 黄连碱 细胞凋亡 内质网应激 线粒体疾病 肝细胞 胱天蛋白酶3
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