环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与将成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR/Cas12a)技术相结合,建立一种快速、准确、无污染的甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)的单管式检测方法(LAMP-CRISPR/Cas12...环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与将成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR/Cas12a)技术相结合,建立一种快速、准确、无污染的甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)的单管式检测方法(LAMP-CRISPR/Cas12a),并探讨其在临床诊断中的应用价值。设计并筛选最佳crRNA和LAMP引物,优化反应缓冲液、ssDNA reporter浓度以及CRISPR/Cas12a反应温度,建立单管式LAMP-CRISPR/Cas12a检测体系,并对该方法的灵敏度、特异性和临床实用性进行了评估。LAMP-CRISPR/Cas12a单管一步法可在45min内实现IAV的检测,灵敏度为10拷贝/μL,检测常见呼吸道病原体RSV-A、RSV-B、PIV3、IBV和SARS-CoV-2结果均为阴性,特异性良好;10例临床样本检测结果均与临床诊断结果相符,且LAMP-CRISPR/Cas12a与PCR法均一致。LAMP-CRISPR/Cas12a单管法检测IAV简便、快速、灵敏度高,且特异性强,无须开盖操作,避免了气溶胶污染,有望成为快速检测IAV的新方法。展开更多
