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应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究 被引量：16
1
作者 布日额 李宝臣 +2 位作者 马波 王君伟 ulrich neumann 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-203,共5页
利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅Ig... 利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 VP3基因重组原核表达产物 间接-ELISA Dot—ELISA
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鹅细小病毒VP1与VP3非重叠序列的克隆与原核表达 被引量：9
2
作者 布日额 王君伟 +3 位作者 吴金花 李勐 马广鹏 ulrich neumann 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第10期3-6,共4页
根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并... 根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并用 SDS- PAGE鉴定 ,结果表明融合蛋白在表达性细菌 BL2 1中重获得了高效表达。 展开更多
关键词 鹅 细小病毒 VP1 VP3 非重叠序列 克隆 原核表达 基因组 核苷酸 结构蛋白 大肠杆菌
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用地高辛标记核酸探针检测鹅细小病毒的研究 被引量：14
3
作者 布日额 王君伟 +2 位作者 吴金花 孙红梅 ulrich neumann 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期102-105,共4页
从带有鹅细小病毒(GPV)NS1基因的重组质粒pMD18T NS1用限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切回收1880bp大小片段,并制备出地高辛标记的GPV核酸探针。其标记效率达到0 01pg/μl。特异性检测结果表明,该探针能与GPV不同毒株核酸发生特异性杂交... 从带有鹅细小病毒(GPV)NS1基因的重组质粒pMD18T NS1用限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切回收1880bp大小片段,并制备出地高辛标记的GPV核酸探针。其标记效率达到0 01pg/μl。特异性检测结果表明,该探针能与GPV不同毒株核酸发生特异性杂交,而与对照的DPV、GPPV等病毒的核酸杂交反应均为阴性;敏感性检测结果表明,该探针对GPV的最低检出量为0 0224pg。该探针对不同方法处理的GPV感染病料进行检测,均出现杂交阳性。表明所研制的标记探针用于GPV的检测是可行的。 展开更多
关键词 地高辛标记 核酸探针 检测技术 鹅细小病毒 GPV检测
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鹅细小病毒NS1基因的克隆及原核表达 被引量：5
4
作者 王君伟 李勐 +3 位作者 马波 布日额 刘宝全 ulrich neumann 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2004年第1期10-13,共4页
本研究根据 Gen Bank发表的 GPV B株全基因核苷酸序列 ,设计了 1对用以扩增 GPV主要非结构蛋白 NS1基因的引物。通过 PCR技术 ,扩增出 NS1完整基因片段 1.9kb。将 PCR产物克隆到 p MD 18- T载体后进行序列测定及分析 ,结果表明 :GPV H1... 本研究根据 Gen Bank发表的 GPV B株全基因核苷酸序列 ,设计了 1对用以扩增 GPV主要非结构蛋白 NS1基因的引物。通过 PCR技术 ,扩增出 NS1完整基因片段 1.9kb。将 PCR产物克隆到 p MD 18- T载体后进行序列测定及分析 ,结果表明 :GPV H1株 NS1基因全长 1884 bp,编码 6 2 7个氨基酸 ,与国外已发表的 B株核苷酸序列同源性为 98.15 %。同时将该目的基因正向插入到 GST融合蛋白原核表达载体 PGEX- 6 P- 1的 Bam H 多克隆位点 ,构建了 GPV NS1的原核表达载体 ,成功的表达了约 97KD的 NS1融合蛋白。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 NS1基因 基因克隆 基因表达 原核表达 小鹅瘟
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鹅细小病毒VP2基因原核及真核表达载体的构建 被引量：5
5
作者 贺云霞 王君伟 +2 位作者 马广鹏 王立群 ulrich neumann 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第5期30-33,共4页
将鹅细小病毒VP2基因克隆到原核表达载体 pPROEX HTb及真核转移载体pFASTBAC HTb中 ,重组真核转移载体在DH10BAC 中经转座作用 ,成功构建了表达VP2基因的原核表达载体pPROEX HTb VP2和杆状病毒表达载体BAC VP2。经限制性内切酶酶切及PC... 将鹅细小病毒VP2基因克隆到原核表达载体 pPROEX HTb及真核转移载体pFASTBAC HTb中 ,重组真核转移载体在DH10BAC 中经转座作用 ,成功构建了表达VP2基因的原核表达载体pPROEX HTb VP2和杆状病毒表达载体BAC VP2。经限制性内切酶酶切及PCR分析 。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 VP2基因 原核表达 真核表达 表达载体
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鹅细小病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及纯化 被引量：4
6
作者 贺云霞 王君伟 +1 位作者 王立群 ulrich neumann 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期126-128,共3页
将鹅细小病毒 (GPV) VP2基因插入原核表达载体 p PROEX- HTb,获得重组表达质粒 p PROEX- HTb- VP2。将其转化大肠杆菌 DH5α,用 IPTG诱导表达 ,表达菌体蛋白中可产生与预期大小相符的约 72 0 0 0的蛋白。以光密度扫描对该表达产物进行... 将鹅细小病毒 (GPV) VP2基因插入原核表达载体 p PROEX- HTb,获得重组表达质粒 p PROEX- HTb- VP2。将其转化大肠杆菌 DH5α,用 IPTG诱导表达 ,表达菌体蛋白中可产生与预期大小相符的约 72 0 0 0的蛋白。以光密度扫描对该表达产物进行定量分析 ,表达产物约占菌体总蛋白的 14 %。经 His- tag金属螯合层析纯化 ,获得纯度较高的 6 His- VP2融合蛋白。 Western- blot结果表明 ,所得蛋白与鹅抗 GPV高免血清有较好的免疫反应性 ,说明在 VP2的 N端融合 6个组氨酸不影响其与特异抗体结合的活性。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 VP2基因 原核表达 纯化
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GPV VP1-VP3非重叠序列重组原核表达多肽的应用研究 被引量：2
7
作者 布日额 王君伟 +6 位作者 吴金花 贾伟星 马波 范铁力 李勐 ulrich neumann 李哲迁 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第7期22-23,共2页
关键词 GPV 原核表达 细小病毒感染 应用 多肽 重组 序列 基因工程疫苗
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鹅细小病毒VP1-VP3非重叠序列地高辛探针的制备和应用 被引量：2
8
作者 布日额 王君伟 +2 位作者 吴金花 马波 ulrich neumann 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第1期7-10,共4页
根据 GPV H1株核苷酸序列 ,设计了扩增 VP1- VP3基因非重叠序列的 1对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,将 PCR产物纯化、回收后制备出 GPV VP1- VP3基因 DIG标记核酸探针 ,其标记效率达到0 .1pg/μl。特异... 根据 GPV H1株核苷酸序列 ,设计了扩增 VP1- VP3基因非重叠序列的 1对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,将 PCR产物纯化、回收后制备出 GPV VP1- VP3基因 DIG标记核酸探针 ,其标记效率达到0 .1pg/μl。特异性检测结果表明 ,该探针能与 GPV不同毒株核酸发生特异性杂交 ,而与对照的 DPV、GPMV等病毒的核酸杂交反应均为阴性 ;敏感性检测结果表明该探针对 GPV的最低检出量为 0 .0 32 ng。上述试验结果表明该探针可以用于 展开更多
关键词 VP1 地高辛 探针 VP3基因 特异性检测 阴性 临床 鹅细小病毒 病料 核苷酸序列
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