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鱼糜制品中谷氨酰胺转氨酶检测方法的建立
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作者 张凌晶 许旻 +3 位作者 靳小莹 孙乐常 杜雪莉 曹敏杰 《实验室科学》 2025年第2期32-37,共6页
通过双水相萃取法来纯化微生物来源的谷氨酰胺转氨酶(microbial transglutaminase,MTGase),利用制备的多克隆抗体,建立并优化了鱼糜制品MTGase的免疫印迹检测方法。结果显示:纯化的MTGase浓度为0.12 mg/mL;采用含8 mol/L尿素、0.1 mmol/... 通过双水相萃取法来纯化微生物来源的谷氨酰胺转氨酶(microbial transglutaminase,MTGase),利用制备的多克隆抗体,建立并优化了鱼糜制品MTGase的免疫印迹检测方法。结果显示:纯化的MTGase浓度为0.12 mg/mL;采用含8 mol/L尿素、0.1 mmol/L DTT的20 mmol/L Tris-HCl(pH8.0)缓冲液处理样品,能获得较多的蛋白;分析比较了鱼肉内源性谷氨酰胺转氨酶(tissue transglutaminase,TTGase)和MTGase对抗体特异性的差异,优化了抗体稀释倍数,确定兔抗MTGase抗体在1∶10000稀释的情况下,可以排除了鱼肉TTGase的干扰,特异地检测出鱼糜制品添加MTGase的含量。该方法的检测限为5 mg MTGase/kg食物。 展开更多
关键词 鱼糜制品 微生物源谷氨酰胺转氨酶 检测方法 抗体特异性 内源性
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大黄鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质分析
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作者 霍卫森 张凌晶 +4 位作者 陈玉磊 孙乐常 翁凌 黄建联 曹敏杰 《食品科学》 北大核心 2025年第24期90-97,共8页
目的:探究大黄鱼(Larimichthys crocea)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶抑制剂(myofibril-bound serine proteinase inhibitor,MBSPI)的结构特性及其对肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)的抑制机理。方法... 目的:探究大黄鱼(Larimichthys crocea)肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶抑制剂(myofibril-bound serine proteinase inhibitor,MBSPI)的结构特性及其对肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(myofibril-bound serine proteinase,MBSP)的抑制机理。方法:采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和SP-Sepharose柱层析等从大黄鱼背部肌肉中纯化得到MBSPI;通过圆二色光谱、内源性荧光光谱分析MBSPI的结构特性;利用抑制动力学分析MBSPI对MBSP的抑制机理。结果:MBSPI是分子质量为55 kDa的单体蛋白,可与大鼠抗白姑鱼MBSPI多克隆抗体发生特异性免疫反应,一级结构与葡萄糖-6-磷酸异构酶高度一致。MBSPI主要由α-螺旋构成,热变性温度为53℃。当温度高于53℃时,MBSPI二级结构发生显著变化,表现为α-螺旋含量减少,无规卷曲和反平行β-折叠含量增加。MBSPI对MBSP呈竞争性抑制,半抑制浓度为0.03µmol/L。MBSPI可有效抑制MBSP对肌原纤维蛋白中肌球蛋白重链、肌动蛋白和原肌球蛋白的降解。综上,大黄鱼肌肉中内源性抑制剂MBSPI可显著抑制由MBSP引起的肌原纤维蛋白自身降解,本研究可为鱼糜制品生产过程中水溶性蛋白的利用提供新思路。 展开更多
关键词 大黄鱼 肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 抑制剂 葡萄糖-6-磷酸异构酶 抑制机理
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鲍源ACE/ACE2双靶点活性肽的分离及其活性分析
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作者 李萌 张捷凯 +4 位作者 何弼璐 翁凌 张凌晶 孙乐常 曹敏杰 《食品科学》 北大核心 2025年第19期124-133,共10页
目的:以血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制活性和ACE2上调活性作为评价指标,用鲍鱼肌肉制备降压活性肽,并探讨其作用机制。方法:采用酶解法优化鲍鱼肌肉酶解条件,筛选出体外较高ACE抑制活性和ACE2上调活性的组分... 目的:以血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制活性和ACE2上调活性作为评价指标,用鲍鱼肌肉制备降压活性肽,并探讨其作用机制。方法:采用酶解法优化鲍鱼肌肉酶解条件,筛选出体外较高ACE抑制活性和ACE2上调活性的组分,并利用超滤、凝胶柱层析及反相高效液相色谱分离纯化活性肽,结合液相色谱-串联质谱鉴定其序列。通过分子对接、抑制动力学及分子动力学模拟分析其抑制类型与结合稳定性。结果:鲍鱼肌肉经酶解和分离纯化后,通过De novo测序获得26条降压肽。基于分子对接结合自由能筛选,选定Ala-GlyPhe(AGF)、Ala-Thr-Lys(ATK)、Pro-Ile-Ile-Thr-Lys(PIITK)、Ala-Lys(AK)、Pro-Val-Gly-Arg(PVGR)和Pro-Trp(PW)6个肽段,其中PIITK与PVGR显示出较强的ACE抑制活性;在ACE2上调方面,PW效果最为显著,其次为PVGR、AK和ATK。对ACE抑制作用方面,PIITK表现为混合性抑制,而PVGR表现为竞争性抑制。动力学模拟结果表明,PIITK-ACE及PVGR-ACE复合物体系均具有较高的结合稳定性。结论:利用鲍鱼肌肉制备生物活性肽为鲍鱼功能性食品的研发和高值化利用提供了理论依据。 展开更多
关键词 鲍鱼 降压肽 分子对接 分子动力学模拟
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魔芋胶对南美白对虾肌原纤维蛋白凝胶特性的影响 被引量:17
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作者 孙乐常 周典颖 +4 位作者 杜瀚 翁凌 缪松 刘光明 曹敏杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第12期42-50,共9页
为探究魔芋胶(konjac glucomannan,KGM)对南美白对虾肌原纤维蛋白(shrimp myofibrillar protein,SMP)凝胶性能的影响,将KGM与SMP按不同比例(1∶50、1∶20、1∶10)进行复配制备复合凝胶体系SK50、SK20、SK10,通过测定表面疏水性、内源性... 为探究魔芋胶(konjac glucomannan,KGM)对南美白对虾肌原纤维蛋白(shrimp myofibrillar protein,SMP)凝胶性能的影响,将KGM与SMP按不同比例(1∶50、1∶20、1∶10)进行复配制备复合凝胶体系SK50、SK20、SK10,通过测定表面疏水性、内源性荧光、浊度及粒径、流变学、红外光谱、蛋白变化及凝胶微观结构,研究复合体系的凝胶特性变化。结果表明,SMP及SMP-KGM复合体系的表面疏水性、浊度及粒径随着KGM添加量的增大而增大,流变学分析表明SMP及SMP-KGM复合体系均出现剪切稀化现象,且SK20的G’值最高,其凝胶的结构稳定性最好。红外光谱分析表明SMP及SMP-KGM复合体系组的光谱特征带相似,表明无明显的基团生成。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明KGM的加入并没有引起蛋白条带的明显变化,相较于未加热组,加热后样品中肌球蛋白重链、副肌球蛋白以及肌动蛋白的条带明显减弱,说明加热能促使三者发生热聚合反应。扫描电镜与分形维数分析表明,随着KGM添加量的增加,形成了致密有序的凝胶。结果表明,一定量的KGM添加能有效提升虾糜的凝胶特性,提高虾糜类产品品质。 展开更多
关键词 南美白对虾 肌原纤维蛋白 魔芋胶 凝胶特性 流变学特性
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酸/碱预处理对美洲鳗鲡(Anguilla rostrata)鱼骨明胶理化性质与凝胶特性的影响 被引量:5
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作者 孙乐常 赵阿云 +3 位作者 杜瀚 翁凌 缪松 曹敏杰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第9期71-78,共8页
以美洲鳗鲡(Anguilla rostrata)鱼骨为原料,采用酸或碱预处理结合热水浸提制备鱼骨明胶,并通过得率、凝胶强度测定、SDS-PAGE、紫外全波长扫描、红外光谱扫描、动态流变学测定以及扫描电镜等研究鱼骨明胶的理化性质和凝胶特性。结果表明... 以美洲鳗鲡(Anguilla rostrata)鱼骨为原料,采用酸或碱预处理结合热水浸提制备鱼骨明胶,并通过得率、凝胶强度测定、SDS-PAGE、紫外全波长扫描、红外光谱扫描、动态流变学测定以及扫描电镜等研究鱼骨明胶的理化性质和凝胶特性。结果表明:酸法预处理明胶(AG60)与碱法预处理明胶(BG60)得率分别为13.6%和6.88%,凝胶强度分别为101.95 g和78.74 g。AG60和BG60的羟脯氨酸含量为3.2 g/100 g和2.7 g/100 g。两种明胶均含有β和α;、α;链,其中AG60的α;+α;含量显著高于BG60。AG60与BG60均具有明胶的特征吸收峰,且无杂蛋白吸收峰。与BG60相比,AG60具有更高的凝胶温度与熔融温度,以及更短的胶凝时间。扫描电镜分析显示,AG60具有更致密、均一的凝胶网络结构。本研究表明,与碱法预处理相比,酸法预处理制备得到的鳗鱼骨明胶具有更高的得率与更好的凝胶特性。 展开更多
关键词 美洲鳗鲡 鱼骨明胶 酸预处理 碱预处理 凝胶特性
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谷氨酰胺转氨酶对荞麦分离蛋白凝胶特性的影响 被引量:3
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作者 孙乐常 王瑜 +4 位作者 翁凌 刘明 缪松 刘光明 曹敏杰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第24期112-122,共11页
以荞麦(Fagopyrum esculentum Moench.)为原料,通过碱溶酸沉法提取荞麦分离蛋白(BPI),分别采用真空冷冻干燥与喷雾干燥制备蛋白粉,研究谷氨酰胺转氨酶(TGase)及不同干燥方式对荞麦分离蛋白理化性质和凝胶特性的影响。结果表明,冷冻干燥... 以荞麦(Fagopyrum esculentum Moench.)为原料,通过碱溶酸沉法提取荞麦分离蛋白(BPI),分别采用真空冷冻干燥与喷雾干燥制备蛋白粉,研究谷氨酰胺转氨酶(TGase)及不同干燥方式对荞麦分离蛋白理化性质和凝胶特性的影响。结果表明,冷冻干燥荞麦分离蛋白(FBPI)的蛋白组成与BPI类似,而喷雾干燥荞麦分离蛋白(SBPI)的13S球蛋白发生降解。FBPI和SBPI的α-螺旋含量分别为22.10%和20.00%,β-转角含量为19.40%和19.80%,表明喷雾干燥会使蛋白结构更加无序化。SBPI的表面疏水性指数显著(P<0.05)高于FBPI与BPI。与BPI相比,SBPI具有更高的表面疏水性和更均匀的粒径,但溶解度和持水能力较低,而FBPI具有与BPI相似的物理化学性质。加入TGase后,FBPI和SBPI的平均粒径分别由213.01与192.55 nm增加至2289.01与1439.67 nm,表明发生了交联反应。BPI、FBPI和SBPI的电位分别为−15.93、−29.43、−29.35 mV,表明干燥处理能进一步提高蛋白的溶液稳定性。相比于SBPI,BPI和FBPI在升温过程中G'持续下降,表明热处理会破坏BPI和FBPI的蛋白凝胶结构。经加热处理再进行冷却,FBPI的G'显著(P<0.05)高于SBPI与BPI,具有更好的凝胶性。TGase能显著(P<0.05)提高FBPI的储能模量与热稳定性,但对SBPI作用不明显。化学作用力结果显示,疏水相互作用和二硫键是凝胶主要作用力;TGase能有效促进凝胶结构中疏水相互作用和二硫键形成,但会导致蛋白分子间氢键断裂。由此可见,通过冷冻干燥制备的荞麦蛋白能在TGase的作用下形成凝胶性与稳定性较好的凝胶。本研究的结果为荞麦分离蛋白凝胶特性研究及其凝胶类食品的开发与应用提供理论参考。 展开更多
关键词 荞麦 分离蛋白 冷冻干燥 喷雾干燥 谷氨酰胺转氨酶(TGase) 凝胶特性
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蓝圆鲹分离蛋白酶解产物的制备及其抗大米淀粉老化特性 被引量:3
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作者 孙乐常 孙小舒 +4 位作者 林端权 陈玉磊 翁凌 缪松 曹敏杰 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期366-380,共15页
为了进一步拓展海洋鱼类蛋白在食品中的应用,以蓝圆鲹分离蛋白为原料,利用酶解改性得到溶解性良好的蓝圆鲹分离蛋白酶解物(BPIH),并研究其对大米淀粉(RS)短期老化的抑制作用。通过响应面法优化酶解改性工艺制备BPIH,并分别按RS的3%、6%... 为了进一步拓展海洋鱼类蛋白在食品中的应用,以蓝圆鲹分离蛋白为原料,利用酶解改性得到溶解性良好的蓝圆鲹分离蛋白酶解物(BPIH),并研究其对大米淀粉(RS)短期老化的抑制作用。通过响应面法优化酶解改性工艺制备BPIH,并分别按RS的3%、6%、9%(质量百分比)进行添加。通过测定RS的凝沉性、动态黏弹性、热学特性以及微观结构分析评价BPIH的抗淀粉老化活性。结果显示,响应面法确定的最佳条件:酶底比5000;1(U/g)、酶解时间3 h、料液比1.00;3.81、酶解温度46.36℃、酶解pH 6.30,氮溶指数(NSI)实际值为85.41%±0.82%,与预测值86.37%接近。该酶解条件下BPIH水解度达到21.62%。BPIH中小于1000 u的肽占79.94%,主要为小分子低聚寡肽。加入BPIH可以减弱RS的凝沉现象,降低RS在4℃保存过程中的储能模量(G'),显著降低老化后RS的峰值温度(T_(p))和焓值(ΔHr);加入BPIH的大米淀粉,老化后微观结构有较大孔洞,提升了淀粉糊化后保留内部水分的能力。研究表明,BPIH能够抑制RS在4℃保存期间凝胶网络和微晶结构的形成,同时可能限制了淀粉分子间的聚集,抑制或延缓RS的短期老化。本研究为蓝圆鲹分离蛋白酶解物在食品蛋白配料中的应用提供理论参考。 展开更多
关键词 蓝圆鲹 分离蛋白 酶解 淀粉短期老化
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干燥方式对蛋清蛋白理化性质和功能特性的影响 被引量:1
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作者 孙乐常 曾添 +4 位作者 林端权 翁凌 刘光明 缪松 曹敏杰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第24期102-111,共10页
为探究干燥方式对蛋清蛋白(egg white protein,EWP)功能特性的影响及其内在机理,分别通过喷雾干燥与真空冷冻干燥制备蛋清蛋白粉,并对其蛋白结构、理化性质与功能特性进行研究。结果表明,与蛋清液(EWPC)相比,喷雾干燥使蛋清蛋白(EWP-P)... 为探究干燥方式对蛋清蛋白(egg white protein,EWP)功能特性的影响及其内在机理,分别通过喷雾干燥与真空冷冻干燥制备蛋清蛋白粉,并对其蛋白结构、理化性质与功能特性进行研究。结果表明,与蛋清液(EWPC)相比,喷雾干燥使蛋清蛋白(EWP-P)的内源性荧光强度降低,表面疏水性和表面游离巯基含量增大。傅里叶变换红外光谱分析显示,EWP-P的α-螺旋、β-折叠和β-转角分别为16.30%、25.72%和40.23%,冷冻干燥蛋清蛋白(EWP-D)分别为20.43%、24.32%和35.69%。不同pH下,EWP-D的溶解度均高于EWP-P,表面张力小于EWP-P。此外,EWP-P的接触角为99.62°,高于EWP-D(接触角为65.97°),表明喷雾干燥能显著提高蛋白的疏水性(P<0.05)。EWP-D在不同pH下的乳化性、乳化稳定性以及起泡性均大于EWP-P,但起泡稳定性更小,这与EWP-D较高的溶解性与较低的表明疏水性有关。荧光倒置显微镜及激光共聚焦扫描显微镜分析表明EWP-D乳液的微粒更小,分布更均匀,其稳定性高于EWP-P。综上,喷雾干燥蛋清蛋白的β-折叠结构较多,表面游离巯基含量和表面疏水性较高,具有较好的凝胶性;冷冻干燥蛋清蛋白的表面疏水性较小,且表面张力小、溶解度大,具有更好的乳化能力与起泡性。 展开更多
关键词 蛋清 喷雾干燥 冷冻干燥 功能特性 理化特性
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蓝圆鲹肝脏酯酶的分离纯化与性质分析 被引量:1
9
作者 孙乐常 文嘉欣 +3 位作者 杜瀚 林怡晨 刘光明 曹敏杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第6期158-164,共7页
以蓝圆鲹肝脏为对象,通过硫酸铵盐析、Q-Sepharose阴离子交换柱层析、Q-HP阴离子交换柱层析、Phenyl Fast Flow疏水柱层析和Superdex G75凝胶过滤柱层析技术分离纯化得到一种酯酶。该酶的回收率为0.69%,纯化倍数为1150倍。十二烷基硫酸... 以蓝圆鲹肝脏为对象,通过硫酸铵盐析、Q-Sepharose阴离子交换柱层析、Q-HP阴离子交换柱层析、Phenyl Fast Flow疏水柱层析和Superdex G75凝胶过滤柱层析技术分离纯化得到一种酯酶。该酶的回收率为0.69%,纯化倍数为1150倍。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳与Superdex G75凝胶过滤柱层析结果显示纯化得到的酯酶分子质量为61.18 kDa。肽指纹图谱显示其肽段与红鳍东方鲀假定脂酰辅酶A水解酶一致。该酶的最适条件为pH 8.0、50℃;在pH 6.0~10.0、温度4~40℃条件下稳定性较高;金属离子K^(+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)、Al^(3+)和Fe^(2+)会使酯酶活性显著下降,而Ba^(2+)、Ca^(2+)、Mn^(2+)、Co^(2+)和Mg^(2+)则会促进酶活性;该酶对甲醇、乙醇、丙酮和异丙醇等有机溶剂与盐具有较强的耐受性。底物特异性表明该酶在水溶液中偏向于水解中短链酯,对长链酯无水解活性,而在乳化体系中对长链酯也有较高的水解活性,显示出其具有酯酶与脂肪酶的双重活性。 展开更多
关键词 蓝圆鲹 肝脏 酯酶 纯化 性质分析
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多金属氧酸盐类α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究进展 被引量:1
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作者 王瑞芳 帅蝶 +1 位作者 孙乐常 谢远红 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2023年第2期126-135,共10页
α-葡萄糖苷酶在淀粉转化为葡萄糖的过程中发挥着重要作用,而抑制α-葡萄糖苷酶活性是控制餐后血糖升高的有效途径。对α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制机理和研究进展进行综述,并重点概述了多金属氧酸盐(polyoxometalates,POMs)作为α-葡萄... α-葡萄糖苷酶在淀粉转化为葡萄糖的过程中发挥着重要作用,而抑制α-葡萄糖苷酶活性是控制餐后血糖升高的有效途径。对α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制机理和研究进展进行综述,并重点概述了多金属氧酸盐(polyoxometalates,POMs)作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的研究成果。 展开更多
关键词 Α-葡萄糖苷酶 Α-葡萄糖苷酶抑制剂 多金属氧酸盐 糖尿病
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鲈鱼在4℃冷藏过程中的肌肉品质变化 被引量:13
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作者 杨汝晴 陈玉磊 +3 位作者 孙乐常 张凌晶 刘光明 曹敏杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第1期239-245,共7页
目的:探究4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉品质的变化。方法:测定4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉pH值、菌落总数、总挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量、K值和质构等指标,综合评价鲈鱼生理生化品质的变化,采用Masson染色和免疫组化... 目的:探究4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉品质的变化。方法:测定4℃冷藏过程中鲈鱼肌肉pH值、菌落总数、总挥发性盐基氮(total volatile base nitrogen,TVB-N)含量、K值和质构等指标,综合评价鲈鱼生理生化品质的变化,采用Masson染色和免疫组化分析评价组织形态学变化,利用酶解荧光肽底物测定特异性酶解胶原蛋白的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)活力变化。结果:鲈鱼在贮藏期间pH值呈先下降后升高趋势,菌落总数、TVB-N含量和K值随贮藏时间的延长而增加,并在第8天超过临界值。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果显示,贮藏至6 d鲈鱼肌肉蛋白组成没有明显变化,而在第8天肌球蛋白重链降解明显。Masson染色和I型胶原免疫组化分析结果显示,随贮藏时间的延长,肌内膜逐渐被降解,至第12天,肌膜I型胶原蛋白和肌纤维之间出现明显间隙。MMPs活力随贮藏时间的延长而明显增加,而鱼肉硬度不断下降。结论:鱼类冷藏期间肌肉的软化与胶原蛋白分解密切相关,而MMPs对I型胶原蛋白的降解可能是鱼死后肌肉软化的主要原因。 展开更多
关键词 鲈鱼 基质金属蛋白酶 质构 MASSON染色 免疫组化
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太平洋牡蛎冷藏过程中闭壳肌品质的变化 被引量:4
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作者 欧韦 杨汝晴 +4 位作者 张凌晶 孙乐常 翁凌 刘光明 曹敏杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第5期179-186,共8页
为了探究太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)在0℃和4℃冷藏过程中的品质变化,首先对牡蛎不同组织(闭壳肌、外套膜、鳃和内脏团)在冷藏过程中的表观变化进行观察,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate-polyacryla... 为了探究太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)在0℃和4℃冷藏过程中的品质变化,首先对牡蛎不同组织(闭壳肌、外套膜、鳃和内脏团)在冷藏过程中的表观变化进行观察,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析冷藏过程中各组织中全蛋白的变化,进一步通过Western blotting鉴定闭壳肌中肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)、肌动蛋白、副肌球蛋白(paramyosin,PM)和原肌球蛋白(tropomyosin,TM)的降解情况,采用荧光光谱分析闭壳肌冷藏过程中内源性丝氨酸蛋白酶和组织蛋白酶B的活力变化,以闭壳肌的pH、K值和质构特性等为评价指标,分析其在冷藏过程中品质的变化。结果显示,随着冷藏时间延长,闭壳肌由紧实变得绵软,表观变化最明显。Western blotting结果显示,在0℃和4℃冷藏过程中,闭壳肌中MHC分别在第3天和第1天开始降解,表明低温有利于降低蛋白酶解速率;但是,肌动蛋白、PM和TM无明显变化。闭壳肌中丝氨酸蛋白酶和组织蛋白酶B活力在冷藏过程中总体呈现先升高后降低的趋势。在0、4℃冷藏过程中,pH值从初始的6.79开始呈现下降趋势,至第11天时分别为6.52、5.84;K值分别在第9天和第5天超过二级鲜度范围(40%);闭壳肌硬度和咀嚼性均在第1天达到峰值,随后逐渐下降,弹性呈现下降趋势;闭壳肌中MHC的降解最为明显,并与牡蛎品质劣化密切相关。研究可为牡蛎冷藏保鲜提供理论参考。 展开更多
关键词 太平洋牡蛎 蛋白质降解 冷藏 质构 酶活力
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酶解前后牡蛎肉风味变化研究 被引量:7
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作者 洪林欣 童星 +5 位作者 孙乐常 吴昌正 尹开平 刘康 林端权 张凌晶 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第20期120-128,共9页
该研究以牡蛎(Ostreae concha)为研究对象,蛋白酶与淀粉酶复合反应制备牡蛎肉酶解液,结合感官评价和顶空-固相微萃取-气相色谱-质谱联用法分析牡蛎肉酶解前后挥发性化合物的变化规律,解析牡蛎肉及其酶解液的关键风味化合物及主要腥味成... 该研究以牡蛎(Ostreae concha)为研究对象,蛋白酶与淀粉酶复合反应制备牡蛎肉酶解液,结合感官评价和顶空-固相微萃取-气相色谱-质谱联用法分析牡蛎肉酶解前后挥发性化合物的变化规律,解析牡蛎肉及其酶解液的关键风味化合物及主要腥味成分。利用相对气味活度值来量化评价各组分对牡蛎肉酶解液风味的贡献程度。添加淀粉酶将牡蛎肉中的糖原分解成小分子单糖,并在一定温度下促使酶解液发生美拉德反应,进而产生具有愉快风味的化合物以遮盖牡蛎的腥味。结果表明,酶解后呈现腥味、哈喇味的(E,E)-2,4-庚二烯醛、己醛、庚醛和壬醛等物质的含量降低,酶解脱除了牡蛎肉中的腥味,生成了具有浓郁果香味和青草味的2-戊基呋喃、苯甲醛和十六醛等物质,在多种挥发性化合物共同作用下,整体香气协调,风味持久。 展开更多
关键词 牡蛎 酶解 风味 挥发性化合物 相对气味活度值
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低盐即食虾皮氨含量的高效液相色谱分析方法 被引量:1
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作者 柳晓萍 郝更新 +4 位作者 杨燊 孙乐常 石林凡 任中阳 邱绪建 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2022年第2期133-137,共5页
建立低盐即食虾皮中氨含量的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分析方法。样品粉碎经三氯乙酸提取后,用丹磺酰氯衍生并用甲苯净化提取,然后采用乙腈和水梯度洗脱,254 nm紫外检测。结果表明,内标法的线性范围是... 建立低盐即食虾皮中氨含量的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分析方法。样品粉碎经三氯乙酸提取后,用丹磺酰氯衍生并用甲苯净化提取,然后采用乙腈和水梯度洗脱,254 nm紫外检测。结果表明,内标法的线性范围是0.0005~0.2 g/L,回收率为84%~105%,检测限约为0.7 mg/L。本方法的稳定性和精密度良好,并且可同时分析其他生物胺物质。 展开更多
关键词 虾皮 生物胺 低盐 高效液相色谱
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刺参ACE抑制肽制备及降压功效分析 被引量:16
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作者 华鑫 孙乐常 +4 位作者 万楚君 唐逸 翁凌 刘光明 曹敏杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第10期125-130,共6页
以刺参(Stichopus japonicus)体壁为原料,利用复合蛋白酶对其进行酶解,运用单因素法优化血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽的酶解制备工艺。获得最佳工艺参数为:料液比1∶6(g/m L)、加酶量0.8%(质量分数)、... 以刺参(Stichopus japonicus)体壁为原料,利用复合蛋白酶对其进行酶解,运用单因素法优化血管紧张素转化酶(angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制肽的酶解制备工艺。获得最佳工艺参数为:料液比1∶6(g/m L)、加酶量0.8%(质量分数)、反应时间6 h、pH 7.0。将酶解产物用3 k Da膜超滤,其中小于3 k Da组分具有较高的ACE抑制活性,IC_(50)为0.8 mg/m L,对ACE表现为非竞争性抑制作用。刺参ACE抑制肽在高温、酸性和碱性条件下均具有较好的稳定性,同时具有较强的抵抗胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶消化的能力。动物实验结果表明,刺参ACE抑制肽对雄性自发性高血压大鼠具有良好的降压功效。因此,利用复合蛋白酶酶解刺参体壁制备的ACE抑制肽在降血压功能性食品的开发利用方面具有研究价值。 展开更多
关键词 刺参 ACE抑制肽 稳定性 抑制模式 自发性高血压大鼠
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利用坛紫菜藻红蛋白制备脯氨酰内肽酶抑制肽 被引量:9
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作者 谢雪琼 钟婵 +4 位作者 孙乐常 翁凌 张凌晶 刘光明 曹敏杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第14期123-129,共7页
以坛紫菜(Porphyra haitanensis)为原料,通过硫酸铵盐析和DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析等方法分离纯化得到一种高纯度藻红蛋白(R-phycoerythrin,R-PE)(A565 nm/A280 nm=5.4)。利用胃、肠液消化酶对R-PE进行酶解制备脯氨酰内肽酶(prol... 以坛紫菜(Porphyra haitanensis)为原料,通过硫酸铵盐析和DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析等方法分离纯化得到一种高纯度藻红蛋白(R-phycoerythrin,R-PE)(A565 nm/A280 nm=5.4)。利用胃、肠液消化酶对R-PE进行酶解制备脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase,PEP)抑制肽。酶解条件为:1)胃蛋白酶与R-PE比例0.5%(m/m),酶解时间30 min,pH 1.2,温度37℃;2)胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶质量比为1∶1的混合酶,其与R-PE比例0.25%(m/m),酶解时间30 min,pH 7.5,温度37℃。Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析发现,经两步酶解,R-PE被完全降解。采用凝胶过滤色谱法测得R-PE水解液中分子质量在3 kDa以下的小肽含量为86.06%。R-PE水解液对PEP抑制水平IC50为136.35μg/mL。酶抑制动力学研究发现,R-PE水解液对PEP表现为可逆的非竞争性抑制作用,抑制常数Ki为14μg/mL。本研究利用坛紫菜R-PE制备活性高的PEP抑制肽,将为坛紫菜深加工及高值化利用提供一定的理论参考。 展开更多
关键词 坛紫菜 藻红蛋白 脯氨酰内肽酶抑制活性 分子质量分布 抑制动力学
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蓝圆鲹酸/碱等电点沉淀法分离蛋白凝胶特性与消化特性 被引量:9
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作者 孙乐常 林怡晨 +4 位作者 刘伟锋 翁凌 张凌晶 刘光明 曹敏杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第12期22-29,共8页
采用酸/碱等电点沉淀(isoelectric solubilization/precipitation,ISP)法制备蓝圆鲹肌肉分离蛋白(acid/alkaline aided protein isolate,API/KPI),并对全蛋白(total protein,TP)、肌原纤维蛋白(myofibrillar protein,MP)与分离蛋白的理... 采用酸/碱等电点沉淀(isoelectric solubilization/precipitation,ISP)法制备蓝圆鲹肌肉分离蛋白(acid/alkaline aided protein isolate,API/KPI),并对全蛋白(total protein,TP)、肌原纤维蛋白(myofibrillar protein,MP)与分离蛋白的理化特性、凝胶特性以及消化稳定性进行比较研究。结果表明,蓝圆鲹肌肉蛋白在碱性条件下溶解性显著高于酸性条件,经优化后的API与KPI的回收率分别为65.0%与84.6%,显著高于MP(54.0%)。KPI、API与MP的脂肪与灰分含量明显低于TP,其中KPI的粗蛋白含量最高。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示KPI与API的蛋白组成与TP相近,但KPI与API的氨基酸组成中甘氨酸与脯氨酸含量显著低于TP。质构与流变学分析结果显示,KPI与API的凝胶强度与储能模量(G’)均明显低于TP与MP,其中TP、MP与KPI的储能模量在50~55 ℃会出现明显的下降趋势,表明发生凝胶劣化现象,而API组无明显变化。扫描电子显微镜结果表明,与90 ℃相比,经55 ℃加热处理的KPI、TP与MP组凝胶结构更加疏松、多孔,这与流变学分析的结果一致。体外模拟胃肠液消化实验表明,MP具有最佳的消化性,API与KPI的消化性相当,且显著高于TP。综上所述,利用ISP制备分离蛋白可显著提高蛋白回收率,且分离蛋白的消化性明显优于TP。由于分离蛋白失去凝胶化能力,故可考虑将其应用于食品蛋白配料领域。 展开更多
关键词 蓝圆鲹 酸/碱等电点沉淀法 凝胶特性 消化性
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载脂蛋白A-I对基质金属蛋白酶-2的抑制作用机理
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作者 王钰佳 李婉玉 +4 位作者 蔡雨晨 张凌晶 翁凌 孙乐常 曹敏杰 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2023年第2期115-125,共11页
为了分离纯化鲢鱼基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)的内源性抑制剂,克隆并表达了鲢鱼MMP-2的催化结构域(rHm-MMP-2c),并将其作为筛选内源性抑制剂的靶标酶。通过60℃加热、50%~90%的硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose... 为了分离纯化鲢鱼基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)的内源性抑制剂,克隆并表达了鲢鱼MMP-2的催化结构域(rHm-MMP-2c),并将其作为筛选内源性抑制剂的靶标酶。通过60℃加热、50%~90%的硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和Phenyl-Sepharose柱层析等手段,从鲢鱼肌肉中纯化了一种MMP-2内源性抑制剂,该抑制剂相对分子质量为28 ku,能有效抑制rHm-MMP-2c在4℃冷藏过程中对I型胶原的降解。质谱鉴定结果表明,纯化的抑制剂为载脂蛋白A-I(Apo A-I)。抑制动力学显示,Apo A-I对rHm-MMP-2c呈现竞争性抑制,抑制常数K_(i)为1.31μmol/L,半抑制浓度(IC_(50))为3.33μmol/L。分子对接结果显示,酶和抑制剂结合的主要作用力为氢键相互作用,抑制原因可能是Apo A-I与MMP-2纤连蛋白结合区结合形成了空间位阻,阻碍了底物与酶的结合。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶-2 鲢鱼 载脂蛋白A-I 内源性抑制剂 分子对接
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碱性蛋白酶限制性酶解对蓝圆鲹分离蛋白功能特性的影响 被引量:7
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作者 孙乐常 刘伟峰 +4 位作者 林怡晨 赵阿云 张凌晶 翁凌 曹敏杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第2期23-29,共7页
以蓝圆鲹(Decapterus maruadsi)分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶对其进行限制性酶解,研究水解度(degree of hydrolysis,DH)对分离蛋白酶解产物溶解性、持油力、乳化性与起泡性等功能特性的影响。结果表明,碱性蛋白酶酶解产物的相对分子... 以蓝圆鲹(Decapterus maruadsi)分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶对其进行限制性酶解,研究水解度(degree of hydrolysis,DH)对分离蛋白酶解产物溶解性、持油力、乳化性与起泡性等功能特性的影响。结果表明,碱性蛋白酶酶解产物的相对分子质量显著下降。酶解可有效提高分离蛋白的溶解性,其溶解度随DH增加而增加。与对照组相比,分离蛋白经酶解后,产物乳化性与起泡性均显著提高,并呈现先升高后降低的趋势。不同DH酶解产物在pH值为4.0时的乳化性和起泡性最低;当pH值为10.0时,DH5(DH=5%)的乳化性最高((100.9±0.7)m2/g);当pH值为7.0时,DH5起泡性最高((227.3±3.8)%)。除DH20外,其他组的持油力均有显著提高,其中DH5的持油力最高,达3.50 g/g(油/蛋白)。结果表明,一定程度的水解可以显著提高蓝圆鲹分离蛋白的功能特性。本研究为鱼蛋白在食品蛋白配料中的应用提供了一定理论参考。 展开更多
关键词 蓝圆鲹 分离蛋白 限制性酶解 功能特性
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不同干燥方式对南极磷虾分离蛋白结构及功能特性的影响
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作者 洪林欣 尹开平 +5 位作者 孙乐常 林端权 何文雄 翁凌 曹敏杰 张凌晶 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2024年第3期211-221,共11页
采用碱溶酸沉的方法提取南极磷虾分离蛋白(krill protein isolate,KPI),通过喷雾干燥和冷冻干燥的方式制备南极磷虾分离蛋白粉,并对这两种分离蛋白粉的结构及功能特性进行比较分析。结果表明:与冷冻干燥南极磷虾分离蛋白(freeze-dried k... 采用碱溶酸沉的方法提取南极磷虾分离蛋白(krill protein isolate,KPI),通过喷雾干燥和冷冻干燥的方式制备南极磷虾分离蛋白粉,并对这两种分离蛋白粉的结构及功能特性进行比较分析。结果表明:与冷冻干燥南极磷虾分离蛋白(freeze-dried krill protein isolate,FKPI)相比,喷雾干燥南极磷虾分离蛋白(spray-dried krill protein isolate,SKPI)明度大,色泽较好;扫描电子显微镜结果显示,SKPI呈现出向内凹陷的不规则球状结构,而FKPI为薄层片状结构,SKPI的堆积密度高于FKPI;圆二色谱进一步表明,与KPI相比,SKPI和FKPI均呈现α-螺旋含量下降、β-转角含量增加的趋势,其中,SKPI的α-螺旋含量下降27.9%,β-转角含量增加12.2%,表明喷雾干燥后蛋白质的二级结构均从有规则的结构向无规则的结构转化;SKPI持水力、持油力、乳化稳定性和起泡性等均高于FKPI,而SKPI的溶解性、乳化性却比FKPI的差。可见,不同的干燥方式会改变南极磷虾分离蛋白的结构特性,并进一步影响其功能特性。 展开更多
关键词 南极磷虾分离蛋白 碱溶酸沉 喷雾干燥 冷冻干燥 理化特性 功能特性
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