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镉应答新基因TEF-1δ的生物学功能研究 被引量：3
1
作者 雷毅雄 pius joseph +1 位作者 吴中亮 Tong-man Ong 《卫生毒理学杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期136-138,共3页
目的　探讨镉应答新基因TEF 1δ在细胞转化和致癌过程中的重要作用。方法　应用细胞转染、WesternBlot以及细胞转化等技术与方法 ,对克隆化基因TEF 1δ的生物学功能进行研究。结果　TEF 1δcDNA以pcDNA 3 1 V5 His TOPO为表达载体所... 目的　探讨镉应答新基因TEF 1δ在细胞转化和致癌过程中的重要作用。方法　应用细胞转染、WesternBlot以及细胞转化等技术与方法 ,对克隆化基因TEF 1δ的生物学功能进行研究。结果　TEF 1δcDNA以pcDNA 3 1 V5 His TOPO为表达载体所转染的CHO细胞和猴肾COS1细胞均可表达相对分子质量为 3 10 0 0的TEF 1δ编码蛋白质 ,而非转染和单纯载体转染的对照细胞则无此蛋白质表达。进一步研究表明 ,TEF 1δcDNA转染NIH3T3细胞可导致TEF 1δ蛋白质超额表达 ,并与细胞转化密切相关。结论　镉的细胞转化和致癌作用至少部分因TEF 1δ基因的高表达所致。TEF 1δ可能是一个新发现的镉应答原癌基因。 展开更多
关键词 镉应答 TEF-1δ 生物学功能 研究 蛋白质 细胞转化 原癌基因 致癌作用
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TEF-1δ基因真核细胞稳定表达系统的构建与鉴定 被引量：2
2
作者 雷毅雄 pius joseph +1 位作者 陈家堃 Tong manOng 《癌变·畸变·突变》 CAS CSCD 2002年第3期171-174,共4页
目的 :构建TEF 1δ (mousetranslationelongationfactor 1δ)的稳定表达系统。方法 :采用磷酸钙介导转染技术和G4 18细胞筛选法 ,以 pcDNA3.1/V5 His TOPO为表达载体 ,构建了TEF 1δ转基因CHO和COS7细胞系 ,WesternBlot分析与鉴定表达... 目的 :构建TEF 1δ (mousetranslationelongationfactor 1δ)的稳定表达系统。方法 :采用磷酸钙介导转染技术和G4 18细胞筛选法 ,以 pcDNA3.1/V5 His TOPO为表达载体 ,构建了TEF 1δ转基因CHO和COS7细胞系 ,WesternBlot分析与鉴定表达蛋白。结果 :在 10株转染和经G4 18反复筛选的CHO细胞系中 ,有 3株 (编码为COH pcDNA3.1 TEF 1δ # 3,# 6 ,# 14 )具有高效稳定表达的TEF 1δ编码蛋白质 (Mr约 31× 10 3 ) ,其余CHO细胞株的TEF 1δ蛋白质表达相对较弱或无表达。在 4株转染和经G4 18反复筛选的COS7细胞系中 ,4株细胞 (编码为COS7 pcCDNA3.1 TEF 1δ # 4 ,# 8,# 14和 # 17)均有高效稳定的TEF 1δ编码蛋白表达 ,相应的无转染组及载体对照组的CHO和COS7细胞均无TEF 1δ蛋白质表达。结论 :这两类TEF 1δ转基因哺乳动物细胞稳定表达系统已成功构建与鉴定 ,该表达系统的建立对于TEF 1δ这一新基因的生物学功能研究 ,尤其是镉的致癌作用与致癌机制的研究有重要应用价值。 展开更多
关键词 TEF-δ基因 稳定转染 CHO细胞 COS7细胞 WESTERN BLOT 磷酸钙介导转染技术 G418细胞筛选法 真核细胞
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TIF3转基因CHO和COS7细胞株的构建与鉴定 被引量：1
3
作者 雷毅雄 pius joseph +1 位作者 刘玉清 Tong-manOng 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期55-57,共3页
目的　构建 TIF3转基因 CHO和 COS7细胞株并对其构建的细胞株进行鉴定。方法　采用磷酸钙介导转染技术和 G4 18细胞筛选法 ,以 pc DNA3.1/ V5 - His- TOPO为表达载体 ,构建 TIF3转基因 CHO和 COS7细胞株 ;并应用 Western Blot技术对转... 目的　构建 TIF3转基因 CHO和 COS7细胞株并对其构建的细胞株进行鉴定。方法　采用磷酸钙介导转染技术和 G4 18细胞筛选法 ,以 pc DNA3.1/ V5 - His- TOPO为表达载体 ,构建 TIF3转基因 CHO和 COS7细胞株 ;并应用 Western Blot技术对转基因表达产物进行分析与鉴定。实验设计分无转染组、载体转染组和目的基因转染组。结果　在 7株转染的 CHO细胞株中 ,有 3株具有高效稳定表达的 TIF3编码蛋白质 ;在 4株转染的 COS7细胞株中有 2株同样具有高效稳定的 TIF3编码蛋白质表达。结论　本研究成功地构建了 3株 TIF3转基因 CHO细胞株和 2株 TIF3转基因 COS7细胞株 。 展开更多
关键词 TIF3cDNA 稳定转染 CHO细胞 COS7细胞 WESTERN BLOT
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TIF3转基因CHO和COS7细胞株的构建与鉴定
4
作者 雷毅雄 刘玉清 +2 位作者 徐培渝 pius joseph Tong-man Ong 《环境与职业医学》 CAS 北大核心 2002年第3期183-183,共1页
[目的 ]TIF3(MouseTranslationInitiationFacfor 3)是从镉转化BALB/c 3T3细胞中克隆出来的新基因 ,其在基因文库 (Gen Bank)的新添编号为AF2 710 72。为了对该基因的生物学功能进行研究 ,构建了TIF3转基因CHO和COS7细胞株并作了鉴定。[... [目的 ]TIF3(MouseTranslationInitiationFacfor 3)是从镉转化BALB/c 3T3细胞中克隆出来的新基因 ,其在基因文库 (Gen Bank)的新添编号为AF2 710 72。为了对该基因的生物学功能进行研究 ,构建了TIF3转基因CHO和COS7细胞株并作了鉴定。[方法 ]采用磷酸钙介导转染技术和G418细胞筛选法 ,以pcD NA3 1/V5 His TOPO为表达载体 ,构建TIF3转基因CHO和COS7细胞株 ;应用WesternBlot技术对转基因表达产物进行分析与鉴定。实验设计分无转染组 (空白对照 )、载体转染组 (载体对照 )和目的基因转染组 (载体 +TIF3cDNA )。 [结果 ]结果显示 ,无论在CHO细胞还是COS7细胞 ,经转染和G418筛选后 ,无转染组的细胞 10 0 %死亡 ,而载体转染组和TIF3cDNA转染组的细胞形成较多的细胞集落。提示克隆化基因的细胞转染及G418筛选效果良好。经WesternBlot分析与鉴定 ,在 7株转染和经G418反复筛选的CHO细胞株中 ,有 3株具有高效稳定表达约 36kDa的TIF3编码蛋白质 ;在 4株转染和经G418反复筛选的COS7细胞株中有 2株也具有高效稳定的TIF3编码蛋白质表达 ,而无转染组和载体对照组的CHO和COS7细胞均缺乏此蛋白质表达。 [结论 ]本研究成功地构建了 3株TIF3转基因CHO细胞株和 2株TIF3转基因COS7细胞株。这两类TIF3转基因哺乳动物细胞稳定? 展开更多
关键词 TIF3cDNA 转染 CHO细胞 COS7细胞 WESTERN BLOT 编码蛋白质表述
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TIF3镉应答基因的致癌性
5
作者 雷毅雄 pius joseph +1 位作者 陈家堃 Tong-man Ong 《环境与职业医学》 CAS 北大核心 2002年第4期216-218,共3页
[目的 ]前期研究发现 ,镉相关新基因TIF3 (基因文库添码 :AF2 710 72 )转染NIH3T3细胞可致其编码蛋白质表达升高而引起细胞转化。本研究的目的是对TIF3基因转化NIH3T3细胞的致癌能力和致瘤性进行鉴定。 [方法 ]软琼脂集落形成试验和裸... [目的 ]前期研究发现 ,镉相关新基因TIF3 (基因文库添码 :AF2 710 72 )转染NIH3T3细胞可致其编码蛋白质表达升高而引起细胞转化。本研究的目的是对TIF3基因转化NIH3T3细胞的致癌能力和致瘤性进行鉴定。 [方法 ]软琼脂集落形成试验和裸鼠成瘤试验。 [结果 ]所有 4株不同的TIF3转染的NIH3T3细胞在软琼脂培养中均显示锚非依赖性生长能力 ,形成明显的细胞集落。而非转化对照细胞在软琼脂上则无生长能力。转化细胞和对照细胞分别给裸鼠皮下注射 (每组 4只 ) ,4周后所有接种转化细胞的裸鼠全部长出大小不等的肿瘤 ,但非转化的对照细胞于第 5周后仍无 1只裸鼠出现肿瘤。提示TIF3转基因转化细胞属恶性转化细胞 ,具有一定的致癌能力和致瘤作用。 [结论 ]根据本研究结果及前期发现 。 展开更多
关键词 TIF3基因 镉 原癌基因 细胞转化 裸鼠 NIH3T3细胞 软琼脂集落形成
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反义TIF3逆转镉转化BALB/c-3T3细胞的致癌性
6
作者 雷毅雄 pius joseph +1 位作者 吴中亮 Tong-man Ong 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期255-257,共3页
为探讨反义TIF3能否逆转镉转化细胞的致癌性 ,用磷酸钙介导转染法和G418细胞筛选技术 ,建立CdCl2 转化BALB c 3T3细胞反义TIF3稳定表达系统 ,再用软琼脂检测和裸鼠致瘤试验对这些转基因细胞的致癌性逆转情况进行鉴定。结果显示CdCl2 转... 为探讨反义TIF3能否逆转镉转化细胞的致癌性 ,用磷酸钙介导转染法和G418细胞筛选技术 ,建立CdCl2 转化BALB c 3T3细胞反义TIF3稳定表达系统 ,再用软琼脂检测和裸鼠致瘤试验对这些转基因细胞的致癌性逆转情况进行鉴定。结果显示CdCl2 转化BALB c 3T3细胞中反义TIF3表达可逆转这些细胞的转化表型 ,与非转染细胞和载体转染对照细胞比较 ,转染反义TIF3的镉转化细胞在软琼脂上所形成的锚非依赖性生长集落减少 2 5 %～ 70 %。转染反义TIF3基因的镉转化细胞可延迟裸鼠出现肿瘤的时间 ,而且这些肿瘤的大小显著变小 ,肿瘤重量平均下降 5 0 8%～ 5 5 1%。提示反义TIF3mRNA表达可逆转镉转化细胞的致癌性 ; 展开更多
关键词 镉 反义TIF3 逆转 致癌性
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镉转化细胞DNA异常甲基化对肿瘤相关基因表达的影响 被引量：9
7
作者 雷毅雄 吴中亮 +1 位作者 pius joseph Tong-man Ong 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期114-116,共3页
目的　对镉转化细胞DNA异常甲基化及其对肿瘤相关基因表达的影响进行研究 ,探讨镉的外遗传致癌机制。方法　从CdCl2 转化BALB/c 3T3细胞中提取基因组DNA ,经甲基化非敏感性酶 (Mse1 )单独消化或Mse1和甲基化敏感性酶 (BstU1 )联合消化 ... 目的　对镉转化细胞DNA异常甲基化及其对肿瘤相关基因表达的影响进行研究 ,探讨镉的外遗传致癌机制。方法　从CdCl2 转化BALB/c 3T3细胞中提取基因组DNA ,经甲基化非敏感性酶 (Mse1 )单独消化或Mse1和甲基化敏感性酶 (BstU1 )联合消化 ,消化产物用甲基化敏感性内切酶指纹法 (MSRF)进行分析 ,差异显示出异常甲基化基因片段 ,进一步以异常甲基化DNA为探针进行Southern分子杂交加以证实 ,并进行DNA序列测定 ,与基因文库中的基因进行类比分析。结果　发现镉转化细胞存在异常甲基化DNA ,其中一个甲基化DNA片段为p1 6抑癌基因。结论　DNA高甲基化会导致基因表达抑制 ,因此 ,p1 6基因高甲基化会导致其抑癌功能减弱或丧失 。 展开更多
关键词 肿瘤 镉中毒 外遗传致癌机制 P16基因 高甲基化
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