Résumé:Objectif Lobjectif de ce travail est detablir une méthode danalyse du polymorphisme de la conformation monochaine(PCMC),capable de détecter la mutation ponctuelle du gène hMLH1 dans le ...Résumé:Objectif Lobjectif de ce travail est detablir une méthode danalyse du polymorphisme de la conformation monochaine(PCMC),capable de détecter la mutation ponctuelle du gène hMLH1 dans le cancer colique en utilisant ll ctrophor se capillaire associée a la fluorescence laser-induite(FLI-EC).Méthodes Les exons 12 du gène hMLH1 du sang périphérique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets sains témoins sont amplifiés par la PCR.Le PCMC des produits du PCR est analysépar FLI-EC.Leséchantillons anormaux ontétéconfirmés par séquen age EC.Les effets de la concentration du milieu(LPA),de la température de séparationet du voltage de séparation sur le comportement de EC ontétéaussi etudiés.Résultats Lanalyse de PCMC par la methode FLI-EC a retrouvéune mutation hétérozygote chez 4 des 42 patients.La mutation ponctuelle de T1151A aétéobjectivée par la séquen age EC de ceséchantillons,aucune mutation naétéretrouvée chez les 20 sujets sains témoins.La séparation des pics dADN monochainaux aétéfacilitée par une légère augmentation de la concentration de LPA(4%-6%),une légère baisse de la température de séparation(20℃)et une légèreélévation du voltage de séparation(9kV).Conclusion Une concentration adéquate de LPA,une température de séparation appropriée et un voltage de séparation bien appropriéaméliorent considérablement l’efficacitédu FLI-EC.L’application de cette méthode pour détecter la mutation ponctuelle du gène hMLH1 est d’une rapidité,d’une efficacité,et d’uneéreproductivit consid rables.Cette méthode de réalisation facile reste très prometteur pour le dépistage rapide et massive des mutations génétiques.展开更多
文摘Résumé:Objectif Lobjectif de ce travail est detablir une méthode danalyse du polymorphisme de la conformation monochaine(PCMC),capable de détecter la mutation ponctuelle du gène hMLH1 dans le cancer colique en utilisant ll ctrophor se capillaire associée a la fluorescence laser-induite(FLI-EC).Méthodes Les exons 12 du gène hMLH1 du sang périphérique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets sains témoins sont amplifiés par la PCR.Le PCMC des produits du PCR est analysépar FLI-EC.Leséchantillons anormaux ontétéconfirmés par séquen age EC.Les effets de la concentration du milieu(LPA),de la température de séparationet du voltage de séparation sur le comportement de EC ontétéaussi etudiés.Résultats Lanalyse de PCMC par la methode FLI-EC a retrouvéune mutation hétérozygote chez 4 des 42 patients.La mutation ponctuelle de T1151A aétéobjectivée par la séquen age EC de ceséchantillons,aucune mutation naétéretrouvée chez les 20 sujets sains témoins.La séparation des pics dADN monochainaux aétéfacilitée par une légère augmentation de la concentration de LPA(4%-6%),une légère baisse de la température de séparation(20℃)et une légèreélévation du voltage de séparation(9kV).Conclusion Une concentration adéquate de LPA,une température de séparation appropriée et un voltage de séparation bien appropriéaméliorent considérablement l’efficacitédu FLI-EC.L’application de cette méthode pour détecter la mutation ponctuelle du gène hMLH1 est d’une rapidité,d’une efficacité,et d’uneéreproductivit consid rables.Cette méthode de réalisation facile reste très prometteur pour le dépistage rapide et massive des mutations génétiques.
