为建立灵敏、高效的登革病毒检测方法,本试验拟以包含登革病毒3′端保守序列的质粒pUC57-DENV为模板,建立检测DENV的荧光定量PCR方法。结果显示,该检测方法在4.88×10^1~4.88×10^9copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为...为建立灵敏、高效的登革病毒检测方法,本试验拟以包含登革病毒3′端保守序列的质粒pUC57-DENV为模板,建立检测DENV的荧光定量PCR方法。结果显示,该检测方法在4.88×10^1~4.88×10^9copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.653。最低检测限度为4.88 copies/μL,对照组未出现特异性扩增,所有稀释度的标准品在80.20℃出现特异性熔解峰。组内和组间试验的变异系数均小于1%。本试验建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,可为登革病毒早期检测提供技术支持。展开更多
为定量检测NADC30-like谱系猪繁殖与呼吸综合征病毒(NADC30-like PRRSV),本研究针对NADC30 PRRSV株的ORF6基因保守区域设计1对特异性引物,通过优化反应条件,建立了一种灵敏度高、耗时短、操作简便且可量化的SYBR Green I荧光定量PCR检...为定量检测NADC30-like谱系猪繁殖与呼吸综合征病毒(NADC30-like PRRSV),本研究针对NADC30 PRRSV株的ORF6基因保守区域设计1对特异性引物,通过优化反应条件,建立了一种灵敏度高、耗时短、操作简便且可量化的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。建立的标准曲线结果显示:Ct值与质粒标准品浓度之间存在良好的线性关系,相关系数(R~2)为0.995。该方法特异性强,除对NADC30-like PRRSV有特异性扩增外,对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪塞尼卡病毒(SVA)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪细小病毒(PPV)、经典型猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)和NADC34-like PRRSV等病原均无扩增。对质粒标准品的检测下限可达4.62×10~1拷贝/μL,敏感性为常规PCR方法的100倍。组内变异系数与组间变异系数均小于1%,重复性较好。利用该方法与常规PCR方法同时检测53份血清样品,该方法的阳性检出率为11.3%(6/53),高于普通PCR的阳性检出率(9.4%,5/53),二者的总符合率为89.11%。本研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法可以用于NADC30-like PRRSV的快速检测,为PRRS的防控提供技术支持。展开更多
根据GenBank羊炎性细胞因子(IL-1β和IL-8)和Mx1保守序列,设计特异性引物,利用SYBR Green I染料法建立实时荧光定量检测方法。将羊IL-1β、IL-8和Mx1细胞因子基因保守区域克隆到pMD18-T载体,构建标准质粒。分别以标准质粒为模板建立荧...根据GenBank羊炎性细胞因子(IL-1β和IL-8)和Mx1保守序列,设计特异性引物,利用SYBR Green I染料法建立实时荧光定量检测方法。将羊IL-1β、IL-8和Mx1细胞因子基因保守区域克隆到pMD18-T载体,构建标准质粒。分别以标准质粒为模板建立荧光定量PCR反应的标准曲线、熔解曲线。结果表明,羊IL-1β、IL-8和Mx1细胞因子实时荧光定量检测方法Ct值与标准品呈良好的线性关系,R^2均大于0.990,所有稀释度标准品模板出现特异性熔解峰。应用所建立的方法对山羊痘病毒AV41感染山羊外周血淋巴细胞中IL-1β、IL-8和Mx1 mRNA表达水平进行检测,山羊痘病毒AV41可以刺激机体产生较高的炎性细胞因子。建立的羊IL-1β、IL-8和Mx1细胞因子荧光定量检测方法,可以为山羊痘病毒感染后分子免疫机制研究奠定基础。展开更多
文摘为建立灵敏、高效的登革病毒检测方法,本试验拟以包含登革病毒3′端保守序列的质粒pUC57-DENV为模板,建立检测DENV的荧光定量PCR方法。结果显示,该检测方法在4.88×10^1~4.88×10^9copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.653。最低检测限度为4.88 copies/μL,对照组未出现特异性扩增,所有稀释度的标准品在80.20℃出现特异性熔解峰。组内和组间试验的变异系数均小于1%。本试验建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,可为登革病毒早期检测提供技术支持。
文摘为定量检测NADC30-like谱系猪繁殖与呼吸综合征病毒(NADC30-like PRRSV),本研究针对NADC30 PRRSV株的ORF6基因保守区域设计1对特异性引物,通过优化反应条件,建立了一种灵敏度高、耗时短、操作简便且可量化的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。建立的标准曲线结果显示:Ct值与质粒标准品浓度之间存在良好的线性关系,相关系数(R~2)为0.995。该方法特异性强,除对NADC30-like PRRSV有特异性扩增外,对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪塞尼卡病毒(SVA)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪细小病毒(PPV)、经典型猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)和NADC34-like PRRSV等病原均无扩增。对质粒标准品的检测下限可达4.62×10~1拷贝/μL,敏感性为常规PCR方法的100倍。组内变异系数与组间变异系数均小于1%,重复性较好。利用该方法与常规PCR方法同时检测53份血清样品,该方法的阳性检出率为11.3%(6/53),高于普通PCR的阳性检出率(9.4%,5/53),二者的总符合率为89.11%。本研究建立的SYBR Green I荧光定量PCR方法可以用于NADC30-like PRRSV的快速检测,为PRRS的防控提供技术支持。
文摘根据GenBank羊炎性细胞因子(IL-1β和IL-8)和Mx1保守序列,设计特异性引物,利用SYBR Green I染料法建立实时荧光定量检测方法。将羊IL-1β、IL-8和Mx1细胞因子基因保守区域克隆到pMD18-T载体,构建标准质粒。分别以标准质粒为模板建立荧光定量PCR反应的标准曲线、熔解曲线。结果表明,羊IL-1β、IL-8和Mx1细胞因子实时荧光定量检测方法Ct值与标准品呈良好的线性关系,R^2均大于0.990,所有稀释度标准品模板出现特异性熔解峰。应用所建立的方法对山羊痘病毒AV41感染山羊外周血淋巴细胞中IL-1β、IL-8和Mx1 mRNA表达水平进行检测,山羊痘病毒AV41可以刺激机体产生较高的炎性细胞因子。建立的羊IL-1β、IL-8和Mx1细胞因子荧光定量检测方法,可以为山羊痘病毒感染后分子免疫机制研究奠定基础。
