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定点突变法显示在高龄SHR大鼠心脏组织中KCNE2第98位氨基酸可能存在磷酸化修饰
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作者 王慧莲 吕社民 +4 位作者 宁启兰 杨旭东 韩燕 钟波 gea-ny tseng 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2007年第4期364-370,共7页
目的:探究在高龄SHR大鼠心室膜蛋白中,KCNE2蛋白是否发生了磷酸化修饰。方法:用碱性磷酸酶处理高龄SHR大鼠心室膜蛋白,以抗KCNE2的抗体(Ab2)为一抗进行免疫印迹;将在蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,... 目的:探究在高龄SHR大鼠心室膜蛋白中,KCNE2蛋白是否发生了磷酸化修饰。方法:用碱性磷酸酶处理高龄SHR大鼠心室膜蛋白,以抗KCNE2的抗体(Ab2)为一抗进行免疫印迹;将在蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,分别以Ab2和抗c-myc的抗体为一抗的免疫印迹;以及一系列的c-myc-hKCNE2的单点(KCNE2Y96F和KCNE2S98A)和双点突变(KCNE2Y96F/S98A)实验。结果:高龄SHR大鼠心室膜蛋白样品经碱性磷酸酶处理后,极大地减弱了Ab2对KCNE2蛋白的识别能力;另外,蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,虽然极大地减弱了Ab2对其融合蛋白的识别能力,却没有影响抗c-myc抗体对KCNE2融合蛋白的识别能力。定点突变的结果显示,虽然以抗c-myc抗体为一抗的免疫印迹结果显示,蛋白质离体翻译系统成功地翻译出了单突变子KCNE2S96A及双突变子KCNE2Y96F/S98A蛋白,但不论样品被碱性磷酸酶处理与否,Ab2在这些样品中均检测出很弱的KCNE2蛋白免疫条带。结论:在高龄SHR大鼠心室组织中,KCNE2第98位丝氨酸可能发生了磷酸化修饰。然而该位点的磷酸化修饰是否会通过影响心脏的电生理,而在SHR大鼠心脏病变过程中起着一定的作用,有待于从电生理的水平上进一步研究。 展开更多
关键词 磷酸化 点突变 心脏 Q—T延长综合征 钾通道 KCNE2蛋白 大鼠 近交SHR
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