目的建立重组Omicron BA.4/5-Delta株新冠疫苗体外相对效力的检测方法,并进行验证,以期为替代体内效力检测奠定基础。方法以人源单克隆抗体GH4作为包被抗体,HRP标记的CB6人源单克隆抗体作为酶标抗体的双抗体夹心ELISA法为基础,确定疫苗...目的建立重组Omicron BA.4/5-Delta株新冠疫苗体外相对效力的检测方法,并进行验证,以期为替代体内效力检测奠定基础。方法以人源单克隆抗体GH4作为包被抗体,HRP标记的CB6人源单克隆抗体作为酶标抗体的双抗体夹心ELISA法为基础,确定疫苗解吸附方法;再以该解吸附方法结合双抗体夹心ELISA法建立体外相对效力检测方法。并验证方法的线性范围、专属性、准确性、精密性、耐用性及定量限。采用建立的方法检测3批供试品重组Omicron BA.4/5-Delta株新冠疫苗的体外相对效力。结果确定解吸附方法为:将疫苗与处理液(1.25 mL 20%二乙醇胺,0.20 mL 10%Triton X-100,8.55 mL PBS)按等体积分数混合,于25℃解离30 min,解吸附率可达95%以上。疫苗参考品在1~26 ng/mL浓度范围内,与A_(450)呈良好的线性关系,线性方程为log(y)=1.447 log(x)-1.643,R^(2)为0.998;可特异性检测疫苗参考品的体外相对效力;90000、50000和20000 ng/mL浓度疫苗参比品检测结果的回收率均在80%~120%范围内;重复性及中间精密性验证相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<20%;解离条件、检测体系孵育时间和显色时间发生微小变动时,检测结果不受影响;定量限为0.2。批号为J202301002、J202301003、J202301004供试品的体外相对效力分别为1.0,1.0和0.8,RSD为11%。结论建立的用于检测体外相对效力的方法具有良好的准确性、精密性、专属性和耐用性,可用于重组Omicron BA.4/5-Delta株新冠疫苗体外相对效力的检测。展开更多
文摘目的建立重组Omicron BA.4/5-Delta株新冠疫苗体外相对效力的检测方法,并进行验证,以期为替代体内效力检测奠定基础。方法以人源单克隆抗体GH4作为包被抗体,HRP标记的CB6人源单克隆抗体作为酶标抗体的双抗体夹心ELISA法为基础,确定疫苗解吸附方法;再以该解吸附方法结合双抗体夹心ELISA法建立体外相对效力检测方法。并验证方法的线性范围、专属性、准确性、精密性、耐用性及定量限。采用建立的方法检测3批供试品重组Omicron BA.4/5-Delta株新冠疫苗的体外相对效力。结果确定解吸附方法为:将疫苗与处理液(1.25 mL 20%二乙醇胺,0.20 mL 10%Triton X-100,8.55 mL PBS)按等体积分数混合,于25℃解离30 min,解吸附率可达95%以上。疫苗参考品在1~26 ng/mL浓度范围内,与A_(450)呈良好的线性关系,线性方程为log(y)=1.447 log(x)-1.643,R^(2)为0.998;可特异性检测疫苗参考品的体外相对效力;90000、50000和20000 ng/mL浓度疫苗参比品检测结果的回收率均在80%~120%范围内;重复性及中间精密性验证相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均<20%;解离条件、检测体系孵育时间和显色时间发生微小变动时,检测结果不受影响;定量限为0.2。批号为J202301002、J202301003、J202301004供试品的体外相对效力分别为1.0,1.0和0.8,RSD为11%。结论建立的用于检测体外相对效力的方法具有良好的准确性、精密性、专属性和耐用性,可用于重组Omicron BA.4/5-Delta株新冠疫苗体外相对效力的检测。
