防己黄芪汤加味调节Notch/Hes⁃1信号通路对糖尿病肾病小鼠肾损伤的影响

1

作者 王小运 丰水华 +5 位作者 张建影 魏雪乔 邓元香 蔡静 冯春艳 邹译娴 《解剖学研究》 2025年第5期435-441,共7页

目的探讨防己黄芪汤加味(FHT)调节Notch/Hes⁃1信号通路对糖尿病肾病(DN)小鼠肾损伤的影响。方法构建小鼠DN模型,将建模成功的小鼠分为DN组、L⁃FHT、M⁃FHT、H⁃FHT(灌胃2730、5460、10920 mg/kg的FHT)、H⁃FHT+VPA组(灌胃10920 mg/kg的FHT... 目的探讨防己黄芪汤加味(FHT)调节Notch/Hes⁃1信号通路对糖尿病肾病(DN)小鼠肾损伤的影响。方法构建小鼠DN模型,将建模成功的小鼠分为DN组、L⁃FHT、M⁃FHT、H⁃FHT(灌胃2730、5460、10920 mg/kg的FHT)、H⁃FHT+VPA组(灌胃10920 mg/kg的FHT+腹腔注射300 mg/kg的Notch激活剂VPA),每组各10只。另取10只正常小鼠为Control组,Control组与DN组给予等量生理盐水,1次/d,连续8周。全自动生化分析仪检测小鼠肾功能指标;HE染色观察小鼠肾组织病理变化;TUNEL染色观察小鼠肾组织细胞凋亡;ELISA检测小鼠血清炎症因子及氧化应激指标水平;Western blot检测小鼠肾组织中Notch/Hes⁃1信号通路蛋白表达变化。结果DN组小鼠肾组织较Control组小鼠肾组织病理损伤明显,肾小管上皮细胞肿胀,肾小管上皮细胞肿胀、刷状缘脱落、肾小球系膜基质增生;L⁃FHT组、M⁃FHT组、H⁃FHT组小鼠较DN组小鼠肾组织病变减轻,系膜区轻度增宽,且随剂量增加,损伤程度缓解明显;H⁃FHT+VPA组小鼠肾组织较H⁃FHT组小鼠肾组织病理损伤加重,可见基底膜增厚,肾间质纤维增生。DN组小鼠Scr、BUN、β2⁃MG、肾组织细胞凋亡率、血清中TNF⁃α、IL⁃6、MDA水平、肾组织中Notch、Hes⁃1蛋白表达较Control组升高,血清中GSH⁃PX水平较Control组降低(P<0.05);L⁃FHT组、M⁃FHT组、H⁃FHT组小鼠Scr、BUN、β2⁃MG、肾组织细胞凋亡率、血清中TNF⁃α、IL⁃6、MDA水平、肾组织中Notch、Hes⁃1蛋白表达较DN组降低,血清中GSH⁃PX水平较DN组升高(P<0.05)。H⁃FHT+VPA组小鼠Scr、BUN、β2⁃MG、肾组织细胞凋亡率、血清中TNF⁃α、IL⁃6、MDA水平、肾组织中Notch、Hes⁃1蛋白表达较H⁃FHT组升高,血清中GSH⁃PX水平较H⁃FHT组降低(P<0.05)。结论FHT可减轻DN小鼠肾损伤,这可能是通过抑制Notch/Hes⁃1信号通路实现的。 展开更多

关键词 防己黄芪汤加味 Notch/发状分裂相关增强子1 糖尿病肾病 肾损伤

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基于非洲猪瘟病毒p72蛋白的阻断ELISA检测方法的建立及初步应用 被引量：17

2

作者 王彩霞 冯春燕 +6 位作者 肖颖 于浩洋 宋晓晖 刘晓飞 仇松寅 林祥梅 吴绍强 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1341-1347,共7页

本研究以真核表达的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白为包被抗原,以抗ASFV p72蛋白的特异性单克隆抗体为检测抗体,经条件优化,建立了特异性检测ASFV抗体的阻断ELISA方法。结果显示,最佳抗原包被量为100 ng/孔,待检血清样本最佳稀释度为1∶2,... 本研究以真核表达的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白为包被抗原,以抗ASFV p72蛋白的特异性单克隆抗体为检测抗体,经条件优化,建立了特异性检测ASFV抗体的阻断ELISA方法。结果显示,最佳抗原包被量为100 ng/孔,待检血清样本最佳稀释度为1∶2,酶标抗体最佳稀释度为1∶10000。该阻断ELISA方法的结果判定标准:当血清样品的PI≥41.84%时,判定为阳性;当血清样品的PI<41.84%时,判定为阴性。特异性试验结果显示,该方法仅能与非洲猪瘟病毒阳性血清反应,与PRV、PCV2、PRRSV、CSFV和PPV等猪病疫苗毒阳性血清无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法最低能检出1∶128稀释的阳性血清;批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%;与商品化ELISA试剂盒的对比检测结果表明,两种方法的符合率为100%。上述结果表明,本研究建立的基于ASFV p72蛋白的阻断ELISA方法可以应用于ASFV抗体的检测,为ASFV流行病学调查及疫情监测提供了有效的检测手段。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p72蛋白 阻断ELISA

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猪流行性腹泻病毒实时荧光RPA等温检测方法的建立 被引量：11

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作者 吕继洲 范燕茹 +2 位作者 冯春燕 袁向芬 吴绍强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第12期3434-3439,共6页

为建立一种简单、快速的猪流行性腹泻病毒(PEDV)分子检测方法,本研究基于PEDV病毒M基因保守序列,设计一系列扩增引物及其荧光探针,以包含PEDV病毒M基因片段的pUC57质粒为模板,同时以包含猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病... 为建立一种简单、快速的猪流行性腹泻病毒(PEDV)分子检测方法,本研究基于PEDV病毒M基因保守序列,设计一系列扩增引物及其荧光探针,以包含PEDV病毒M基因片段的pUC57质粒为模板,同时以包含猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)及古典猪瘟病毒(CSFV)等病毒膜蛋白或核衣壳蛋白基因序列的质粒作为对照,建立了一种PEDV实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)等温检测方法,测定了方法的特异性与敏感性。结果表明,该实时荧光RPA方法可在39℃恒温反应20min特异性扩增PEDV病毒M基因,与TGEV、PRRSV等对照病毒基因无交叉反应,其检测限为10拷贝/μL。应用该实时荧光RPA方法可有效检测出血浆及血浆蛋白粉中的PEDV核酸。本研究建立的实时荧光RPA检测方法简单、快速、灵敏度高,可为PEDV的检测防控提供一种新的、可靠的技术支持。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 分子检测 重组酶聚合酶扩增(RPA) 等温扩增

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新型冠状病毒实时荧光双重逆转录RPA的建立及其在食品检测中的应用 被引量：5

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作者 吕继洲 吴绍强 +5 位作者 张舟 邓俊花 袁向芬 王彩霞 冯春燕 林祥梅 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期238-244,共7页

旨在建立一种新型冠状病毒实时荧光逆转录重组酶聚合酶恒温快速的检测技术(RT-RPA)用于新型冠状病毒的检测与监测。根据新型冠状病毒保守的特异性S基因以及N基因序列,设计了两套RPA引物、探针;同时基于N基因等靶标序列构建重组载体,构... 旨在建立一种新型冠状病毒实时荧光逆转录重组酶聚合酶恒温快速的检测技术(RT-RPA)用于新型冠状病毒的检测与监测。根据新型冠状病毒保守的特异性S基因以及N基因序列,设计了两套RPA引物、探针;同时基于N基因等靶标序列构建重组载体,构建新型冠状病毒假病毒颗粒(VLPs)作为阳性质控品。经验证,筛选出一套基于S基因以及N基因的双重RPA引物、探针组合,其分析敏感度S基因引物探针可达10 copies/reaction,N基因引物探针分析敏感度可达102 copies/reaction;分析特异性良好,与H1N1流感病毒、PEDV、TGEV、FMDV、PPRV以及RV病毒无交叉反应。该方法建立后,应用于食品、动物组织器官及临床样本的检测。该方法可特异性从上述样本中检测到新型冠状病毒,表明其具有速度快(20 min)、双靶标、灵敏度高、操作简便,对仪器设备要求低等优点,可用于新型冠状病毒在食品、动物产品以及临床样本中的快速筛查。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 实时荧光反转录RPA 假病毒颗粒

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非洲猪瘟病毒p54抗原C端的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：4

5

作者 冯春燕 王彩霞 +4 位作者 杜方原 张永宁 刘丹丹 林祥梅 吴绍强 《动物医学进展》 北大核心 2019年第6期1-5,共5页

利用大肠埃希菌表达非洲猪瘟病毒核心抗原p54蛋白C末端55个氨基酸的肽段(命名为p54-2),制备了多克隆抗体并进行了纯化,以进一步用于非洲猪瘟ELISA试剂盒的研发。将PCR扩增获得的p54-2目的片段与表达载体pGEX6p-1质粒均经过限制性内切Bam... 利用大肠埃希菌表达非洲猪瘟病毒核心抗原p54蛋白C末端55个氨基酸的肽段(命名为p54-2),制备了多克隆抗体并进行了纯化,以进一步用于非洲猪瘟ELISA试剂盒的研发。将PCR扩增获得的p54-2目的片段与表达载体pGEX6p-1质粒均经过限制性内切BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,构建pGEX6p-1-ASFV-P54-2原核表达质粒。将该质粒转化到大肠埃希菌BL21中,诱导蛋白大量表达,并纯化获得高纯度的蛋白。将纯化的p54-2蛋白免疫小鼠,获得p54-2多克隆抗体并进一步纯化多抗。用ELISA、Westernblot对纯化的多克隆抗体进行效价滴定及特异性鉴定。结果显示,成功构建了pGEX6p-1-ASFV-P54-2重组质粒,在大肠埃希菌中IPTG诱导下,能够高效表达重组p54-2蛋白。用p54-2蛋白免疫Balb/c小鼠获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶128000,说明该蛋白有很好的免疫原性。Westernblot结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别非洲猪瘟病毒p54胞内区,具有较高反应性和特异性,可以用于ELISA检测方法研究和p54抗原表位的鉴定。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p54抗原 多克隆抗体 酶联免疫吸附试验

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四君子汤含药血清抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究 被引量：3

6

作者 胡艳红 李颖 +5 位作者 林淑娜 李四化 胡俊 陈胜 冯春燕 柯发杰 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第7期630-633,共4页

目的观察四君子汤含药血清对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)凋亡的抑制作用,从而探讨四君子汤防治老年性白内障的机制。方法 30只SD大鼠随机分为2组,分别用四君子汤(1.725 g·kg^(-1)·d^(-1))和生理盐水灌... 目的观察四君子汤含药血清对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)凋亡的抑制作用,从而探讨四君子汤防治老年性白内障的机制。方法 30只SD大鼠随机分为2组,分别用四君子汤(1.725 g·kg^(-1)·d^(-1))和生理盐水灌胃,用药7 d后经腹主动脉采血,离心提取四君子汤含药血清和空白血清冻存备用。细胞实验分为4组:阴性对照组、过氧化氢组(300μmol·L^(-1)过氧化氢作用4 h)、空白血清组(300μmol·L^(-1)过氧化氢作用4 h后加入体积分数20%空白血清作用12 h)和四君子汤含药血清组(300μmol·L^(-1)过氧化氢作用4 h后加入体积分数20%四君子汤含药血清作用12 h),流式细胞仪检测HLEC细胞周期;透射电子显微镜观察各组HLEC超微结构的改变。结果流式细胞仪检测结果示:过氧化氢组G1期细胞比例为(67.127±2.615)%,较阴性对照组明显增加,S期细胞比例为(24.603±2.547)%、G2期细胞比例为(8.270±1.149)%,均较阴性对照组减少,差异均具有统计学意义(均为P<0.05)。四君子汤含药血清组G1期细胞比例为(41.517±20.008)%,较过氧化氢组明显减少,S期细胞比例为(38.423±10.213)%、G2期细胞比例为(20.060±11.004)%,均较过氧化氢组明显增加,差异均具有统计学意义(均为P<0.05)。透射电子显微镜结果显示:阴性对照组胞膜完整,各细胞器结构正常;过氧化氢组细胞表面微绒毛消失,染色质凝集成块分布于核膜下,核膜欠完整,细胞质内可见溶酶体;空白血清组细胞质内空泡增多,线粒体、内质网等细胞器结构仍可见;四君子汤含药血清组胞膜完整,细胞质内可见少许空泡,线粒体、内质网等细胞器结构清晰。结论四君子含药血清能有效抑制过氧化氢诱导的HLEC凋亡,这可能是四君子汤防治老年性白内障的机制之一。 展开更多

关键词 老年性白内障 四君子汤 含药血清 人晶状体上皮细胞 细胞凋亡

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基于非洲猪瘟病毒p72蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：2

7

作者 王彩霞 于浩洋 +5 位作者 林祥梅 仇松寅 刘晓飞 李昊轩 冯春燕 吴绍强 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1223-1229,共7页

为建立非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p72蛋白的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法,本研究以实验室前期制备的ASFV单克隆抗体32H5作为捕获抗体,以HRP标记的MAb 2B2-1作为检测抗体,经条件优化,建立了基于非洲猪瘟病毒p7... 为建立非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)p72蛋白的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法,本研究以实验室前期制备的ASFV单克隆抗体32H5作为捕获抗体,以HRP标记的MAb 2B2-1作为检测抗体,经条件优化,建立了基于非洲猪瘟病毒p72蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行了敏感性、特异性和重复性试验,同时初步探索了两种抗体在试纸条方面的应用。结果显示,该夹心ELISA方法的最佳工作条件为:捕获抗体包被浓度为2μg/m L,酶标检测抗体的最适稀释倍数为1∶200;判定标准为:当检测样品D值大于等于0.252时判定为阳性;该方法检测猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒均呈阴性反应,具有良好的特异性;最低可检测到50 ng/m L p72重组蛋白;其批间和批内重复性变异系数均小于10%。利用两种抗体制备的蓝乳胶免疫层析试纸条也取得了较好的检测结果。这些结果表明本研究建立的ASFV p72双抗体夹心ELISA检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为非洲猪瘟的快速诊断、p72蛋白的功能研究及检测提供了技术支持。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p72蛋白 双抗体夹心ELISA 蓝乳胶免疫层析试纸条

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LC-MS/MS法测定贝类中20种抗生素残留的基质效应补偿研究

8

作者 张欣琪 冯春艳 +2 位作者 王儒 赵晓野 王婷 《化学工程师》 2025年第8期22-28,共7页

基质效应影响液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)分析的准确性。以离子抑制率作为评价指标,考察LC-MS/MS法测定13种贝类中20种抗生素残留的基质效应,并研究基质匹配标准曲线校正法的补偿作用。结果表明,13种贝类样品对测定15种抗生素表现出... 基质效应影响液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)分析的准确性。以离子抑制率作为评价指标,考察LC-MS/MS法测定13种贝类中20种抗生素残留的基质效应,并研究基质匹配标准曲线校正法的补偿作用。结果表明,13种贝类样品对测定15种抗生素表现出基质抑制效应,而分别有11和12种贝类样品对测定四环素、金霉素时表现出基质增强效应。采用贝类基质匹配标准曲线法可补偿基质效应对检测结果的影响,20种抗生素基质匹配标准曲线方程的相关系数(R^(2))均大于0.997,定量限为0.48~8.71μg·kg^(-1),平均回收率为79.33%~113.18%,相对标准偏差小于等于4.96%。该研究提高了结果准确度与精密度,可为不同贝类样品抗生素残留的检测提供借鉴。 展开更多

关键词 液相色谱-串联质谱法 贝类 抗生素 基质效应

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高效液相色谱-串联质谱法测定贝类水产品中20种抗生素

9

作者 王婷 冯春艳 +3 位作者 张欣琪 王儒 赵晓野 林丽珍 《食品安全质量检测学报》 2025年第18期27-35,共9页

目的建立高效液相色谱-串联质谱法同时测定贝类水产品中20种抗生素的方法。方法样品经75%乙腈水溶液(0.1%甲酸)超声提取,0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液进行梯度洗脱,电喷雾离子源正/负扫描,多重反应监测模式检测,外标法定量。结果2... 目的建立高效液相色谱-串联质谱法同时测定贝类水产品中20种抗生素的方法。方法样品经75%乙腈水溶液(0.1%甲酸)超声提取,0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液进行梯度洗脱,电喷雾离子源正/负扫描,多重反应监测模式检测,外标法定量。结果20种抗生素在0.5~150.0 ng/mL的范围,线性相关系数(r2)达到0.998以上,检出限为0.060~0.648μg/kg,定量限为0.200~2.161μg/kg,低、中、高3个浓度梯度回收率均在80.5%~114.8%之间,相对标准偏差均小于10%。结论该方法前处理效率高,损失小,灵敏度、准确度、精密度、重现性均有良好表现,满足贝类水产品中20种抗生素高通量实际检测要求。为服务食品安全监管和消费者健康保护提供技术支持。 展开更多

关键词 贝类 抗生素 高效液相色谱-串联质谱法

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甘肃省中部干旱地区大麦引种试验

10

作者 冯春艳 张健 +6 位作者 权小兵 周丽娜 赵锋 柳小宁 王正凤 牛小霞 包奇军 《安徽农业科学》 2025年第8期17-19,共3页

[目的]筛选适宜甘肃省中部干旱地区种植大麦新品种。[方法]2021-2022年从甘肃省农业科学院引进7个大麦品系(种)在定西市进行筛选试验。[结果]所有参试品系(种)蛋白质含量较高,在14.2%~16.1%;>2.5 mm饱满度除1008-1较高,其余均低于70%... [目的]筛选适宜甘肃省中部干旱地区种植大麦新品种。[方法]2021-2022年从甘肃省农业科学院引进7个大麦品系(种)在定西市进行筛选试验。[结果]所有参试品系(种)蛋白质含量较高,在14.2%~16.1%;>2.5 mm饱满度除1008-1较高,其余均低于70%;千粒重均在40.1 g以下;从产量看,Y2017折合产量2950.43 kg/hm^(2),较甘啤7号(CK)增产17.2%,位居参试品系(种)第1位,其余参试品系(种)均较CK减产。[结论]综合分析结果表明,Y2017综合性状较好,适宜在甘肃省中部干旱地区作饲用大麦示范推广种植。 展开更多

关键词 大麦 产量 品质

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猪不同器官组织猪圆环病毒3型载量的实时荧光定量PCR检测 被引量：2

11

作者 王彩霞 杜方原 +3 位作者 刘丹丹 林祥梅 冯春燕 吴绍强 《动物医学进展》 北大核心 2020年第11期15-18,共4页

为实现PCV3快速定量检测的需求,参考GenBank中已登录的PCV3 rep基因序列设计引物,建立了PCV3 TaqMan探针法实时荧光PCR检测方法,并进一步构建标准曲线,采用绝对定量法对猪的心、肝、脾、肺、肾、淋巴结组织进行PCV3病毒载量的检测。结... 为实现PCV3快速定量检测的需求,参考GenBank中已登录的PCV3 rep基因序列设计引物,建立了PCV3 TaqMan探针法实时荧光PCR检测方法,并进一步构建标准曲线,采用绝对定量法对猪的心、肝、脾、肺、肾、淋巴结组织进行PCV3病毒载量的检测。结果显示,所建立的PCV3实时荧光定量PCR检测方法具有良好的敏感性和特异性,敏感性可达16.3 copies/μL质粒DNA。病毒载量检测结果显示,在肺和淋巴结中检测到了PCV3,且淋巴结中的病毒含量明显高于肺中的病毒含量,这表明不同组织器官中PCV3的病毒含量存在较大差异。 展开更多

关键词 新型猪圆环病毒3型 实时荧光定量聚合酶链反应 绝对定量 检测

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塞内卡病毒A间接ELISA检测方法的建立及应用 被引量：2

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作者 王彩霞 张舟 +3 位作者 范燕茹 冯春燕 吴绍强 林祥梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第4期19-23,I0001,共6页

为了建立塞内卡病毒A(SVA)血清学诊断方法,本研究体外融合表达结构蛋白VP2和VP3全长,并建立了间接ELISA方法,并利用建立的方法,进一步研究了多次感染SVA后VP2/3抗体的消长规律。本研究首先从塞内卡GD01/2017株中扩增出VP2和VP 3基因,将... 为了建立塞内卡病毒A(SVA)血清学诊断方法,本研究体外融合表达结构蛋白VP2和VP3全长,并建立了间接ELISA方法,并利用建立的方法,进一步研究了多次感染SVA后VP2/3抗体的消长规律。本研究首先从塞内卡GD01/2017株中扩增出VP2和VP 3基因,将其克隆至表达载体pET-30a,IPTG诱导表达目的蛋白,经检测蛋白以包涵体形式存在。大量诱导表达后收集纯化包涵体蛋白,用6 mol/L盐酸胍溶解包涵体并测定其浓度为5.3 mg/mL,利用该蛋白建立了SVA结构蛋白VP2/3的间接ELISA检测方法。本研究进一步利用该ELISA方法检测SVA GD01/2017株多次感染SPF猪后的血清样品,绘制了VP2/3抗体的消长规律图,为后续疫苗免疫程序的制定奠定基础。 展开更多

关键词 塞内卡病毒A 结构蛋白 原核表达 酶联免疫吸附试验 检测

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针刺结合康复治疗卒中后足内翻的研究现状 被引量：15

13

作者 冯春燕 张春红 李金坡 《中医药导报》 2019年第14期129-131,共3页

就近年来针刺结合康复治疗足内翻的研究进展作如下综述,中西医治疗理念趋同,不断碰撞并尝试多方融合,临床疗效显著,但仍需大规模、高质量的临床试验研究,为临床标准化提供参考。

关键词 针刺 康复 卒中后 足内翻 综述

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稳定表达非洲猪瘟病毒P54蛋白的Vero细胞系的建立 被引量：1

14

作者 王彩霞 杜方原 +4 位作者 林祥梅 Grzegorz Wozniakowski 王勤 冯春燕 吴绍强 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期139-144,共6页

旨为建立稳定表达非洲猪瘟病毒(ASFV)P54蛋白的Vero细胞系,将ASFV-P54基因与绿色荧光基因Azami Green的融合基因片段,将其克隆至慢病毒载体pLV-puro中构建重组慢病毒质粒pLV-ASFV-P54-AG,将该质粒与慢病毒包装质粒pH1和pH2共转染HEK-293... 旨为建立稳定表达非洲猪瘟病毒(ASFV)P54蛋白的Vero细胞系,将ASFV-P54基因与绿色荧光基因Azami Green的融合基因片段,将其克隆至慢病毒载体pLV-puro中构建重组慢病毒质粒pLV-ASFV-P54-AG,将该质粒与慢病毒包装质粒pH1和pH2共转染HEK-293V细胞,包装表达ASFV-P54蛋白的慢病毒。将重组慢病毒在聚凝胺(Polybrene)的介导下感染Vero细胞,筛选出一株稳定表达ASFV-P54蛋白的Vero细胞系,命名为Vero-AG-ASFV-P54。间接免疫荧光试验表明,该细胞系能够与P54多克隆抗体反应;经波兰国家兽医研究所进一步验证,结果显示,该细胞系与ASFV抗体阳性血清也能发生反应,并且与阴性血清无反应。结果表明,Vero-AG-ASFV-P54细胞系能够稳定高效的表达具有生物活性的ASFV-P54蛋白。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 P54蛋白 Azami绿色荧光蛋白 VERO细胞 慢病毒载体

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长庆油田石油磺酸盐中活性组分识别 被引量：2

15

作者 徐飞艳 王永宏 +4 位作者 张英 冯春艳 李文宏 王帅 郭勇 《分析测试技术与仪器》 CAS 2022年第1期88-95,共8页

石油磺酸盐中活性组分的识别对于磺化原料油的选择和磺酸盐产品界面活性的稳定具有重要的指导意义.开展石油磺酸盐关键活性物质结构的确定与活性检测研究,可以提升高品质石油磺酸盐生产的可控性.采用液相色谱制备技术,结合质谱分析和界... 石油磺酸盐中活性组分的识别对于磺化原料油的选择和磺酸盐产品界面活性的稳定具有重要的指导意义.开展石油磺酸盐关键活性物质结构的确定与活性检测研究,可以提升高品质石油磺酸盐生产的可控性.采用液相色谱制备技术,结合质谱分析和界面张力测试评价,从长庆石油磺酸盐样品中成功分离制备出了具有优异界面活性的关键活性组分.试验结果表明,其活性组分占总石油磺酸盐含量的7.3%,可以将油水界面张力快速降至超低(<1.0×10^(-3) mN/m),且具有广泛的油相普适性,对于正己烷~正十六烷油相以及多种油田来源原油,均可将油水界面张力降至超低.此外,活性组分以单磺酸盐为主,平均相对分子质量为414(不含Na^(+)),相对分子质量分布范围在380~450之间,主要组成是以多种同分异构体结构形式存在的十七烷基苯磺酸盐和十八烷基苯磺酸盐混合物. 展开更多

关键词 石油磺酸盐 液相色谱 活性组分 界面活性 原油

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UPLC-MS/MS法同时测定裸花紫珠药材中9种农药残留 被引量：2

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作者 郑培 冯春艳 赵晓野 《海南医学》 CAS 2018年第16期2309-2312,共4页

目的采用固相萃取(SPE)前处理技术净化样品,建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定裸花紫珠药材中9种农药残留的方法。方法裸花紫珠样品用乙腈提取,通过Cleanet-TPH固相萃取柱净化,采用安捷伦1290~6460超高效液相色谱质谱联用... 目的采用固相萃取(SPE)前处理技术净化样品,建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定裸花紫珠药材中9种农药残留的方法。方法裸花紫珠样品用乙腈提取,通过Cleanet-TPH固相萃取柱净化,采用安捷伦1290~6460超高效液相色谱质谱联用仪测定,流动相为乙腈-水(含0.1%甲酸),扫描方式为多反应离子监测(MRM)模式。结果多菌灵、敌百虫、敌敌畏、灭线磷、倍硫磷、甲拌磷、丙溴磷、辛硫磷、丁硫克百威等9种被测物质的线性关系良好,相关系数为0.997 8~0.999 7,各农药的定量限为0.003~3.1μg/kg,测试精密度和重复性良好,RSD值均<3.0%;高、中、低3个浓度的样品加标回收率范围为92.7%~103.9%。3批裸花紫珠样品检出了多菌灵、敌百虫、辛硫磷等3种农药残留。结论所建立的方法简便、准确度及灵敏度高、分析速度快、专属性好,可用于裸花紫珠药材中9种农药残留的测定。 展开更多

关键词 超高效液相色谱-串联质谱法 固相萃取 裸花紫珠药材 农药残留

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四君子汤治疗脾气虚弱型老年性白内障的临床疗效 被引量：2

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作者 胡艳红 李颖 +5 位作者 林淑娜 李四化 胡俊 陈胜 冯春燕 柯发杰 《实用中西医结合临床》 2019年第1期7-9,共3页

目的:观察四君子汤对脾气虚弱型老年性白内障患者的临床疗效。方法:将符合纳入标准的脾气虚弱型老年性白内障患者60例120眼随机分为四君子汤组30例60眼和吡诺克辛组30例60眼,四君子汤组予四君子汤颗粒剂口服治疗,每次1包,150 ml温水冲泡... 目的:观察四君子汤对脾气虚弱型老年性白内障患者的临床疗效。方法:将符合纳入标准的脾气虚弱型老年性白内障患者60例120眼随机分为四君子汤组30例60眼和吡诺克辛组30例60眼,四君子汤组予四君子汤颗粒剂口服治疗,每次1包,150 ml温水冲泡,早晚饭后温服;吡诺克辛组予吡诺克辛钠滴眼液点眼,点双眼,每次1滴,3次/d,疗程均为3个月。比较治疗前和治疗3个月后患者的视力、晶状体混浊程度及中医证候疗效,以评定临床疗效。结果:两组患者治疗后最佳矫正视力均较治疗前有所提高,且治疗后四君子汤组最佳矫正视力较吡诺克辛组提高更显著(P<0.05);两组患者治疗后晶状体混浊程度均较治疗前减轻,且治疗后四君子汤组晶体混浊程度较吡诺克辛组减轻更显著(P<0.05)。两组患者治疗后中医证候疗效比较:吡诺克辛组显效0例,有效14例,无效16例,总有效率46.67%;四君子汤组显效13例,有效15例,无效2例,总有效率93.33%;两组中医证候疗效比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:四君子汤可提高脾气虚弱型老年性白内障患者最佳矫正视力,减轻患者的晶状体混浊程度,改善患者中医症候,对脾气虚弱型老年性白内障患者有一定的临床疗效,值得临床推广应用。 展开更多

关键词 老年性白内障 四君子汤 脾气虚弱

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海南自由贸易港化学性食品安全风险及防控措施

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作者 李建丽 冯春艳 林艳珠 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第11期4688-4693,共6页

食品安全关系人民群众身体健康和生命安全。食品中化学性风险是影响食品安全的重要因素之一,食品安全化学性风险可分为已知化学风险和未知化学风险、内源性化学风险和外源性化学风险。本文重点介绍了食品安全内源性化学风险和外源性化... 食品安全关系人民群众身体健康和生命安全。食品中化学性风险是影响食品安全的重要因素之一,食品安全化学性风险可分为已知化学风险和未知化学风险、内源性化学风险和外源性化学风险。本文重点介绍了食品安全内源性化学风险和外源性化学风险的主要来源,并结合海南食品安全状况,系统分析了海南建设自由贸易港新形势下食品安全化学性风险的主要挑战。建议海南发挥自由贸易港建设的制度优势,实施大部制改革,建立"从农田到餐桌"的无缝监管体制,探索食品安全地方立法,建立海南食品安全风险管理平台,在提升食品和食用农产品安全风险监测能力等方面作出有益探索和创新,为全国食品安全治理能力和治理水平的提升提供有效路径。 展开更多

关键词 食品安全 化学性风险 海南自由贸易港 防控措施

原文传递

非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA检测方法的建立 被引量：8

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作者 于浩洋 王彩霞 +5 位作者 吴绍强 宋晓晖 刘晓飞 仇松寅 冯春燕 林祥梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期48-55,共8页

为建立一种能检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的阻断ELISA方法,本研究以真核表达后纯化的ASFV p30重组蛋白作为包被抗原,以特异性单抗作为阻断抗体,经条件优化、特异性试验和敏感性试验,建立了一种检测血清... 为建立一种能检测血清中非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体的阻断ELISA方法,本研究以真核表达后纯化的ASFV p30重组蛋白作为包被抗原,以特异性单抗作为阻断抗体,经条件优化、特异性试验和敏感性试验,建立了一种检测血清中ASFV抗体的阻断ELISA方法。结果显示,纯化后的p30重组蛋白大小约为25 ku,建立的ASFV抗体阻断ELISA检测方法通过方阵试验优化后,最终确定了抗原最佳包被浓度为1μg/m L,待检血清最佳稀释度为1∶2,最佳封闭液为5%BSA,酶标抗体最佳稀释度为1∶20 000,阴阳性血清临界值为35.11%。本方法与PCV3灭活阳性血清、PRRSV灭活阳性血清、SVA灭活阳性血清、PRV灭活阳性血清均无交叉反应,具有较强的特异性。本方法检测ASFV阳性血清的敏感性可达1∶128。本试验建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,在非洲猪瘟的临床检测中具有广泛的应用价值。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p30蛋白 真核表达 单克隆抗体 阻断ELISA

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非洲猪瘟CD2v胞外区基因片段的真核表达及其多克隆抗体的制备 被引量：8

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作者 于浩洋 吴绍强 +6 位作者 王彩霞 Grzegorz WOZNIAKOWSKI 刘晓飞 仇松寅 李新实 冯春燕 林祥梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期45-52,共8页

本研究利用真核表达系统表达非洲猪瘟病毒的CD2v胞外区蛋白,研究其免疫特性,制备多克隆抗体并研究其性质,为研发特异性单抗奠定数据基础。以非洲猪瘟病毒Wuhan2019-1株(GenBank:MN393476.1)为模板,合成CD2v胞外区基因序列,并将其克隆至... 本研究利用真核表达系统表达非洲猪瘟病毒的CD2v胞外区蛋白,研究其免疫特性,制备多克隆抗体并研究其性质,为研发特异性单抗奠定数据基础。以非洲猪瘟病毒Wuhan2019-1株(GenBank:MN393476.1)为模板,合成CD2v胞外区基因序列,并将其克隆至真核表达载体pCAGGS载体中,获得pCAGGS-CD2v胞外区重组质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染293F细胞,获得重组胞外CD2v蛋白(简称His-CD2v)。用Ni-NTA柱纯化His-CD2v,并以此为抗原免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,利用ELISA和间接免疫荧光对多克隆抗体进行鉴定。结果显示,(1)His-CD2v融合蛋白在293F中以可溶形式表达,SDS结果显示,相对分子质量约为35~80 ku的弥散带;(2)融合表达的His-CD2v能与阳性血清反应,与对照不反应;(3)HisCD2v制备的多抗效价最高达1∶218700,且能与阳性血清竞争性结合CD2v抗原。上述结果表明,His-CD2v融合蛋白的表达及其多抗的成功制备,为进一步筛选CD2v特异性单抗及研制竞争ELISA试剂盒,为非洲猪瘟感染与免疫鉴别方法的建立奠定了坚实的基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 CD2v 真核表达 多克隆抗体 竞争ELISA

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