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λ噬菌体nutL序列突变对N蛋白生物功能的影响 被引量：2
1
作者 周建光 donaldl.court 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第4期572-575,共4页
λ噬菌体 Ｎ 蛋白不仅是抗转录终止的正调控因子，也是在翻译水平上阻遏自身基因表达的负调控蛋白．ｎｕｔ Ｒ Ｎ Ａ 位点（包括 ｂｏｘ Ａ 和 ｂｏｘ Ｂ）参与了这两种生物效应．对位于左向操纵子（ｐ Ｌ）的 ｎｕｔ Ｌ 序列进行了... λ噬菌体 Ｎ 蛋白不仅是抗转录终止的正调控因子，也是在翻译水平上阻遏自身基因表达的负调控蛋白．ｎｕｔ Ｒ Ｎ Ａ 位点（包括 ｂｏｘ Ａ 和 ｂｏｘ Ｂ）参与了这两种生物效应．对位于左向操纵子（ｐ Ｌ）的 ｎｕｔ Ｌ 序列进行了突变后，证明 ｎｕｔ Ｌ 缺失及 ｂｏｘ Ｂ 第 ６ 位核苷酸突变使 Ｎ 丧失了正、负调控功能，提示 ｎｕｔ Ｌ 在 Ｎ 介导的调控反应中是必需的．ｎｕｔ Ｌ 序列中 ｂｏｘ Ａ 单碱基突变使 Ｎ 丧失了正调控功能，部分保留了负调控功能．这种负调控作用导至极性效应，使 ｌａｃ Ｚ基因转录水平明显下降． 展开更多
关键词 nutL突变 基因调控 Λ噬菌体 N蛋白
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双报道基因系统的构建以及在N蛋白生物功能研究中的应用 被引量：2
2
作者 周建光 donaldl.court 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第4期568-571,共4页
为研究 λ噬菌体调控因子 Ｎ 蛋白的生物功能，应用 λ噬菌体感染、 Ｐ１ 噬菌体转导、体内、体外重组方法，通过对遗传标记的筛选，将 ｌａｃ Ｚ 和 ｇａｌ Ｋ 报道基因、λ噬菌体 ｐ Ｌ 操纵子负责调控转录、翻译的 Ｄ Ｎ Ａ 序列... 为研究 λ噬菌体调控因子 Ｎ 蛋白的生物功能，应用 λ噬菌体感染、 Ｐ１ 噬菌体转导、体内、体外重组方法，通过对遗传标记的筛选，将 ｌａｃ Ｚ 和 ｇａｌ Ｋ 报道基因、λ噬菌体 ｐ Ｌ 操纵子负责调控转录、翻译的 Ｄ Ｎ Ａ 序列以及转录终止子装配到大肠杆菌染色体上，构建成菌株 Ｚ Ｈ１０４１、 Ｚ Ｈ１０４２ 和 Ｚ Ｈ１１４２．应用 Ｚ Ｈ１１４２ 菌株模拟 λ噬菌体的自然状态对其调控蛋白 Ｎ 的生物功能进行了研究．研究证明， Ｎ 蛋白不仅在转录水平上正向调控基因表达，还具有一种新的在翻译水平上负向调节自身基因表达的生物功能． 展开更多
关键词 报道基因 N蛋白 Λ噬菌体 生物功能
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大肠杆菌中高表达重组Era可溶性蛋白的纯化及其生化特性 被引量：5
3
作者 陈苏民 donaldl.court 《生物化学杂志》 CSCD 1992年第1期33-41,共9页
质粒pCE31含有在P_L起动子控制下的重组era基因,在大肠杆菌中、42℃诱导高表达出Era蛋白,经溶菌酶处理裂菌、沉淀离心洗涤后所得的纯Era是不溶的,生物活性也不高。改在40℃诱导2h,在Era底物GDP的存在下裂菌,60％以上的Era处于可溶状态... 质粒pCE31含有在P_L起动子控制下的重组era基因,在大肠杆菌中、42℃诱导高表达出Era蛋白,经溶菌酶处理裂菌、沉淀离心洗涤后所得的纯Era是不溶的,生物活性也不高。改在40℃诱导2h,在Era底物GDP的存在下裂菌,60％以上的Era处于可溶状态。用蛋白酶抑制剂防止Era蛋白降解,经盐析、Q-SepharoseFF柱层析分离,获得可溶性纯Era蛋白。该蛋白能特异地与鸟苷酸结合、并具有GTP酶活性,表明Era是一种G蛋白。动力学定量分析结果:在4℃时,每分子Era肽链能结合一分子GTP或GDP,表明所纯化的Era蛋白几乎都具有活性;4℃下,Era蛋白与GTP或GDP结合的解离常数,分别为5.49和1.01μmol/L;37℃时,Era蛋白GTP酶的Km值为9.0μmol/L,催化GTP水解的最大速度为9.8mmolCTP/mol Era/min。 展开更多
关键词 ERA蛋白 基因表达 蛋白质纯化
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