目的:从牛乳酪蛋白中纯化获得α_(S1)-酪蛋白并对其进行综合鉴定,以及制备特异性识别α_(S1)-酪蛋白的兔多克隆抗体。方法:采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析色谱对α_(S1)-酪蛋白进行分离纯化,利用酪蛋白的理化性质(等电点...目的:从牛乳酪蛋白中纯化获得α_(S1)-酪蛋白并对其进行综合鉴定,以及制备特异性识别α_(S1)-酪蛋白的兔多克隆抗体。方法:采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析色谱对α_(S1)-酪蛋白进行分离纯化,利用酪蛋白的理化性质(等电点和含量)、免疫学技术和质谱技术对纯化的α_(S1)-酪蛋白进行综合鉴定,然后通过透析和冷冻干燥获得高纯度的α_(S1)-酪蛋白,最后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并分析其特异性。结果:在4种酪蛋白中,α_(S1)-酪蛋白在阴离子交换层析色谱中的出峰时间最晚、峰面积最大,在电泳图中的位置最高,最终获得纯度高达94.26%的α_(S1)-酪蛋白,得率为27.19%。免疫5次后,两只兔子的抗血清效价分别为128万和32万,抗血清除了与大豆蛋白存在轻微交叉反应(<0.25%)外,与α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、蛋清蛋白、花生蛋白均无交叉反应,表明特异性高。结论:本研究制备了高纯度的α_(S1)-酪蛋白及其高特异性的多克隆抗体,为过敏原蛋白的纯化与综合鉴定提供了思路,为α_(S1)-酪蛋白免疫学检测方法的建立提供了物质基础。展开更多
文摘目的:从牛乳酪蛋白中纯化获得α_(S1)-酪蛋白并对其进行综合鉴定,以及制备特异性识别α_(S1)-酪蛋白的兔多克隆抗体。方法:采用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析色谱对α_(S1)-酪蛋白进行分离纯化,利用酪蛋白的理化性质(等电点和含量)、免疫学技术和质谱技术对纯化的α_(S1)-酪蛋白进行综合鉴定,然后通过透析和冷冻干燥获得高纯度的α_(S1)-酪蛋白,最后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并分析其特异性。结果:在4种酪蛋白中,α_(S1)-酪蛋白在阴离子交换层析色谱中的出峰时间最晚、峰面积最大,在电泳图中的位置最高,最终获得纯度高达94.26%的α_(S1)-酪蛋白,得率为27.19%。免疫5次后,两只兔子的抗血清效价分别为128万和32万,抗血清除了与大豆蛋白存在轻微交叉反应(<0.25%)外,与α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、蛋清蛋白、花生蛋白均无交叉反应,表明特异性高。结论:本研究制备了高纯度的α_(S1)-酪蛋白及其高特异性的多克隆抗体,为过敏原蛋白的纯化与综合鉴定提供了思路,为α_(S1)-酪蛋白免疫学检测方法的建立提供了物质基础。
