结核分枝杆菌蛋白酶Rv1487对宿主免疫反应作用的研究

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作者 陈春文 姜艳艳 +10 位作者 郭若男 段祎凡 高云洁 张镇钧 冯婷婷 王慧 李梦雨 聂蝉蝉 崔莹莹 党光辉 刘思国 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期721-730,共10页

结核病是由结核分枝杆菌(MTB)引起的一种重要人兽共患传染病,现有的卡介苗无法对MTB感染提供有效的免疫保护。为探寻更有效的MTB保护性抗原,本团队前期通过生物信息学软件分析发现MTB Rv1487蛋白具有蛋白酶活性。为研究Rv1487蛋白酶对... 结核病是由结核分枝杆菌(MTB)引起的一种重要人兽共患传染病,现有的卡介苗无法对MTB感染提供有效的免疫保护。为探寻更有效的MTB保护性抗原,本团队前期通过生物信息学软件分析发现MTB Rv1487蛋白具有蛋白酶活性。为研究Rv1487蛋白酶对宿主免疫反应的影响,本研究采用噬菌体介导的同源重组方法构建rv1487基因缺失株ΔRv1487和回补株ΔRv1487+Rv1487,并经PCR与southern blot鉴定正确后,将ΔRv1487与ΔRv1487+Rv1487株连续传5代,PCR鉴定结果显示,ΔRv1487+Rv1487株出现约345 bp的目的条带,ΔRv1487株则无该条带;Southern blot鉴定结果显示,经Bam H I酶切后H37Ra与ΔRv1487株分别出现4.3 kb与7.6 kb的目的条带,经Nhe I酶切后上述两株菌分别出现5.6 kb和8.9 kb的目的条带。传5代后回补株出现约435 bp的目的条带,缺失株则无该目的条带。表明正确构建了遗传稳定性较好的rv1487基因缺失株和回补株。通过检测各菌液OD_(600nm)值绘制生长曲线,利用H37Ra菌株感染小鼠和人巨噬细胞后不同时间通过qPCR检测细胞中rv1487基因的相对转录水平,将H37Ra、ΔRv1487和ΔRv1487+Rv1487株分别感染巨噬细胞12 h和24 h,通过qPCR检测促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)基因的相对转录水平;感染后12 h、24 h和48 h,分别采用qPCR检测细菌在巨噬细胞胞内的定植量。生长曲线测定结果显示,各菌株的生长速度基本一致;qPCR检测结果显示,与未感染H37Ra的巨噬细胞相比,感染后72 h该细胞中rv1487基因的转录水平显著升高(P<0.05),感染后不同时间人巨噬细胞中rv1487基因的转录水平均极显著升高(P<0.01和P<0.001);感染后12 h和24 h,ΔRv1487株感染的细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的转录水平均显著和极显著低于H37Ra和ΔRv1487+Rv1487株感染的细胞(P<0.05、P<0.01和P<0.001)。感染后24 h和48 h,ΔRv1487株感染细胞中的细菌数显著高于H37Ra菌株感染的细胞(P<0.05);感染后12 h和24 h,ΔRv1487株感染细胞中的细菌数显著和极显著高于ΔRv1487+Rv1487株感染的细胞(P<0.05、P<0.001)。以上结果表明,Rv1487蛋白酶参与MTB的感染过程,促进促炎细胞因子的转录并增强Th1及Th17细胞免疫应答,抑制MTB在巨噬细胞内的定植。本研究为MTB候选抗原蛋白的筛选及结核病疫苗的研究提供参考依据。 展开更多

关键词 Rv1487 蛋白酶 结核分枝杆菌 巨噬细胞 免疫反应

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小鼠tfeb基因对巨噬细胞自噬功能影响的研究

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作者 张镇钧 冯婷婷 +8 位作者 聂蝉蝉 段祎凡 陈春文 郭若男 高云洁 李梦雨 崔莹莹 党光辉 刘思国 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第6期614-622,共9页

转录因子EB(TFEB)作为自噬的主要转录调节因子,通过调控细胞自噬体和溶酶体相关基因的表达影响自噬的发生。为研究TFEB在结核分枝杆菌(MTB)介导细胞自噬中的作用,本实验采用CRISPR/Cas9原理构建重组质粒pSpCas9(BB)-2A-GFP-tfeb,并测序... 转录因子EB(TFEB)作为自噬的主要转录调节因子,通过调控细胞自噬体和溶酶体相关基因的表达影响自噬的发生。为研究TFEB在结核分枝杆菌(MTB)介导细胞自噬中的作用,本实验采用CRISPR/Cas9原理构建重组质粒pSpCas9(BB)-2A-GFP-tfeb,并测序鉴定正确后电转化小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞,简写为WT细胞),经流式细胞仪筛选GFP阳性单克隆细胞,经PCR及western blot鉴定,将鉴定正确的细胞连续传10代,每隔3代均经western blot鉴定。结果显示,经流式细胞术共筛选到25株出现绿色荧光的单克隆细胞,对这些细胞纯化后经PCR鉴定并测序结果显示,仅一株单克隆细胞敲除tfeb中PAM序列(AGG)前的第3位碱基;western blot鉴定结果显示,相比正常细胞,该细胞无57 ku的特异性条带,且每隔3代该细胞均无该57 ku的特异性条带,表明tfeb基因缺失细胞系Δtfeb RAW264.7正确构建,且其遗传稳定性较强。将MTB H37Ra株分别感染WT细胞和Δtfeb RAW264.7细胞,12 h后经western blot检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3-II和溶酶体相关膜糖蛋白1(LAMP1)的表达水平,通过RT-qPCR检测自噬相关基因maplc3、ctsb、lamp1、tpp1的转录水平,采用激光共聚焦试验检测TFEB对H37Ra诱导细胞自噬流形成的影响。Western blot和RT-qPCR结果显示,与未感染的两种细胞相比,H37Ra菌株感染的WT细胞中LC3-II和LAMP1蛋白的表达量均极显著升高(P<0.01、P<0.001);自噬相关基因maplc3和溶酶体相关基因lamp1、ctsb和tpp1的转录水平均显著和极显著升高(P<0.05、P<0.01)。H37Ra菌株感染的Δtfeb RAW264.7细胞中上述两种蛋白的表达量均无显著差异,其上述两种蛋白的表达水平均低于WT细胞且该细胞中上述自噬体和溶酶体相关基因的转录水平均无显著差异。激光共聚焦试验结果显示,与WT细胞相比,H37Ra株感染的WT细胞中黄色荧光(成熟自噬体)和红色荧光(溶酶体)的数量均极显著增加(P<0.01),且自噬流通畅,表明WT细胞发生了自噬;H37Ra株感染的Δtfeb RAW264.7细胞与未感染的该细胞中二者的荧光数量均无显著差异,且二者荧光的数量均比WT细胞整体降低,自噬流受阻。上述结果表明,本研究构建了tfeb基因稳定缺失的细胞系Δtfeb RAW264.7,且首次证实TFEB是MTB介导巨噬细胞自噬的关键宿主因子,在巨噬细胞自噬过程中发挥关键作用,本研究为深入探究TFEB在MTB介导巨噬细胞自噬中的作用提供了细胞模型和参考依据。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 转录因子EB蛋白 自噬 结核分枝杆菌

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肺炎支原体肺炎患儿外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平与心肌损伤的关系 被引量：41

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作者 崔莹莹 王琳 王玲玲 《解放军医药杂志》 CAS 2020年第3期48-53,共6页

目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2)、巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)、CXC趋化因子配体8(CXCL8)、CXC趋化因子配体9(CXCL9)水平变化及其与心肌损伤的关系。方法选取2018年3月—2019年5月收治的72... 目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2)、巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)、CXC趋化因子配体8(CXCL8)、CXC趋化因子配体9(CXCL9)水平变化及其与心肌损伤的关系。方法选取2018年3月—2019年5月收治的72例MPP患儿为研究对象,根据患儿疾病严重程度分为MPP轻症组54例与MPP重症组18例;选取同期门诊体检健康儿童35例为对照组。检测各组外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平以及血清急性时相蛋白指标水平。根据MPP患儿是否发生心律失常分为心律失常组12例与非心律失常组60例并检测其心肌酶谱指标。采用Pearson法分析CCL2、CCL4、CXCL9、CXCL8与MPP患儿血清急性时相蛋白指标及其与心律失常患儿心肌酶谱指标的相关性。结果MPP轻症组和MPP重症组血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9、C-反应蛋白(CRP)、α1-酸性糖蛋白(α1-AGP)、触珠蛋白(HP)、铜蓝蛋白(CP)水平均显著高于对照组,且MPP重症组显著高于MPP轻症组(P<0.05)。CCL2、CCL4均与CRP、α1-AGP、HP、CP呈正相关(P<0.05或P<0.01),CXCL8、CXCL9均与CRP、α1-AGP呈正相关(P<0.05或P<0.01),CXCL9与CP呈正相关(P<0.05)。心律失常组血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDB)、磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平均显著高于非心律失常组(P<0.05或P<0.01)。CCL2、CXCL8、CXCL9均与LDH、α-HBDB、CK、CK-MB呈正相关(P<0.05或P<0.01),CCL4与LDH、α-HBDB、CK-MB呈正相关(P<0.05)。结论MPP患儿外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平均明显升高,并与疾病严重程度及心肌损伤有关,对MPP病情评估及治疗方案的制定均具有重要意义。 展开更多

关键词 肺炎 支原体 单核细胞趋化蛋白1 巨噬细胞炎性蛋白1β CXC趋化因子配体8 CXC趋化因子配体9 急性时相蛋白

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平行钢绞线斜拉索风致异常振动监测及响应分析

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作者 要世乾 崔营营 郭书峰 《建筑机械》 2025年第2期137-142,共6页

斜拉索在日常运营过程中受复杂外环境作用,作为斜拉桥关键受力构件将产生振动响应。平行钢绞线斜拉索多根索股带来较大阻尼,日常振动小于100mg。索体整体振动监测结果表明,倍频效应明显且以前20阶为主,频谱分析可准确获取平行钢绞线基... 斜拉索在日常运营过程中受复杂外环境作用,作为斜拉桥关键受力构件将产生振动响应。平行钢绞线斜拉索多根索股带来较大阻尼,日常振动小于100mg。索体整体振动监测结果表明,倍频效应明显且以前20阶为主,频谱分析可准确获取平行钢绞线基频。基于监测数据,捕获平行钢绞线斜拉索偶发异常振动,所监测8根斜拉索振动加速度瞬时值超300mg,能量集中于第1阶振动,带来较大位移响应。风速风向相关性分析表明,在风速10~15m/s、风向垂直于索面状态下,斜拉索振动呈现明显放大现象。斜拉索异常振动引起主梁及主塔振动的放大,主梁出现谐振现象,振动频率出现漂移,频率集中于0.415Hz,在异常振动结束后主梁及主塔振动恢复正常。 展开更多

关键词 平行钢绞线 风致振动 监测 响应分析

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基于能力模型的管道环焊缝缺陷修复制约因素分析及建议 被引量：5

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作者 吴超 崔莹莹 +4 位作者 杨瑞 温文 胡森 牛亚琨 杨爱兴 《科技和产业》 2020年第10期209-213,共5页

近几年随着国内管道事故频发,管道环焊缝质量问题已经成为管道安全生产的重大隐患,为此国务院安委办、集团公司先后发文要求对已建管道环焊缝进行排查及隐患治理。按照相关工作要求,2019年,管道公司共需开挖验证2620道焊口,截止到6月底... 近几年随着国内管道事故频发,管道环焊缝质量问题已经成为管道安全生产的重大隐患,为此国务院安委办、集团公司先后发文要求对已建管道环焊缝进行排查及隐患治理。按照相关工作要求,2019年,管道公司共需开挖验证2620道焊口,截止到6月底管道公司仅完成全年工作量的33%,工作进度缓慢。通过分析管道公司各分公司缺陷修复时间,建立管道公司环焊缝缺陷修复能力模型,分析制约环焊缝工作进度的因素,并提出对应的建议,为后续类似项目提供借鉴和决策依据。 展开更多

关键词 油气管道 环焊缝 缺陷修复 能力模型

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RH因子和HBS1L-MYB基因多态性与重型β地中海贫血患儿输血效果的关系探讨 被引量：5

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作者 王琳 崔莹莹 《实用预防医学》 CAS 2019年第12期1521-1524,共4页

目的探讨恒河猴(rhesus macacus,RH)因子和贫血致病基因HBS1L-MYB与重型β地中海贫血(β-thalassemia major,β-TM)患儿输血效果的关系。方法回顾性分析128例重型β-TM患儿临床资料,分别采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法和P... 目的探讨恒河猴(rhesus macacus,RH)因子和贫血致病基因HBS1L-MYB与重型β地中海贫血(β-thalassemia major,β-TM)患儿输血效果的关系。方法回顾性分析128例重型β-TM患儿临床资料,分别采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法和PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)检测患儿RH因子和贫血致病基因HBS1L-MYBrs4895441、rs35959442位点多态性。根据输血是否有效将患者分为有效组和无效组,对比2组RH因子基因型分布及等位基因频率,贫血致病基因HBS1L-MYBrs4895441、rs35959442位点基因型分布及等位基因频率。结果本组患者输血有效率为34.38%。有效组与无效组RH因子基因型分布比较差异有统计学意义(P<0.05)。有效组与无效组比较,RH因子e等位基因频率较低[(60.82%)vs.(77.42%)],E等位基因频率较高[(39.18%)vs.(22.58%)],差异有统计学意义[χ^2=5.676,P=0.017,OR值(95%CI)为2.208(1.140~4.279)],RH因子C等位基因频率[(64.43%)vs.(72.58%)],c等位基因频率[(35.57%)vs.(27.42%)]比较差异无统计学意义[χ^2=1.398,P=0.237,OR值(95%CI)为0.684(0.364~1.286)];有效组与无效组比较,HBS1L-MYB基因rs4895441位点AA[(67.01%)vs.(32.26%)]基因型构成比较高,GA[(31.96%)vs.(54.84%)]、GG[(1.03%)vs.(12.90%)]基因型构成比较低[(χ^2=11.694、5.247、5.942,P=0.001、0.022、0.015),OR值(95%CI)分别为3.565(1.463~8.685)和26.00(2.632~256.803)];有效组与无效组比较,HBS1L-MYB基因rs4895441位点G等位基因频率较低[(17.01%)vs.(40.32%)],A等位基因频率较高[(82.99%)vs.(59.68%)],差异有统计学意义[(χ^2=14.572,P=0.000),OR值(95%CI)为0.303(0.161~0.570)]。有效组与无效组比较,HBS1L-MYB基因rs35959442位点CC[(65.98%)vs.(41.94%)]基因型构成比较高,CG[(31.96%)vs.(51.61%)]基因型构成比较低[χ^2=5.666、3.905,P=0.017、0.048,OR值(95%CI)为2.541(1.088~5.935)],GG[(2.06%)vs.(6.45%)]基因型构成比比较差异无统计学意义[χ^2=1.495,P=0.221,OR值(95%CI)为4.923(0.635~38.190)];有效组与无效组比较,HBS1L-MYB基因rs35959442位点G[(18.04%)vs.(32.26%)]等位基因频率较低,C[(81.96%)vs.(67.74%)]等位基因频率较高[χ^2=5.630,P=0.018,OR值(95%CI)为0.462(0.242~0.882)]。结论重型β-TM输血有效性可能与RH因子E、e等位基因频率和贫血HBS1L-MYB致病基因rs4895441、rs35959442位点多态性有关。 展开更多

关键词 恒河猴因子 贫血致病基因 基因多态性 重型Β地中海贫血 输血效果

原文传递

副结核分枝杆菌MAP1068胞外蛋白酶的特性研究 被引量：1

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作者 王忠星 党光辉 +6 位作者 刘虹秀 臧鑫鑫 崔莹莹 崔子寅 宋宁宁 陈利苹 刘思国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期505-508,共4页

为研究副结核分枝杆菌(MAP)1068蛋白的特性,本研究以MAP参考株K10基因组为模板,PCR扩增其map1068基因,构建p ET28a-map1068重组载体,将其转化BL21后诱导表达并纯化MAP1068蛋白。利用纯化的重组蛋白免疫(100μg/只/0.1 m L)小鼠制备多克... 为研究副结核分枝杆菌(MAP)1068蛋白的特性,本研究以MAP参考株K10基因组为模板,PCR扩增其map1068基因,构建p ET28a-map1068重组载体,将其转化BL21后诱导表达并纯化MAP1068蛋白。利用纯化的重组蛋白免疫(100μg/只/0.1 m L)小鼠制备多克隆抗体,应用该抗体对MAP1068蛋白进行亚细胞定位。以酪蛋白为底物测定MAP1068蛋白的酶活性。结果显示,MAP1068蛋白以包涵体形式表达;经变性、复性、亲和层析纯化后获得目的蛋白;将该蛋白免疫小鼠后其血清抗体效价可达1∶204 800;该蛋白主要定位于MAP细胞壁,可降解酪蛋白,为胞外蛋白酶。本实验为进一步研究MAP的致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 副结核分枝杆菌 MAP1068 特性 酶活性

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家常凉菜肉帽味汁品质优化研究 被引量：2

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作者 杜险峰 崔莹莹 李双琦 《中国调味品》 CAS 北大核心 2018年第4期28-32,共5页

家常凉菜是哈尔滨名菜,生冷凉脆、口感丰富、酸甜咸辣、五味爽口,广受人们喜爱。文章以家常凉菜作为研究对象,通过对肉帽酱汁、糖、醋、辣椒油等因素进行感官、仪器分析,研究了调味清汁配比对家常凉菜口味的影响,实验得出最佳的味汁配... 家常凉菜是哈尔滨名菜,生冷凉脆、口感丰富、酸甜咸辣、五味爽口,广受人们喜爱。文章以家常凉菜作为研究对象,通过对肉帽酱汁、糖、醋、辣椒油等因素进行感官、仪器分析,研究了调味清汁配比对家常凉菜口味的影响,实验得出最佳的味汁配比。通过加工工艺实验,显示最佳味汁配比是:糖11.5g、醋23.5g、辣椒油10.5g、酱油肉帽(松花江特级酱油)22g、香菜末6g、蒜10g、盐5g。 展开更多

关键词 凉菜 感官评价 正交实验 单因素 酸度计 电子鼻

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调理食品内涵及其研究进展 被引量：12

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作者 杨铭铎 张瑛 +2 位作者 崔莹莹 张宇晴 何志贵 《中国调味品》 CAS 北大核心 2022年第3期211-216,共6页

随着科技发展和人们生活水平的提高,调理食品以其方便快捷的特点备受欢迎,并在行业领域发展迅速,一定程度上改变了人们的饮食习惯和消费方式。文章在辨析调理食品的概念、属性、工艺和特点等基础上,从调理食品的加工工艺、品质研究、贮... 随着科技发展和人们生活水平的提高,调理食品以其方便快捷的特点备受欢迎,并在行业领域发展迅速,一定程度上改变了人们的饮食习惯和消费方式。文章在辨析调理食品的概念、属性、工艺和特点等基础上,从调理食品的加工工艺、品质研究、贮藏保鲜及杀菌技术方面综述其国内外研究进展,旨在为调理食品的深入研究、工艺标准化与生产工业化等提供参考。 展开更多

关键词 调理食品 内涵 研究进展

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小儿急诊静脉输液异常的急救护理价值分析 被引量：1

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作者 崔盈盈 朱明霞 《泰州职业技术学院学报》 2022年第4期82-84,共3页

目的针对小儿急诊静脉输液异常实施急救护理的价值分析。方法选择2018年9月至2019年12月我院急诊静脉输液出现异常的患儿100例随机分为参照组与实验组,各50例。其中常规护理干预为参照组护理方法,急救护理为实验组护理方法,并对两组患... 目的针对小儿急诊静脉输液异常实施急救护理的价值分析。方法选择2018年9月至2019年12月我院急诊静脉输液出现异常的患儿100例随机分为参照组与实验组,各50例。其中常规护理干预为参照组护理方法,急救护理为实验组护理方法,并对两组患儿护理前后疼痛感评分、护理满意度以及不良反应发生率进行对比。结果在护理前后疼痛感评分等方面,实验组疼痛感评分的下降幅度大于对照组,且存在显著差异(P<0.05);对比护理满意度方面,实验组护理满意度为98.00%,而参照组护理满意度为70.00%,二者存在明显差异(P<0.05);对比不良反应发生率方面,实验组不良反应发生率为8.00%,而参照组不良反应发生率为28.00%,二者存在明显差异(P<0.05)。结论对于急诊静脉输液异常患儿,实施急救的护理方法,能够缓解患儿的抗拒、恐惧的不良情绪,降低不良反应发生率,对于护理满意度的提高有着显著的积极作用,在临床中具有一定应用的优势与价值。 展开更多

关键词 急救护理 小儿急诊静脉输液异常 护理效果 护理价值

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结核分枝杆菌PE26蛋白调节巨噬细胞免疫反应进而促进分枝杆菌胞内定殖 被引量：12

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作者 陈凡若 党光辉 +5 位作者 张嘉俊 鹿萍 崔宁 崔莹莹 崔子寅 刘思国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期502-509,共8页

结核分枝杆菌(MTB)PE/PPE家族蛋白介导MTB与宿主间的相互作用,调节宿主炎症反应,有助于其的存活和疾病发展。为研究PE/PPE家族中PE26蛋白的作用,本实验利用PCR扩增pe26基因片段,构建重组载体p AIN-PE26,转化耻垢分枝杆菌(Ms)构建重组菌p... 结核分枝杆菌(MTB)PE/PPE家族蛋白介导MTB与宿主间的相互作用,调节宿主炎症反应,有助于其的存活和疾病发展。为研究PE/PPE家族中PE26蛋白的作用,本实验利用PCR扩增pe26基因片段,构建重组载体p AIN-PE26,转化耻垢分枝杆菌(Ms)构建重组菌p AIN-PE26/Ms,经western blot鉴定结果显示,p AIN-PE26/Ms正确表达重组PE26蛋白(rPE26)。利用差速离心分离p AIN-PE26/Ms亚细胞组分,经western blot鉴定结果显示,r PE26定位于p AIN-PE26/Ms细胞壁。通过p AIN-PE26/Ms的菌落形态观察和生长曲线测定,结果显示,p AIN-PE26/Ms菌体表面较p AIN/Ms对照组更粗糙,脊不规则且相对较高,褶皱不明显;p AIN-PE26/Ms生长速度较对照组极显著增加(P<0.001)。利用H37Ra感染巨噬细胞,通过q RT-PCR检测pe26转录水平,结果显示,H37Ra感染巨噬细胞后pe26转录水平极显著增加(P<0.001)。利用p AIN-PE26/Ms感染巨噬细胞,分别通过q RT-PCR、ELISA检测细胞因子转录和表达水平,采用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验、流式细胞术和胞内定殖的方法检测细胞毒性,结果显示,p AIN-PE26/Ms促进宿主细胞炎性细胞因子(IL-1β、IL-6、IL-12和TNF-α)的转录和表达(P<0.05);r PE26促进巨噬细胞死亡,且在感染48 h时促进细胞早期凋亡(P<0.05);r PE26促进p AIN-PE26/Ms在巨噬细胞内的定殖(P<0.01)。上述结果首次表明,定位于细胞壁的r PE26在感染巨噬细胞过程中促进p AIN-PE26/Ms的生长、炎性细胞因子的转录和表达、巨噬细胞凋亡和胞内定殖。本实验为解析PE26参与分枝杆菌的致病机制和MTB调节宿主免疫反应的机制提供一定参考依据。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 巨噬细胞 PE/PPE家族蛋白 PE26

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结核分枝杆菌复合群、副结核分枝杆菌和禽分枝杆菌禽亚种多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用 被引量：7

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作者 蔡珠明 党光辉 +6 位作者 臧鑫鑫 邵明珠 唐阳阳 鹿萍 崔莹莹 崔子寅 刘思国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期51-59,共9页

结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(M... 结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(MAH)、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌(MAP)和禽分枝杆菌森林土壤亚种(MAS)。为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法,本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针,通过优化各反应条件,建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重Taq Man荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性,对其他畜禽病原菌,包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性较好。利用该方法检测体外模拟污染(MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0×10^(3)cfu/mL~1.0×10^(0)cfu/mL)的27份牛抗凝血和12份牛淋巴结组织样品,确定该方法对3种菌的检测限,结果显示该方法对3种菌的检测限均为1.0 cfu/mL~10.0 cfu/mL。将浓度为1.0×10^(6)cfu/mL的MB、MAP和MAA菌液分别单一、两两混合、三种菌混合感染BALB/c小鼠,5 d后,剖杀各组小鼠并取各组织及血液样品,同时采用该方法、常规单一PCR及细菌分离培养方法检测,比较三者的检测结果。结果显示,多重荧光定量PCR方法对不同感染组小鼠的各组织样品检出率为98.1%(212/216),常规单一PCR方法的检出率为81.5%(176/216),细菌分离培养的检出率为52.8%(114/216),多重荧光定量PCR与常规单一PCR的阳性符合率均为100.0%(176/176),与细菌分离培养鉴定结果的阳性符合率均为100.0%(114/114)。本研究首次建立了能够同时检测MTBC、MAP和MAA的Taq Man多重荧光定量PCR方法,其特异性强、敏感性高、重复性及稳定性好,检测性能强,可以用于临床各种样品的检测,为这3种病原的快速检测和流行病学调查提供了技术手段。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌复合群 副结核分枝杆菌 禽分枝杆菌禽亚种 多重Taq Man荧光定量PCR

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结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0827c(KmtR)调控靶点的初步研究 被引量：5

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作者 王慧 崔莹莹 +6 位作者 唐祎依 吕明月 党光辉 崔子寅 曹俊 宋宁宁 刘思国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期823-830,共8页

结核分枝杆菌(MTB)通过转录调控系统快速适应宿主的防御系统与环境变化,从而形成持续感染,但其机制不明。为研究转录调控蛋白Rv0827c与通过细菌单杂交预测的23种基因的启动子DNA在体内与体外条件下的结合情况,明确Rv0827c与已确定基因rv... 结核分枝杆菌(MTB)通过转录调控系统快速适应宿主的防御系统与环境变化,从而形成持续感染,但其机制不明。为研究转录调控蛋白Rv0827c与通过细菌单杂交预测的23种基因的启动子DNA在体内与体外条件下的结合情况,明确Rv0827c与已确定基因rv3616c启动子结合的影响因素,本研究利用PCR从MTB H37Ra株基因组DNA中扩增rv0827c基因后构建重组质粒pET-22b-rv0827c,经IPTG诱导表达和纯化后获得重组蛋白Rv0827c(rRv0827c),同时以MTB H37Ra株基因组为模板扩增23种基因的启动子。通过体外凝胶迁移试验(EMSA)和体内染色质免疫共沉淀试验(ChIP)对rRv0827c与这23种基因启动子的相互作用及其互作区域进行检测,结果显示,rRv0827c与23种启动子DNA均能结合,且rRv0827c能够特异性地结合rv3616c(espA)启动子DNA,并结合于其大沟区域;通过EMSA对影响rRv0827c和rv3616c启动子DNA结合的金属离子进行筛选显示,Ni^(2+)、Co^(2+)在体外抑制rRv0827c与rv3616c启动子的结合,而Cr^(3+)则促进二者的结合;表面等离子共振试验(SPR)也进一步验证rRv0827c能够特异性地结合rv3616c(espA)启动子DNA;利用MEME软件分析23种启动子DNA核苷酸序列的保守性,结果显示,4G和10G为rv3616c启动子DNA与rRv0827c互作的关键核苷酸位点。本研究首次揭示了rRv0827c与多基因启动子DNA结合的广泛性,且直接调控rv3616c的表达,进而可能影响MTB的毒力。这对完善Rv0827c的调控网络及深入解析Rv0827c的调控功能奠定了理论基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 转录调控蛋白Rv0827c rv3616c

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语用迁移视角下英语非专业大学生语用能力研究

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作者 崔莹莹 《鄂州大学学报》 2021年第5期36-38,共3页

长久以来,语用能力和语用迁移一直是语用学、应用语言学以及语际语用学领域专家学者关注的热点议题,但是有关两者关系的研究可谓凤毛麟角。文章着眼这个角度,结合对语用能力和语用迁移研究的相关文献综述,旨在探究非英语专业大学生语用... 长久以来,语用能力和语用迁移一直是语用学、应用语言学以及语际语用学领域专家学者关注的热点议题,但是有关两者关系的研究可谓凤毛麟角。文章着眼这个角度,结合对语用能力和语用迁移研究的相关文献综述,旨在探究非英语专业大学生语用能力的内涵以及其与语用迁移之间的关系,以期更好地提高学生语用能力。 展开更多

关键词 非专业 大学生 语用能力 语用迁移

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结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0324调控rv3597c的初步研究 被引量：4

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作者 唐祎依 崔莹莹 +5 位作者 吕明月 王慧 党光辉 崔子寅 刘思国 宋宁宁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期691-698,共8页

结核分枝杆菌(MTB)利用其转录调控系统快速适应环境变化,而其Ars R家族的转录调控蛋白Rv0324则在转录调控系统中发挥着重要的作用。为研究Rv0324的调控机制,本研究以卡介苗(BCG)(Tokyo-172)基因组为模板,PCR扩增得到rv0324基因,构建p ET... 结核分枝杆菌(MTB)利用其转录调控系统快速适应环境变化,而其Ars R家族的转录调控蛋白Rv0324则在转录调控系统中发挥着重要的作用。为研究Rv0324的调控机制,本研究以卡介苗(BCG)(Tokyo-172)基因组为模板,PCR扩增得到rv0324基因,构建p ET22b-rv0324重组表达载体,转化至E.coli BL21后经诱导表达获得蛋白Rv0324;同时以BCG(Tokyo-172)基因组为模板扩增获得rv3597c启动子(p/o rv3597c)。通过体外凝胶迁移实验(EMSA)和体内染色质免疫沉淀(Ch IP)实验对Rv0324与p/o rv3597c的相互作用进行检测,结果显示Rv0324可与p/o rv3597c结合,且Rv0324结合于p/o rv3597c的大沟;通过EMSA对影响Rv0324和p/o rv3597c结合的小分子进行筛选,结果显示二者的结合均能够被Trp、Fe^(3+)、Cu^(2+)、V_(B1)、V_(C)和贝达喹啉小分子抑制。在利用tr Rosetta软件对Rv0324蛋白结构分析的基础上,通过Rv0324和小分子的对接实验进一步分析它们间可能的互作模式,结果显示主要是位于Rv0324环区结构域的Asp203和Asp204氨基酸残基参与了与小分子的互作。综上所述,本研究首次证实MTB Rv0324通过直接调控rv3597c的表达,参与调控MTB的氧耗和代谢水平的变化,同时发现了影响Rv0324和rv3597c互作的小分子及其作用模式,为临床治疗的药物筛选提供了一定的参考依据。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 转录调控蛋白Rv0324 rv3597c

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副结核分枝杆菌胞外GDSL脂肪酶MAP_2739的酶学特性研究 被引量：4

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作者 王建国 陈凡若 +10 位作者 鹿萍 臧鑫鑫 党光辉 姜艳艳 崔宁 冯婷婷 张嘉俊 王慧 崔莹莹 崔子寅 刘思国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期331-338,共8页

本实验室前期研究发现了未见报道的副结核分枝杆菌(MAP)GDSL脂肪酶家族蛋白MAP_2739。为进一步分析MAP_2739的酶学特性,本实验利用生物信息学网站和软件对MAP_2739保守结构域、二级结构、3D同源建模等分析,进一步确认其属于GDSL脂肪酶... 本实验室前期研究发现了未见报道的副结核分枝杆菌(MAP)GDSL脂肪酶家族蛋白MAP_2739。为进一步分析MAP_2739的酶学特性,本实验利用生物信息学网站和软件对MAP_2739保守结构域、二级结构、3D同源建模等分析,进一步确认其属于GDSL脂肪酶家族蛋白。以MAP参考株基因组DNA为模板,PCR扩增获得map_2739目的基因约891 bp,克隆于表达载体pET-22b中,构建重组质粒pET-22b-map_2739,转化大肠杆菌感受态细胞,经IPTG诱导表达、蛋白复性、Ni-TNA柱亲和层析纯化后,利用SDS-PAGE分析目的蛋白的表达及纯化效果,并通过western blot鉴定。结果显示,获得了以包涵体形式表达的经复性的纯化重组MAP_2739蛋白(rMAP_2739)。利用该蛋白制备兔多克隆抗体,通过ELISA方法检测,多抗血清效价为1∶51200。经差速离心法分离MAP参考株组分,利用该多克隆抗体为一抗,通过western blot检测,结果显示在细胞壁、细胞膜和细胞浆均出现35 ku的特异性条带,表明MAP_2739为胞外蛋白。以对硝基苯基酯(p-NPs)为底物进行酶活测定,结果显示MAP_2739蛋白为脂肪酶,可水解短链和长链脂肪酸,其最适酶反应pH值为9.0,且rMAP_2739蛋白经巴氏消毒法预处理后,仍具有脂肪酶活性。以重组质粒pET-22b-map_2739为模板,利用各定点突变引物,经PCR扩增各突变的map_2739基因,并测序后转化大肠杆菌感受态细胞,通过western blot鉴定蛋白表达及纯化情况,并进行了酶活测定分析,结果显示获得各定点突变纯化蛋白,确定S46和D204为MAP_2739的酶活性位点。综上所述,本研究首次证明MAP_2739是MAP胞外GDSL脂肪酶,该结果为进一步研究其在MAP致病中的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 副结核分枝杆菌 GDSL脂肪酶 MAP_2739 酶学特性

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肉的烹调嫩化机理研究进展 被引量：10

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作者 崔莹莹 李想 杨铭铎 《中国调味品》 CAS 北大核心 2019年第7期184-187,194,共5页

肌动球蛋白的解离与胶原蛋白的溶解可减缓肉制品在烹调过程中的肌原纤维收缩,与其品质改善有密切的关系。文章综述了烹调方式对肉制品嫩度影响的最新研究进展,为肉制品嫩度改善机理的研究提供了一定的理论基础。

关键词 肉的烹调 嫩化机理 研究进展

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结核分枝杆菌TetR家族蛋白Rv3295新调控靶点及辅助因子的初步研究 被引量：2

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作者 吕明月 崔莹莹 +4 位作者 唐祎依 党光辉 崔子寅 刘思国 宋宁宁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期643-649,共7页

为了验证rv3229c是否为结核分枝杆菌(MTB)的转录调控蛋白Rv3295的调控靶点,并研究哪些小分子对rv3229c与Rv3295蛋白的结合有影响,本研究通过PCR扩增MTB rv3295基因后构建了重组表达载体pET-22b-rv3295,经诱导后得到重组蛋白Rv3295。凝... 为了验证rv3229c是否为结核分枝杆菌(MTB)的转录调控蛋白Rv3295的调控靶点,并研究哪些小分子对rv3229c与Rv3295蛋白的结合有影响,本研究通过PCR扩增MTB rv3295基因后构建了重组表达载体pET-22b-rv3295,经诱导后得到重组蛋白Rv3295。凝胶迁移试验(EMSA)和染色质免疫沉淀(ChIP)试验结果显示,Rv3295与rv3229c(desA3)启动子在体外与体内均能够结合。DNA大沟小沟结合试验表明,Rv3295与rv3229c DNA的大沟结合。通过EMSA小分子筛选,结果显示,小分子(VB1、VB3、VB6、VC)和金属离子(Fe3+和Zn2+)在体外均可降低Rv3295与rv3229c启动子区域的结合,而氨基酸及其它小分子对该结合无影响。分子对接试验表明Rv3295的Glu 67和Glu 105氨基酸残基在该蛋白质与小分子及金属离子的相互作用中起重要作用。以上试验结果表明rv3229c为TetR家族蛋白Rv3295新的调控靶点。本研究首次揭示了MTB中的Rv3295调控蛋白可直接调控rv3229c(desA3)的表达,进而参与油酸合成的调控。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Rv3295 转录调控 rv3229c

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皮质远盲蚓体内酶对土壤有机碳形态及碳库管理指数的影响 被引量：3

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作者 林晓钦 崔莹莹 +4 位作者 张孟豪 张池 侯舒雨 戴军 周波 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第7期1447-1454,共8页

【目的】研究皮质远盲蚓(Amynthas corticis)体内酶活性在蚯蚓发育期内的动态变化,从生物酶的角度解释蚯蚓对土壤有机碳形态及碳库管理指数的影响。【方法】通过蚯蚓-土壤培育试验,在0~100 d内共5次采样测定蚯蚓体内酶与培育土壤中的蚓... 【目的】研究皮质远盲蚓(Amynthas corticis)体内酶活性在蚯蚓发育期内的动态变化,从生物酶的角度解释蚯蚓对土壤有机碳形态及碳库管理指数的影响。【方法】通过蚯蚓-土壤培育试验,在0~100 d内共5次采样测定蚯蚓体内酶与培育土壤中的蚓粪以及未吞食土壤的碳指标。【结果】与试验初期相比,试验结束时,蚯蚓体内碱性磷酸酶(AKP)、过氧化物酶(POD)含量无显著变化,酸性磷酸酶(ACP)和脂肪酶(LPS)分别显著增加70.17%和15.14%,而胃蛋白酶(PG)和纤维素酶(CL)显著减少27.48%和53.73%,体内AKP、ACP、LPS、CL和PG对有机碳形态转化起显著性催化作用;接种蚯蚓土壤与对照组相比,轻组有机碳、腐殖质碳和可矿化碳在试验结束后显著减少,土壤微生物生物量碳和易氧化碳含量则得到显著提高;未吞食土壤和蚓粪碳库管理指数达到159.97和215.30,分别是对照组1.45和1.95倍。【结论】蚯蚓的存在在短期培育期内没有影响土壤有机碳库储量,但加速土壤有机碳库的转化效率并影响有机碳组分组成,从而提高土壤碳库活度及碳库质量。 展开更多

关键词 皮质远盲蚓 体内酶 土壤有机碳 碳库管理指数

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深圳市中学生非自杀性自伤行为现状及影响因素调查 被引量：25

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作者 崔莹莹 黄园园 +2 位作者 谌丁艳 周丽 王赟 《华南预防医学》 2018年第5期416-420,共5页

目的了解深圳市中学生非自杀性自伤行为(NSSI)的流行特征及影响因素,为干预和预防NSSI提供科学依据。方法采用分层整群抽样的方法,对深圳市10所学校中学生进行问卷调查,调查内容包括一般情况和伤害行为,利用c2检验和非条件多因素logisti... 目的了解深圳市中学生非自杀性自伤行为(NSSI)的流行特征及影响因素,为干预和预防NSSI提供科学依据。方法采用分层整群抽样的方法,对深圳市10所学校中学生进行问卷调查,调查内容包括一般情况和伤害行为,利用c2检验和非条件多因素logistic回归等方法分析中学生NSSI的发生情况及其影响因素。结果共调查3 737名学生,包括2 033名男生和1 704名女生,男女比例为1.19∶1。调查对象包括初一至高三学生,平均年龄为15岁。过去1年内深圳市中学生NSSI发生率为34.7%。非条件多因素logistic回归分析显示,11～16岁年龄段的学生NSSI发生率较其他年龄段高(OR=1.220),发生过外伤比不发生外伤者NSSI发生率高(OR=1.788),学习日住校学生NSSI发生率比不住校学生低(OR=0.724),有关系亲密的朋友的学生NSSI发生率较低(OR=0.804)。结论深圳市中学生NSSI发生率较高,应及早发现并根据相关影响因素采取干预措施,减少和预防NSSI的发生。 展开更多

关键词 学生 自我伤害行为 因素分析 统计学

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