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体外分子定向进化研究进展 被引量：28
1
作者 徐卉芳 张先恩 +1 位作者 张用梅 a.e.g.cass 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期518-522,共5页
体外定向进化作为近几年发展起来的一种蛋白质改造新策略 ,可以在未知目标蛋白三维结构信息和作用机制的情况下 ,通过对编码基因的随机突变、重组和定向筛选 ,获得具有改进功能或全新功能的蛋白质 ,使几百万年的自然进化过程在短期内得... 体外定向进化作为近几年发展起来的一种蛋白质改造新策略 ,可以在未知目标蛋白三维结构信息和作用机制的情况下 ,通过对编码基因的随机突变、重组和定向筛选 ,获得具有改进功能或全新功能的蛋白质 ,使几百万年的自然进化过程在短期内得以实现 ,因而是发现新的生物活性分子和反应途径的重要方法 ,已在短短几年内取得了令人瞩目的成就 . 展开更多
关键词 体外分子定向进化 研究进展 体外分子进化 蛋白质工程 渐进切割法产生杂和酶 基因组进化
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大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究 被引量：13
2
作者 徐卉芳 张先恩 +2 位作者 张治平 张用梅 a.e.g.cass 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期89-94,共6页
大肠杆菌碱性磷酸酶 (E .colialkalinephosphatase,EAP ,EC 3 1 3 1)是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶 .采用易错聚合酶链反应 (errorpronePCR)的方法 ,在原有高活力突变株的基础上 ,对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化 ,经... 大肠杆菌碱性磷酸酶 (E .colialkalinephosphatase,EAP ,EC 3 1 3 1)是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶 .采用易错聚合酶链反应 (errorpronePCR)的方法 ,在原有高活力突变株的基础上 ,对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化 ,经两轮errorpronePCR ,获得催化活力较亲本D10 1S突变株提高 3倍、较野生型酶提高 35倍的进化酶 4 186 ,并对该酶的催化动力学特征进行了分析 .进化酶基因的DNA测序表明 4 186含两个有义氨基酸置换 :K16 7R和S374C ,二者既不位于底物结合位点 ,也不位于酶的金属离子结合位点 . 展开更多
关键词 大肠杆菌 碱性磷酸酶 体外定向进化 催化活力
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