目的:建立一测多评法(QAMS)同时测定蒙古族成药每粒清热八味胶囊中胆红素、羟基红花黄色素A、芦丁、胡黄连苷Ⅱ、胡黄连苷Ⅰ、肉桂酸、槲皮素、紫堇灵、山柰素的质量。方法:采用高效液相色谱法,安捷伦Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250...目的:建立一测多评法(QAMS)同时测定蒙古族成药每粒清热八味胶囊中胆红素、羟基红花黄色素A、芦丁、胡黄连苷Ⅱ、胡黄连苷Ⅰ、肉桂酸、槲皮素、紫堇灵、山柰素的质量。方法:采用高效液相色谱法,安捷伦Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^(–1),检测波长分别为275、370、403 nm,柱温为35℃。以羟基红花黄色素A和胡黄连苷Ⅰ为双标化合物,使用双标线性校正法(LCTRC)预测tR。以胡黄连苷Ⅰ为内参物,建立与其他8个成分的相对校正因子,并计算每粒中9个待测成分的质量,实现一测多评。同时与外标法进行比较,验证QAMS的准确性和可行性。结果:9个成分在各自质量浓度范围内的线性关系良好(r≥0.9990),平均加样回收率为93.0%~99.8%,RSD为0.23%~1.53%;建立的QAMS可用于测定每粒清热八味胶囊中9个指标成分的质量,并对6批清热八味胶囊进行测定,其计算值与测定值的差异无统计学意义。结论:QAMS测定清热八味胶囊中9个成分准确且可行,可用于清热八味胶囊的质量控制。展开更多
目的:探讨在骨髓增生异常综合征(MDS)中TP53基因不同突变状态(野生型/突变型)对地西他滨(DAC)耐药性的影响,并筛选耐药相关调控基因。方法:选用2种TP53状态差异的MDS细胞:M-07e:野生型;SKM-1:突变型,用递增浓度(0、0.5、1、5和10μmol/L...目的:探讨在骨髓增生异常综合征(MDS)中TP53基因不同突变状态(野生型/突变型)对地西他滨(DAC)耐药性的影响,并筛选耐药相关调控基因。方法:选用2种TP53状态差异的MDS细胞:M-07e:野生型;SKM-1:突变型,用递增浓度(0、0.5、1、5和10μmol/L)的地西他滨干预0-72 h后,采用CCK-8法检测细胞活力。通过RNA-Seq转录组测序和甲基化组学分析,筛选与耐药相关的关键基因。结果:CCK-8实验结果显示DAC对M-07e和SKM-1细胞活力的抑制作用呈时间和剂量依赖性(SKM-1耐药性最强,IC_(50)=5μmol/L vs M-07e IC_(50)=0.5μmol/L,P<0.01)。基因表达分析结果显示,M-07e细胞经DAC处理后共鉴定到662个上调基因和452个下调基因;SKM-1细胞经DAC处理后共发现515个上调基因和73个下调基因。蛋白质组学检测显示:DAC处理的M-07e细胞中共鉴定117个上调蛋白和136个下调蛋白;DAC处理的SKM-1细胞中发现91个上调蛋白和46个下调蛋白。通过整合分析上调基因和蛋白表达谱,共筛选出181个候选基因。甲基化组学分析发现884个低甲基化基因中存在高敏感位点和高CpG密度区域,其中与上述181个候选基因存在交集的共31个基因,GO功能富集分析表明这31个基因主要参与细胞分化正调控、结合过程负调控以及细胞组分组织负调控等生物学过程。结论:TP53突变通过表观遗传重编程介导DAC耐药,靶向这些基因可能改善TP53突变型MDS的预后。展开更多
文摘目的:建立一测多评法(QAMS)同时测定蒙古族成药每粒清热八味胶囊中胆红素、羟基红花黄色素A、芦丁、胡黄连苷Ⅱ、胡黄连苷Ⅰ、肉桂酸、槲皮素、紫堇灵、山柰素的质量。方法:采用高效液相色谱法,安捷伦Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 m L·min^(–1),检测波长分别为275、370、403 nm,柱温为35℃。以羟基红花黄色素A和胡黄连苷Ⅰ为双标化合物,使用双标线性校正法(LCTRC)预测tR。以胡黄连苷Ⅰ为内参物,建立与其他8个成分的相对校正因子,并计算每粒中9个待测成分的质量,实现一测多评。同时与外标法进行比较,验证QAMS的准确性和可行性。结果:9个成分在各自质量浓度范围内的线性关系良好(r≥0.9990),平均加样回收率为93.0%~99.8%,RSD为0.23%~1.53%;建立的QAMS可用于测定每粒清热八味胶囊中9个指标成分的质量,并对6批清热八味胶囊进行测定,其计算值与测定值的差异无统计学意义。结论:QAMS测定清热八味胶囊中9个成分准确且可行,可用于清热八味胶囊的质量控制。
文摘目的:探讨在骨髓增生异常综合征(MDS)中TP53基因不同突变状态(野生型/突变型)对地西他滨(DAC)耐药性的影响,并筛选耐药相关调控基因。方法:选用2种TP53状态差异的MDS细胞:M-07e:野生型;SKM-1:突变型,用递增浓度(0、0.5、1、5和10μmol/L)的地西他滨干预0-72 h后,采用CCK-8法检测细胞活力。通过RNA-Seq转录组测序和甲基化组学分析,筛选与耐药相关的关键基因。结果:CCK-8实验结果显示DAC对M-07e和SKM-1细胞活力的抑制作用呈时间和剂量依赖性(SKM-1耐药性最强,IC_(50)=5μmol/L vs M-07e IC_(50)=0.5μmol/L,P<0.01)。基因表达分析结果显示,M-07e细胞经DAC处理后共鉴定到662个上调基因和452个下调基因;SKM-1细胞经DAC处理后共发现515个上调基因和73个下调基因。蛋白质组学检测显示:DAC处理的M-07e细胞中共鉴定117个上调蛋白和136个下调蛋白;DAC处理的SKM-1细胞中发现91个上调蛋白和46个下调蛋白。通过整合分析上调基因和蛋白表达谱,共筛选出181个候选基因。甲基化组学分析发现884个低甲基化基因中存在高敏感位点和高CpG密度区域,其中与上述181个候选基因存在交集的共31个基因,GO功能富集分析表明这31个基因主要参与细胞分化正调控、结合过程负调控以及细胞组分组织负调控等生物学过程。结论:TP53突变通过表观遗传重编程介导DAC耐药,靶向这些基因可能改善TP53突变型MDS的预后。
