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非洲猪瘟病毒蛋白的结构和功能研究进展 被引量：3
1
作者 罗梦 郭子强 +8 位作者 李佳乐 帅文娜 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 韦祖樟 高飞 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第3期125-134,共10页
非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是一种在家猪和野猪之间传播的高度传染性和致死性的病毒性疾病,该病的病原体是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV),致死率高达100%。近年来,ASF疫情严重威胁着我国生猪产业的健康发展... 非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是一种在家猪和野猪之间传播的高度传染性和致死性的病毒性疾病,该病的病原体是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV),致死率高达100%。近年来,ASF疫情严重威胁着我国生猪产业的健康发展。与之前相比,我国的ASFV流行毒株逐渐由ASFVⅡ型强毒株转变为ASFVⅡ型和Ⅰ型的重组毒株。因此,迫切需要开发具有交叉保护效力的有效疫苗来预防ASFV的感染。ASFV的结构复杂,其基因组是一种大型双链DNA分子,大小在170~193 kb,包含150~167个开放阅读框,编码近200种蛋白。这些蛋白具有复杂的结构、功能以及免疫逃逸机制,使ASF疫苗研发困难重重。截止目前,尚未有针对ASF的有效疫苗或治疗药物问世,仍需要全面解析非洲猪瘟病毒蛋白的结构和功能,深入了解病毒感染机制以及病毒蛋白和宿主蛋白的相互作用。本文旨在综述当前关于ASFV相关蛋白的结构和功能的研究进展,以期为有效预防和控制ASF提供科学依据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 结构蛋白 非结构蛋白 免疫逃避
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猪繁殖与呼吸综合征病毒基因重组的研究进展 被引量：3
2
作者 帅文娜 郭子强 +7 位作者 李佳乐 罗梦 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 高飞 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第1期145-152,162,共9页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)主要引发母猪流产、死胎、木乃伊胎和仔猪呼吸道症状,自1996年国内首次报道以来,经过20多年的遗传演化,其复杂性显著增加,给养猪业带来了巨大的经... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)主要引发母猪流产、死胎、木乃伊胎和仔猪呼吸道症状,自1996年国内首次报道以来,经过20多年的遗传演化,其复杂性显著增加,给养猪业带来了巨大的经济损失。近年来,随着各种PRRSV重组病毒的出现,防控这一疫病的难度进一步加大。现全面梳理PRRSV的基因组结构及功能、RNA病毒重组机制、重组的主要类型、流行现状和主要流行毒株的重组情况,以期为深入研究PRRSV的基因重组提供线索,同时为制定科学的防控策略提供理论支撑。 展开更多
关键词 PRRSV RNA重组 重组类型
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表达PEDV S蛋白优势抗原区域的重组PRRSV活载体疫苗株的鉴定 被引量：1
3
作者 劳梦琴 刘瑞琳 +13 位作者 陈鹏飞 黄世静 于家荣 朱钧锐 孙祁 虞凌雪 高飞 姜一峰 童武 刘长龙 李丽薇 于海 童光志 周艳君 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期155-163,共9页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪流行性腹泻(PED)是当前对养猪业影响较大的两种重要传染病,为了开发可同时针对这两种疫病的疫苗,本研究以PRRSV HuN4-F112活疫苗株为载体,将PEDV S蛋白中可诱导产生中和抗体的抗原区域进行优化和组合,命名... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪流行性腹泻(PED)是当前对养猪业影响较大的两种重要传染病,为了开发可同时针对这两种疫病的疫苗,本研究以PRRSV HuN4-F112活疫苗株为载体,将PEDV S蛋白中可诱导产生中和抗体的抗原区域进行优化和组合,命名为SNE,利用反向遗传操作技术将其引入至HuN4-F112株基因组中,构建了含有SNE的PRRSV全长cDNA克隆pHuN4-F112-SNE,通过病毒拯救获得了重组病毒rHuN4-F112-SNE株,经过对重组病毒引入基因和表达蛋白的鉴定,证实获得的重组病毒rHuN4-F112-SNE能够正确表达PEDV S蛋白优势抗原区域,其生物学特性与亲本毒株相似。将该重组病毒连续传至30代,引入的SNE基因均能获得稳定表达,且不影响亲本毒复制和自身蛋白的表达,表明重组病毒rHuN4-F112-SNE中引入的SNE基因可稳定遗传,研究结果为后续评价rHuN4-F112-SNE作为二价基因工程活载体疫苗的有效性奠定了基础。 展开更多
关键词 PEDV S蛋白 PRRSV 重组病毒
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A型塞内卡病毒的分离鉴定及3A蛋白的多克隆抗体制备 被引量：1
4
作者 韩松 段宏勇 +8 位作者 杨楠 王树茂 高飞 赵款 周艳君 童武 姜一峰 童光志 李丽薇 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第5期625-631,共7页
A型塞内卡病毒(senecavirus A,SVA)作为一种可以引起猪水泡样症状的外来病原,与口蹄疫病毒引起的临床症状难以区分。本研究成功分离1株SVA,将其命名为HN2019。经全基因组测序和进化分析发现,该分离株与我国毒株CH-HN-2017亲缘性最高。... A型塞内卡病毒(senecavirus A,SVA)作为一种可以引起猪水泡样症状的外来病原,与口蹄疫病毒引起的临床症状难以区分。本研究成功分离1株SVA,将其命名为HN2019。经全基因组测序和进化分析发现,该分离株与我国毒株CH-HN-2017亲缘性最高。该毒株可在猪肾传代细胞(PK-15)、乳仓鼠肾细胞(BHK-21)中有效复制增殖,感染后均能产生细胞病变。通过病毒一步生长曲线、间接免疫荧光、Western-blot等试验研究了该毒株的生物学特性。同时,利用pCold-TF质粒构建该毒株非结构蛋白3A的原核表达载体,转化大肠杆菌表达系统,发现该重组蛋白可在上清中可溶性表达。将纯化后的重组蛋白分4次免疫BALB/c小鼠,成功制备针对3A蛋白的多克隆抗体。该抗体效价为1∶128000,可特异性识别病毒感染的细胞产生特异性荧光,证明该抗体具有良好的反应性和特异性,为进一步研究SVA 3A蛋白的生物学功能及病毒的致病机制提供了有效工具。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 遗传进化分析 3A蛋白 多克隆抗体
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猪细小病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立与应用 被引量：1
5
作者 帅文娜 郭子强 +8 位作者 李佳乐 罗梦 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 李兆龙 高飞 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第1期80-85,共6页
本研究通过对猪细小病毒(PPV)1型非结构蛋白NS1基因保守序列进行设计,建立了PPV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,实现了对PPV1的快速检测。结果显示,该检测方法的Ct值与标准品质粒在1.0×10^(10)copies/μL~1.0×10^(4)copies/μL... 本研究通过对猪细小病毒(PPV)1型非结构蛋白NS1基因保守序列进行设计,建立了PPV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,实现了对PPV1的快速检测。结果显示,该检测方法的Ct值与标准品质粒在1.0×10^(10)copies/μL~1.0×10^(4)copies/μL范围内具有良好的线性关系,曲线回归方程为y=-3.6186x+42.01,R^(2)=0.99,扩增效率为189%;重复性好,组内与组间变异系数均低于1.0898%;敏感性好,最低检测限为1.0×10^(1)copies/μL;特异性强,不与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、非洲猪瘟病毒发生交叉反应,并用该方法对临床样品与病毒拷贝数进行了检测。表明本研究建立的方法重复性好、敏感性高、特异性强,适用于对PPV进行临床检测与诊断。 展开更多
关键词 猪细小病毒 NS1蛋白 TaqMan实时荧光定量PCR
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猪德尔塔冠状病毒截短S1蛋白原核表达与多克隆抗体制备
6
作者 叶曼青 叶晨倩 +10 位作者 秦文珍 杨心雨 翟雪滢 郑浩 童武 李国新 于海 童光志 孔宁 李智丽 单同领 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期132-138,共7页
自2014年猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)在美国暴发以来,严重危害生猪健康,给各国的经济带来重大压力。本试验拟将PDCoV S1蛋白截短,通过原核表达获得重组蛋白,并且制备对应的多克隆抗体。利用生物信息学软件对PDCoV S1蛋白的亲疏水性进行分析... 自2014年猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)在美国暴发以来,严重危害生猪健康,给各国的经济带来重大压力。本试验拟将PDCoV S1蛋白截短,通过原核表达获得重组蛋白,并且制备对应的多克隆抗体。利用生物信息学软件对PDCoV S1蛋白的亲疏水性进行分析,将其截短为3个相互重叠的基因片段,并通过原核表达获得重组蛋白。以重组蛋白为抗原免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示:截短获得的3个重组蛋白均在包涵体中稳定表达,通过间接ELISA、Western blot和IFA检测方法,表明制备的多克隆抗体具有良好的抗体效价和特异性识别能力。本研究制备出特异性识别PDCoV S蛋白的多克隆抗体,为后续研究PDCoV S蛋白的结构和功能提供了工具,为建立PDCoV诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 PDCoV S蛋白 截短蛋白 原核表达 多克隆抗体
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欧亚类禽H1N1亚型猪流感全病毒灭活疫苗的免疫保护效力评价
7
作者 陈荣琳 邢燕茹 +13 位作者 王娟 李健楠 高硕磊 刘清艳 祝宇翔 周艳君 单同领 童武 郑浩 刘长龙 姜一峰 孔宁 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第2期35-42,共8页
本研究以Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞作为培养基质扩增猪流感病毒,并选择甲醛和β-丙内酯(BPL)两种化学灭活剂对病毒灭活。这两种灭活试剂最佳灭活条件为0.1%甲醛终浓度及37℃灭活24 h,以及0.02%BPL终浓度及4℃灭活18 h,灭活后抗原血凝... 本研究以Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞作为培养基质扩增猪流感病毒,并选择甲醛和β-丙内酯(BPL)两种化学灭活剂对病毒灭活。这两种灭活试剂最佳灭活条件为0.1%甲醛终浓度及37℃灭活24 h,以及0.02%BPL终浓度及4℃灭活18 h,灭活后抗原血凝效价比原始病毒低1个滴度左右。在不同灭活剂基础上分别配伍油佐剂ISA 201 VG和水佐剂HA 208乳化,在BALB/c小鼠上对灭活疫苗进行免疫评估及攻毒保护评价,攻毒使用剂量为1×10~6 TCID50/只。甲醛灭活苗相比BPL灭活苗更能刺激小鼠产生高水平的HI抗体,佐剂选用油佐剂ISA 201 VG相比水佐剂HA 208所产生的HI抗体效价更高。攻毒后疫苗免疫组的存活率均达到100%,与对照组相比免疫组肺脏样品中病毒含量明显减少。据以上试验结果,初步认为甲醛+ISA 201 VG佐剂灭活苗对BALB/c小鼠所产生的免疫效果最佳并能较好地抵抗欧亚类禽猪流感病毒的攻击。以上研究结果为后续猪流感全病毒灭活疫苗的设计以及病毒灭活生产工艺提供了一定的研究基础。 展开更多
关键词 欧亚类禽H1N1 甲醛 BPL 全病毒灭活疫苗 免疫效力评价
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猪德尔塔冠状病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体制备
8
作者 叶晨倩 李智丽 +11 位作者 叶曼青 秦文珍 杨心雨 翟雪滢 郑浩 童武 李国新 于海 童光志 单同领 娄华 孔宁 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期164-170,共7页
猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新发的病原体,引起仔猪腹泻、脱水和呕吐等症状。本研究以PDCoV的RNA为模板,扩增PDCoV N基因,将其插入原核表达载体pColdⅠ中,构建PDCoV N-pColdⅠ质粒;通过BL21(DE3)原核表达和纯化获得高纯度的PDCoV N蛋... 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新发的病原体,引起仔猪腹泻、脱水和呕吐等症状。本研究以PDCoV的RNA为模板,扩增PDCoV N基因,将其插入原核表达载体pColdⅠ中,构建PDCoV N-pColdⅠ质粒;通过BL21(DE3)原核表达和纯化获得高纯度的PDCoV N蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备PDCoV N蛋白多克隆抗体。结果显示:原核表达的PDCoV N蛋白为可溶性蛋白,分子量约为40 kDa;通过ELISA、Western blot和IFA鉴定可知,本研究制备的PDCoV N多克隆抗体均具有良好的效价,可为深入开展PDCoV相关的基础和应用研究提供工具。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒 N蛋白 原核表达 多克隆抗体
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表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组杆状病毒构建与鉴定
9
作者 王安铖 李俊波 +10 位作者 胡一帆 孟鑫 陈玲超 童武 单同领 于海 孔宁 刘雪兰 童光志 徐家萍 郑浩 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期165-171,共7页
为了制备高活性的非洲猪瘟病毒p72蛋白,本研究优化合成了非洲猪瘟B646L和B602L全基因序列,并分别克隆进pFastBac Dual载体中,构建了重组质粒pBac-B602L-B646L。将pBac-B602L-B646L转化感受态细胞DH10Bac中,经过蓝白斑纯化和PCR鉴定,获... 为了制备高活性的非洲猪瘟病毒p72蛋白,本研究优化合成了非洲猪瘟B646L和B602L全基因序列,并分别克隆进pFastBac Dual载体中,构建了重组质粒pBac-B602L-B646L。将pBac-B602L-B646L转化感受态细胞DH10Bac中,经过蓝白斑纯化和PCR鉴定,获得重组杆状质粒rBacmid-p72。将rBacmid-p72转染到sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒。通过IFA和Western blot分析,证实rBac-p72感染sf9表达p72和pB02L。以rBac-p72感染悬浮培养的sf9细胞,并通过Ni柱亲和层析获得了纯化的p72蛋白。以p72蛋白包被酶标板,通过间接ELISA检测,显示纯化的p72蛋白能与ASFV阳性血清中的抗体良好结合。上述研究结果表明,本研究通过杆状表达的p72蛋白具有较高的活性,为下一步开展p72蛋白功能及应用研究打下良好的基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 杆状病毒表达 p72蛋白 抗原性
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表达PPV VP2蛋白的重组PRRSV基因工程活载体疫苗株的构建与免疫原性评价
10
作者 帅文娜 唐银保 +11 位作者 郭子强 李佳乐 罗梦 曾一凡 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 李兆龙 杨倩 童光志 高飞 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第12期1608-1618,共11页
为获得能够有效预防猪繁殖与呼吸综合征和猪细小病毒(PPV)感染的重组活载体疫苗,利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活疫苗的反向遗传操作平台,将PPV的保护性抗原蛋白VP2的基因插入PRRSV的结构蛋白与非结构蛋白之间,构建pPRRSV-PPV-VP2... 为获得能够有效预防猪繁殖与呼吸综合征和猪细小病毒(PPV)感染的重组活载体疫苗,利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活疫苗的反向遗传操作平台,将PPV的保护性抗原蛋白VP2的基因插入PRRSV的结构蛋白与非结构蛋白之间,构建pPRRSV-PPV-VP2的全长感染性克隆,经过Marc-145细胞上的病毒拯救获得重组病毒rPRRSV-PPV-VP2,并比较其与亲本病毒的空斑形态学差异、遗传稳定性、病毒增殖动力学等,同时,将其免疫仔猪以评价其激发猪体免疫反应的效果。结果显示,PPV的VP2基因能够在重组病毒rPRRSV-PPV-VP2中稳定遗传并高效表达;用重组病毒rPRRSV-PPV-VP2免疫的仔猪临床表现正常、剖检与病理切片显示各组织器官无异常病理变化,表明该重组病毒对仔猪具有良好的安全性,同时,其能诱导仔猪同时产生抗PRRSV与PPV的特异性抗体,表明该重组病毒具有良好的免疫原性。检测免疫后第0、7、14、21、28、35天所有试验猪的血清样本,VP2蛋白抗体水平与N蛋白抗体水平均于免疫后第7天转为阳性,同时两种抗体水平分别于第21天与28天达到峰值。以上结果表明,rPRRSV-PPV-VP2是一种具有前瞻性的针对PRRSV与PPV的病毒活载体疫苗。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪细小病毒 重组病毒 活载体疫苗
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非洲猪瘟病毒抗体乳胶免疫层析检测试纸条的研制
11
作者 胡一帆 陈玲超 +8 位作者 王安铖 李俊波 孟鑫 童武 单同领 于海 孔宁 童光志 郑浩 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期76-86,共11页
以非洲猪瘟病毒(ASFV)p30、p54和pK205R蛋白作为检测线,以兔IgG作为质控线,利用葡萄球菌A蛋白(SPA)和乳胶微球偶联作为免疫探针,建立ASFV抗体检测乳胶微球免疫层析方法。用该方法检测非洲猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒... 以非洲猪瘟病毒(ASFV)p30、p54和pK205R蛋白作为检测线,以兔IgG作为质控线,利用葡萄球菌A蛋白(SPA)和乳胶微球偶联作为免疫探针,建立ASFV抗体检测乳胶微球免疫层析方法。用该方法检测非洲猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪德尔塔冠状病毒、猪瘟病毒和猪流感病毒阳性血清。结果显示:除了ASFV阳性血清检测结果为阳性外,其他阳性血清检测结果均为阴性,未发生交叉反应,表明抗体检测试纸条具有较强的特异性;将ASFV阳性血清倍比稀释用于检测试纸条的敏感性,结果显示p30抗体检测试纸条的检出限为1:51200,pK205R抗体检测试纸条的检出限为1:12800,p54抗体检测试纸条的检出限为1:6400,表明3种抗体检测试纸条具有较高的灵敏度;分别用ASFV抗体检测试纸条和商品化ASFV阻断ELISA抗体检测试剂盒对63份临床猪血清样品进行检测,结果显示p30抗体检测试纸条的符合率为96.8%,p54和pK205R抗体检测试纸条的符合率为100%;将室温存放3个月的抗体检测试纸条取出检测血清样品,结果显示不同保存时间段内的试纸条特异性、敏感性和均一性一致,表明ASFV抗体检测试纸条具有良好的稳定性与重复性。本研究建立的ASFV抗体检测试纸条具有良好的特异性、敏感性及重复性,并且操作简便,可以用于猪场现场检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 乳胶微球 抗体检测 试纸条
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猪细小病毒NS1基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 帅文娜 郭子强 +8 位作者 李佳乐 罗梦 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 李兆龙 高飞 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第3期314-320,共7页
本研究旨在制备PPV-NS1的多克隆抗体,并用猪细小病毒(PPV)和真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag进行双重验证。首先将PPV的非结构蛋白编码基因NS1克隆至原核表达载体pETDuet,构建原核质粒pET-PPV-NS1。接着,将原核质粒pET-PPV-NS1转... 本研究旨在制备PPV-NS1的多克隆抗体,并用猪细小病毒(PPV)和真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag进行双重验证。首先将PPV的非结构蛋白编码基因NS1克隆至原核表达载体pETDuet,构建原核质粒pET-PPV-NS1。接着,将原核质粒pET-PPV-NS1转化至感受态E.coli BL21细胞中,经由1 mmol/LIPTG诱导以后,通过SDS-PAGE和Western-blot对NS1表达进行检测,结果表明,NS1基因在感受态细胞中得到了良好的表达。其次,将纯化后获得的NS1蛋白采用多点注射的方式对大白兔进行免疫,制备获得针对重组NS1蛋白的多克隆抗体。然后,将真核质粒pcDNA3.1(+)-NS1-3×Flag转染HEK 293T细胞;同时PPV感染ST细胞后收取蛋白样品,用上述制备的NS1多克隆抗体进行验证。结果显示,制备的NS1多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。 展开更多
关键词 猪细小病毒 NS1蛋白 多克隆抗体 原核表达
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非洲猪瘟病毒B602L基因编码蛋白多克隆抗体的制备及其在PRRSV活载体中的表达
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作者 罗梦 郭子强 +9 位作者 李佳乐 帅文娜 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 丛雁方 韦祖樟 高飞 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第2期171-181,共11页
为深入研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的编码基因B602L,本研究根据ASFVSY18株的B602L基因序列(MH766894.3),设计引物合成1593 bp的B602L基因全长序列,构建pCold-TFB602L原核表达质粒。将鉴定正确的原核表达质粒转化... 为深入研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的编码基因B602L,本研究根据ASFVSY18株的B602L基因序列(MH766894.3),设计引物合成1593 bp的B602L基因全长序列,构建pCold-TFB602L原核表达质粒。将鉴定正确的原核表达质粒转化感受态细胞,用IPTG诱导表达重组蛋白B602L并通过SDS-PAGE进行验证和分析。用纯化后的pB602L蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,测定抗体效价并经Westernblot鉴定其特异性。同时基于本实验室前期研究,构建表达B602L基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)全长感染性克隆。本研究将ASFV B602L基因全长序列插入PRRSVORF1b和ORF2a之间,转染全长感染性克隆质粒后拯救获得重组病毒rPRRSV-B602L,并对其进行病毒学特性分析。利用制备的多克隆抗体与重组病毒和真核细胞表达的蛋白进行Western-blot和IFA验证。结果显示,成功构建pCold-TF-B602L原核表达质粒,诱导表达的重组蛋白pB602L可与His标签单抗和制备的抗pB602L抗体产生特异性反应,其效价为1∶16000;成功构建并拯救出重组病毒rPRRSV-B602L,它与亲本病毒具有相似的病毒学特性。本研究拯救的重组病毒可以稳定表达pB602L蛋白,该抗pB602L多克隆抗体能够特异性识别重组病毒表达的蛋白和真核细胞表达的蛋白,具有良好的特异性和反应原性,为进一步探索pB602L蛋白的功能及研制表达ASFV特异性抗原蛋白的重组PRRSV活载体疫苗提供一定的研究基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 pB602L蛋白 多克隆抗体 病毒活载体
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猪细小病毒2型VP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
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作者 帅文娜 李佳乐 +8 位作者 郭子强 罗梦 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 李兆龙 高飞 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第8期78-84,共7页
旨在制备猪细小病毒(PPV)VP2的多克隆抗体,并进行其检测能力验证。将PPV VP2克隆至原核表达载体pCold-TF,由1 mmol/L IPTG诱导得到VP2蛋白;纯化后VP2蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(I... 旨在制备猪细小病毒(PPV)VP2的多克隆抗体,并进行其检测能力验证。将PPV VP2克隆至原核表达载体pCold-TF,由1 mmol/L IPTG诱导得到VP2蛋白;纯化后VP2蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证其反应性。ELISA检测结果显示,多克隆抗体效价达1∶128000;Western blot和IFA分析表明,其能特异性识别和结合PPV,说明重组VP2蛋白具有较好的免疫原性和反应原性。本研究为VP2血清学检测方法的建立及其蛋白的功能研究提供了材料。 展开更多
关键词 猪细小病毒 VP2蛋白 多克隆抗体 原核表达
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猪繁殖与呼吸综合征病毒SH1/2022株的分离鉴定及基因组特征分析
15
作者 刘瑞琳 黄世静 +9 位作者 于家荣 蒋霁捷 朱钧锐 孙祁 姜一峰 高飞 童武 童光志 温永俊 周艳君 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期32-40,共9页
2022年末上海某猪场保育猪群出现持续发热等临床症状,为了确定该猪群的发病原因,本研究采集了发病猪临床样品进行了病原检测,结果显示,12份样品中有11份呈PRRSV阳性,并利用Marc-145细胞分离获得了1株病毒,经过RT-PCR和IFA等鉴定,证实该... 2022年末上海某猪场保育猪群出现持续发热等临床症状,为了确定该猪群的发病原因,本研究采集了发病猪临床样品进行了病原检测,结果显示,12份样品中有11份呈PRRSV阳性,并利用Marc-145细胞分离获得了1株病毒,经过RT-PCR和IFA等鉴定,证实该毒株为PRRSV,将其命名为SH1/2022。对分离株SH1/2022进行全基因组测序和分析,结果显示,该毒株基因组全长为15317 bp(不含poly A),与HP-PRRSV-like亲缘关系较近。重组分析结果表明,分离株SH1/2022是以谱系8的HP-PRRSV-like作为亲本毒株和谱系5的RespPRRS MLV疫苗毒株作为次要亲本毒株,发生谱系间重组而产生的毒株,基因组中含有两个重组断点nt9460和nt11398,分别位于Nsp9和Nsp11基因区域。我们推测造成该养猪场发病的原因可能是由谱系间毒株发生重组所致,提示该重组毒株仍然具有一定的致病性,有必要持续监测养猪场中PRRSV的流行动态。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离株SH1/2022 重组分析
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免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定 被引量：103
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作者 童武 张青占 +5 位作者 郑浩 刘飞 姜一峰 单同领 周艳君 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第3期1-7,共7页
从2011年开始,全国多个省份发生了新生仔猪疑似伪狂犬病的典型症状。2012年下半年,我们从江苏省某伪狂犬病疫苗免疫猪场中发病仔猪的脑组织中分离到一株伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV),并进行了部分生物学特性分析。从发病死亡仔... 从2011年开始,全国多个省份发生了新生仔猪疑似伪狂犬病的典型症状。2012年下半年,我们从江苏省某伪狂犬病疫苗免疫猪场中发病仔猪的脑组织中分离到一株伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV),并进行了部分生物学特性分析。从发病死亡仔猪脑组织中,利用PCR技术针对PRV的gB基因和gE基因分别扩增出了两条特异性片段,经序列分析初步确定为伪狂犬病毒感染。随后,将病料上清接种Vero细胞,24 h后细胞发生变圆、空泡、合胞体等典型的细胞病变,将分离的病毒经过6轮蚀斑纯化后,用PRV抗体IFA检测显示,感染细胞产生阳性荧光反应。分离的病毒在Vero细胞上的生长滴度可以达到107.43TCID50/mL。将病毒接种小鼠很快出现了奇痒并最终死亡等伪狂犬症状,且比经典的PRV(S株)对小鼠的LD50低。对gE毒力基因序列的比对分析表明,该毒株与经典PRV强毒和疫苗株有明显差异。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 分离 鉴定
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伪狂犬病毒变异株(JS-2012)对仔猪的致病性研究 被引量：37
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作者 童武 郑浩 +8 位作者 单同领 刘飞 梁超 李国新 姜一峰 于海 高飞 周艳君 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第5期10-14,共5页
本实验室2012年从江苏省太仓市某发病猪场分离到1株变异的伪狂犬病毒,命名为JS-2012。为了研究该分离株对仔猪的致病性,将12头15日龄的伪狂犬病毒阴性仔猪随机分为3组,其中2组(每组5头猪)分别通过肌肉注射和滴鼻接种JS-2012毒,第3组2头... 本实验室2012年从江苏省太仓市某发病猪场分离到1株变异的伪狂犬病毒,命名为JS-2012。为了研究该分离株对仔猪的致病性,将12头15日龄的伪狂犬病毒阴性仔猪随机分为3组,其中2组(每组5头猪)分别通过肌肉注射和滴鼻接种JS-2012毒,第3组2头猪做空白对照。接种病毒的仔猪在攻毒后24 h体温均开始升高,4 d后开始死亡,死亡率为100%。临床观察发现,滴鼻组仔猪发病死亡明显快于肌肉注射组。对病死猪进行剖解,均可见大脑血管扩张并出血等典型的伪狂犬病病理变化。病理切片显示猪的脑蛛网膜下腔严重出血,其他各脏器也均有严重病理变化。结果表明该变异株JS-2012为伪狂犬强毒毒株。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 JS-2012 仔猪 致病性
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猪伪狂犬病基因缺失灭活疫苗(JS-2012-△gI/gE株)的制备及免疫效力评价 被引量：10
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作者 童武 李国新 +10 位作者 郑浩 刘飞 梁超 李林 田青 曹艳云 武吉强 王涛 郑旭晨 单同领 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2016年第6期12-18,共7页
本研究将猪伪狂犬病毒双基因缺失毒株（JS-2012-△g I/g E株）用0.15%的甲醛灭活后,与赛彼科公司MONTANIDE ISA201VG佐剂进行乳化,制备成猪伪狂犬病灭活疫苗。为了评价灭活疫苗的免疫效力,15头14日龄的健康仔猪（猪伪狂犬病毒、猪繁殖... 本研究将猪伪狂犬病毒双基因缺失毒株（JS-2012-△g I/g E株）用0.15%的甲醛灭活后,与赛彼科公司MONTANIDE ISA201VG佐剂进行乳化,制备成猪伪狂犬病灭活疫苗。为了评价灭活疫苗的免疫效力,15头14日龄的健康仔猪（猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒和猪圆环病毒Ⅱ型抗原和抗体均为阴性）随机分成3组,每组5头。第一组猪颈部肌肉接种猪伪狂犬病灭活疫苗（JS-2012-△g I/g E株）每头2 m L,接种后28 d,第一组和第二组同样方式同等剂量接种猪伪狂犬病灭活疫苗（JS-2012-△g I/g E株）,第三组猪作为对照。第二次免疫后d 28,三组实验猪均滴鼻接种PRV JS-2012第5代强毒,每头105.0TCID50/2 m L。攻毒后0~14 d,每日测量体温并记录临床症状。通过抗体检测和保护效率来评价猪伪狂犬病灭活疫苗（JS-2012-△g I/g E株）免疫效力。结果表明,两次免疫（第一组）PRV g B抗体水平明显高于一次免疫（第二组）,两次免疫提供了更好的保护效力。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 灭活疫苗 制备 效力评价
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2010年国内部分省份猪场常见病毒性疾病的病原学调查 被引量：19
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作者 童武 周艳君 +2 位作者 肖少波 童光志 陈焕春 《中国动物传染病学报》 CAS 2011年第5期1-7,共7页
随着规模化养猪业的发展,传染性疾病越来越多,混合感染或多重感染十分普遍,给疾病的诊断和预防带来很大困难。本文将我们实验室2010年分别采自福建、广西、河南、上海、内蒙、浙江、江苏和山西等地发病猪场的185份病料,通过RT-PCR和PCR... 随着规模化养猪业的发展,传染性疾病越来越多,混合感染或多重感染十分普遍,给疾病的诊断和预防带来很大困难。本文将我们实验室2010年分别采自福建、广西、河南、上海、内蒙、浙江、江苏和山西等地发病猪场的185份病料,通过RT-PCR和PCR方法对其进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪繁殖障碍的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪圆环病毒2(Porcine circovirus type 2,PCV2)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、细环病毒2(Torque teno virus 2,TTV2)等病毒检测。结果表明在所检的病料中PRRSV、PCV2和TTV2的阳性率比较高,分别为49.2%、62.2%和95.1%。有些地方TTV2的阳性率高达100%;同时,还存在很普遍的PRRSV与PCV2、PRRSV与TTV2、PCV2与TTV2等混合感染,混合感染率分别为27.6%、45.4%、58.4%;以及PRRSV、PCV2与TTV2的三重感染率为24.9%。同时对部分PRRSV阳性病料的PRRSV GP5和nsp2基因分别进行测序,分析测序结果表明病料中的PRRSV的GP5和nsp2序列与PRRSV HuN4株的相应序列的亲缘关系分别在98.2%和96.2%以上,且在nsp2区域都存在30个不连续氨基酸的缺失,说明现在临床中所流行的PRRSV可能仍是与高致病性PRRSV基因型相似的病毒。通过本文可以及时了解当前养猪场的病毒性疾病的流行情况,为猪场病毒性疾病的防控提供依据。 展开更多
关键词 猪病毒性疾病 猪繁殖与呼吸综合征病毒 流行病学
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表达O型口蹄疫病毒保护性抗原表位重组PRRSV的构建及其鉴定 被引量：5
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作者 童武 徐彦召 +8 位作者 周艳君 姜一峰 张善瑞 王亚欣 朱建平 虞凌雪 孙晶 陈焕春 童光志 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1431-1440,共10页
以高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的感染性分子克隆（rHuN4-F112）作为载体，将O型口蹄疫病毒（FMDV）VPl基因的421～480nt（141～160aa）和598～639nt（200～213aa）两优势保护性抗原表位串联成的目的基因，通过突变PCR的方法插入... 以高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的感染性分子克隆（rHuN4-F112）作为载体，将O型口蹄疫病毒（FMDV）VPl基因的421～480nt（141～160aa）和598～639nt（200～213aa）两优势保护性抗原表位串联成的目的基因，通过突变PCR的方法插入Nsp2中的508～532位缺失区域，经体外转录后转染至BHK-21细胞中培养36h，将上清接种至MARC-145细胞中培养，并在MARC-145细胞中连续传代，拯救重组病毒。经RT-PCR扩增，MluI酶切及测序验证，结果表明插入的外源基因及人为突变的Mlu1分子标记都正确，说明重组病毒拯救成功，且该重组病毒能够在MARC-145细胞中稳定传代，将此重组病毒命名为rPRRSV-F112-O／VPlep。rPRRsv-F112-O／VPlep能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变，间接免疫荧光检测表明外源基因在该病毒中成功获得了表达。经过生物学特性分析，该病毒的TCID50=-log10-6.75／0．1mL，且在MARC-145细胞中整体生长速度与其亲本病毒rHuN4-Fll2（△508-532）相似，但明显高于rHuN4-F112病毒。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合症病毒 O型口蹄疫病毒 感染性分子克隆 重组病毒
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