目的本研究旨在构建适用于毕赤酵母的高效表达载体,建立高效可行的鼠疫杆菌功能基因酵母表达策略,用于鼠疫杆菌功能蛋白的表达及后续研究。方法以F1抗原编码基因caf1为示范目标,基于密码子偏好进行序列优化,在5'与3'端分别引入...目的本研究旨在构建适用于毕赤酵母的高效表达载体,建立高效可行的鼠疫杆菌功能基因酵母表达策略,用于鼠疫杆菌功能蛋白的表达及后续研究。方法以F1抗原编码基因caf1为示范目标,基于密码子偏好进行序列优化,在5'与3'端分别引入BglⅡ与EcoRⅠ限制性位点,克隆入酵母表达载体。在大肠杆菌扩增并经双酶切与测序确认后,转化毕赤酵母SMD1168菌株,采用甲醇诱导表达;收集上清后以Ni-NTA亲和层析纯化并通过SDS-PAGE与ELISA检测表达产物。结果构建的重组质粒经双酶切可见约0.5 kb插入片段,测序未见突变或移码。诱导约72 h后在上清中检测到与F1抗原相符的约35 k Da蛋白条带;ELISA检测呈阳性反应,His标签抗体可识别纯化产物。结论本研究完成了以caf1为代表的功能基因在毕赤酵母中的表达验证,证实该策略具备可复制性与可扩展性,可用于后续鼠疫功能蛋白的分泌表达与工艺优化研究。展开更多
针对现有技术对某些特定分布式拒绝服务(Distributed Denial of Service,DDoS)攻击检测精度不够的问题,提出了一种防御软件定义网络(Software Defined Network,SDN)中路由欺骗(Route Spoofing,RS)攻击的轻量级解决方案.该方案通过分析...针对现有技术对某些特定分布式拒绝服务(Distributed Denial of Service,DDoS)攻击检测精度不够的问题,提出了一种防御软件定义网络(Software Defined Network,SDN)中路由欺骗(Route Spoofing,RS)攻击的轻量级解决方案.该方案通过分析路由欺骗产生的原因,在数据平面OpenFlow交换机上设计了选择性阻塞扩展模块,一旦检测器发现RS攻击,交换机将生成的报警包发送给控制器,控制器通过发送转发规则阻止攻击者节点恶意使用其他用户的活动通信路由.仿真结果表明,本文方法可以有效地检测出SDN中的DDoS攻击,相关指标也充分显示了解决方案的可行性和正确性.展开更多
文摘目的本研究旨在构建适用于毕赤酵母的高效表达载体,建立高效可行的鼠疫杆菌功能基因酵母表达策略,用于鼠疫杆菌功能蛋白的表达及后续研究。方法以F1抗原编码基因caf1为示范目标,基于密码子偏好进行序列优化,在5'与3'端分别引入BglⅡ与EcoRⅠ限制性位点,克隆入酵母表达载体。在大肠杆菌扩增并经双酶切与测序确认后,转化毕赤酵母SMD1168菌株,采用甲醇诱导表达;收集上清后以Ni-NTA亲和层析纯化并通过SDS-PAGE与ELISA检测表达产物。结果构建的重组质粒经双酶切可见约0.5 kb插入片段,测序未见突变或移码。诱导约72 h后在上清中检测到与F1抗原相符的约35 k Da蛋白条带;ELISA检测呈阳性反应,His标签抗体可识别纯化产物。结论本研究完成了以caf1为代表的功能基因在毕赤酵母中的表达验证,证实该策略具备可复制性与可扩展性,可用于后续鼠疫功能蛋白的分泌表达与工艺优化研究。
文摘针对现有技术对某些特定分布式拒绝服务(Distributed Denial of Service,DDoS)攻击检测精度不够的问题,提出了一种防御软件定义网络(Software Defined Network,SDN)中路由欺骗(Route Spoofing,RS)攻击的轻量级解决方案.该方案通过分析路由欺骗产生的原因,在数据平面OpenFlow交换机上设计了选择性阻塞扩展模块,一旦检测器发现RS攻击,交换机将生成的报警包发送给控制器,控制器通过发送转发规则阻止攻击者节点恶意使用其他用户的活动通信路由.仿真结果表明,本文方法可以有效地检测出SDN中的DDoS攻击,相关指标也充分显示了解决方案的可行性和正确性.
